生命科學(xué)低值可口革囊星蟲體壁膠原蛋白特性研究

摘要以越南可口革囊星蟲為原材料，采用酸法從體壁中提取膠原蛋白，對(duì)所提膠原蛋白的理化特性進(jìn)行研究。通過(guò)紫外全波長(zhǎng)掃描（UV）、SDS凝膠電泳、氨基酸分析、粘度和變性溫度特性測(cè)定、凝膠強(qiáng)度、保濕性對(duì)膠原蛋白進(jìn)行分析。結(jié)果顯示，可口革囊星蟲ASC紫外掃描波長(zhǎng)在230nm處有最大吸收峰，SDS電泳結(jié)果顯示可口革囊星蟲ASC含有β、α1、α2鏈，屬于I型膠原蛋白；可口革囊星蟲ASC中甘氨酸、谷氨酸和脯氨酸含量較高；可口革囊星蟲ASC變性溫度為33.6℃，具有較好的熱穩(wěn)定性；凝膠強(qiáng)度為84.65N；保濕率與甘油相比較低。關(guān)鍵詞：可口革囊星蟲；酸法；膠原蛋白；理化特性

AbstractUsingPhascolosomaesculentasinVietnamasrawmaterials,thecollagenwasextractedfrombodywallbyacidmethod,andthephysicalandchemicalpropertiesoftheextractedcollagenwerestudied.Collagenwasanalyzedbyultravioletfullwavelengthscanning(UV),SDSgelelectrophoresis,aminoacidanalysis,viscosityanddenaturationtemperaturecharacteristicdetermination,gelstrengthandmoistureretention.TheresultsshowedthattheultravioletscanningwavelengthofASCofPhanerochaetevietnamesehadthemaximumabsorptionpeakat230nm.SDSelectrophoresisresultsshowedthatASCofPhanerochaetevietnamesecontainedβ,α1andα2chains,belongingtotypeIcollagen.Thecontentsofglycine,glutamicacidandprolineinASCofPhanerochaetevietnamesearerelativelyhigh.ASCdenaturationtemperatureofPhanerochaetevietnameseis33.6℃,whichhasgoodthermalstability.Thegelstrengthwas84.65N;Themoistureretentionrateislowerthanthatofglycerol.Keywords：Phanerochaetevietnamese；acidmethod；collagen；Physicalandchemicalcharacteristics

目錄1引言 低值可口革囊星蟲體壁膠原蛋白特性研究1引言1.1可口革囊星蟲簡(jiǎn)介可口革囊星蟲(Phascolosomaesculenta)，屬于星蟲動(dòng)物門，革囊星蟲綱，革囊星蟲目，革囊星蟲科，革囊星蟲屬動(dòng)物，俗稱泥蒜、土丁、沙蟲等，主要分布于浙江、福建、廣東等東南沿海，為中國(guó)特有物種[1]。其滋味鮮美，風(fēng)味獨(dú)特，且東南沿海地區(qū)產(chǎn)量較大，故自古以來(lái)就被沿海居民所食用，閩南風(fēng)味小吃“土筍凍”就是以其為原料而制成。各類報(bào)道中表明，可口革囊星蟲富含多種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，具有多方面的保健功能；可口革囊星蟲不僅可以食用，還可以藥用。