玉屏風(fēng)顆?？箲?yīng)激止汗活性研究

玉屏風(fēng)顆?？箲?yīng)激止汗活性研究

玉屏用車是用玉屏風(fēng)散來(lái)制作的。它具有益氣、固表、止汗的功效。臨床應(yīng)用于身體的虛表不固、自發(fā)出汗和寒風(fēng)、皮膚白皙或身體無(wú)力的人。本試驗(yàn)根據(jù)其功效主治,分別從止汗、抗應(yīng)激及增強(qiáng)免疫功能等對(duì)該藥進(jìn)行了藥效研究。1材料表面1.1分組、給藥劑量、劑量玉屏風(fēng)顆粒浸膏,每g相當(dāng)生藥5.8g,由廣東環(huán)球制藥有限公司提供。小鼠給藥劑量按臨床日用量10倍、20倍、40倍設(shè)計(jì),分別為5.0g/kg、10,0g/kg、20.0g/kg。藥物用蒸餾水配成200g/L、400g/L、800g/L,給藥體積為25ml/kg。大鼠劑量按臨床用量5倍、10倍、20倍設(shè)計(jì),2.5g/kg、5.0g/kg、10.0g/kg,藥物配成250g/L、500g/L、1000g/L,給藥體積為10ml/kg。對(duì)照藥玉屏風(fēng)口服液,每瓶10ml,廣州嘉禾制藥廠生廠,批號(hào):060901,大鼠給藥按臨床用量的10倍設(shè)計(jì),藥物用蒸餾水配成0.5ml原液/ml,給藥體積同上;小鼠按臨床用量20倍設(shè)計(jì),藥物配成0.4ml原液/ml,給藥體積同上。1.2天津人民國(guó)家火廠硝酸毛果蕓香堿,規(guī)格:1ml含2mg,天津人民制藥廠生廠,批號(hào):730520。利血平,1ml含2mg,廣州市僑光制藥有限公司生產(chǎn),批號(hào):970901。1.3對(duì)于要求縣cSD大鼠,體重180～210g,普通級(jí),合格證:97A007;NIH小鼠,18～22g,普通級(jí),合格證:97A009,由廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。2方法和結(jié)果2.1大鼠足跖部的深紫色點(diǎn)汗點(diǎn)的檢測(cè)參照文獻(xiàn)方法加以改進(jìn),室溫23～24℃,大鼠隨機(jī)分為6組:正常組、毛果蕓香堿模型組、玉屏風(fēng)顆粒高、中、低計(jì)量組、玉屏風(fēng)口服液組。動(dòng)物預(yù)先給藥或等體積蒸餾水4天,末次給藥后45min皮下注射毛果蕓香堿1.0mg/kg(正常組注射生理鹽水),15min將動(dòng)物轉(zhuǎn)入特制鐵絲籠內(nèi),右后足固定籠外,適應(yīng)15min,用棉簽蘸上無(wú)水乙醇輕輕將足跖部污物擦拭干凈,于大鼠足跖部皮膚涂上和田-高恒氏試劑A液,待干燥后,再薄薄涂上B液,然后于10、20min用10倍放大鏡計(jì)數(shù)深紫色著色點(diǎn)(即汗點(diǎn))的數(shù)目。由表1結(jié)果可見,毛果蕓香堿模型組的汗點(diǎn)數(shù)較正常組顯著增加,玉屏風(fēng)顆粒中、高劑量組的汗點(diǎn)數(shù)較模型組的汗點(diǎn)數(shù)明顯減少,玉屏風(fēng)口服液也有止汗作用。2.2小鼠游泳實(shí)驗(yàn)結(jié)果小鼠隨機(jī)分為5組:蒸餾水組、玉屏風(fēng)顆粒高、中、低劑量組及玉屏風(fēng)口服液組,連續(xù)給藥7天,每天一次,末次給藥后1小時(shí)進(jìn)行游泳實(shí)驗(yàn)。泳缸水深30cm,面積40×40cm,將小鼠尾部負(fù)重10%體重后輕輕放入水中,用秒表記錄游泳時(shí)間,以小鼠尾巴觸底無(wú)力沖出水面為準(zhǔn),結(jié)果見表2。小鼠預(yù)先給藥7天,其游泳時(shí)間較蒸餾水組明顯延長(zhǎng)。2.3肌注利血平實(shí)驗(yàn)方法小鼠隨機(jī)分為6組:正常組、利血平組、玉屏風(fēng)顆粒高、中、低劑量組、玉屏風(fēng)口服液組。除正常組外,其余各組每天上午肌注利血平0.2mg/kg連續(xù)4天,之后每天加量至0.3mg/kg連續(xù)4天,共8天。每天下午給藥或等體積蒸餾水1次,末次給藥后一小時(shí)按上述方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。由表3結(jié)果可見,利血平模型組的游泳的時(shí)間較正常組明顯減少,而同時(shí)給玉屏風(fēng)顆粒組,其游泳時(shí)間均較模型組延長(zhǎng)。