雞堆型艾美耳球蟲病的發(fā)生與防治

雞堆型艾美耳球蟲病的發(fā)生與防治

球蟲病是一種常見的一起疾病，對雞造成了嚴(yán)重的傷害。經(jīng)濟(jì)損失令人驚訝。據(jù)Bhogal等(1992)報道,全世界每年因雞球蟲病造成的損失達(dá)20億元,抗球蟲藥每年消費是3.2億美元。Allen等(2002)報道,美國每年因球蟲病引起的經(jīng)濟(jì)損失可高達(dá)6.4億美元。我國養(yǎng)雞業(yè)因球蟲病造成的損失無系統(tǒng)報道,按索勛等估算我國年養(yǎng)肉雞為30～60億羽,平均每羽耗用抗球蟲藥費為0.2～0.3元,則每年用于抗球蟲藥的費用高達(dá)6～18億人民幣。雞球蟲隸屬于原生動物亞界、頂器復(fù)合門、孢子蟲綱、真球蟲目、艾美耳科、艾美耳屬(Eimeria)。據(jù)統(tǒng)計,全世界已報道的雞球蟲共有15種,除多數(shù)學(xué)者公認(rèn)的堆型艾美耳球蟲(E.acervulina)、布氏艾美耳球蟲(E.brunetti)、巨型艾美耳球蟲(E.maxima)、和緩艾美耳球蟲(E.mitis)、毒害艾美耳球蟲(E.necatrix)、早熟艾美耳球蟲(E.praecox)、柔嫩艾美耳球蟲(E.tenella)等7種艾美耳屬球蟲外,還有杜氏艾美耳球蟲(E.dubeyi)、哈氏艾美耳球蟲(E.hagani)、變位艾美耳球蟲(E.mivati)、范氏艾美耳球蟲(E.vanmurghavi)、雞等孢球蟲(Isosporagallinae)、諸雞等孢球蟲(I.gallinarum)、等孢球蟲種(I.sp.)、雞溫?fù)P球蟲(Wenyonellagallinae),這些種的獨立性還存在爭議。E.acervulina屬于中等毒力、寄生于小腸的球蟲,在集約化養(yǎng)雞場中流行率最高,對養(yǎng)雞業(yè)的危害僅次于柔嫩艾美耳球蟲。最近的研究證明,堆型艾美耳球蟲不僅伴隨柔嫩艾美耳球蟲混合感染引起臨床型球蟲病,同時主要由堆型艾美耳球蟲感染引起的亞臨床型球蟲病對養(yǎng)雞業(yè)造成的損失有時比臨床型球蟲病大得多。因而,有必要對堆型艾美耳球蟲的研究情況有較全面了解,本文對E.acervulina的流行狀況、致病性、免疫原性以及早熟蟲株培育等相關(guān)領(lǐng)域研究進(jìn)展情況進(jìn)行了綜述。1meractorvolica的生物學(xué)特性Tyzzer在對某一球蟲病發(fā)病雞場進(jìn)行蟲種鑒定時,發(fā)現(xiàn)了一種從未見過的卵圓形的小卵囊,對其生物學(xué)特征進(jìn)行詳細(xì)的研究,證明它是一個新種,并命名為Eimeriaacervulina。1929年Tyzzer將其研究結(jié)果以“雞形目的球蟲病”為題發(fā)表在《美國衛(wèi)生學(xué)雜志》上,該文詳述了雞的柔嫩艾美耳球蟲和另3個新種(堆型艾美耳球蟲、巨型艾美耳球蟲、和緩艾美耳球蟲)的形態(tài)特征。隨后許多國家相繼報道有E.acervulina存在,越來越多的學(xué)者開始對其生物學(xué)特性進(jìn)行深入研究。我國最早正式報道E.acervulina的是林昆華和熊大仕,他們于1981年報道在北京查出E.acervulina等6種雞球蟲。2雞球蟲病現(xiàn)狀E.acervulina的流行率最高,主要發(fā)生于3～6周齡的肉仔雞和后備母雞。一般在做寄生蟲學(xué)檢查時,才易察覺此蟲種。