在中醫(yī)理論中，不僅能有效改善陰虛潮熱，氣血不足的癥狀，還具有腎經(jīng)、歸脾的功效，常常用作治療虛火上炎及滋陰補(bǔ)腎的治療藥物。因此可口革囊星蟲也被稱為“動(dòng)物人參”、“海洋冬蟲夏草”[2-3]。1.2膠原蛋白簡(jiǎn)介膠原蛋白是生物體內(nèi)的重要蛋白質(zhì)，主要存在于動(dòng)物的骨骼和皮膚中，能對(duì)生物機(jī)體起到保護(hù)、支持等作用，也是哺乳動(dòng)物中最廣泛、最豐富的動(dòng)物結(jié)締組織和功能蛋白質(zhì)的主要組成部分[4]。膠原蛋白是一種具有三螺旋結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)，是自然界中的天然生物高分子材料，具良好的生物兼容性、生物活性和生物可降解性。膠原蛋白所具有的結(jié)構(gòu)功能多樣性和復(fù)雜性，在許多不同的領(lǐng)域有具有極大的發(fā)展?jié)摿蛷V闊的應(yīng)用前景[5]。隨著生物化學(xué)、分子生物化學(xué)和材料科學(xué)的迅速發(fā)展，膠原蛋白所具有的特殊結(jié)構(gòu)與功能將在食品、藥品、化妝品、生物醫(yī)學(xué)等方面廣泛應(yīng)用，膠原蛋白的加工應(yīng)用逐漸成為關(guān)注焦點(diǎn)與研究熱點(diǎn)。1.3膠原蛋白提取方法現(xiàn)如今，膠原蛋白的提取方法一般有酸法、堿法、酶法、鹽法和熱水抽提法，通過(guò)改變溫度、鹽濃度、pH等外界環(huán)境，使不同特性的膠原蛋白從原料中分離出來(lái)。每種方法都有各自的優(yōu)缺點(diǎn)，在實(shí)際的操作過(guò)程中為了提高膠原蛋白的提取率，通常會(huì)將不同的提取方法相結(jié)合，提取方法的差異，也會(huì)導(dǎo)致所提取的膠原蛋白在理化特性上有一定差別。1.3.1酸法酸法提取是利用一定濃度的酸溶液在一定的條件下提取膠原蛋白，在實(shí)際操作中較為常用和有效。在酸提過(guò)程中膠原蛋白的三螺旋結(jié)構(gòu)不容易被破壞，因此適合運(yùn)用到生物醫(yī)學(xué)材料領(lǐng)域[6]。酸提取法中主要使用的酸是檸檬酸、冰醋酸、鹽酸等。王曉軍等[7]報(bào)道了以牦牛骨為原料，用酸法提取膠原得率為2.24%（濕基）。1.3.2堿法堿法提取是指在一定的外部條件下用一定濃度的堿提取膠原蛋白，通常使用的堿性溶液為氫氧化鈣、氫氧化鈉、碳酸鈉等。但堿提過(guò)程中容易導(dǎo)致蛋白質(zhì)變性，如肽鍵水解，會(huì)導(dǎo)致水解產(chǎn)物分子量低，還有可能產(chǎn)生D、L-型氨基酸消旋混合物，部分D-型氨基酸具有毒性，也可能會(huì)有一定的致癌性，還會(huì)影響L-型氨基酸的吸收，因此，采用堿法提取膠原蛋白不能保留其的三螺旋結(jié)構(gòu)。目前單純使用堿法提取的例子不多，大多與酸相結(jié)合使用[8]。1.3.3酶法用酶法提取膠原反應(yīng)條件溫和、反應(yīng)迅速、實(shí)驗(yàn)設(shè)備簡(jiǎn)單、產(chǎn)生污染少，并且得到的膠原水溶性、理化性質(zhì)穩(wěn)定。常用的酶包括胃蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶等[9]。目前，提取蛋白的熱點(diǎn)是將各種酶混合使用，以獲得更高的提取率。胡勝等[10]利用不同的酶提取豬皮膠原蛋白并進(jìn)行研究。MasahiroO等[11]以黑鼓魚為原料，采用酶法提取了膠原蛋白。1.3.4鹽法鹽法提取是利用不同的鹽在不同的濃度條件下提取膠原的方法。作為溶劑使用的鹽主要有氯化鈉、氯化鉀、乙酸鈉等。