微生物檢驗(yàn)學(xué)之病毒感染的實(shí)驗(yàn)診斷

病毒感染的實(shí)驗(yàn)診療第一節(jié)概述

一、病毒的基本性狀

病毒是一類非細(xì)胞型微生物，個(gè)體極小，可通過細(xì)菌濾器，需用電子顯微鏡觀察。僅含一種核酸作為遺傳物質(zhì)，外被蛋白質(zhì)衣殼或尚有包膜。病毒只能在活細(xì)胞內(nèi)寄生，以復(fù)制的方式進(jìn)行增殖。在臨床微生物感染中，近75%的傳染病是由病毒引發(fā)的。（一）形態(tài)構(gòu)造

1.大小和形狀病毒體極其微小，測其大小的單位用納米表達(dá)。根據(jù)其大小大致分為：大型病毒（200～300nm）、中型病毒（80～160nm）和小型病毒（18～30nm）。病毒的形態(tài)大致可分為：球形或近似球形、桿狀、子彈狀、磚形、蝌蚪狀等。

2.基本構(gòu)造是指病毒的核心和衣殼兩部分。病毒的核心充滿一種類型的核酸，即DNA或RNA，構(gòu)成病毒的基因組。另外，核心還含有少數(shù)功效蛋白，重要是病毒早期復(fù)制所需的某些酶。病毒的衣殼是包圍在核酸外的一層蛋白質(zhì)，由一定數(shù)量的殼粒聚合而成。衣殼可保護(hù)核酸免受核酸酶及其它理化因素的破壞。

3.輔助構(gòu)造病毒的包膜是病毒成熟后以出芽方式釋放包圍在核衣殼外的宿主細(xì)胞成分。包膜嵌有病毒編碼的糖蛋白，含有病毒的特異性。無包膜的病毒衣殼上也有些突出物。（二）病毒的增殖病毒必須依賴宿主細(xì)胞，以特殊的自我復(fù)制方式進(jìn)行增殖。病毒的復(fù)制周期普通可分為吸附、穿入、脫殼、生物合成、組裝與成熟、釋放6個(gè)階段。

若病毒進(jìn)入細(xì)胞后的環(huán)境不利于它的復(fù)制，不能組裝或釋放有感染性的病毒顆粒，稱為頓挫感染。由于病毒基因組不完整或基因位點(diǎn)變化而復(fù)制出不完整無感染性的病毒，稱為缺損病毒。

當(dāng)兩種不同的病毒或兩株性質(zhì)不同的同種病毒，同時(shí)或先后感染同一細(xì)胞或機(jī)體時(shí)，可發(fā)生一種病毒克制另一種病毒增殖的現(xiàn)象，稱為病毒的干擾現(xiàn)象。干擾現(xiàn)象是機(jī)體非特異性免疫的一部分，是抗病毒免疫的重要內(nèi)容。除干擾現(xiàn)象外，當(dāng)一種細(xì)胞受到兩種或兩種以上的病毒感染時(shí)，還可出現(xiàn)雙重感染、互補(bǔ)、加強(qiáng)、表型混合與病毒雜交等現(xiàn)象。（三）病毒的遺傳和變異病毒在增殖過程中常發(fā)生基因組堿基序列的置換、缺失或插入，引發(fā)基因突變。病毒因基因突變而發(fā)生表型變化的毒株稱為突變株。

1.基因突變條件致死性突變株、宿主范疇突變株、耐藥突變株。

2.基因重組與重配

3.基因整合某些病毒感染宿主細(xì)胞的過程中，病毒的DNA片段可插入細(xì)胞染色體DNA中，這種病毒基因組與細(xì)胞基因組的重組過程稱為基因整合。

（四）噬菌體除了以動(dòng)、植物細(xì)胞為宿主的病毒外，尚有以細(xì)菌、真菌等為宿主的病毒，這些侵襲細(xì)菌等并在其中增殖，能引發(fā)細(xì)菌等裂解的病毒稱噬菌體。噬菌體含有識(shí)別細(xì)菌表面特異受體的功效，這種特異性是極為嚴(yán)格的，可用于進(jìn)行細(xì)菌的鑒定與分型。噬菌體感染細(xì)菌后產(chǎn)生兩種后果：一是噬菌體增殖并裂解細(xì)菌，建立溶菌周期；二是噬菌體在細(xì)菌內(nèi)不增殖，其核酸整合于細(xì)菌染色體內(nèi)，并可隨細(xì)菌分裂而將噬菌體的核酸傳至子代細(xì)菌中，建立溶原狀態(tài)。

（五）非尋常病毒非尋常病毒是比病毒更小更簡樸的致病因子，又稱為亞病毒因子，涉及類病毒、衛(wèi)星病毒和朊粒等。朊粒個(gè)體微小，不含核酸，其重要成分是一種蛋白酶抗性蛋白，對多個(gè)理化作用的抵抗力強(qiáng)，含有傳染性，是引發(fā)傳染性海綿狀腦病的病原體。朊粒至中樞神經(jīng)系統(tǒng)退化性病變，引發(fā)牛海綿狀腦病，俗稱瘋牛病。人類的克雅?。–JD）和Kuru病被認(rèn)為與朊粒感染有關(guān)。

二、病毒的分類與命名

病毒分類的根據(jù)和原則是病毒的基本性質(zhì)，重要涉及①病毒的大小與形態(tài)；②核衣殼的對稱類型；③有無包膜及刺突；④病毒基因組的特性；⑤天然宿主范疇；⑥傳輸方式、媒介種類以及致病性、組織嗜性和病理學(xué)特性。

病毒分類的普通系統(tǒng)是科、屬、種3級(jí)或科、亞科、屬、種4級(jí)。1995年的分類報(bào)告首先將病毒分為DNA病毒、RNA病毒、DNA和RNA反轉(zhuǎn)錄病毒三大類?，F(xiàn)在認(rèn)為有24個(gè)科的病毒能感染人類和動(dòng)物。