1994年,Williams對法國41個雞場的球蟲流行情況進(jìn)行了調(diào)查,發(fā)現(xiàn)E.acervulina的流行率達(dá)100%。Kucera(1990)對前捷克斯洛伐克16個雞場進(jìn)行了球蟲調(diào)查,結(jié)果E.acervulina流行率達(dá)94%。Long等(1987)報道,在1960～1962年間對送英國豪頓家禽研究所的雞只進(jìn)行球蟲檢查中,發(fā)現(xiàn)3個年度E.acervulina的流行率分別為31.37%、25.12%、31.62%。在我國,E.acervulina是養(yǎng)雞場最常見的一種球蟲,分布十分廣泛,眾多學(xué)者對其流行狀況進(jìn)行了研究。如黃兵等(2002)對上海地區(qū)不同區(qū)縣的種雞場、肉雞場和蛋雞場的雞球蟲病存在情況進(jìn)行了調(diào)查,發(fā)現(xiàn)E.acervulina出現(xiàn)率67%。李培英等(2004)對安徽合肥市79份雞的糞樣進(jìn)行了雞球蟲感染情況的檢查,得出雞球蟲優(yōu)勢蟲種為E.acervulina。該種球蟲已在我國29個省市區(qū)均有報道。3藥物性狀及前代子檢測索勛等記錄E.acervulina的卵囊為中等大小,呈卵圓形,無色,卵囊壁呈淡黃綠色,厚度為1.0μm,卵囊大小(17.7～20.2)μm×(13.7～16.3)μm,平均18.3μm×14.6μm。Levine(1961)記錄為卵囊無卵膜孔,無卵囊殘體,有一極粒,卵囊大小(12～23)μm×(9～17)μm,平均16μm×13μm;孢子囊呈卵圓形,大小(9～12)μm×(4.5～7.5)μm,平均為10.5μm×5.5μm。Tacla(1967)記錄卵囊具有一個卵膜孔,卵囊大小(13～22)μm×(10～16)μm,平均18μm×13.5μm;內(nèi)無孢子囊殘體,壁上含有一斯氏體。楊金生等測量200個卵囊,其大小為(13.5～21)μm×11～17.5μm,平均17.5μm×14.5μm,形態(tài)指數(shù)為1.21;孢子囊有斯氏體,無殘體,測200個孢子囊,大小為(4.6～9.5)μm×(3.5～6.5)μm。黃兵等對鑒定為E.acervulina的單卵囊分離物進(jìn)行觀測,卵囊呈卵圓形,囊壁光滑分為2層,囊內(nèi)有1～3個折光性顆粒;測量240個卵囊,大小為(16.25～21.25)μm×(12.5～17.5)μm,平均18.18μm×13.85μm,形狀指數(shù)1.31;孢子囊有斯氏體,未見孢子囊殘體,測120個孢子囊,大小范圍為(8～11)μm×(4.5～6.5)μm,平均9.59μm×5.21μm。由此可見不同地區(qū)、不同蟲株形態(tài)卵囊大小略有不同。4e.esp沉積因子分析潛在期和最短孢子化時間是鑒定球蟲的兩個重要參數(shù)。各學(xué)者報道的E.acervulina的潛在期和最短孢子化時間不盡相同(表1),這可能是由于實驗條件以及蟲株來源不同帶來的差異。5雞的生長和感染黃兵等研究表明,E.acervulina的感染多呈隱性感染,一般不會引起臨床癥狀,因而常被養(yǎng)雞者忽視。其實這種隱性感染造成的經(jīng)濟(jì)損失也較嚴(yán)重,因為E.acervulina廣泛寄生于十二指腸,整個腸上皮細(xì)胞被球蟲占領(lǐng),腸壁彈性喪失,黏膜層變薄,上皮組織廣泛脫落,飼料消化率、利用率低,而且飲水量的40%～60%不能被吸收,盡管雞大量飲水,出現(xiàn)脫水癥狀。