膠原蛋白不溶于較低濃度的鹽，當(dāng)鹽的濃度達(dá)到一定量時(shí)，膠原就會(huì)溶解在其中。但反應(yīng)系統(tǒng)中存在中性鹽效應(yīng)，可能會(huì)對(duì)膠原蛋白的穩(wěn)定性和構(gòu)象穩(wěn)定性造成影響，不利于提取天然膠原蛋白。Z.Deyl等[12]報(bào)道了用中性鹽成功提取膠原蛋白的例子。1.3.5熱水抽提法熱水抽提法是將原料進(jìn)行預(yù)處理，在一定條件下通過(guò)熱水抽提而得到水溶性膠原蛋白的方法。該方法在實(shí)驗(yàn)中通常與酸、堿提取法結(jié)合使用。首先，用一定濃度的酸或堿溶液處理原料，使膠原纖維得到充分溶脹，再用熱水進(jìn)行抽提，就能在一定程度上提高膠原纖維的溶解性。需要注意的是，膠原蛋白的三螺旋空間結(jié)構(gòu)在經(jīng)過(guò)熱水抽提后會(huì)被破壞，而提取的產(chǎn)物通常稱之為明膠[13]。1.4膠原蛋白測(cè)定方法膠原蛋白的測(cè)定目前還沒(méi)有直接、簡(jiǎn)便的方法，但是膠原蛋白中含有羥脯氨酸這一特有氨基酸，所以一般先測(cè)定其羥脯氨酸含量，再乘以相應(yīng)的系數(shù)而計(jì)算出膠原蛋白的含量。羥鋪氨酸的測(cè)定通常使用分光光度法或液相色譜法。分光光度法是一種傳統(tǒng)的、簡(jiǎn)便的方法，且對(duì)實(shí)驗(yàn)條件要求低，因此實(shí)驗(yàn)中常用此方法進(jìn)行測(cè)定。但分光光度法只能測(cè)定毫克級(jí)的羥脯氨酸，不能辨別出膠原的類型。相較而言高效液相色譜法更適宜在工業(yè)化生產(chǎn)中應(yīng)用。色譜法能快速進(jìn)行分析、且樣品用量少，靈敏度高、能使分離和檢測(cè)一次完成，易于實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化[14]。1.5研究?jī)?nèi)容及意義膠原蛋白所特有的三螺旋結(jié)構(gòu)賦予其很多有用的特性，膠原作為天然的生物資源，在生物相容性和可降解性上是合成高分子材料無(wú)法與之相比的，因此，它廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)藥、組織工程、化妝品和食品工業(yè)等領(lǐng)域，動(dòng)物膠原蛋白已經(jīng)成為一種廣泛且有代表性的綠色天然生物材料。但目前膠原蛋白主要從陸地哺乳動(dòng)物中提取，近年來(lái)，相關(guān)畜類疾病如狂犬病和口蹄疫的爆發(fā)次數(shù)越來(lái)越多，人們對(duì)其安全性產(chǎn)生質(zhì)疑，并且受到了部分宗教的限制。因此，從海洋生物中提取膠原成為國(guó)內(nèi)外學(xué)者關(guān)注的熱點(diǎn)。星蟲具有含豐富的膠原蛋白的體壁，星蟲種類很多，有的品種味道鮮美價(jià)值高，有的味道差，食用人少，價(jià)格低廉。本論文的研究目的是以價(jià)格低廉的越南可口革囊星蟲為原料提取其體壁膠原蛋白，并對(duì)其顏色、外觀、膠原類型、氨基酸組成、粘度、變性溫度、凝膠強(qiáng)度、紫外吸收峰等特性進(jìn)行研究，為進(jìn)一步開發(fā)利用星蟲資源提供了更廣闊的思路，為其進(jìn)一步加工和應(yīng)用提供了重要的生物學(xué)數(shù)據(jù)和理論依據(jù)。2材料和方法2.1材料、試劑與儀器2.1.1原材料越南可口革囊星蟲：購(gòu)于寧德宏遠(yuǎn)水產(chǎn)有限公司。2.1.2主要試劑氫氧化鈉、正丁醇、冰乙酸、氯化鈉、溴化鉀2.1.3主要儀器本實(shí)驗(yàn)所用儀器見(jiàn)表2-1。