基因擴(kuò)增PCR實(shí)驗(yàn)室

基因擴(kuò)增（PCR）實(shí)驗(yàn)室遼陽鑫宇實(shí)驗(yàn)室設(shè)備安裝工程有限公司技術(shù)部前言基因擴(kuò)增檢查實(shí)驗(yàn)室一文，是根據(jù)國(guó)家有關(guān)法律、法規(guī)和技術(shù)規(guī)范，進(jìn)行選編、擇錄和收集有關(guān)資料、文章而編寫的。選編和擇錄有關(guān)技術(shù)規(guī)范等，如有錯(cuò)誤是編著人理解有誤，編者表達(dá)歉意。本文的平面圖由黃海江、效果圖趙玉、錄入周悅同志完畢。柏松楓、何興福、張璐、張偉卓、趙馨、趙儼、熊潔萌等編寫。陳洪柱參加校對(duì)。總經(jīng)理郎憲明（高級(jí)工程師）編導(dǎo)。本文為內(nèi)部參閱資料，僅供參考。2月基因擴(kuò)增（PCR）實(shí)驗(yàn)室基因擴(kuò)增檢查辦法（簡(jiǎn)稱PCR）敏捷度高、特異性強(qiáng)、精確快捷、合用范疇廣等特點(diǎn)。在生物學(xué)、醫(yī)學(xué)科學(xué)研究、轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品、臨床檢測(cè)、疾病與動(dòng)物疫病防止和控制、公安偵查等有關(guān)專業(yè)和學(xué)科廣為應(yīng)用。但是，PCR檢查實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用時(shí)需確保明驗(yàn)安全、設(shè)立合理的實(shí)驗(yàn)室、規(guī)范的操作程序和嚴(yán)格的管理制度。近幾年，對(duì)PCR實(shí)驗(yàn)室建設(shè)越來越得到重視，由于對(duì)檢測(cè)成果的可靠性、精確性和安全性起到至關(guān)重要作用，PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)核心問題是如何避免污染。實(shí)驗(yàn)室的平面布局、空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)運(yùn)行、氣流控制等都是圍繞避免污染這個(gè)核心進(jìn)行設(shè)計(jì)和建設(shè)。1.PCR實(shí)驗(yàn)室組合形式PCR實(shí)驗(yàn)室能夠是分散形式，也能夠是組合形式，現(xiàn)在重要是以組合形式為主。1.1分散形式PCR實(shí)驗(yàn)室各功效區(qū)間分散，又有一定的間距，不會(huì)造成區(qū)間干擾，因此沒有特定規(guī)定。由于工作流程的不便利，在新組建的PCR實(shí)驗(yàn)室時(shí)往往不被采用。1.2組合形式PCR實(shí)驗(yàn)室在較大空間實(shí)驗(yàn)用房相鄰布置依次劃分各功效區(qū)域，形成一種組合形式完畢基因擴(kuò)增分析的PCR實(shí)驗(yàn)室，各區(qū)間在物理空間上完全互相獨(dú)立，各區(qū)間無論是在空間還是在使用中，始終處在完全的分隔狀態(tài)。但是，各實(shí)驗(yàn)區(qū)間集中布置，容易造成互相干擾，因此對(duì)總體布局以及屏障系統(tǒng)含有一定規(guī)定。對(duì)實(shí)驗(yàn)室的空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)、氣流流向、大氣壓力、人物流程等方面，在實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)和裝修上需進(jìn)行合理考慮。2.PCR實(shí)驗(yàn)室的區(qū)域設(shè)計(jì)2.1PCR實(shí)驗(yàn)室分區(qū)PCR實(shí)驗(yàn)室可分兩個(gè)工作區(qū)域：核酸擴(kuò)增前區(qū)和核酸擴(kuò)增后區(qū)。核酸擴(kuò)增前區(qū)涉及試劑準(zhǔn)備區(qū)和樣品解決區(qū)，設(shè)在不同房間或區(qū)域；核酸擴(kuò)增后區(qū)涉及擴(kuò)增區(qū)和產(chǎn)物分析區(qū)，設(shè)在不同房間或區(qū)域。