莪術(shù)醇的提取分離鑒定實(shí)驗(yàn)開題報(bào)告

PAGE1目錄選題的根據(jù)…………22.文獻(xiàn)綜述……………5研究?jī)?nèi)容及試驗(yàn)方法………………6實(shí)驗(yàn)裝置及藥品……………………7實(shí)驗(yàn)?zāi)繕?biāo)……………7實(shí)驗(yàn)進(jìn)度安排………77.主要文獻(xiàn)資料………8天然藥物化學(xué)開題報(bào)告莪術(shù)醇的額提取分離及鑒定一選題的根據(jù)（一）莪術(shù)的簡(jiǎn)介姜科植物，主要用藥部位為根莖。功能：行氣破血；消積止痛。主治：血?dú)庑耐矗伙嬍撤e滯；脘腹脹痛；血滯經(jīng)閉；痛經(jīng)；癥瘕瘤痞塊；跌打損傷。采收儲(chǔ)藏：12月中、下旬，地上部分枯萎時(shí)，挖掘根部，除去根莖上的泥土，洗凈，置鍋里蒸或煮約15min，曬干或烘干，撞去須根即成。將根莖放入清水中浸泡，撈起，瀝干水，潤(rùn)透，切薄片，曬干或烘干。資源分布：分布于廣東、廣西、四川、云南等地。浙江、福建、湖南等地有少量栽培。主要成分為莪術(shù)揮發(fā)油，有抗癌的作用，其主要作用是莪術(shù)醇和莪術(shù)二酮。（二）莪術(shù)醇的化學(xué)式及理化性質(zhì)化學(xué)式理化性質(zhì)莪術(shù)醇是一種在加熱條件下為棒狀，并且伴有升華現(xiàn)象的白色針狀結(jié)晶樣的化合物。熔點(diǎn)為142~147，沒有紫外吸收，因此在紫外燈下沒有熒光發(fā)生，易溶于乙醚，氯仿，溶于乙醇，幾乎不溶于水，分類屬于倍半萜類的物質(zhì)。（三）莪術(shù)醇的藥理作用及臨床應(yīng)用雖然已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的莪術(shù)醇的臨床用途非常廣泛，但最集中的，還是抗癌，抗菌，抗病毒的作用。在抗癌方面，最為明顯的就是對(duì)宮頸癌的治療，主要采用局部瘤體注射的方法。因?yàn)檩g(shù)醇的抗癌機(jī)制為一直癌變細(xì)胞細(xì)胞核的生長(zhǎng)以及增加機(jī)體特異性免疫的能力，幾乎沒有毒副作用，所以一直以來都被廣泛使用。根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，表明莪術(shù)醇能抑制試管中的金黃色葡萄球菌，溶血性球菌，大腸桿菌，傷寒桿菌，霍亂弧菌等的生長(zhǎng)，對(duì)呼吸道荷包體病毒有直接的抑制作用。除此之外，也能對(duì)風(fēng)濕病毒，水痘病毒等一些常見的致病病毒起到直接和間接地抑制殺害作用。因此常常被用作抗菌抗病毒的藥物。在已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的這額病毒之外，還有人們尚且不清楚的，因此其毒力性等需要經(jīng)過進(jìn)一步的研究。（四）莪術(shù)醇的研究歷史莪術(shù)醇是傳統(tǒng)中藥姜科植物莪術(shù)揮發(fā)油成分中的主要物質(zhì)之一，同時(shí)也是中藥莪術(shù)的有效成分，在醫(yī)藥領(lǐng)域有非常廣泛的應(yīng)用。莪術(shù)的入藥史在中國可以追溯到唐朝，當(dāng)時(shí)最為出名的醫(yī)藥著作《藥性論》及李時(shí)珍的《本草綱目》都有記載:莪術(shù)有行氣破血、消積止痛的功效，被稱為血中之氣藥，常用于心腹脹痛、氣血凝滯、血淤閉經(jīng)、跌打損傷等癥。近年來研究更表明，莪術(shù)具有調(diào)節(jié)機(jī)體免疫反應(yīng)，直接抑制和破壞癌細(xì)胞，拮抗致癌反應(yīng)的作用，并已應(yīng)用臨床抗腫瘤治療中。此外，還具有抗早孕、抗炎、抗菌和降酶等活性。與許多化學(xué)抗腫瘤藥物相比，莪術(shù)醇無致突變性，在臨床應(yīng)用中是安全可靠的抗腫瘤藥物。在實(shí)驗(yàn)中，通常采取水蒸氣蒸餾法、超臨界CO2流體萃取、索氏提取3種方法提取三個(gè)不同地方莪術(shù)揮發(fā)油，并利用GC-MS聯(lián)用儀分析比較其化學(xué)成分差異，分析各種成分的含量，從而為最佳治療提供理論依據(jù)。