表2-1實(shí)驗(yàn)儀器實(shí)驗(yàn)儀器廠家SQP電子天平賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司磁力攪拌器河南愛(ài)博特科技發(fā)展有限公司S60紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)英國(guó)柏楉有限公司電泳儀（DYY-6C型）美國(guó)Bio-Rad公司烏式粘度計(jì)上海玻璃儀器廠TMS-PRO質(zhì)構(gòu)儀美國(guó)FTCDK-8D型恒溫水浴鍋上海三發(fā)科學(xué)儀器有限公司3-16PK高速冷凍離心機(jī)德國(guó)Sigma公司FDU-1200凍干機(jī)東京理化器械株式會(huì)社JSM-6490LV掃描電子顯微鏡JEOL日本株式會(huì)社835-50氨基酸自動(dòng)分析儀日本Hitachi公司2.2試驗(yàn)方法2.2.1星蟲的預(yù)處理將新鮮越南星蟲去內(nèi)臟，清洗干凈，在-20℃下貯藏備用。取一定量的星蟲體壁，用蒸餾水沖洗三次，去除體壁上殘留的雜質(zhì)。在4℃下，以1:10（m/V）的料液比添加0.1mol/LNaOH溶液浸泡并攪拌24h（NaOH溶液每6h更換一次），以去除可口革囊星蟲體壁中的雜蛋白物質(zhì)。然后用冰水沖洗可口革囊星蟲的體壁直到中性，等完全瀝干后，加入10%正丁醇以料液比為1:30（m/v），充分浸泡并攪拌24h（每6h更換正丁醇溶液一次），正丁醇用以除去體壁中的脂肪，再用冰水沖洗可口革囊星蟲體壁直到中性，充分瀝干，以備下次使用。2.2.2星蟲體壁酸溶性膠原蛋白（ASC）的提取分別取一定量預(yù)處理后的星蟲體壁加入0.5mol/L乙酸溶液，按1：20（m/V）的料液比?；旌虾蟮男窍x體壁浸泡乙酸溶液在4℃下低速攪拌24h，并在9000r/min下離心30min，取其上清液。未提取徹底的星蟲體壁用次同等量的0.5mol/L冰醋酸浸泡，用以徹底提取星蟲的體壁，混合上清液，并將研磨精細(xì)的NaCl緩慢加入到溶液中，直至最終濃度c(NaCl)=0.9mol/L，靜置過(guò)夜，利用冷凍離心機(jī)在10000r/min下離心30min，離心管內(nèi)得到白色絮狀沉淀；將白色的絮狀物質(zhì)在蒸餾水透析1天，每6h更換1次透析液。采用冷凍干燥法對(duì)透析過(guò)的膠原蛋白溶液進(jìn)行冷凍干燥，得到可口革囊星蟲體壁酸溶性膠原蛋白（ASC）。按下式計(jì)算膠原蛋白提取率，可口革囊星蟲提取率（濕基）=（凍干后的膠原蛋白mg2.2.3顏色、質(zhì)地對(duì)已冷凍干燥的越南可口革囊星蟲進(jìn)行色澤、質(zhì)地方面的感官性狀分析比較。2.2.4紫外全波長(zhǎng)掃描（UV）依據(jù)JeevithanE等[15]的操作方法并適當(dāng)調(diào)整。取適量?jī)龈傻男窍xASC樣品溶解在0.5mol/L冰醋酸溶液中，制備0.5mg/mL的膠原蛋白溶液，以0.5mol/L冰醋酸溶液用作空白對(duì)照。在190-400nm近紫外光區(qū)以2nm/s的速度對(duì)膠原蛋白溶液進(jìn)行掃描，分辨率為0.5nm。2.2.5膠原類型測(cè)定（SDS）利用SDS電泳分析膠原蛋白樣品。取一定量的可口革囊星蟲ASC，加入0.1mol/L的醋酸溶液配制成1mg/mL膠原蛋白溶液。配制10%的分離膠和5%的濃縮膠，取30μL的ASC樣品溶液，再加入10μL4×上樣緩沖液，在沸水中煮沸5min，在4000r/min下離心5min，離心后用微量進(jìn)樣器取20μL的溶液上樣，100V電泳。電泳后染色、脫色，拍照觀察。2.2.6氨基酸組成氨基酸采用GB/T14965-94鹽酸水解法測(cè)定。2.2.7粘度、變性溫度的測(cè)定取一定量的可口革囊星蟲膠原蛋白，溶于0.1mol/L冰醋酸溶液中，配制成含有0.03%的膠原蛋白溶液。