2.1.1P2.1.2核酸擴(kuò)增前區(qū)和核酸擴(kuò)增后區(qū)可設(shè)在一種房間內(nèi)，但必須在滿足下列規(guī)定的前提下：2.1.2.1核酸擴(kuò)增前區(qū)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)設(shè)立兩個(gè)不同位置的實(shí)驗(yàn)區(qū)，試劑配備在超凈工作臺(tái)中操作，樣品解決在生物安全柜內(nèi)操作。2.1.2.2在核酸擴(kuò)增后區(qū)使用全封閉的擴(kuò)增和檢測(cè)系統(tǒng)時(shí)，如實(shí)時(shí)熒光PCR儀等。2.1.2.3每個(gè)實(shí)驗(yàn)人員使用各自的試劑、耗材、移液器和盛放污染物的盛器。2.1.2.4在實(shí)驗(yàn)前后對(duì)操作區(qū)域和共享器具進(jìn)行清潔及消毒。2.1.2.5各區(qū)域的試劑、器具、儀器和設(shè)備為該區(qū)專用，不得交叉使用。2.2PCR實(shí)驗(yàn)室各區(qū)域功效：2.2.1試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)：擴(kuò)增試劑的制備、試劑的分裝和擴(kuò)增反映混合液的制備以及離心管、吸頭等消耗品的儲(chǔ)存和準(zhǔn)備。2.2.2標(biāo)本制備區(qū)：樣品登記、解決和分裝；核酸（RNA/DNA）提取、保存和使用；PCR擴(kuò)增的第一輪加樣。對(duì)于涉及樣本的操作應(yīng)符合生物安全二級(jí)實(shí)驗(yàn)室防護(hù)原則或更高。2.2.3基因擴(kuò)增區(qū)：cDNA合成和DNA擴(kuò)增。如果在此區(qū)進(jìn)行套式PCR的第二輪加樣，應(yīng)在PCR防護(hù)罩內(nèi)進(jìn)行。2.2.4擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)：擴(kuò)增產(chǎn)物的電泳、雜交、成像、序列測(cè)定、變性高效液相分析、成果分析、登記及報(bào)告。2.3工作區(qū)域設(shè)備和儀器的配備。2.3.1試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)2-8℃和-20℃下列的冰箱、普通離心機(jī)、超凈工作臺(tái)、混勻器、微量加樣器（覆蓋0.2-1000μL），消耗品（一次性手套、耐高壓解決的離心管和加樣吸頭）、專用工作服工作鞋（套）、專用辦公用品和廢棄物容器、可移動(dòng)紫外線燈。2.3.2標(biāo)本制備區(qū)2-8℃冰箱、-20℃（或-80℃）冰箱，生物安全柜、高速制冷離心機(jī)（臺(tái)式）、混勻器、恒溫水浴箱或加熱模塊、制冰器或制冷模塊、微量加樣器、消耗品（一次性手套、耐高壓解決的離心管和加樣吸頭）、專用工作服工作鞋（套）、上下水設(shè)備、專用辦公用品和廢棄物容器、紫外線殺菌燈。如需解決大分子的DNA應(yīng)含有超聲波水浴儀。2.3.3擴(kuò)增區(qū)核酸擴(kuò)增儀、微量加樣器、消耗品（一次性手套、耐高壓解決的離心管和加樣吸頭）、專用工作服工作鞋（套）、專用辦公用品和廢棄物容器、紫外線殺菌燈。2.3.4擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)視檢查辦法不同而定，基本配備以下：電泳儀、電泳槽、攝影/像設(shè)備、變性高效液相分析儀、測(cè)序儀、紫外透射儀、普通冰箱、離心機(jī)、恒溫水浴、微波爐、上下水設(shè)備、紫外線燈、微量加樣器、消耗品（一次性手套、耐高壓解決的離心管和加樣吸頭）、專用工作服工作鞋（套）、專用辦公用品和廢棄物容器。各區(qū)域設(shè)備和儀器的配備，應(yīng)根據(jù)使用的擴(kuò)增檢測(cè)技術(shù)或試劑特點(diǎn)，對(duì)設(shè)備和儀器進(jìn)行必要的增減。2.4PCR實(shí)驗(yàn)室單向流流向制度2.4.1實(shí)驗(yàn)室的空氣單向流流向應(yīng)當(dāng)為：試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)→樣品制備區(qū)→擴(kuò)增區(qū)→擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)，不得逆向流動(dòng)。擴(kuò)增前區(qū)保持微（弱）正壓狀態(tài)，擴(kuò)增后區(qū)保持微（弱）負(fù)壓狀態(tài)。