并對(duì)莪術(shù)中主要有效成分揮發(fā)油的提取工藝進(jìn)行優(yōu)選，作為莪術(shù)揮發(fā)油制備的科學(xué)依據(jù)。本實(shí)驗(yàn)旨在人為操作失誤很小的因素下，驗(yàn)證現(xiàn)有提取分離辦法下實(shí)驗(yàn)室提取最大產(chǎn)率。二文獻(xiàn)綜述根據(jù)對(duì)國內(nèi)外相關(guān)文獻(xiàn)的查閱，從莪術(shù)醇的研究進(jìn)展，不同提取方法對(duì)莪術(shù)油提取的影響，莪術(shù)醇的分離，，莪術(shù)醇鑒定，莪術(shù)醇對(duì)照品的主要相關(guān)物質(zhì)及莪術(shù)醇含量測(cè)定幾個(gè)方面進(jìn)行綜述。（一）莪術(shù)醇的研究進(jìn)展從上個(gè)世紀(jì)七十年代，莪術(shù)醇被正式運(yùn)用于宮頸癌的治療，在取得一定的療效后，相繼開發(fā)了其抗癌抗腫瘤抗病毒的一系列用途。在人們生活水平日益上升的今天，人們對(duì)健康的關(guān)注越來越多，這些新用途的發(fā)現(xiàn)，莪術(shù)醇的藥用價(jià)值也吸引了越來越多的人的關(guān)注。在莪術(shù)醇的研究進(jìn)展方面主要包括了莪術(shù)醇的分離，提取，定性定量分析及藥理作用。（二）莪術(shù)醇的分離和提取莪術(shù)醇是一種在加熱條件下為棒狀，并且伴有升華現(xiàn)象的白色針狀結(jié)晶樣的化合物。熔點(diǎn)為142~147，沒有紫外吸收，因此在紫外燈下沒有熒光發(fā)生，易溶于乙醚，氯仿，溶于乙醇，幾乎不溶于水，分類屬于倍半萜類的物質(zhì)。利用莪術(shù)醇的這些特點(diǎn)，常用方法就是以郁溫金生藥的根莖為原料，先用水蒸氣蒸餾法從中提取出莪術(shù)油，然后用乙醚洗滌，留下微溶于石油醚的莪術(shù)醇和莪術(shù)二酮的混合物結(jié)晶，硅膠柱層析分離兩者，再用無水乙醇洗滌，可最終得到莪術(shù)醇單一物質(zhì)的白色針狀結(jié)晶。（三）定性分析在莪術(shù)醇的定性分析中，波層層析鑒定是最經(jīng)典的方法。中國藥典1995版采用的方法是在硅膠G薄層板上以石油醚——醋酸乙酯90：10傾斜上行展開，用1%香草醛硫酸溶液噴霧顯色。在2000版本的中國藥典則采用了波層色譜法鑒別莪術(shù)醇。采用以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板，分別吸取對(duì)照品和供試品溶液按照波層色譜法的操作規(guī)則點(diǎn)樣，仍然采用石油醚（60~90）——醋酸乙酯90：10為展開劑，待展開劑到前沿線取出，晾干，噴5%香草醛硫酸溶液，用熱風(fēng)吹干到斑點(diǎn)清晰,2005版的中國藥典使用的相同的方法，只是展開劑中石油醚的沸點(diǎn)在（30~60）之間。出了上述的三種方法，還有氣相色譜結(jié)合質(zhì)譜的方法。除此之外，還有：化學(xué)鑒定。莪術(shù)醇的化學(xué)結(jié)構(gòu)是為：其中含有的特征基團(tuán)，利用化學(xué)手段加以鑒定。在很多情況下也可以采取核磁共振鑒定。標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品品的核磁共振圖譜如下。利用核磁共振的操作得出所得產(chǎn)品的圖譜，經(jīng)兩者相互比較，觀察特征峰的存在與否就能得出結(jié)論。在莪術(shù)醇的定量分析在莪術(shù)醇的定量分析方面，最常使用的有三種方法。（1）紫外分光光度法。該方法在520納米波長(zhǎng)測(cè)定樣品的吸光度，以吐溫80乙醇溶液為對(duì)照品，在相同條件下測(cè)定其吸光度。通過精密計(jì)算得出樣品中含量。（2）氣相色譜法。氣相色譜法測(cè)定含量一般選取一定的內(nèi)標(biāo)物，利用儀器分析的手段最終測(cè)得相關(guān)的數(shù)據(jù)。（3）毛細(xì)管色譜法。根據(jù)朱亞爾等的文獻(xiàn)，可以看到這種新的方法。采用的色譜柱為石英毛細(xì)管柱，在控制進(jìn)樣溫度，流速，以及升溫程序，保留時(shí)間及相關(guān)條件下，可以使莪術(shù)醇鋒和有關(guān)物質(zhì)的鋒有效分離。