將制配含有0.03%的星蟲膠原蛋白溶液倒入烏式粘度計(jì)，將烏氏粘度計(jì)浸入水浴鍋中并進(jìn)行固定，溫度從15℃緩慢升高至45℃，每隔5℃測(cè)定一次，測(cè)定時(shí)要在30min內(nèi)維持溫度不變，使膠原溶液的溫度與水浴鍋溫度保持一致，測(cè)量溶液通過(guò)毛細(xì)管所需要的時(shí)間，每個(gè)溫度下做平行試驗(yàn)，重復(fù)測(cè)定3次[16-18]。以0.1mol/L冰醋酸溶液為空白對(duì)照，重復(fù)上述操作。假設(shè)膠原蛋白樣品溶液密度和0.1mol/L冰醋酸溶劑的密度相同，相對(duì)粘度ηt=t/t0，粘度增加ηsp=(η?η0)/η0=(t?t0)/t02.2.8凝膠強(qiáng)度的測(cè)定參考HaoS等[19]的方法并稍作修改，將可口革囊星蟲ASC冷凍干燥的樣品切成1.0cm×1.0cm×1.0cm的立方體，使用質(zhì)構(gòu)儀對(duì)膠原蛋白樣品凝膠的質(zhì)構(gòu)特性進(jìn)行分析。參數(shù)設(shè)定：探頭型號(hào)P/50，測(cè)試前速度1.00mm/s，測(cè)試速度1.00mm/s，測(cè)試后速度1.00mm/s；樣品壓縮比為40%，感應(yīng)力5.0gf。每組樣品平行測(cè)定3次。2.2.9保濕性的測(cè)定精確稱取經(jīng)過(guò)凍干后的星蟲膠原蛋白的樣品0.50g，放置于稱量瓶?jī)?nèi)，往里加進(jìn)樣品質(zhì)量10%的蒸餾水，取一密閉的干燥器，將稱量瓶和無(wú)水硅膠置于其中，同時(shí)用甘油作對(duì)照試驗(yàn)，每經(jīng)過(guò)一小時(shí)，測(cè)定一次樣品質(zhì)量，重復(fù)實(shí)驗(yàn)三次，按下式計(jì)算樣品和甘油的保濕率。以時(shí)間為橫坐標(biāo)，保濕率為縱坐標(biāo)作保濕曲線。Y（%）=(式中：Y—保濕率（%）；m0—試驗(yàn)開始時(shí)樣品或甘油的含水量（g）；mt—t小時(shí)后樣品或甘油的含水量（g）。2.2.10掃描電鏡將適量的膠原蛋白凍干樣品黏連于樣盤雙面膠上，蒸金處理。將樣品座置于蒸金室中，對(duì)蒸金室進(jìn)行抽真空，設(shè)置好時(shí)間后加電壓，得到掃描結(jié)果。掃描條件：高壓20kV；束流6.9×10—2mA；工作距離11.96mm。3結(jié)果與分析3.1顏色、外觀星蟲膠原蛋白凍干品如圖3-1所示，越南星蟲膠原蛋白凍干品顏色偏黃，質(zhì)地硬脆。圖3-1圖3-1可口革囊星蟲膠原蛋白凍干品3.2紫外全波長(zhǎng)掃描（UV）可口革囊星蟲ASC的紫外掃描光譜如圖3-2所示。由圖可知可口革囊星蟲ASC在230mm處有最大吸收峰，符合膠原蛋白的特性，這與已報(bào)道的膠原的UV吸收特性一致[20]，因此可以初步判斷該蛋白質(zhì)為膠原蛋白。與其他類型的蛋白質(zhì)不同的是，大多數(shù)蛋白質(zhì)中會(huì)含有色氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸等這幾種氨基酸，在280nm處會(huì)有一個(gè)較強(qiáng)的吸收峰，而膠原蛋白幾乎不含有這幾種氨基酸或含量很低，因此一般在280nm處沒(méi)有強(qiáng)吸收峰出現(xiàn)。圖3-2中可口革囊星蟲ASC在280nm處有一個(gè)小吸收峰，可能是由于提取的膠原蛋白不夠純含有雜蛋白所導(dǎo)致的。可口革囊星蟲ASC的特征吸收波長(zhǎng)與草魚皮膠原蛋白[21]、鱘魚魚皮膠原蛋白[22]的紫外掃描光譜分析結(jié)果相似。