按傳輸途徑可分為呼吸道病毒、胃腸炎病毒、經(jīng)性傳輸感染的病毒等。按感染部位與癥狀特性可分為肝炎病毒、出血性熱病毒、皰疹病毒等。第二節(jié)病毒感染的實(shí)驗(yàn)診療

病毒可侵犯人體各系統(tǒng)，所致疾病見于臨床各科，臨床體現(xiàn)復(fù)雜多樣。病毒學(xué)研究發(fā)展較快，免疫學(xué)和分子生物學(xué)技術(shù)的快速發(fā)展，出現(xiàn)了不少快速、簡便、敏感、高特異性的實(shí)驗(yàn)室診療辦法。

病毒學(xué)實(shí)驗(yàn)室診療有三個(gè)方面：①直接檢測和分離鑒定；②檢測病毒蛋白抗原成分和核酸；③檢測抗體。

一、標(biāo)本采集、運(yùn)輸及解決

（一）標(biāo)本采集

1.采樣時(shí)機(jī)應(yīng)在患者急性期或發(fā)病早期采集標(biāo)本。

2.標(biāo)本種類根據(jù)不同病毒感染采集不同標(biāo)本，如鼻咽分泌物、腦脊液、血液、糞便等。

（二）標(biāo)本的運(yùn)輸及保存大多數(shù)病毒抵抗力較弱，在室溫中易被滅活，因此標(biāo)本要快速傳遞，立刻解決和接種。采集和運(yùn)輸過程注意冷藏。如不能立刻解決和接種，可在4℃保存數(shù)小時(shí)，長時(shí)間保存需置-70℃。對于在凍融過程中易失去感染性的標(biāo)本，凍存時(shí)應(yīng)加入適宜的保護(hù)劑如甘油或二甲基亞砜等。

（三）標(biāo)本解決根據(jù)不同種類的標(biāo)本，運(yùn)用不同的解決辦法。凝固的血液需先離心，得到的血清能夠用于病毒分離。肝素抗凝全血、腦脊液、胸腔液、水痘液以及尿液均可直接用于病毒分離培養(yǎng)。有些標(biāo)本如糞便等，常需粗提、提純和濃縮等復(fù)雜解決過程。

二、分離培養(yǎng)與鑒定

（一）分離培養(yǎng)

1.組織培養(yǎng)涉及器官培養(yǎng)、組織塊培養(yǎng)和細(xì)胞培養(yǎng)。前兩者只是在分離某些特殊病毒時(shí)需要，現(xiàn)在慣用的辦法是細(xì)胞培養(yǎng)。核心是針對不同的欲檢測病毒，選擇適宜的培養(yǎng)細(xì)胞。細(xì)胞培養(yǎng)根據(jù)細(xì)胞的來源、染色特性及傳代次數(shù)重要分3種類型：①原代和次代細(xì)胞培養(yǎng)；②二倍體細(xì)胞株；③傳代細(xì)胞系。

2.雞胚接種雞胚慣用于黏液病毒、皰疹病毒、痘類病毒等的原代分離。根據(jù)病毒種類的不同，接種雞胚的部位也各異。如乙型腦炎病毒以接種卵黃囊為最佳，羊膜腔和尿囊腔適合于流感病毒和腮腺炎病毒，絨毛尿囊膜對痘類病毒和皰疹病毒形成痘瘡非常敏感。

3.動(dòng)物接種實(shí)驗(yàn)室慣用新生小鼠或乳鼠進(jìn)行病毒分離。根據(jù)病毒種類不同，需選擇對應(yīng)的敏感動(dòng)物，還需接種對應(yīng)的適宜部位（鼻內(nèi)、皮內(nèi)、皮下、腦內(nèi)、腹腔內(nèi)、靜脈等）。如嗜神經(jīng)病毒（流行性乙型腦炎病毒），最佳接種小鼠腦內(nèi)。（二）病毒鑒定

1.初步鑒定根據(jù)臨床癥狀、流行病學(xué)特點(diǎn)、標(biāo)原來源、易感動(dòng)物范疇、細(xì)胞病變特性及生物學(xué)特性、理化性質(zhì)可初步判斷病毒的科及屬。如B組柯薩奇病毒僅對新生乳鼠有致病性，而對成年小鼠無致病性，腺病毒可使細(xì)胞腫脹，顆粒增多，病變細(xì)胞聚集成葡萄狀。核酸類型測定可將DNA病毒與RNA病毒進(jìn)行分辨，耐酸實(shí)驗(yàn)可將腸道病毒與鼻病毒大致分辨開。

2.最后鑒定在初步鑒定的基礎(chǔ)上，選擇適宜的血清學(xué)辦法對病毒分離株進(jìn)行最后鑒定，辦法是將分離到的病毒和已知病毒的參考血清學(xué)實(shí)驗(yàn)。血清學(xué)診療辦法諸多，慣用的有中和實(shí)驗(yàn)、補(bǔ)體結(jié)合實(shí)驗(yàn)、血凝克制實(shí)驗(yàn)、免疫熒光實(shí)驗(yàn)、酶免疫實(shí)驗(yàn)等。

現(xiàn)在分子生物學(xué)辦法也在病毒鑒定方面得到應(yīng)用。

三、快速診療

（一）顯微鏡檢查

1.用光學(xué)顯微鏡直接檢查病毒包涵體。在普通光學(xué)顯微鏡下，胞質(zhì)或胞核內(nèi)的包涵體呈現(xiàn)嗜酸或嗜堿性染色，大小和數(shù)量不等。包涵體檢查可作為病毒感染的輔助診療，不是特異性實(shí)驗(yàn)。