2.4.2實(shí)驗(yàn)用品單向流工作流向應(yīng)當(dāng)為：試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)→樣品制備區(qū)→擴(kuò)增區(qū)→擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)，不得逆向進(jìn)行。實(shí)驗(yàn)用品涉及實(shí)驗(yàn)材料（試劑、樣品和擴(kuò)增產(chǎn)物）、實(shí)驗(yàn)器材（容器、板架、實(shí)驗(yàn)服裝、帽子、口罩、手套、鞋套）、辦公用品（統(tǒng)計(jì)紙、筆）、以及清潔工具等。物品的傳送是通過互鎖式傳遞窗傳遞。2.4.3實(shí)驗(yàn)人員單向工作流流向應(yīng)當(dāng)為：進(jìn)入各工作區(qū)域嚴(yán)格按照試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)→樣品制備區(qū)→擴(kuò)增區(qū)→擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)單一方向進(jìn)行，不得逆向走動(dòng)。原則上實(shí)驗(yàn)人員應(yīng)在擴(kuò)增后區(qū)工作后當(dāng)天不得再返回?cái)U(kuò)增前區(qū)工作。在標(biāo)本制備區(qū)由于加樣的操作中可能會(huì)發(fā)憤怒溶膠污染，因此應(yīng)避免或減少在本區(qū)內(nèi)不必要的走動(dòng)。2.4.4實(shí)驗(yàn)室的單向清潔流流向應(yīng)當(dāng)為：試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)→樣品制備區(qū)→擴(kuò)增區(qū)→擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)的方向進(jìn)行。不同的實(shí)驗(yàn)區(qū)域應(yīng)當(dāng)有各自的清潔用品，以避免交叉污染。2.5PCR實(shí)驗(yàn)室工作基本原則和實(shí)驗(yàn)室各區(qū)域工作注意事項(xiàng)2.5.1嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn)室分區(qū)制度；各區(qū)域必須有明確的標(biāo)記，只用于特定的操作，不得從事其它工作；不同區(qū)域的設(shè)備物品（儀器、設(shè)備、材料、清潔工具），不得交叉使用。2.5.2不同工作區(qū)域使用不同工作服（例如不同顏色），工作人員離開工作區(qū)域時(shí)，不得將工作服帶出。2.5.3實(shí)驗(yàn)前移入所需試劑、耗材、樣品以及盛放污染物的容器。2.5.4試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)：儲(chǔ)存試劑和用于標(biāo)本制備的消耗品等材料須直接運(yùn)輸至本區(qū)，不能通過擴(kuò)增檢測(cè)區(qū)。試劑盒中的陽性對(duì)照品及質(zhì)控品不能保存在本區(qū)，應(yīng)當(dāng)保存在標(biāo)本制備區(qū)。2.5.5標(biāo)本制備區(qū)：由于在樣品混合、核酸純化過程中可能會(huì)發(fā)憤怒溶膠所致污染，可通過在本區(qū)內(nèi)設(shè)正壓條件，避免從鄰近區(qū)域進(jìn)入本區(qū)的氣溶膠污染。為避免標(biāo)本間的交叉污染，加入待測(cè)核酸后，必須蓋好含反映混合液的反映管。對(duì)含有潛在傳染危險(xiǎn)性的材料，必須在生物安全柜內(nèi)操做，并有明確的標(biāo)本解決和滅活程序。2.5.6擴(kuò)增區(qū)：為避免氣溶膠所致的污染，應(yīng)當(dāng)盡量避免或減少本區(qū)內(nèi)的人員不必要的走動(dòng)。必須注意全部通過檢測(cè)的反映管不得在本區(qū)內(nèi)打開。2.5.7擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)：核酸擴(kuò)增后產(chǎn)物的分析辦法較多，如膜上或微孔板或芯片上探針雜交辦法（放射性核素標(biāo)記或非放射性核素標(biāo)記）直接或酶切后瓊脂糖凝膠電泳、聚丙烯酰胺凝膠電泳southern轉(zhuǎn)移、核酸測(cè)序辦法、質(zhì)譜分析等。