圖3-3可口革囊星蟲膠原蛋白電泳圖譜圖3-3可口革囊星蟲膠原蛋白電泳圖譜注：A,B—越南可口革囊星蟲膠原蛋白；C—分子量標(biāo)準(zhǔn)圖3-2可口革囊星蟲膠原蛋白紫外光譜圖圖3-2可口革囊星蟲膠原蛋白紫外光譜圖3.3膠原類型測(cè)定（SDS）星蟲膠原蛋白SDS電泳結(jié)果如圖3-3，圖中顯示為同一樣品的兩條泳帶。由圖可知可口革囊星蟲ASC有3條帶，分子量在110kDa以上，從上到下依次是β、α1、α2鏈，說(shuō)明星蟲膠原蛋白為I型膠原蛋白，并且膠原蛋白在酸提過(guò)程中沒(méi)有遭到破壞和降解，結(jié)構(gòu)仍然較完整。星蟲ASC的SDS電泳圖與海參體壁膠原蛋白[20]、鰱魚皮膠原蛋白[23]、鯰魚皮膠原蛋白[24]的電泳圖譜相似，這說(shuō)明在星蟲與海參、鰱魚、鯰魚皮膠原蛋白分子結(jié)構(gòu)類似。3.4膠原蛋白氨基酸組成可口革囊星蟲ASC氨基酸測(cè)定結(jié)果如表3-1。膠原蛋白的氨基酸組成有一個(gè)顯著特點(diǎn)，具有豐富的甘氨酸、谷氨酸和脯氨酸。因?yàn)槟z原蛋白多肽鏈序列由Gly-X-Y氨基酸序列不斷重復(fù)而成，從而甘氨酸含量在其中的占比較高。由表可知星蟲膠原中甘氨酸含量最高，占總氨基酸含量的23.31%，具有典型的膠原氨基酸組成特征。經(jīng)比較，可口革囊星蟲ASC甘氨酸含量與鮰魚皮[25]（23.1%）相似，低于鯉魚皮[26]（32.5%）、草魚皮[8]（33.6%）。本實(shí)驗(yàn)所提取的可口革囊星蟲ASC氨基酸組成中，除色氨酸未被檢出外，另外七種人體必需氨基酸含量占總氨基酸的18.89%，具有較高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。表3-1可口革囊星蟲ASC氨基酸測(cè)定結(jié)果氨基酸氨基酸含量(mg/g)Asp6.27Glu10.98Ser3.12His0.24Gly16.83Thr2.12Arg7.28Ala3.56Tyr0.85Val2.90Met0.49Phe1.04Ile1.13Leu2.97Lys2.99Pro9.423.5粘度、變性溫度的測(cè)定膠原蛋白的熱穩(wěn)定性是由其在溶液中分子的熱變性溫度所表達(dá)的。用烏氏粘度計(jì)測(cè)定可口革囊星蟲ASC的粘度，結(jié)果如圖3-4。從圖中可以看出，低溫時(shí)可口革囊星蟲ASC比濃粘度較高，30-40℃時(shí)星蟲ASC比濃粘度隨溫度升高變化明顯，與其他報(bào)道中的膠原蛋白比濃粘度變化趨勢(shì)相似。比濃粘度變化一半時(shí)的溫度為變性溫度，計(jì)算出可口革囊星蟲膠原蛋白變性溫度為33.6℃，高于刺參[27]（24.3℃）、鱸魚(25℃)、鯽魚[28]（27℃），與羅非魚[29]（34.5℃）相似，具有較好的熱穩(wěn)定性。有研究[9]認(rèn)為水產(chǎn)生物的生存環(huán)境的溫度可能會(huì)在一定程度上影響其膠原蛋白的變性溫度，因此推測(cè)這也可能是星蟲膠原蛋白變性溫度較高的原因。圖3-5可口革囊星蟲膠原蛋白凝膠強(qiáng)度圖3-4可口革囊星蟲膠原蛋白熱變性曲線圖圖3-5可口革囊星蟲膠原蛋白凝膠強(qiáng)度圖3-4可口革囊星蟲膠原蛋白熱變性曲線圖3.6凝膠強(qiáng)度的測(cè)定凝膠強(qiáng)度是評(píng)價(jià)蛋白凝膠作用的主要標(biāo)準(zhǔn)，具有一定的研究和利用價(jià)值?？煽诟锬倚窍xASC凝膠強(qiáng)度測(cè)定結(jié)果如圖3-5所示。由圖可知可口革囊星蟲ASC凝膠強(qiáng)度84.65N，具有較強(qiáng)的凝膠強(qiáng)度及彈性、恢復(fù)性。3.7保濕性的測(cè)定膠原蛋白作為一種重要的化妝品原材料，保濕性是護(hù)膚化妝品的關(guān)鍵指標(biāo)。可口革囊星蟲ASC保濕性測(cè)定結(jié)果如圖3-6所示。