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2023/10/15Copyright?Jiangyong轉(zhuǎn)基因西紅柿請(qǐng)您欣賞2023/10/15Copyright?Jiangyong抗蟲害作物2023/10/15Copyright?Jiangyong2023/10/15Copyright?Jiangyong番木瓜優(yōu)良抗病品種2023/10/15Copyright?Jiangyong金大米2023/10/15Copyright?Jiangyong地雷探測(cè)草擬南芥2023/10/15Copyright?Jiangyong不會(huì)引起過敏的大豆2023/10/15Copyright?Jiangyong轉(zhuǎn)基因芥菜可減輕土壤污染2023/10/15Copyright?Jiangyong彩色玉米2023/10/15Copyright?Jiangyong巨型鮭魚2023/10/15Copyright?Jiangyong熒光魚2023/10/15Copyright?Jiangyong超級(jí)奶牛2023/10/15Copyright?Jiangyong培育出人耳的小鼠2023/10/15Copyright?Jiangyong轉(zhuǎn)基因豬2023/10/15Copyright?Jiangyong基因工程1944年確認(rèn)了遺傳的物質(zhì)基礎(chǔ)是DNA。1953年JWatson和FCricK提出了DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)模型,1958年MMesselson和FWStahl證實(shí)了DNA半保留復(fù)制的機(jī)制,揭示了生物界遺傳性狀能世代遺傳的分子奧秘。重要的里程碑:雙螺旋結(jié)構(gòu)的確立
1962年WSzybalski和ESzybalski
用人類DNA去轉(zhuǎn)化人類細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)Ca2+有刺激DNA轉(zhuǎn)移入細(xì)胞的作用,是人工轉(zhuǎn)移遺傳物質(zhì)給其它細(xì)胞的第1次嘗試。
1965年,Jacobf基因操縱子.1968年,NirenbergM,遺傳密碼.1967年Nirenberg提出遺傳工程可用于人類的基因治療。
60年代分子生物學(xué)作為一門獨(dú)立學(xué)科正式出現(xiàn)70年代初Graessmann和Dicumako莫定了用顯微注射法轉(zhuǎn)移基因。
1972年Grahant等對(duì)磷酸鈣介導(dǎo)的DNA轉(zhuǎn)移過程進(jìn)行了詳細(xì)的研究,使這技術(shù)能被普遍接受和應(yīng)用。
1972年,P.Berg:構(gòu)建第一個(gè)DNA重組分子
2種病毒DNA的重組
1973年,S.S.Cohen:第一個(gè)基因克隆實(shí)驗(yàn)基因工程的開始
1977年,基因工程產(chǎn)品的出現(xiàn)
H.W.Boyer,第一個(gè)基因工程產(chǎn)品(SS)
somatostatin
生長(zhǎng)素釋放抑素70年代出現(xiàn)基因工程并有初步成果基因重組技術(shù)80年代的代表性研究領(lǐng)域基因工程產(chǎn)品的開發(fā)應(yīng)用定點(diǎn)突變的研究與應(yīng)用癌基因的發(fā)現(xiàn)
DNA-蛋白質(zhì)分子相互辨認(rèn)
PCR技術(shù)的出現(xiàn)人類基因組計(jì)劃開始醞釀90年代基因診斷技術(shù)漸趨成熟基因治療合法化人類基因計(jì)劃的啟動(dòng)分子生物學(xué)各分支學(xué)科的建立與發(fā)展從20世紀(jì)50年代起,分子生物學(xué)領(lǐng)域的研究成果共獲得40項(xiàng)諾貝爾醫(yī)學(xué)-生理科學(xué)獎(jiǎng),說明分子生物學(xué)在生命科學(xué)研究中的重要性
根據(jù)桑格法開發(fā)的DNA自動(dòng)定序機(jī)使一周(24小時(shí)運(yùn)轉(zhuǎn))解讀100萬甚至幾百萬個(gè)堿基成為可能。它為“人類基因組計(jì)劃”立下了汗馬功勞
2023/10/15Copyright?Jiangyong理論基礎(chǔ)DNA是遺傳物質(zhì)的證明DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)和中心法則的確立遺傳密碼的破譯工程技術(shù)基因轉(zhuǎn)移載體的發(fā)現(xiàn)工具酶的發(fā)現(xiàn)DNA合成和測(cè)序技術(shù)的發(fā)現(xiàn)DNA體外重組的實(shí)現(xiàn)重組DNA表達(dá)實(shí)驗(yàn)的成功第一例轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的問世PCR技術(shù)的發(fā)明基因工程:就是重組DNA技術(shù),指在體外將不同來源的DNA進(jìn)行剪切和重組,形成雜合DNA或稱嵌合DNA分子,然后將其導(dǎo)入特定的宿主細(xì)胞,得到大量擴(kuò)增和表達(dá),使宿主細(xì)胞獲得新的遺傳特性,產(chǎn)生新的基因產(chǎn)物。2023/10/15Copyright?Jiangyong已學(xué):基因工程的“專用工具”基因的剪刀——限制性核酸內(nèi)切酶基因的針線——DNA連接酶基因的運(yùn)輸工具——運(yùn)載體分子手術(shù)刀----限制性核酸內(nèi)切酶(限制酶)磷酸二酯鍵EcoRI、SmaI限制酶提醒①切割的化學(xué)鍵為磷酸二酯鍵。②在切割目的基因和運(yùn)載體時(shí)要求用同一種限制酶,目的是產(chǎn)生相同的黏性末端。③將一個(gè)基因從DNA分子上切割下來,需要2個(gè)限制酶,同時(shí)產(chǎn)生4個(gè)黏性末端2023/10/15Copyright?Jiangyong限制性核酸內(nèi)切酶(限制酶)來源:主要從原核生物中分離化學(xué)本質(zhì):蛋白質(zhì)作用:能夠識(shí)別雙鏈DNA分子的某種特定核苷酸序列,并使每一條鏈中特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開。特性:特異性。即限制酶識(shí)別特定的脫氧核苷酸序列,切割特定位點(diǎn)切割后的DNA末端:黏性末端;平末端分子縫合針----DNA連接酶功能:將切下來的DNA片段拼接成新的DNA分子種類T4DNA連接酶:既能“縫合”雙鏈DNA片段互補(bǔ)的黏性末端,也能“縫合”雙鏈DNA的平末端(效率低)E·coliDNA連接酶:只能將雙鏈片段互補(bǔ)的黏性末端連接常用載體質(zhì)粒λ噬菌體的衍生物動(dòng)植物病毒基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體(分子運(yùn)輸車)2023/10/15Copyright?Jiangyong2023/10/15Copyright?Jiangyong(1)載體是基因運(yùn)輸工具,在基因操作過程中,使用載體有兩個(gè)目的:一是用它作為運(yùn)載工具,將目的基因送到宿主細(xì)胞中去;二是利用它在宿主細(xì)胞內(nèi)對(duì)目的基因進(jìn)行大量復(fù)制。
(2)種類:質(zhì)粒(既存在于原核生物細(xì)菌中,也存在
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