2.用電子顯微鏡直接檢查病毒顆粒，數(shù)小時(shí)即可從病毒形態(tài)上作出明確的鑒別診療。應(yīng)用免疫電鏡敏捷度更高。

（二）病毒抗原檢查運(yùn)用特異性免疫血清檢測標(biāo)本中的病毒抗原。慣用辦法有：免疫熒光技術(shù)、酶免疫技術(shù)等。另外尚有放射免疫法、反相間接血凝和對流免疫電泳等辦法。對于某些血清型別不多或在普通細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)中尚不能成功增殖的病毒，直接檢測病毒抗原是快速而實(shí)用的辦法。（三）病毒抗體檢查運(yùn)用特異性抗原檢測病毒感染者血清中的IgM和IgG抗體。慣用的辦法有中和實(shí)驗(yàn)、補(bǔ)體結(jié)合實(shí)驗(yàn)、血凝克制實(shí)驗(yàn)及免疫擴(kuò)散等，還能夠運(yùn)用放射免疫法及酶聯(lián)免疫吸附法。IgM抗體出現(xiàn)在病毒感染的早期，因此標(biāo)本采集時(shí)間對檢測成果的影響很大。IgG抗體檢測需采集感染急性期與恢復(fù)期雙份血清，恢復(fù)期IgG效價(jià)必須比急性期增高4倍或4倍以上時(shí)，才有診療意義。

（四）病毒核酸檢測運(yùn)用核酸雜交和PCR技術(shù)檢測病毒特異基因片段。但檢出病毒核酸并不等于檢出含有傳染性的病毒顆粒。第三節(jié)各類病毒感染的介紹

一、呼吸道病毒

（一）流行性感冒病毒

1.生物學(xué)性狀

（1）形態(tài)與構(gòu)造：流感病毒屬正黏病毒科。病毒顆粒含有多形性，普通為球形或絲狀，絲狀多見于新分離株，感染性較強(qiáng)。其構(gòu)造由內(nèi)至外為。

1）核心：位于病毒最內(nèi)層，是由核酸和核蛋白構(gòu)成，流感病毒的核酸為分節(jié)段的單負(fù)股RNA，節(jié)段間易發(fā)生基因重組，從而引發(fā)變異；核蛋白為型特異性抗原，抗原性穩(wěn)定，極少發(fā)生變異。

2）基質(zhì)蛋白（M蛋白）：位于包膜與核心之間含有保護(hù)核心與維持病毒外形的作用。其抗原性穩(wěn)定，含有型特異性。

3）包膜：位于M蛋白外面的脂質(zhì)雙層，含有宿主細(xì)胞膜成分，其中鑲嵌有突出于病毒表面的兩種構(gòu)造蛋白，一種為血凝素（HA），另一種為神經(jīng)氨酸酶（NA）。其抗原性是劃分流感病毒亞型的根據(jù)。（2）分型與變異

1）分型：根據(jù)核蛋白抗原和M蛋白的不同，將流感病毒分為甲（A）、乙（B）、丙（C）型，甲型流感病毒根據(jù)NA和HA的抗原性不同又分為若干亞型。

2）變異：流感病毒易發(fā)生變異，變異的物質(zhì)基礎(chǔ)是HA和NA，兩者變異可同時(shí)出現(xiàn)，也可單獨(dú)出現(xiàn)?？乖儺惙刃r(shí)稱為抗原漂移，如果變異幅度大形成新的亞型，普通引發(fā)大規(guī)模流行，這稱為抗原轉(zhuǎn)變。

（3）培養(yǎng)特性：流感病毒慣用雞胚接種培養(yǎng)，初次分離接種羊膜腔為最佳，傳代適應(yīng)后可移種尿囊腔。細(xì)胞培養(yǎng)普通用原代猴腎細(xì)胞（PMK）或犬腎傳代細(xì)胞（MDCK）。運(yùn)用紅細(xì)胞凝集實(shí)驗(yàn)擬定病毒的存在。

（4）抵抗力：不耐熱，對干燥、日光、紫外線以及甲醛、乙醇等均敏感。2.微生物檢查

（1）標(biāo)本采集和解決：在發(fā)病急性期，以前3天為最佳。合理采集對應(yīng)標(biāo)本，如鼻腔洗液、咽拭子、鼻拭子等，置于Hanks液中。采集的標(biāo)本應(yīng)立刻放入冰壺中，速送實(shí)驗(yàn)室。若48小時(shí)內(nèi)未能進(jìn)行接種，標(biāo)本應(yīng)放于低溫中保存。

（2）分離培養(yǎng)與鑒定：標(biāo)本置于Hanks液中加抗生素解決，將解決的標(biāo)本接種于雞胚羊膜腔，35℃3天后，收集羊水和尿囊液進(jìn)行血凝實(shí)驗(yàn)并測定滴度。血凝陽性者，用已知抗體作血凝克制實(shí)驗(yàn)進(jìn)行鑒定。若血凝陰性時(shí)，需用雞胚盲傳1～2次，仍不出現(xiàn)血凝陽性者，方可判斷病毒分離陰性。也可接種原代猴腎細(xì)胞（PMK）或犬腎傳代細(xì)胞（MDCK）進(jìn)行培養(yǎng)。（3）快速診療

1）免疫熒光技術(shù)和酶免疫技術(shù)。

2）分子雜交技術(shù)。

3）PCR技術(shù)。

4）免疫電鏡技術(shù)。

（4）血清學(xué)診療：需同時(shí)檢測急性期（5天以內(nèi)）和恢復(fù)期（2～4周）血清，在相似條件下進(jìn)行血凝克制實(shí)驗(yàn)，如恢復(fù)期抗體效價(jià)比急性期髙4倍或4倍以上即有診療意義。

3.臨床意義流感病毒是在呼吸道柱狀上皮細(xì)胞內(nèi)復(fù)制，病毒隨飛沫傳輸進(jìn)入易感者呼吸道，依靠血凝素與黏膜柱狀上皮細(xì)胞對應(yīng)受體結(jié)合，感染細(xì)胞。重要在呼吸道增殖，極少入血，但代謝毒素樣物質(zhì)可進(jìn)入血流引發(fā)發(fā)熱、頭痛和全身酸痛。甲型流感能夠是散發(fā)，也能夠是全球性大流行。乙型流感的播散速度及范疇不如甲型。1997年在香港確診有人感染H5N1禽流感病毒。（二）副流感病毒