由圖可知隨著時(shí)間的增加，可口革囊星蟲ASC的保濕率變化趨勢(shì)和甘油相似，但保濕率與甘油相比偏低，也低于鰈魚[30]、鯉魚[31]，保濕性能較弱。圖3-6可口革囊星蟲ASC和甘油的保濕性曲線圖3-6可口革囊星蟲ASC和甘油的保濕性曲線3.8掃描電鏡膠原蛋白的顯微結(jié)構(gòu)對(duì)實(shí)際應(yīng)用有重要影響?？煽诟锬倚窍xASC掃描電鏡結(jié)果如圖3-6所示，分別為ASC在放大100倍、200倍、500倍下的掃描電鏡圖。從圖中可以看出通過(guò)酸法提取的可口革囊星蟲膠原蛋白呈現(xiàn)疏松、多孔、分布均勻的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，且通過(guò)放大500倍的掃描電鏡圖能看到ASC表面較光滑，纖維呈薄片狀，說(shuō)明酸提取過(guò)程基本保持了膠原纖維原有的結(jié)構(gòu)，比較適合運(yùn)用到生物醫(yī)學(xué)材料領(lǐng)域。注注：A：100x；B：200x；C：500x圖3-6可口革囊星蟲ASC掃描電鏡圖ABC4結(jié)論本實(shí)驗(yàn)從越南可口革囊星蟲體壁提取酸溶性膠原蛋白（ASC），并對(duì)其理化特性進(jìn)行研究，得出以下結(jié)論：1.采用酸法從可口革囊星蟲體壁提取膠原蛋白提取率為2.90%，越南星蟲膠原蛋白凍干品顏色偏黃，質(zhì)地硬脆。2.紫外光譜掃描結(jié)果表明，可口革囊星蟲ASC在230nm處有最大吸收峰，符合已知的膠原蛋白基本特征，可初步判斷從可口革囊星蟲體壁提取的蛋白質(zhì)為膠原蛋白?？煽诟锬倚窍xASC的電泳圖有3條帶，從上到下依次是β、α1、α2鏈，星蟲膠原蛋白屬于I型膠原蛋白。氨基酸分析結(jié)果表明，可口革囊星蟲ASC具有豐富的甘氨酸、谷氨酸和脯氨酸，甘氨酸占氨基酸總含量的23.31%，占比最高，星蟲ASC的氨基酸組成與I型膠原蛋白基本類似，且其所含人體必需氨基酸含量占總氨基酸的18.89%，具有一定的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。3.通過(guò)熱穩(wěn)定性測(cè)定可知可口革囊星蟲ASC變性溫度為33.6℃，具有較高的熱穩(wěn)定性。4.通過(guò)凝膠強(qiáng)度測(cè)定可知可口革囊星蟲ASC凝膠強(qiáng)度為84.65N，具有較強(qiáng)的凝膠強(qiáng)度及彈性、恢復(fù)性。5.通過(guò)保濕性測(cè)定可知可口革囊星蟲ASC的保濕率隨時(shí)間的增加而逐漸降低，保濕率與甘油相比偏低，保濕性能較弱。6.通過(guò)掃描電鏡結(jié)果可知，酸法提取的可口革囊星蟲ASC呈現(xiàn)疏松、多孔、分布均勻的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，且表面較光滑，纖維呈薄片狀，適合運(yùn)用到生物醫(yī)學(xué)材料領(lǐng)域。綜上所述，可口革囊星蟲ASC具有較高的熱穩(wěn)定性、較強(qiáng)的凝膠強(qiáng)度及彈性、恢復(fù)性，也具有一定的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，雖然保濕性能較弱，但價(jià)格相對(duì)更低廉，具有良好的開發(fā)前景。參考文獻(xiàn)[1]李鳳魯,周紅,王瑋.中國(guó)沿海星蟲動(dòng)物門名錄[J].青島海洋大學(xué)學(xué)報(bào),1992(02):72-88.[2]張金鼎.海洋藥物與效方[M].北京:中醫(yī)古籍出版社,1998.154-155.[3]管華詩(shī),王曙光.中華海洋本草第3卷海洋無(wú)脊椎動(dòng)物藥[M].