第十三章 流動(dòng)注射分析技術(shù)

第十三章流動(dòng)注射分析技術(shù)第一節(jié)概述

流動(dòng)注射分析（FlowInjectionAnalysis，簡(jiǎn)稱FIA）是一門(mén)比較年輕的分析技術(shù)，1975年由丹麥學(xué)者Ruzicka和Hansen教授在“流動(dòng)注射分析”論文中首次合名。Ruzicka等應(yīng)用非空氣間隔斷流體系，向在細(xì)管內(nèi)連續(xù)流動(dòng)的液流中注射一定何種的液體試樣，被測(cè)組分經(jīng)化學(xué)反應(yīng)（或不經(jīng)過(guò)化學(xué)反應(yīng)）后，導(dǎo)入檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)、定量。一般認(rèn)為流動(dòng)注射具有三大要素，即試樣注入、受控分散和準(zhǔn)確流動(dòng)經(jīng)歷時(shí)間。分析過(guò)程分為：試樣溶液注入載流、試樣溶液與載流的混合和反應(yīng)(試樣的分散和反應(yīng))、試樣溶液隨載流恒速地流進(jìn)檢測(cè)器被檢測(cè)三個(gè)過(guò)程。

一、特點(diǎn)1.實(shí)驗(yàn)設(shè)備簡(jiǎn)單、價(jià)格便宜，國(guó)產(chǎn)自動(dòng)化FIA儀器（不包括檢測(cè)器）的價(jià)格僅為數(shù)千元。操作簡(jiǎn)便易行；2.快速，一般分析速度為100-300樣/h，最高可達(dá)420樣/h，試樣經(jīng)在線復(fù)雜處理（如萃取、柱分離等）時(shí)分析速度也可達(dá)40-60樣/h；3.高精度，一般分析精度通常為0.3%-1%，即使反應(yīng)產(chǎn)物很不穩(wěn)定或經(jīng)過(guò)復(fù)雜的在線處理，其測(cè)定精度仍可達(dá)1.5%-3%；4.低消耗，F(xiàn)IA是一種微量分析技術(shù)，試樣消耗量為10-100uL，每個(gè)試樣消耗試劑量為數(shù)十微升至幾毫升，對(duì)生物活體分析或節(jié)約貴重試劑有十分重要的意義；5.靈活性和多樣性，它可以與多種檢測(cè)手段相結(jié)合，如分光光度法、電化學(xué)法、熒光法、及原子吸收法等。二、應(yīng)用范圍

FIA作為分析操作中一種新的溶液處理技術(shù)，應(yīng)用于藥物分析中產(chǎn)要涉及的藥物有磺胺類、水楊酸類、皮質(zhì)激素類、腎上腺素類、生物堿類、青霉素類、頭孢菌素類和維生素類。

應(yīng)用范圍主要包括原料藥物的分析，制劑分析中的片劑均勻度的測(cè)定和制劑的含量測(cè)定，藥物雜質(zhì)的檢查和體液分析等。在中藥檢驗(yàn)工作中，已經(jīng)有測(cè)定膽紅素、黃酮等。三、基本原理及分類1、基本原理

典型的FIA系統(tǒng)包括載流驅(qū)動(dòng)系統(tǒng)、注樣器或注樣閥、反應(yīng)器、流通式檢測(cè)器(折光計(jì)、比色計(jì)、紫外/可見(jiàn)分光光度計(jì)、離子選擇電極、原子吸光光度計(jì)、熒光計(jì)等)及信號(hào)讀出裝置。將一定體積的試樣溶液通過(guò)進(jìn)樣系統(tǒng)間歇地注入一個(gè)由泵推動(dòng)的密閉的連續(xù)流動(dòng)的載流中，載流由水及反應(yīng)試劑組成。剛注入的呈“塞”狀分布的試樣溶液被載流帶入反應(yīng)器并與試劑分散混合，發(fā)生化學(xué)反應(yīng)生成可被檢測(cè)的物質(zhì)，再由載流帶入檢測(cè)器中，從而通過(guò)記錄儀記錄的曲線峰高或峰寬，對(duì)標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度作標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出試樣中待測(cè)組分的含量。流程圖(此例中試樣為含Cl－的試液，載流為Hg(SCN)2、Fe3+)進(jìn)樣時(shí)的試樣“塞”2、分類根據(jù)檢測(cè)器的不同，可以有下列幾種類型FIA分析方法：1）流動(dòng)注射分析原子吸收檢測(cè)（FIA-AAS)：FIA與原子光譜法聯(lián)用，最初FIA只是作為原子光譜儀的進(jìn)樣系統(tǒng)。后來(lái)，由于發(fā)現(xiàn)聯(lián)用系統(tǒng)可大大節(jié)省試劑，并且進(jìn)樣之前樣品經(jīng)過(guò)分離富集等預(yù)處理，提高了測(cè)定的選擇性和靈敏度，因此得到廣泛應(yīng)用。2）流動(dòng)注射分析紫外－可見(jiàn)分光光度檢測(cè)：分光光度法是最早與FIA聯(lián)用的檢測(cè)方法,由于方法簡(jiǎn)便、儀器結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、價(jià)格低廉，至今仍然是應(yīng)用最廣泛的檢測(cè)方法。3）流動(dòng)注射分析熒光分光光度檢測(cè)：選擇性較好的熒光法與流動(dòng)注射聯(lián)用，因整個(gè)過(guò)程在一個(gè)密閉體系中完成，避免了氧的熒光淬滅，提高了定量分析的準(zhǔn)確度。熒光分光光度法更多地用于流動(dòng)注射免疫分析（FIIA）中，F(xiàn)IIA可分為均相和非均相兩種：①均相FIIA：是最簡(jiǎn)單的一種流動(dòng)注射免疫分析法。在本法中，反應(yīng)器中發(fā)生抗原抗體的結(jié)合反應(yīng)。抗原抗體的結(jié)合會(huì)改變抗體標(biāo)記物的信號(hào)，信號(hào)的變化由檢測(cè)器記錄，從而得到樣品量的信息。熒光分光光度法均相FIIA就是利用標(biāo)記物的熒光變化定量的。②非均相FIIA：本法中，固定相固著在一個(gè)流通小池中，稱著免疫反應(yīng)器。固定相結(jié)合抗原或抗體后成為一種有活性的微粒、膜、毛細(xì)管或其