本區(qū)是最重要的擴(kuò)增產(chǎn)物污染來源，因此，必須注意避免通過本區(qū)物品及工作服將擴(kuò)增物帶出。在使用PCR-ELISA辦法檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物時(shí)，必須使用洗板機(jī)洗板，廢液必須收集在1moL/LHCL中，不能在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)傾倒，應(yīng)當(dāng)遠(yuǎn)離PCR實(shí)驗(yàn)室的地方棄掉。用過的吸頭也必須放在1moL/LHCL中侵泡后再放到廢棄物容器或垃圾袋中按程序解決。2.5.8工作結(jié)束過后，須對(duì)工作區(qū)進(jìn)行清潔解決：對(duì)工作區(qū)域的實(shí)驗(yàn)臺(tái)面進(jìn)行清潔消毒（如使用次氯酸鈉），實(shí)驗(yàn)臺(tái)面采用紫外線照射更為方便、效果更佳。由于紫外線照射的距離和能量對(duì)于去污的效果非常核心，可使用移動(dòng)紫外線燈（254nm波長(zhǎng)），在工作完畢后調(diào)至實(shí)驗(yàn)臺(tái)面上60-90cm范疇內(nèi)照射。由于擴(kuò)增產(chǎn)物僅幾百和幾十堿基對(duì)(bp),對(duì)紫外線損傷不敏感，因此紫外線照射擴(kuò)增片段必須延長(zhǎng)照射時(shí)間，最佳是照射過夜。由于本區(qū)有可能會(huì)用到某些可致基因突變和有毒物質(zhì)，如溴化乙錠、丙烯酰胺、甲醛或放射性核素等，故應(yīng)當(dāng)注意實(shí)驗(yàn)人員的安全防護(hù)。3.PCR實(shí)驗(yàn)室建設(shè)與裝修3.1根據(jù)使用采用儀器的不同擬定五個(gè)或四個(gè)或三個(gè)或二個(gè)區(qū)域，各區(qū)域必須設(shè)立緩沖間，緩沖間宜設(shè)正壓，使室內(nèi)空氣不流向室外，室外空氣不流向室內(nèi)，以減少室內(nèi)外空氣交換。也可設(shè)專用走廊，但緩沖間比專用走廊更為重要。3.2PCR實(shí)驗(yàn)室空氣流向，可按照試劑儲(chǔ)藏和準(zhǔn)備區(qū)→標(biāo)本制備區(qū)→擴(kuò)增區(qū)→擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)方向進(jìn)行空氣壓力遞減方式控制氣流流向，避免擴(kuò)增產(chǎn)物順空氣氣流逆向進(jìn)入擴(kuò)增前的區(qū)域。也可通過負(fù)壓排風(fēng)裝置、排電扇或其它可行的方式進(jìn)行。3.3壓差與凈化級(jí)別3.3.1試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)、樣品解決區(qū)應(yīng)設(shè)微正壓，以避免外界核酸氣溶膠的進(jìn)入，造成污染，能夠通過空氣進(jìn)風(fēng)風(fēng)量的不不大于排風(fēng)量達(dá)成正壓效果。3.3.2核酸擴(kuò)增區(qū)、產(chǎn)物分析區(qū)應(yīng)設(shè)微負(fù)壓，避免含核酸的氣溶膠擴(kuò)散出去而污染試劑與樣品，造成假陽性成果，能夠通過控制排風(fēng)風(fēng)量不不大于進(jìn)風(fēng)風(fēng)量達(dá)成負(fù)壓效果。3.3.3P3.4PCR實(shí)驗(yàn)室空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)及壓力控制為避免各個(gè)實(shí)驗(yàn)區(qū)域間交叉感染的可能性，宜采用全送全排的氣流組織形式。同時(shí)要嚴(yán)格控制送排風(fēng)的比例，以確保各實(shí)驗(yàn)區(qū)的壓力規(guī)定。3.4.1試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)：由于該區(qū)重要進(jìn)行的操作為儲(chǔ)存試劑的制備、試劑的分裝和主反映混合液的制備，對(duì)于氣流壓力的控制，本區(qū)沒有嚴(yán)格規(guī)定，但宜采用微正壓。3.4.2標(biāo)本制備區(qū)：該區(qū)域重要進(jìn)行的操作為標(biāo)本的保存、核酸（RNA、DNA）提取、儲(chǔ)存即加入至擴(kuò)增反映管和測(cè)定RNA和DNA的合成體。本區(qū)的壓力梯度規(guī)定與相對(duì)相鄰近區(qū)域?yàn)檎龎?