免疫組化實(shí)驗(yàn)中的抗原修復(fù)

免疫組化實(shí)驗(yàn)中的抗原修復(fù)來(lái)源：網(wǎng)絡(luò)抗原修復(fù)是指石蠟、冰凍、火棉膠、塑料切片免疫組織化學(xué)(IHC)前用胰蛋白酶、尿素、表面活性劑、微波緩沖液和金屬鹽等，使被掩蓋的抗原決定簇或變性的抗原重新暴露或抗原性得到一定程度的恢復(fù)過(guò)程。免疫組化實(shí)驗(yàn)中的抗原修復(fù):免疫組化實(shí)驗(yàn)中的抗原修復(fù):1、酶消化：如胰蛋白酶、胃蛋白酶、蛋白水解酶。2、 抗原熱修復(fù)：高壓法、微波法、水煮法。眾所周知，免疫組化染色中最關(guān)鍵的莫過(guò)于抗原修復(fù)，而絕大多數(shù)常用抗體的修復(fù)是通過(guò)加熱來(lái)完成的，熱抗原修復(fù)優(yōu)于酶消化，更有效，染色結(jié)果更易一致，操作單一。3、 修復(fù)時(shí)間：既要獲得最強(qiáng)的染色結(jié)果，又要保持組織形態(tài)的完整性。許多抗原修復(fù)存在的問(wèn)題是組織固定時(shí)間過(guò)短時(shí)，強(qiáng)烈的抗原修復(fù)可引起形態(tài)破壞、脫片及組織完全消化，解決的方法可采用較短時(shí)間的熱修復(fù)或減少酶的消化時(shí)間。4、 抗原修復(fù)緩沖液：有檸檬酸鹽緩沖液(pH6.0)、Tris(pH7-8)、EDTA(pH8.0?9.0)、EGTA(pH9.0)等。檸檬酸鹽緩沖液（PH6.0）的優(yōu)點(diǎn)是染色背景清晰，適合于大多數(shù)抗體，Tris和EDTA兩種修復(fù)液對(duì)部分抗原修復(fù)效果較強(qiáng)，但其染色背景同時(shí)加深，如使用不當(dāng)易造成假陽(yáng)性結(jié)果的判斷。目前還沒(méi)有一種抗原修復(fù)液能適合于所有的抗體，檸檬酸緩沖液（PH6.0）可作為免疫組化常規(guī)使用的抗原修復(fù)緩沖液，但也不能除外某些抗體適用于EDTA和EGTA緩沖修復(fù)液，一般抗原比較難于表達(dá)的抗體多選擇高PH值的修復(fù)液。例如：ER、PR、Bcl-2、Bcl-6、TdT、Ki-67、CyclinD1等。5、 抗原熱修復(fù)注意事項(xiàng)：無(wú)論哪一步都不要讓切片干凅，加熱后需要冷卻15－30分鐘。充分的抗原修復(fù)是影響染色結(jié)果的唯一重要因素，加熱的溫度和時(shí)間可導(dǎo)致修復(fù)不足或過(guò)度修復(fù)。6、 抗原熱修復(fù)對(duì)組織中內(nèi)源性生物素的影響：抗原熱修復(fù)在增強(qiáng)抗原決定簇表達(dá)的同時(shí)，也增強(qiáng)了組織中內(nèi)源性生物素的反應(yīng)。采用卵白素-生物素（Avidin-biotin）檢測(cè)系統(tǒng)，組織中內(nèi)源性生物素容易出現(xiàn)人為假象，在加熱抗原處理?xiàng)l件完全相同的陰性對(duì)照片中可以觀察到較強(qiáng)的內(nèi)源性生物素的反應(yīng)，沒(méi)有經(jīng)過(guò)熱抗原處理的切片中沒(méi)有出現(xiàn)類似的情況。在細(xì)胞漿中呈均一的細(xì)顆粒狀的淺棕色陽(yáng)性，有時(shí)表達(dá)也非常強(qiáng)，與真陽(yáng)性的結(jié)果表達(dá)很相似，在以往的免疫組化染色中內(nèi)源性生物素的影響對(duì)診斷造成許多的誤差，卻常常被忽略。值得提醒的是在概念上一定要十分清楚，陰性對(duì)照片必須與一抗的抗原修復(fù)處理?xiàng)l件完全相同，才能準(zhǔn)確發(fā)現(xiàn)內(nèi)源性生物素出現(xiàn)的部位。7、 內(nèi)源性生物素封閉方法：一般在抗原修復(fù)以后，加抗體前使用卵白素進(jìn)行生物素阻斷處理，也可使用非生物素的檢測(cè)系統(tǒng)，如：EliVision、EnVision、SuperVesion等?？乖迯?fù)能最大程度地恢復(fù)在制片等過(guò)程中損失的抗原性，使原來(lái)認(rèn)為不能在石蠟切片上進(jìn)行IHC的許多抗體獲得了良好的染色結(jié)果，成為一種有效的補(bǔ)救措施?！颈居嗛喬?hào)為非盈利學(xué)術(shù)交流訂閱號(hào)，部分資料來(lái)源于網(wǎng)絡(luò)，如