1.生物學(xué)性狀屬副黏病毒科、副黏病毒亞科、副黏病毒屬。形態(tài)構(gòu)造類似流感病毒，但體積較大，其核酸為單負(fù)股RNA，不分節(jié)段。包膜上嵌有兩種糖蛋白刺突，一種為HN（hemagglutininneuraminidase），含有血凝和神經(jīng)氨酸酶活性。含有流感病毒HA的吸附作用，另一種為F（fusion）含有使病毒進(jìn)入宿主細(xì)胞和使病毒在宿主細(xì)胞之間傳輸?shù)淖饔谩８绷鞲胁《镜挚沽θ?，不耐酸，對熱敏感?.微生物檢查

（1）標(biāo)本采集和解決：采集發(fā)病早期標(biāo)本，成人可采用鼻咽分泌物及咽嗽液標(biāo)本，年幼患者可用咽拭子涂咽后壁，然后放入2ml收集液中，攪拌后，立刻接種細(xì)胞。

（2）分離培養(yǎng)：最敏感的細(xì)胞是原代人胚腎和原代猴腎細(xì)胞。

（3）病毒鑒定：最慣用的辦法是紅細(xì)胞吸附克制實(shí)驗(yàn)，亦可用血凝克制實(shí)驗(yàn)，中和實(shí)驗(yàn)和補(bǔ)體結(jié)合實(shí)驗(yàn)對病毒進(jìn)行鑒定。

（4）直接檢測病毒抗原：慣用辦法有間接免疫熒光法，也可用ELISA、放射免疫和電鏡技術(shù)直接檢測標(biāo)本中的病毒抗原。

（5）血清學(xué)診療：由于副流感病毒各型之間，以及與其它病毒之間存在某些共同抗原，血清學(xué)實(shí)驗(yàn)常有交叉反映。故運(yùn)用血清學(xué)診療往往很困難。

3.臨床意義副流感病毒經(jīng)感染者呼吸道分泌物通過人與人親密接觸或氣溶膠傳輸，可引發(fā)小朋友和成人上呼吸道感染，副流感病毒可分為4個(gè)型，其中1型和2型是重要的致病因子，并且?？梢l(fā)哮喘。3型常引發(fā)下呼吸道感染，4型只引發(fā)輕型上呼吸道感染。（三）呼吸道合胞病毒

1.生物學(xué)性狀屬副黏病毒科、肺病毒亞科、肺病毒屬。電鏡負(fù)染色呈球形，單個(gè)病毒顆粒含有多形性。核酸為單負(fù)股RNA，不分節(jié)段。包膜上的G蛋白作用類似于流感病毒的血凝素蛋白HA，包膜上的F蛋白是融合蛋白，介導(dǎo)病毒穿入和細(xì)胞融合。G、F蛋白均含有較強(qiáng)的免疫原性，能刺激機(jī)體產(chǎn)生中和抗體。在中和病毒方面，抗F抗體比抗G抗體更強(qiáng)。

2.微生物檢查

（1）標(biāo)本采集和解決：可采用鼻腔洗液或鼻咽拭子，置轉(zhuǎn)運(yùn)培養(yǎng)基中冷藏（4℃）運(yùn)輸至實(shí)驗(yàn)室，盡量立刻接種。

（2）分離培養(yǎng)與鑒定：呼吸道合胞病毒，不能在雞胚中增殖，可在人類上皮細(xì)胞傳代細(xì)胞系內(nèi)增殖。細(xì)胞病變普通在培養(yǎng)后3～7天出現(xiàn)，細(xì)胞病變特點(diǎn)為合胞體形成即細(xì)胞融合成多核巨細(xì)胞，胞質(zhì)內(nèi)形成嗜酸性包涵體。

（3）直接檢測病毒抗原：可運(yùn)用免疫熒光技術(shù)和酶免疫技術(shù)直接檢測標(biāo)本中的病毒抗原。

（4）血清學(xué)診療：慣用中和實(shí)驗(yàn)、免疫熒光實(shí)驗(yàn)和酶免疫實(shí)驗(yàn)檢查血清中IgG、IgM及IgA。中和實(shí)驗(yàn)需雙份血清，檢測IgG滴度變化。檢測患者IgM、IgA可進(jìn)行早期診療。

3.臨床意義是引發(fā)嬰幼兒下呼吸道疾病的最常見的病毒。最常見的傳輸途徑是經(jīng)飛沫傳染，最易引發(fā)嬰幼兒細(xì)支氣管炎和細(xì)支氣管肺炎，若不及時(shí)解決，死亡率較高，較大小朋友和成人重要引發(fā)上呼吸道感染。（四）腺病毒

1生物學(xué)性狀是中檔大小的無包膜病毒，核心為單一線形雙股DNA。核衣殼呈20面體立體對稱。腺病毒不能在雞胚中增殖，只能在人源的組織細(xì)胞中增殖。細(xì)胞病變?yōu)槟[脹、變形、聚集成葡萄串狀，細(xì)胞核中形成嗜堿性包涵體。腺病毒對酸和乙醚不敏感，對低溫耐受，但56℃30分鐘可被滅活。

2.微生物檢查

（1）標(biāo)本采集：在患者急性期內(nèi)采集標(biāo)本，如鼻咽拭子、鼻咽吸取物、直腸拭子、尿道拭子或?qū)m頸拭子及活檢組織等?？焖偎蜋z，快速檢查。

（2）直接檢測病毒抗原：能夠運(yùn)用電鏡或免疫電鏡檢查，也能夠運(yùn)用免疫熒光技術(shù)及酶免疫技術(shù)，如EIA進(jìn)行病毒抗原檢測。還可運(yùn)用PCR技術(shù)或核酸探針進(jìn)行鑒定。（3）病毒分離與鑒定：適合于腺病毒分離的細(xì)胞有傳代人細(xì)胞系HeLa、KB、A549以及原代人胚腎細(xì)胞等。將解決好的臨床標(biāo)本進(jìn)行細(xì)胞接種，接種后24小時(shí)內(nèi)換培養(yǎng)液一次，避免細(xì)胞毒效應(yīng)。后來原代細(xì)胞7天左右換液一次，傳代細(xì)胞3～4天換液一次，每日在鏡下觀察與否有細(xì)胞病變出現(xiàn)。以上直接檢測病毒抗原的辦法均可進(jìn)行病毒鑒定。普通用補(bǔ)體結(jié)合實(shí)驗(yàn)和EIA實(shí)驗(yàn)對腺病毒進(jìn)行分屬。以中和實(shí)驗(yàn)或血凝克制實(shí)驗(yàn)進(jìn)行血清型鑒定。