2.4小鼠游泳實(shí)驗(yàn)采用限制飲食法造模。小鼠隨機(jī)分為6組,除正常組給充足飼料外,其余各組按100g/kg·d給予飼料,造模7天后開始給藥或等體積蒸餾水,每天一次,連續(xù)7天,末次給藥后1小時(shí)進(jìn)行游泳實(shí)驗(yàn),水溫保持45±0.5℃,記錄小鼠放入水中至死亡時(shí)間作為游泳時(shí)間。結(jié)果見4,氣虛模型小鼠組的游泳時(shí)間較正常組明顯縮短,玉屏風(fēng)顆粒組的游泳時(shí)間相對(duì)延長(zhǎng),以高、中劑量組及玉屏風(fēng)口服液組的作用顯著。2.5低溫游泳實(shí)驗(yàn)采用放血法造模。將動(dòng)物隨機(jī)分為6組,除正常組外,其余各組小鼠于第1、5、11天眼球采血0.4ml/只,每天下午給藥或等體積蒸餾水一次,第14天給藥后1小時(shí)進(jìn)行低溫游泳實(shí)驗(yàn),將小鼠放入冰水浴中游泳,記錄小鼠死亡時(shí)間。結(jié)果見表5,放血?dú)馓撃Ｐ托∈蟮挠斡緯r(shí)間較正常組明顯縮短,而同時(shí)給藥的各組均明顯延長(zhǎng)。2.6起球蛋白咀嚼指數(shù)ld小鼠隨機(jī)分為5組,每天一次,連續(xù)給藥7天,末次給藥后1小時(shí),小鼠尾靜脈注射一得閣墨汁0.1ml/10g(用前500rpm離心5min,去掉大顆粒,用2倍生理鹽水稀釋),注射后1min、10min眼眶采血10μl,放入3ml0.1%Na2CO3溶液中混勻,在675nm處測(cè)OD值,此值經(jīng)校正(減去空白血的OD值),按公式計(jì)算吞噬指數(shù)。結(jié)果見表6,玉屏風(fēng)顆粒高、中劑量及玉屏風(fēng)口服液的吞噬指數(shù)均較蒸餾水組升高,提示該藥有一定的提高網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)(RES)吞噬功能的作用。3玉屏風(fēng)散對(duì)正常小鼠、利血平質(zhì)和免疫調(diào)節(jié)的作用玉屏風(fēng)散是益氣固本的經(jīng)典方劑,出自《丹溪心法》,由黃芪、白術(shù)、防風(fēng)組成,具有益氣、固表、止汗的功效,臨床常用氣虛自汗,上呼吸道反復(fù)感染,體虛感冒等的衛(wèi)氣虛證。研究表明該方劑有抗應(yīng)激、提高免疫作用。陳新等研究表明玉屏風(fēng)散可拮抗風(fēng)寒刺激造成衛(wèi)氣虛小鼠和截肢應(yīng)激法造成小胸腺病理性萎縮,并能抑制截肢應(yīng)激造成小鼠T、B淋巴細(xì)胞對(duì)ConA和LPS的轉(zhuǎn)化反應(yīng)減弱,IL-2含量下降及NK細(xì)胞活性下降。本研究表明玉屏風(fēng)顆粒能明顯提高正常小鼠、利血平脾虛小鼠的抗疲勞能力,提高限制飲食法致氣虛小鼠的游泳時(shí)間,也能提高失血性氣虛小鼠低溫游泳生存時(shí)間,提示該制劑的益氣作用之一與其提高機(jī)體的抗應(yīng)激能力有關(guān)。中醫(yī)的氣虛與機(jī)體的免疫功能低下有關(guān),研究表明玉屏風(fēng)散有多方面提高免疫的作用,周然等的研究發(fā)現(xiàn)玉屏風(fēng)散可明顯增加小鼠呼吸道免疫球蛋白的含量,增加小鼠血清溶血素抗體的產(chǎn)生,拮抗環(huán)磷酸胺致小鼠脾細(xì)胞總數(shù)的溶血空斑形成細(xì)胞(PFC)數(shù)的降低。畢玉霞等研究表明玉屏風(fēng)散可提高小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬功能,促進(jìn)小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化、延緩免疫細(xì)胞衰老等作用。張紅軍等的研究表明玉屏風(fēng)散對(duì)氫化考的松所致小鼠脾細(xì)胞抗體形成細(xì)胞(AFC)功能、T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化、巨噬細(xì)胞的吞噬功能以及脾效應(yīng)細(xì)胞殺傷活性(APCC)的抑制均有明顯的拮抗作用。本研究表明,玉屏風(fēng)顆粒也有提高小鼠網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)吞噬功能的作用,提示該制劑臨床治療氣虛證