護(hù)士長竹杖提取物抑菌活性的比較研究

護(hù)士長竹杖提取物抑菌活性的比較研究

竹苔，又稱竹參、竹菌和竹生動。它是一種大型真菌。在真菌學(xué)上，它屬于擔(dān)子菌亞門、腹菌、鬼筆、竹筆和康乃馨。竹蓀營養(yǎng)豐富、味道鮮美、清甜鮮脆、風(fēng)味獨特,既是宴席中的名貴山珍,也是馳名中外的貴重藥材,素有“山珍之王”、“菌中皇后”的美稱。另外,竹蓀還具有特異的防腐功能,在炎熱的夏季作菜煲湯時,置少許竹蓀入內(nèi),可防止酸敗,即可延長存放時間。鑒于竹蓀對食物的特殊防腐效果,筆者就此進(jìn)行了從竹蓀中提取天然防腐劑的研究,優(yōu)化了提取工藝條件,并對其抑菌功效進(jìn)行初步探討。本試驗中分別對長裙竹蓀的乙醇提取物和水提取物的抑菌作用進(jìn)行研究與功能比較,為今后進(jìn)一步提取并生產(chǎn)純天然生物防腐劑提供參考。1材料和方法1.1材料表面1.1.1原材料竹蓀干子實體粉,即市售長裙竹蓀干品,粉碎后過80目篩;食用乙醇(濃度為95%)。1.1.2試驗中的細(xì)菌大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、啤酒酵母、黑曲霉:均由天津市工業(yè)微生物研究所菌種保藏中心提供。1.1.3培養(yǎng)基細(xì)菌完全培養(yǎng)基;營養(yǎng)肉汁瓊脂培養(yǎng)基;麥汁瓊脂-1培養(yǎng)基;查氏瓊脂培養(yǎng)基。1.2方法1.2.1長竹執(zhí)行醇提物的制備醇提物:取長裙竹蓀干子實體粉末10g,按照料液比1∶10加入食用乙醇,混勻后置于水浴中80℃回流抽提2h,過濾,所得濾渣再加入70mL食用乙醇,按原條件進(jìn)行2次提取,時間為1h,固液分離后棄掉濾渣,合并2次濾液,減壓濃縮至恒重,即得長裙竹蓀醇提物,保存?zhèn)溆?。水提?取未粉碎的長裙竹蓀干品10g,按照料液比1∶20加入純水,煎煮2次,第1次為2h,第2次為1h,固液分離后合并2次濾液,減壓濃縮至恒重,即得長裙竹蓀水提物,保存?zhèn)溆谩?.2.2無菌試驗1.2.2.菌種培養(yǎng)和冷藏在無菌室中將供試菌種接入相對應(yīng)的試管斜面培養(yǎng)基上,細(xì)菌置35℃~37℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)18h~24h,霉菌、酵母菌培養(yǎng)44h~48h,之后置0℃~4℃冷藏備用。1.2.2.2.培養(yǎng)基支持塊的制備配制好的各種菌株的培養(yǎng)基,高壓蒸汽滅菌后,冷卻至50℃~60℃,無菌操作傾注于干熱滅菌的培養(yǎng)皿內(nèi),每皿15mL~20mL。1.2.2.菌落、酵母菌和比濁法計數(shù)用接種環(huán)挑取少許菌體于裝有9mL無菌水的試管內(nèi),制成菌體懸浮液。霉菌、酵母菌用血球計數(shù)板計數(shù),細(xì)菌用比濁法計數(shù)。調(diào)整菌體懸浮液的濃度至含孢子或菌體為106個/mL~107個/mL,向平板上加0.1mL菌體懸浮液,用三角刮鏟涂布均勻。1.2.2.接種平板的制備用打孔器將定性濾紙打成直徑6mm的小圓片,于培養(yǎng)皿中160℃干熱滅菌1h~2h。將滅菌濾紙片浸入長裙竹蓀提取液中,浸泡約40min。將浸好的濾紙片貼在1.2.2.3中制備好的接種平板上,培養(yǎng)皿背面劃線等分為二,一邊貼提取液濾紙片,一邊貼空白對照濾紙片,每邊3片。貼好濾紙片的平板置恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng),細(xì)菌于35℃~37℃培養(yǎng)18h~24h,霉菌、酵母菌44h~48h,測量抑菌圈直徑。2結(jié)果與分析2.1醇提物的抑菌效果醇提物抑菌效果,見表1。長裙竹蓀乙醇提取物為棕黃色油狀黏稠液體。由表1看出,此醇提物對各受試菌種有不同的抑制作用,其中對細(xì)菌顯現(xiàn)出很明顯的抑制作用,如大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌,抑菌圈輪廓清晰,且直徑較大;而該提取物對酵母菌和霉菌抑制作用不強(qiáng)。2.2克氏原螯蝦提取物b水提物抑菌效果,見表2。長裙竹蓀水提物呈現(xiàn)棕黃色,提取后靜置一段時間,為果凍狀膠質(zhì)物質(zhì)。由表2看出,此提取物對各供試菌種的抑制作用普遍低于醇提物。統(tǒng)計數(shù)據(jù)表明,長裙竹蓀水提法的提取率會明顯高于醇提法,但抑菌試驗結(jié)果表明,此提取物抑菌作用不明顯,其抑制細(xì)菌的作用略強(qiáng)于對真菌的抑制作用。3抑菌效果測定長裙竹蓀菌體中含有大量蛋白質(zhì)、氨基酸、粗脂肪、碳水化合物、微量元素等,提取溶劑不同,方法不同,提取物中所含的有效成分亦有所不同,通過抑菌試驗顯現(xiàn)出了不同的抑菌效果。乙醇提取物對各受試菌種均有不同的抑制作用,其中對以大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌為代表的細(xì)菌有很明顯的抑制作用,但對真菌的抑制作用不明顯;而水提物對各受試菌種均未顯現(xiàn)出抑制作用。值得提出的是,細(xì)菌培養(yǎng)基p