，是為避免從鄰近區(qū)進(jìn)入本區(qū)氣溶膠污染。3.4.3擴(kuò)增區(qū)：擴(kuò)增反映混合物配制和擴(kuò)增反映，該區(qū)域重要進(jìn)行的操作為DNA和CDNA擴(kuò)增。另外，已制備的DNA模板和合成的CDNA（來自標(biāo)本制備區(qū)）的加入和主反映混合液（來自試劑儲(chǔ)存和制備區(qū)）制備成反映混合液等也可在本區(qū)內(nèi)進(jìn)行。在巢式PCR測(cè)試中，普通在第一輪擴(kuò)增后必須打開反映管，由于巢式擴(kuò)增有較高的危險(xiǎn)性，第二次加樣必須在本區(qū)內(nèi)進(jìn)行。因此，本區(qū)壓力梯度規(guī)定為相對(duì)鄰近區(qū)域?yàn)樨?fù)壓，以避免氣溶膠從本區(qū)瀉出。3.4.4擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)：該區(qū)域重要進(jìn)行的操作為擴(kuò)增片段的測(cè)定（根據(jù)所使用的分析儀器的不同此區(qū)域與擴(kuò)增區(qū)能夠合并為一種區(qū)），本區(qū)是重要擴(kuò)增產(chǎn)物污染來源，因此對(duì)本區(qū)域的壓力梯度規(guī)定相對(duì)于鄰近區(qū)域應(yīng)為負(fù)壓，以避免擴(kuò)增產(chǎn)物從本區(qū)域擴(kuò)散至其它區(qū)域。4.PCR實(shí)驗(yàn)室污染的防止與控制PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)的核心問題是如何避免實(shí)驗(yàn)室污染。常見的污染有下列幾個(gè)：天然基因組DNA的污染、試劑的污染以及標(biāo)本間（樣品）的污染。由于一旦發(fā)生污染，實(shí)驗(yàn)就必須停止，直至查到污染源為止，并且實(shí)驗(yàn)成果必須作廢，需重新進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，不僅浪費(fèi)人力、物力，并且也延長(zhǎng)了實(shí)驗(yàn)成果的報(bào)告時(shí)間。實(shí)驗(yàn)室一旦發(fā)生污染，尋查污染源是一件很繁瑣的事情，因此要避免污染，首先是防止污染的發(fā)生，而不是發(fā)生了再研究如何排除。避免污染的發(fā)生，應(yīng)注意：4.1工作區(qū)域的嚴(yán)格劃分4.1.1各個(gè)區(qū)域的合理設(shè)立4.1.2各個(gè)實(shí)驗(yàn)區(qū)域須有明顯的標(biāo)記（如醒目的門牌或不同的地面顏色），以避免各個(gè)不同的實(shí)驗(yàn)區(qū)域設(shè)備、物品、試劑等發(fā)生混淆。4.2合理的系統(tǒng)設(shè)立4.2.1合理的空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)設(shè)立，應(yīng)盡量采用全送全排的空調(diào)系統(tǒng)（擴(kuò)增區(qū)和產(chǎn)物分析區(qū)更為重要）。4.2.2嚴(yán)格的氣流壓力控制，確保不同的實(shí)驗(yàn)區(qū)域內(nèi)不同的壓力梯度。4.2.3嚴(yán)格確保合理的氣流流程工藝，確保核酸擴(kuò)增后區(qū)的氣流不逆向流入核酸擴(kuò)增前區(qū)。4.3嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn)室配套設(shè)施完備的實(shí)驗(yàn)室配套實(shí)施是確保明驗(yàn)工作的必備條件，應(yīng)根據(jù)各個(gè)區(qū)域功效配備對(duì)應(yīng)的設(shè)備和儀器，如生物安全柜、超凈工作臺(tái)、離心機(jī)等。避免PCR實(shí)驗(yàn)室的污染除了實(shí)驗(yàn)室在設(shè)計(jì)上應(yīng)注意工作區(qū)域的嚴(yán)格劃分、合理的系統(tǒng)設(shè)立、完備的配套設(shè)施外，規(guī)范的操作和嚴(yán)格的管理也同樣重要。5.裝飾材料5.1吊頂與隔墻：采用彩鋼夾心板等材料要符合國(guó)家有關(guān)實(shí)驗(yàn)室的消防規(guī)范。應(yīng)構(gòu)造牢固、氣密性好；全部陰角應(yīng)采用弧形線條過渡，墻體內(nèi)壁光潔不吸附、易清潔消毒、耐腐蝕。