（4）血清學(xué)診療：辦法有補(bǔ)體結(jié)合實(shí)驗(yàn)，酶免疫測定及血凝克制實(shí)驗(yàn)及血清中和實(shí)驗(yàn)等。

3.臨床意義腺病毒感染可常年流行，在人體各器官都有發(fā)現(xiàn)，常引發(fā)呼吸道疾病，上呼吸道感染多見普通感冒、咽炎、扁桃體炎。下呼吸道疾病有支氣管炎、細(xì)支氣管炎和肺炎。腺病毒感染后，機(jī)體可獲得對同型病毒的持久免疫力。（五）麻疹病毒

1.生物學(xué)性狀屬副黏病毒科、麻疹病毒屬。病毒呈球形，核心為單負(fù)鏈RNA，三種衣殼蛋白（L、P、N），外被包膜，包膜內(nèi)面為M蛋白，包膜表面有血凝素（H蛋白）和融合蛋白（F）。H蛋白與細(xì)胞表面病毒受體CD46結(jié)合，感染宿主。病毒抵抗力不強(qiáng)，對陽光和普通消毒劑敏感。

2.微生物檢查

（1）標(biāo)本采集：在患者急性期內(nèi)采集標(biāo)本，如鼻咽拭子、鼻咽吸取物、痰液等。

（2）直接檢測病毒：HE或Wright染色可見受感染細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞融合和多核巨細(xì)胞，胞質(zhì)和胞核內(nèi)有嗜酸性包涵體。能夠運(yùn)用電鏡或免疫電鏡檢查病毒顆粒，也能夠運(yùn)用免疫熒光技術(shù)及酶免疫技術(shù)，如EIA進(jìn)行病毒抗原檢測。還可運(yùn)用PCR技術(shù)或核酸探針進(jìn)行鑒定。（3）病毒分離與鑒定：將解決好的臨床標(biāo)本進(jìn)行細(xì)胞接種，接種傳代細(xì)胞系HeLa、Vero以及原代人胚腎細(xì)胞等。鏡下觀察與否有細(xì)胞病變出現(xiàn)。以上直接檢測病毒抗原的辦法均可進(jìn)行病毒鑒定。

（4）血清學(xué)診療：雙份血清作補(bǔ)體結(jié)合實(shí)驗(yàn)，酶免疫測定及血凝克制實(shí)驗(yàn)等。另外用ELISA法檢測血清特異性IgM可協(xié)助診療。

3.臨床意義麻疹是小朋友時(shí)期最常見的急性呼吸道傳染病。病毒通過飛沫直接傳輸，冬春季易發(fā)。病毒侵入上呼吸道和瞼結(jié)膜上皮細(xì)胞內(nèi)增殖，通過局部淋巴組織入血，出現(xiàn)第一次病毒血癥，病毒隨血流侵入全身淋巴組織和單核吞噬細(xì)胞系統(tǒng)增殖，再次入血形成第二次病毒血癥，并感染瞼結(jié)膜、皮膚、口腔黏膜、呼吸道、消化道、血管等。麻疹病毒還可引發(fā)較為少見的遠(yuǎn)期并發(fā)癥是亞急性硬化性全腦炎（SSPE）。（六）風(fēng)疹病毒

1.生物學(xué)性狀病毒呈球形，核心為單正鏈RNA，外被包膜。包膜表面有血凝素。病毒能在綠猴腎、兔腎和人胚腎細(xì)胞內(nèi)增殖。病毒抵抗力不強(qiáng)，不耐熱，對脂溶劑敏感，紫外線能滅活病毒。

2.微生物檢查

（1）標(biāo)本采集：在早期采集標(biāo)本，如咽拭子、皮疹液、尿液以及死亡嬰兒的多個(gè)臟器等。

（2）直接檢測病毒：運(yùn)用PCR技術(shù)或核酸探針進(jìn)行鑒定。

（3）病毒分離與鑒定：將解決好的臨床標(biāo)本進(jìn)行細(xì)胞接種，接種非洲綠猴腎Vero以及原代人胚腎細(xì)胞等。鏡下觀察與否有細(xì)胞病變出現(xiàn)。用酶標(biāo)或熒光素標(biāo)記的單克隆抗體進(jìn)行病毒鑒定。

（4）血清學(xué)診療：雙份血清作血凝克制實(shí)驗(yàn)等。用ELISA法檢測血清特異性IgM可協(xié)助診療?；純撼錾鷷r(shí)血清中有抗風(fēng)疹病毒IgM抗體和從母體獲得的IgG抗體，或?qū)m內(nèi)羊水中有IgM抗體可鑒定為先天性風(fēng)疹綜合征。

3.臨床意義風(fēng)疹是要注意全身麻疹樣出疹伴耳后及枕下淋巴結(jié)腫大為特性的急性呼吸道傳染病。病毒在局部淋巴結(jié)增殖后，通過病毒血癥播撒全身。孕婦在妊娠早期感染病毒，經(jīng)胎盤垂直傳輸感染胎兒，可引發(fā)先天性風(fēng)疹綜合征。胎兒出生后患先天性心臟病、耳聾、失明、智力障礙等。（七）冠狀病毒冠狀病毒可能是成人和較大小朋友上呼吸道感染的重要病因。重要引發(fā)普通感冒和咽炎。大概10%～30%的普通感冒由該病毒引發(fā)。嚴(yán)重急性呼吸綜合征（SARS）病毒可能是冠狀病毒變種所致。

（八）禽流感病毒禽流感病毒是甲型流感病毒的一種亞型，可引發(fā)禽流行性感冒。現(xiàn)在發(fā)現(xiàn)最易感染人類的高致病性禽流感病毒亞型有H5N1、H9N2、H7N7、H7N2、H7N3等，其中感染H5N1亞型的患者病情嚴(yán)重，致死率高。