通過計(jì)算鋒的面積得出最終結(jié)果。（五）莪術(shù)醇的藥理作用及臨床應(yīng)用雖然已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的莪術(shù)醇的臨床用途非常廣泛，但最集中的，還是抗癌，抗菌，抗病毒的作用。在抗癌方面，最為明顯的就是對(duì)宮頸癌的治療，主要采用局部瘤體注射的方法。因?yàn)檩g(shù)醇的抗癌機(jī)制為一直癌變細(xì)胞細(xì)胞核的生長(zhǎng)以及增加機(jī)體特異性免疫的能力，幾乎沒有毒副作用，所以一直以來都被廣泛使用。根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，表明莪術(shù)醇能抑制試管中的金黃色葡萄球菌，溶血性球菌，大腸桿菌，傷寒桿菌，霍亂弧菌等的生長(zhǎng)，對(duì)呼吸道荷包體病毒有直接的抑制作用。除此之外，也能對(duì)風(fēng)濕病毒，水痘病毒等一些常見的致病病毒起到直接和間接地抑制殺害作用。因此常常被用作抗菌抗病毒的藥物。在已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的這額病毒之外，還有人們尚且不清楚的，因此其毒力性等需要經(jīng)過進(jìn)一步的研究。三研究?jī)?nèi)容及實(shí)驗(yàn)方法（一）流程圖莪術(shù)藥材粗粉8倍水浸泡，水蒸氣蒸餾6h莪術(shù)揮發(fā)油置冰箱中0~5°冷藏，析晶，過濾結(jié)晶物石油醚洗滌結(jié)晶石油醚液無水乙醇重結(jié)晶回收石油醚針狀結(jié)晶（莪術(shù)醇）脫腦液四莪術(shù)醇的分離提?。ㄒ唬┪鼍Вg(shù)醇的初步分離。將上一部所的揮發(fā)油靜置冷（放置在0~5°的溫度冰箱），待不再有結(jié)晶析出，用布氏漏斗真空抽濾。得到的結(jié)晶為主要組成為莪術(shù)醇和莪術(shù)二酮的混合粗晶。（二）莪術(shù)醇的二次分離。將上一部所得的莪術(shù)醇和莪術(shù)二酮的粗晶用石油醚洗滌，以出去一些極性較小的有關(guān)物質(zhì)。得到結(jié)晶和石油醚液，將結(jié)晶用無水乙醇重結(jié)晶就能得到針狀的莪術(shù)醇白色晶體。稱量其重量。五實(shí)驗(yàn)裝置及藥品水蒸氣蒸餾裝置實(shí)驗(yàn)器材：水蒸氣發(fā)生器恒溫水浴鍋500ml圓底燒瓶雙控橡膠塞冷凝器橡膠管尾接管錐形瓶玻璃管過濾裝置及藥品實(shí)驗(yàn)儀器：布氏漏斗真空泵無灰濾紙抽濾瓶石油醚無水乙醇產(chǎn)品純度檢測(cè)及定性檢測(cè)裝置及藥品薄層色譜儀器和藥品：玻璃板硅膠G石油醚醋酸乙酯香草醛硫酸溶液展開缸吹風(fēng)機(jī)紫外燈六實(shí)驗(yàn)?zāi)繕?biāo)1.對(duì)莪術(shù)進(jìn)行提取工藝的優(yōu)化，提高發(fā)油的產(chǎn)率。2.分離出相對(duì)較純的莪術(shù)醇。3.鑒定得到的莪術(shù)醇產(chǎn)品。七工作進(jìn)度安排1.查找相關(guān)的資料并選擇合適的文獻(xiàn)和書籍2013.3.10至2013.3.15查閱資料并撰寫開題報(bào)告2013.3.15至2013.3.17修改并完善開題報(bào)告2013.3.17至2013.3.24實(shí)驗(yàn)試劑盒實(shí)驗(yàn)器材的相關(guān)準(zhǔn)備2013.3.25至2013.3.26莪術(shù)油的提取2013.3.27至2013.3.31莪術(shù)醇的分離2013.4.1至2013.4.5莪術(shù)醇的鑒定2013.4.6至2013.4.11完善實(shí)驗(yàn)報(bào)告以及實(shí)驗(yàn)分析2013.4.12至2013.4.19八主要參考資料（一）參考書籍1.《中藥化學(xué)成分提取分離與鑒定》人民衛(wèi)生出版社唐志書2.《中藥鑒定學(xué)》高等教育出版社王喜春（二）參考文獻(xiàn)1.不同提取方法對(duì)羲術(shù)油提取的影響王娟，劉漢清南京中醫(yī)藥大學(xué)，江蘇南京2100462.獲術(shù)醇