功效相近的實(shí)驗(yàn)室隔墻設(shè)立比例適宜的透視窗，透視窗以雙面玻璃為好，這樣能保持與墻體齊平，隔墻距走廊隔墻不低于1.5米為宜，吊頂棚高以2.4~2.6m為宜。5.2地面：實(shí)驗(yàn)室建議采用PVC卷材或環(huán)氧樹脂整體地面，地面與墻交界處應(yīng)圓弧過渡上墻120mm-150mm（需用水沖刷房間），使用進(jìn)口橡膠卷材（片）更佳。地面材料與其它圍護(hù)構(gòu)造交界處應(yīng)安全平齊過渡，無縫隙和裂紋，地面鋪設(shè)前采用自流平解決，地面平整性好、易清潔、耐腐蝕。5.3門：彩鋼板門框?yàn)槔滠埐垆?，外加鋁型材，配專用密封條，優(yōu)質(zhì)閉門器，設(shè)可視窗，門單向鎖定。緩沖間的門與主實(shí)驗(yàn)室的門有互鎖功效。5.4傳遞窗：各實(shí)驗(yàn)室區(qū)間設(shè)不銹鋼互鎖功效傳遞窗并含有消毒功效，試劑和標(biāo)本通過傳遞窗傳遞，確保試劑和標(biāo)本在傳遞過程中不受污染（人物分流）。5.5給排水系統(tǒng)：給排水管宜設(shè)在緩沖區(qū)。給水管路最佳采用薄壁不銹鋼鋼管，管上安裝逆止閥。緩沖區(qū)設(shè)洗手盆，手動(dòng)水龍頭；標(biāo)本制備區(qū)、擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)設(shè)洗手盆，水龍頭（感應(yīng)、腳踏、手動(dòng)）和洗眼器。如果設(shè)立地漏，地漏采用不銹鋼密閉地漏。5.6照明：燈具要選用凈化燈具，便于清洗不積塵。6安全與自動(dòng)系統(tǒng)6.1疏散出口（專用走廊）設(shè)立專用疏散批示燈（標(biāo)記）及應(yīng)急照明。6.2送排風(fēng)系統(tǒng)采用變頻控制，并聯(lián)動(dòng)互鎖，即工作時(shí)先啟動(dòng)排風(fēng)機(jī)后啟動(dòng)送風(fēng)機(jī)。停機(jī)時(shí)相反，并設(shè)事故自動(dòng)報(bào)警裝置。6.3自動(dòng)系統(tǒng)發(fā)生故障時(shí)由手動(dòng)控制裝置控制，自動(dòng)控制系統(tǒng)設(shè)備及主件采用進(jìn)口產(chǎn)品為宜。6.4網(wǎng)絡(luò)與通信：各區(qū)域?qū)嶒?yàn)室、緩沖室設(shè)網(wǎng)絡(luò)終端，在專用走廊設(shè)電話分機(jī)。6.5強(qiáng)電系統(tǒng)：實(shí)驗(yàn)室用電負(fù)荷為一級(jí)負(fù)荷，采用雙路電源供電，設(shè)自動(dòng)切換裝置，配電箱單獨(dú)設(shè)立。根據(jù)實(shí)驗(yàn)室各區(qū)域功效合理配備三相和單相電源，穿管暗線埋設(shè)，大型儀器接地線布局到位。實(shí)驗(yàn)室照度滿足規(guī)范規(guī)定（最低照度為200lx），裝有紫外線燈，照射無死角。7.PCR實(shí)驗(yàn)室建設(shè)與裝修注意事項(xiàng)7.1在設(shè)計(jì)的過程中應(yīng)注意事項(xiàng)：規(guī)范的安裝流程和全方面的服務(wù)流程；嚴(yán)格按照規(guī)范科學(xué)設(shè)計(jì)的安裝流程。安裝前需要擬定下列安裝條件，如：電源電壓、電源進(jìn)線位置、電話網(wǎng)絡(luò)線位置、進(jìn)水水壓、最小安裝空間、地面平整度、通風(fēng)孔、給水管和下水管的位置等，抱負(fù)狀態(tài)的尺寸。7.2PCR實(shí)驗(yàn)室能夠按二級(jí)生物安全實(shí)驗(yàn)室建設(shè)原則執(zhí)行，國(guó)標(biāo)是底線不能違反，行業(yè)原則高于國(guó)標(biāo)，應(yīng)按行業(yè)原則執(zhí)行。7.3實(shí)驗(yàn)室各區(qū)域功效不同，為滿足設(shè)備、儀器、用品等的擺放需求，各區(qū)域須有充足的空間。建筑面積（m2）分派，以聚合酶聯(lián)反映法為例：試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)25~35、樣品解決區(qū)20~30、核酸擴(kuò)增區(qū)20~30、擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)20~30為宜。