上海:上海科學(xué)技術(shù)出版社,2009:78-90.[4]JongjareonrakA,BenjakulS,VisessanguanW,etal.Isolationandcharacterisationofacidandpepsin-solubilisedcollagensfromtheskinofBrownstriperedsnapper(Lutja-nusvitta)[J].FoodChemistry,2004,93(3):475-484.[5]李昀.膠原蛋白在食品和化妝品中的應(yīng)用[J].天津農(nóng)學(xué)院學(xué)報(bào),2005(02):54-57.[6]余海,廖小宜,周志瑜.鼠尾肌腱膠原蛋白的提取及凝膠的制備[J].海南醫(yī)學(xué),2000(03):64-65+88.[7]王曉軍,吳婷,賈偉,等.酸法和酶法提取牦牛骨膠原蛋白的特性分析[J].食品科學(xué),2018,39(12):101-106.[8]張建忠.草魚皮膠原蛋白的制備及性質(zhì)研究[D].南京農(nóng)業(yè)大學(xué),2007.[9]劉磊.海蜇膠原蛋白的提取、純化及理化性質(zhì)研究[D].江南大學(xué),2009.[10]胡勝,李志強(qiáng),陳敏.皮膠原蛋白的酶法提取及在高附加值領(lǐng)域的應(yīng)用[J].皮革科學(xué)與工程,2002(05):38-43.[11]MasahiroO,RalphJP,MichaelWM,etal.Biochemicalpropertiesofboneandscal-ecollagensisolatedfromthesubtropicalfishblackdrum(Pogoniacromis)andsh-eepsheadseabream(Archosargusprobatocephalus)[J].FoodChemistry,2004,(88):495-501.[12]Z.Deyl,,I.Miksik.Advancedseparationmethodsforcollagenparentα-chains,theirpolymersandfragments[J].JournalofChromatography,2000,39:3-31.[13]林琳.魚皮膠原蛋白的制備及膠原蛋白多肽活性的研究[D].中國(guó)海洋大學(xué),2006.[14]曹慧,許時(shí)嬰.反相高效液相色譜法測(cè)定軟骨中的II型膠原蛋白[J].食品工業(yè)科技,2010,31(08):348-350.[15]JEEVITHANE,WUW,NANPINGW,etal.Isolation,purificationandcharacterizati-onofpepsinsolublecollagenisolatedfromsilvertipshark(Carcharhinusalbimarg-inatus)skeletalandheadbone[J].ProcessBiochemistry,2014,49(10):1767-1777.[16]NomuraY,TokiS,IshiiY,etal.ThephysicochemicalpropertyofsharktypeIcollagengelandmembrane.[J].Journalofagriculturalandfoodchemistry,2000,48(6):2028-32.[17]NomuraY,TokiS,IshiiY,etal.ImprovementofthematerialpropertyofsharktypeIcollagenbycomposingwithpigtypeIcollagen.[J].Journalofagriculturalandfoodchemistry,200