個(gè)別感染禽流感的因素可能是發(fā)生了變異的病毒。變異的可能性一是兩種以上的病毒進(jìn)入同一細(xì)胞發(fā)生重組；二是病毒基因位點(diǎn)由于某種因素的影響而發(fā)生突變使病毒獲得了感染人的能力。

臨床變現(xiàn)為急性發(fā)病，早期體現(xiàn)類似普通流感。

常規(guī)采集全血、死亡動(dòng)物的內(nèi)臟等。采用雞胚培養(yǎng)法分離病毒。也可作病毒抗原、抗體及核酸的檢測。

二、腸道病毒

腸道病毒屬小RNA病毒科腸道病毒屬。由糞-口途徑傳輸。重要涉及脊髓灰質(zhì)炎病毒、柯薩奇病毒、?？刹《竞湍承┬履c道病毒。

（一）生物學(xué)性狀腸道病毒由簡樸的病毒衣殼和單股RNA構(gòu)成。能在猴腎、人胚腎、人羊膜細(xì)胞、HEP-2、HeLa細(xì)胞中增殖，最適生長溫度為36～37℃，腸道病毒對外界抵抗力較強(qiáng)，在污水及糞便中可生存數(shù)月。對酸及乙醚穩(wěn)定，對紫外線、干燥及熱敏感，56℃30分鐘可滅活。（二）微生物檢查

1.標(biāo)本的采集與解決合理采集對應(yīng)標(biāo)本，如腦脊液、血液、尿液、直腸拭子、咽喉拭子、鼻腔洗液等，將液體標(biāo)本置無菌試管內(nèi)立刻送檢。將拭子標(biāo)本最佳先放在運(yùn)輸培養(yǎng)基內(nèi)立刻送檢。收集急性期與恢復(fù)期的全血，分離血清置-20℃保存供檢測抗體用。

2.直接檢測病毒電鏡檢查及酶免疫法均可直接檢測腸道病毒。但PCR在腸道病毒檢測方面更具優(yōu)勢。

3.病毒分離猴細(xì)胞系對脊髓灰質(zhì)炎病毒，B組柯薩奇病毒和ECHO病毒含有良好的敏感性。人類二倍體成纖維細(xì)胞，如WI-38和HELF適合于A組柯薩奇病毒的分離。將不同的標(biāo)本進(jìn)行對應(yīng)的解決，接種至細(xì)胞培養(yǎng)中。

4.病毒鑒定可用中和實(shí)驗(yàn)進(jìn)行病毒鑒定，此為鑒定的原則辦法。另外還可運(yùn)用PCR及免疫熒光法進(jìn)行快速鑒定。

5.血清學(xué)診療慣用辦法有中和實(shí)驗(yàn)、補(bǔ)體結(jié)合實(shí)驗(yàn)及血凝克制實(shí)驗(yàn)。三種實(shí)驗(yàn)只有中和實(shí)驗(yàn)較特異，但操作繁瑣。故血清學(xué)實(shí)驗(yàn)在腸道病毒診療方面的作用極其有限。（三）臨床意義腸道病毒是人類最常見最重要的病毒。腸道病毒即使以感染胃腸道作為開始，但卻極少引發(fā)胃腸道疾病。病毒的靶器官以神經(jīng)系統(tǒng)、肌肉和其它系統(tǒng)為主。其中脊髓灰質(zhì)炎病毒可損害脊髓前腳運(yùn)動(dòng)神經(jīng)細(xì)胞，造成脊髓灰質(zhì)炎即小兒麻痹癥。

柯薩奇病毒、ECHO病毒等感染與脊髓灰質(zhì)炎病毒感染相似，以幼年小朋友最常見。發(fā)病率和嚴(yán)重性隨年紀(jì)增加而減少。多數(shù)感染沒有癥狀或僅有非特異性發(fā)熱，極少數(shù)患者出現(xiàn)無菌性腦膜炎和輕癱等癥狀?？滤_奇病毒還可引發(fā)手足口病、心肌炎和心包炎、急性結(jié)膜炎等。

在糞便中有腸道病毒排除時(shí)，多數(shù)患者往往無任何癥狀。而在中樞神經(jīng)系統(tǒng)、血液、瞼結(jié)膜分泌物和泌尿生殖道等部位的標(biāo)本中檢出腸道病毒，就意味著真正的病毒侵入。

三、急性胃腸炎病毒

輪狀病毒

1.生物學(xué)性狀輪狀病毒呈球形，核心含雙鏈RNA，外被雙層衣殼，內(nèi)層核衣殼的殼粒呈放射狀排列，電鏡下猶如車輪狀外形。慣用的細(xì)胞為原代猴腎細(xì)胞和傳代猴腎細(xì)胞。病毒抵抗力強(qiáng)，耐酸堿，耐乙醚。56℃30分鐘可滅活?？杀幌緞缁睢?/p>

2.微生物檢查

（1）標(biāo)本采集與解決：發(fā)病早期采集腹瀉糞便，密封送檢。

（2）標(biāo)本直接檢查：

1）電鏡和免疫電鏡檢查

2）抗原檢測慣用ELISA法、膠乳凝集實(shí)驗(yàn)

3）病毒RNA聚丙烯酰胺凝膠電泳分析用于病毒分型。

4）檢測核酸

（3）分離培養(yǎng)

3.臨床意義輪狀病毒是引發(fā)嬰幼兒急性腹瀉的重要病因。在發(fā)展中國家發(fā)病率高。其發(fā)病和嬰幼兒病死率僅次于呼吸道感染。A組感染引發(fā)嬰幼兒急性胃腸炎，感染以溫帶地區(qū)的秋冬季為主。B組引發(fā)成人腹瀉，無明顯季節(jié)性。

四、黃病毒

黃病毒曾歸類為蟲媒病毒B組。這類病毒是指一大群通過吸血的節(jié)肢動(dòng)物而傳輸疾病的病毒。

（一）流行性乙型腦炎病毒

1.生物學(xué)性狀病毒基因組為單正鏈RNA。流行性乙型腦炎病毒簡稱乙腦病毒，其構(gòu)造蛋白有三種：M、C和E。

2.微生物檢查

（1）標(biāo)本直接檢查：運(yùn)用免疫熒光技術(shù)及酶免疫技術(shù)進(jìn)行病毒抗原檢測。還可運(yùn)用PCR技術(shù)或核酸探針檢測核酸。