從人工感染試驗結(jié)果看,感染量達(dá)仍到或超過5萬時,雞的生長就會受到明顯影響,增重顯著下降,在生長后期也難以得到補(bǔ)償。楊金生等研究表明,接種E.acervulina卵囊84h后,感染5萬和10萬兩組雞表現(xiàn)為飲食欲減少,羽毛逆立,糞便變稀;感染后144h,感染各組均出現(xiàn)明顯的臨床癥狀,糞便開始變稀不成形,帶有大量黏液,部分試驗雞糞便帶血,很少出現(xiàn)死亡。E.acervulina對增重影響比較明顯,隨著感染劑量的增加,增重顯著減少,感染5萬個卵囊,雞的相對增重率可下降40%以上,嚴(yán)重感染時可引起死亡。顧有方等研究表明,感染E.acervulina后96h有水樣糞便排出,同時混有未消化的飼料,剖檢時,在十二指腸和小腸前段的黏膜上出現(xiàn)少量點線狀的灰白色壞死灶,這種特征性病變隨感染時間的延長而加重;第144h左右,食欲稍減退,糞便呈細(xì)長面條狀,外裹有黏液,此時起雞有強(qiáng)烈的飲水欲。6重組菌p-9和krad-染色對E.acervulina的致弱主要采用早熟株選育和理化致弱兩種方法,由于該球蟲在雞胚上不發(fā)育,不能用雞胚傳代致弱。McDonald等(1982)最早選育出E.acervulina的早熟株,其潛在期縮短,繁殖潛力降低,具有很好的免疫原性。國內(nèi)秦建華等(1992)用早熟選育方法對E.acervulina保定株進(jìn)行了12代早熟選育,獲得了潛在期為74h的P-9株和62h的P-(12)株兩個早熟株。兩個早熟株放松選育傳遞2代,仍保持了早熟的特性。Jenkins等于1991年和1993年用15KradX-射線和12Krad-γ射線處理E.acervulina,發(fā)現(xiàn)卵囊毒力明顯下降,但仍可以使宿主產(chǎn)生保護(hù)性免疫反應(yīng)。Young(1994)研究了Co-γ射線對布氏艾美耳球蟲、巨型艾美耳球蟲、堆型艾美耳球蟲、柔嫩艾美耳球蟲及其后代的影響,用SPF雞進(jìn)行了致病性和免疫原性試驗,發(fā)現(xiàn)第3代艾美耳球蟲的致病性比輻射當(dāng)代更為嚴(yán)重。早熟株較其親代株繁殖能力下降,致病力降低,但仍然保持了良好的免疫原性,用于疫苗株是安全的,現(xiàn)已應(yīng)用于生產(chǎn)。目前使用的早熟株球蟲疫苗有Paracox(含有柔嫩艾美耳球蟲、巨型艾美耳球蟲、堆型艾美耳球蟲等7種早熟株)和Livacox含有(堆型艾美耳球蟲和巨型艾美耳球蟲的早熟株),可應(yīng)用于各種雞,尤其是種雞。7子胞菌回復(fù)突變試驗amesE.acervulina的免疫原性強(qiáng)。Jenkins等鑒定了E.acervulina的45種主要抗原,約15%有免疫原性,其分子量為20～250KDa,絕大多數(shù)位于裂殖子表面。Martin等(1995)鑒定E.acervulina引起細(xì)胞介導(dǎo)以及體液免疫反應(yīng)的抗原,電泳分離了裂殖子和子孢子成分,分子量為12.7～18.4KDa的裂殖子成分產(chǎn)生較多的干擾素,攻毒后產(chǎn)生良好的抗體反應(yīng);分子量為18.4～29KDa的裂殖子成分能引起很高的抗體滴度和少量淋巴細(xì)胞增殖;分子量為29～43KDa的裂殖子成分能引起大量淋巴細(xì)胞增殖,但抗體反應(yīng)正常;分子量為60～127KDa的裂殖子成分引起少量淋巴細(xì)胞增殖,抗體反應(yīng)正常,干擾素產(chǎn)生非常少。