各區(qū)域的緩沖間也須留有足夠的使用面積，方便于洗手盆、更衣柜、衛(wèi)生用品等的擺放、存儲(chǔ)和出入門的設(shè)立與啟動(dòng)。如果平面布局允許宜設(shè)專用走廊，專用走廊寬度不得低于1.2m，設(shè)立進(jìn)出口。7.4實(shí)驗(yàn)室樣品解決區(qū)的面積應(yīng)不不大于其它區(qū)域，方便于生物安全柜的擺放，如采用實(shí)時(shí)熒光法，擴(kuò)增區(qū)和擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)合并一種區(qū)域，房間尺寸可適宜縮小，因全封閉熒光分析儀尺寸不大。7.5緩沖間、試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)、樣品解決區(qū)設(shè)立正壓間；擴(kuò)增區(qū)、擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)設(shè)立負(fù)壓間。7.6PCR實(shí)驗(yàn)室各區(qū)域間沒有干凈度的規(guī)定，但是為了保護(hù)和延長(zhǎng)生物安全柜的使用壽命和實(shí)驗(yàn)環(huán)境，經(jīng)濟(jì)條件允許狀況下，各區(qū)域均可采用空調(diào)通風(fēng)凈化系統(tǒng)，干凈度宜為8~9級(jí)。7.7PCR實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增區(qū)、擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)的氣流不能逆流向擴(kuò)增前的區(qū)域，以免污染造成假陽性成果。擴(kuò)增區(qū)、擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)排風(fēng)不得排向技術(shù)夾層，應(yīng)排向室外。7.8但凡有壓差規(guī)定的房間，在顯著位置須設(shè)有壓差顯示裝置，并預(yù)留測(cè)試孔，測(cè)試孔要密封。7.9洗手盆不適宜過大，實(shí)驗(yàn)臺(tái)面兩端棱角須圓弧解決，實(shí)驗(yàn)臺(tái)底層離地面距離在150mm以上或考慮加裝移動(dòng)輪便于移動(dòng)。7.10基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室應(yīng)選用B2級(jí)生物安全柜，不適宜選用A1/2級(jí)生物安全柜，因A1/2級(jí)生物安全柜循環(huán)風(fēng)易造成標(biāo)本交叉污染。7.11實(shí)驗(yàn)室微正壓是指相對(duì)于大氣壓的最小壓差不得低于10Pa，因在多風(fēng)季節(jié)大氣的最小正壓差往往能達(dá)成5Pa或5Pa以上。7.12技術(shù)夾層寬度應(yīng)不低于600mm，800mm為宜。7.13各房間進(jìn)出的門，根據(jù)室內(nèi)壓差，設(shè)立門的啟動(dòng)方向。8.基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室（PCR）參考文獻(xiàn)即文獻(xiàn)擇錄9.平面布局見圖1/210.工程案例8.基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室（PCR實(shí)驗(yàn)室）設(shè)計(jì)參考文獻(xiàn)文獻(xiàn)1、有關(guān)同意公布《疾病防止控制中心建設(shè)原則》建標(biāo)127—號(hào)。文獻(xiàn)擇錄第13頁：附表一疾病防止控制中心特殊用途實(shí)驗(yàn)室用房建筑面積指標(biāo)。項(xiàng)目名稱建筑面積（㎡）備注項(xiàng)目功效室內(nèi)環(huán)境規(guī)定其它PCR實(shí)驗(yàn)室試劑配備室25~35聚合酶鏈反映實(shí)驗(yàn)宜為正壓合用于有一定生物安全隱患的實(shí)驗(yàn)；實(shí)驗(yàn)流向、氣流、人流、物流均為單向流。樣品解決室20~30宜為BSL-2或以上等級(jí)實(shí)驗(yàn)室核酸擴(kuò)增室20~30壓強(qiáng)不高于樣品解決室，局部5級(jí)凈化產(chǎn)物分析室20~30壓強(qiáng)低于核酸擴(kuò)增室文獻(xiàn)擇錄第37頁：如