（2）分離培養(yǎng)與鑒定：將患者血清或死亡患者腦組織懸液上清接種乳鼠腦內(nèi)，接種后幾天便死亡，進(jìn)一步傳代或鑒定。也可將對的解決的標(biāo)本接種原代金色地鼠腎細(xì)胞等細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)。根據(jù)細(xì)胞病變、紅細(xì)胞吸附實(shí)驗(yàn)證明病毒的增殖，陽性即可傳代或鑒定。動(dòng)物接種或細(xì)胞培養(yǎng)陽性者以中和實(shí)驗(yàn)、血凝克制實(shí)驗(yàn)等進(jìn)行鑒定。

（3）血清學(xué)診療：能夠運(yùn)用血凝克制、補(bǔ)體結(jié)合實(shí)驗(yàn)等進(jìn)行血清學(xué)診療。

3.臨床意義流行性乙型腦炎病毒可通過三帶喙庫蚊叮咬傳輸，引發(fā)流行性乙型腦炎，簡稱乙腦。豬為最重要的宿主和傳染源。病毒流行重要在夏秋季節(jié)。人類感染后，絕大多數(shù)體現(xiàn)為隱性或輕型感染。只有少數(shù)發(fā)生腦炎。病毒侵入腦組織內(nèi)增殖，造成腦實(shí)質(zhì)病變，體現(xiàn)為高熱、驚厥或昏迷癥狀。（二）森林腦炎病毒

1.生物學(xué)特性森林腦炎病毒的形態(tài)構(gòu)造與乙腦病毒近似。最易感染的動(dòng)物為小鼠?？稍谠u胚細(xì)胞和傳代地鼠細(xì)胞培養(yǎng)中生長并引發(fā)病變。雞胚接種能在卵黃囊、絨毛尿囊膜增殖，該病毒抗原性穩(wěn)定。

2.微生物檢查與乙型腦炎病毒相似。

3.臨床意義森林腦炎病毒可經(jīng)蜱傳輸，引發(fā)人類森林腦炎。森林硬蜱為重要傳輸媒介和儲(chǔ)存宿主。亦可經(jīng)胃腸道傳輸。人類感染后，有相稱一部分體現(xiàn)為隱性感染，發(fā)病者潛伏期約10～14天，然后出現(xiàn)高熱、頭痛、腦膜刺激征、昏迷等。（三）登革病毒

1.生物學(xué)性狀病毒形態(tài)構(gòu)造與乙腦病毒相似，根據(jù)抗原性不同，可分為1、2、3、4，四個(gè)血清型。該病毒可用蚊體胸內(nèi)接種培養(yǎng)，也可用白紋伊蚊的傳代細(xì)胞（C6/36株）或地鼠腎細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，能夠用初生小鼠進(jìn)行動(dòng)物接種。

2.微生物檢查取患者第1～3天的血清接種白紋伊蚊C6/36株細(xì)胞等以分離病毒。患者感染1周后血清中可出現(xiàn)血凝克制抗體，通過測定早期與恢復(fù)期血清標(biāo)原來觀察抗體滴度與否呈4倍以上增高。如果有4倍或4倍以上增高則有診療意義，也可運(yùn)用ELISA及斑點(diǎn)免疫測定法檢測特異性IgM抗體，這有助于登革熱的早期診療。

3.臨床意義登革病毒儲(chǔ)存于人類和猴，通過埃及伊蚊和白紋伊蚊等傳輸。病毒感染人體后，可在毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞和單核細(xì)胞中增殖，然后經(jīng)血液播散，引發(fā)發(fā)熱、肌肉和關(guān)節(jié)酸痛、淋巴結(jié)腫脹及皮膚出血、休克等。臨床上分為普通型登革熱和登革出血熱/登革休克綜合征兩個(gè)類型。前者病情較輕，后者病情較重。

五、皰疹病毒

（一）單純皰疹病毒（HSV）

1.生物學(xué)性狀單純皰疹病毒為有包膜的DNA病毒，基因組由兩個(gè)互相連接的長片段（L）和短片段（S）構(gòu)成，為雙股線狀DNA。該病毒能在多個(gè)細(xì)胞內(nèi)增殖，如原代兔腎、人胚肺、人胚腎細(xì)胞或地鼠腎細(xì)胞等。細(xì)胞被感染后很快發(fā)生病變。如細(xì)胞腫脹、變圓、出現(xiàn)嗜酸性核內(nèi)包涵體。該病毒可感染的動(dòng)物種類較多，如家兔、豚鼠、小鼠等。該病毒有兩種血清型，HSV-1和HSV-2。兩型病毒的DNA有5%同源性。2.微生物檢查

（1）標(biāo)本采集和解決：合理采集對應(yīng)標(biāo)本，如水皰液、唾液、尿液、血液、腦脊液、陰道或?qū)m頸拭子等。標(biāo)本應(yīng)立刻接種敏感細(xì)胞培養(yǎng)液，如果不能則將標(biāo)本置于轉(zhuǎn)運(yùn)培養(yǎng)基，快速送檢。

（2）直接檢查病毒：采用皰疹液、皮膚黏膜病灶刮取物、活檢組織等，運(yùn)用免疫電鏡檢查病毒顆?；虿∽兗?xì)胞，也可用吉姆薩染色，在光學(xué)顯微鏡下檢查多核巨細(xì)胞和胞核內(nèi)嗜酸性包涵體。將標(biāo)本制成涂片，采用直接免疫熒光法或酶免疫法進(jìn)行病毒抗原檢測。

（3）分離及鑒定：病毒分離培養(yǎng)是HSV感染實(shí)驗(yàn)室診療的最敏感的辦法，HSV-1和HSV-2在細(xì)胞培養(yǎng)中均可出現(xiàn)明顯的細(xì)胞病變。能夠運(yùn)用單克隆抗體擬定HSV分離株的型別。