Jenkins等(1981)用125I標(biāo)記法對E.acervulina的子孢子、裂殖子表面顯性抗原進(jìn)行了生化分析,阻止球蟲侵入、發(fā)育的單抗可識別多種表面抗原。Danforth等(1989)用免疫血清篩選8種雞球蟲子孢子基因組和cDNA文庫,發(fā)現(xiàn)2種具有免疫潛能的抗原即CSZ-1和5401,其中CSZ-1抗原是E.acervulina子孢子表面蛋白的一個大約10～15KDa的片段,它能刺激雞發(fā)生T細(xì)胞反應(yīng),但不具有保護(hù)性免疫作用。3-1E是E.acervulina子孢子與裂殖生殖階段的表面抗原,Lillehoj等(2000)用重組3-1E蛋白免疫雛雞,發(fā)現(xiàn)可以促進(jìn)E.acervulina免疫雞的脾細(xì)胞發(fā)生增殖反應(yīng)以及誘導(dǎo)γ-干擾素的生成,并用桿狀病毒或大腸桿菌表達(dá)的3-1E蛋白免疫雛雞后免疫組卵囊排出量明顯減少。根據(jù)T細(xì)胞表面抗原,可將其分為CD8+T細(xì)胞(細(xì)胞毒性T細(xì)胞)和CD4+T細(xì)胞(輔助性T細(xì)胞)。CD8+T細(xì)胞在抗球蟲病中起到了十分重要的作用。Lillehoj等(2000)研究證實CD8+T細(xì)胞具有抗E.tenella、E.acervulina作用,用清除CD8+T細(xì)胞的雞再次感染E.tenella、E.acervulina,其敏感性增強(qiáng)。CD4+T細(xì)胞也在抗球蟲感染中起重要作用。Bessay等發(fā)現(xiàn)用E.acervulina感染雞后,十二指腸IEL(上皮間淋巴細(xì)胞)中CD4+T數(shù)目從感染后4d～8d有很大的提高,表明CD4+T淋巴細(xì)胞在初次免疫中發(fā)揮著重要作用,主要起免疫誘導(dǎo)、調(diào)節(jié)作用。IL-2(白細(xì)胞介素-2)是一種有效的生長因子,對多種細(xì)胞起作用,Choi等(2000)用E.acervulina感染雞,經(jīng)檢測脾臟和腸道中的IL-2mRNA轉(zhuǎn)錄水平在初次感染和再次感染后都有明顯增強(qiáng)。SO7(也被命名為GX3262)是第一種被發(fā)現(xiàn)的折光體蛋白,其重組蛋白表現(xiàn)出良好的免疫原性。Vermeulen等(1993)表達(dá)了E.acervulina的折光體蛋白Ea1A,發(fā)現(xiàn)其與煙胺酸依賴的轉(zhuǎn)氫酶(reducedformofnicotinamide)具有同源性,用其免疫雞可降低球蟲感染雞的卵囊產(chǎn)量,雞的增重下降也得到改善。8基于cdna的wlp-pcr檢測國外已經(jīng)建立了多株單克隆抗體細(xì)胞株,并應(yīng)用單克隆抗體對已建立的表達(dá)性DNA文庫進(jìn)行球蟲基因篩選,利用這種方法已經(jīng)篩選出很多基因,如E.acervulina的6S2、9S4、EAlA、MAI、EAMZp30-40、MA16等。Jenkins等(1988)用抗E.acervulina第三代裂殖子表面抗原的多克隆抗體從cDNA文庫中篩選出一個片段(cm2-8),該片段表達(dá)的融合蛋白的分子量為150KDa,其中蟲體蛋白為35KDa。Jerkins等(