（4）分子生物學(xué)診療：可運(yùn)用核酸雜交技術(shù)或PCR技術(shù)檢測出HSV。

（5）血清學(xué)診療：應(yīng)用ELISA或膠乳凝集實(shí)驗(yàn)可檢測HSV抗體，但由于HSV-1和HSV-2的廣泛交叉反映，該實(shí)驗(yàn)難以分辨兩型的感染。由于HSV抗體出現(xiàn)的特點(diǎn)，血清學(xué)實(shí)驗(yàn)無助于早期診療及指導(dǎo)抗病毒治療。3.臨床意義HSV感染可通過直接親密接觸和性接觸傳輸，也可經(jīng)飛沫及垂直傳輸。HSV-1感染常局限在口咽部，通過唾液或呼吸道分泌物傳輸，引發(fā)口咽部皰疹、皰疹性角結(jié)膜炎、腦炎等。HSV-1的原發(fā)感染多見于半歲后來的嬰幼兒，大多數(shù)呈隱性感染。HSV-2的原發(fā)感染多見于青春期后來的患者，重要通過生殖道途徑傳輸，重要體現(xiàn)為生殖器皰瘆。孕婦在胎兒胚胎期感染HSV，有引發(fā)流產(chǎn)、早產(chǎn)、死胎或先天畸形、智力低下等危險(xiǎn)。（二）水痘-帶狀皰疹病毒

1.生物學(xué)性狀水痘帶狀皰疹病毒（VZV）的基本特性與HSV相似。此病毒只有一種血清型，為線狀雙股DNA病毒。普通實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及雞胚對VZV均不敏感。VZV能在人胚二倍體腎細(xì)胞（HFDK）或人胚二倍體肺細(xì)胞（HFDL）培養(yǎng)中增殖。受感染的細(xì)胞出現(xiàn)嗜酸性核內(nèi)包涵體和多核巨細(xì)胞。

2.微生物檢查

（1）直接檢測病毒或抗原：刮取新鮮病灶基底部細(xì)胞涂片，用直接或間接免疫熒光法檢測病變細(xì)胞內(nèi)的VZV抗原，有助于快速診療。運(yùn)用皰疹液進(jìn)行免疫電鏡檢查，可對VZV感染進(jìn)行特異性診療。運(yùn)用核酸雜交或PCR技術(shù)亦可檢出皰疹液中的VZV。

（2）病毒分離：取水痘內(nèi)容物（規(guī)定4天以內(nèi)的內(nèi)容物）肺炎及腸炎活檢組織接種人胚腎或人胚肺細(xì)胞。多數(shù)狀況下3～7天可出現(xiàn)細(xì)胞病變效應(yīng)。

（3）鑒定：根據(jù)典型細(xì)胞病變效應(yīng)進(jìn)行初步鑒定，運(yùn)用標(biāo)記的抗VZV的單克隆抗體進(jìn)行直接熒光抗體染色，進(jìn)行特異性鑒定。

（4）血清學(xué)診療：過去慣用補(bǔ)體結(jié)合實(shí)驗(yàn)，近年來EIA已成為VZV血清學(xué)診療的重要辦法。

3.臨床意義VZV可引發(fā)水痘和帶狀皰疹。前者為原發(fā)感染引發(fā)，后者為復(fù)發(fā)感染所致。水痘重要發(fā)生于小朋友，小朋友初次感染VZV大概有1周的潛伏期，然后皮膚出現(xiàn)斑疹、水皰疹，可進(jìn)一步發(fā)展為膿皰疹并伴有發(fā)熱。帶狀皰疹多發(fā)生于成人和老人。（三）巨細(xì)胞病毒

1.生物學(xué)性狀巨細(xì)胞病毒（CMV）的形態(tài)與基因組構(gòu)造與HSV極為相似，但病毒感染的宿主范疇及細(xì)胞范疇均狹窄，且種屬特異性高，即人CMV（HCMV）只能感染人。體外培養(yǎng)HCMV只有在人成纖維細(xì)胞中才干增殖。病毒在細(xì)胞培養(yǎng)中增殖緩慢，初次分離需經(jīng)2～6周才可出現(xiàn)細(xì)胞病變，細(xì)胞病變特點(diǎn)為腫脹、核變大形成巨大細(xì)胞，核內(nèi)有致密的嗜堿性包涵體，形似貓頭鷹眼特性。加熱56℃30分鐘，低pH、乙醚、紫外線、重復(fù)凍融均能使CMV滅活。2.微生物檢查

（1）標(biāo)本采集：病毒分離可采用患者尿液、口腔拭子、外周血白細(xì)胞等。血清學(xué)診療可采用患者血清。

（2）直接檢查病毒：活檢組織切片或其它標(biāo)本涂片，用HE等染色觀察巨大細(xì)胞和細(xì)胞核內(nèi)的包涵體。也可運(yùn)用免疫熒光技術(shù)檢查標(biāo)本中的HCMV抗原，亦可運(yùn)用酶免疫法檢查。運(yùn)用核酸雜交或PCR技術(shù)檢測HCMV的核酸。

（3）分離與鑒定：人成纖維細(xì)胞適合于HCMV增殖，將解決后的標(biāo)本接種于生長旺盛的單層細(xì)胞，定時(shí)換液，定時(shí)觀察。檢查細(xì)胞病變效應(yīng)出現(xiàn)與否。運(yùn)用單克隆或多克隆對應(yīng)抗體對分離培養(yǎng)出的病毒進(jìn)行間接免疫熒光法鑒定。

（4）血清學(xué)診療：常運(yùn)用ELISA或IFA來檢測HCMVIgG抗體或IgM抗體。3.臨床意義

由于CMV可存在唾液、尿液、乳汁、淚液、糞便、陰道或?qū)m頸分泌物、血液、精液中，因此病毒可通過多個(gè)途徑傳輸。有先天性或獲得性細(xì)胞免疫缺點(diǎn)的小朋友或成人，如艾滋病及器官移植患者，CMV感染很常見。

（1）正常人感染：人群中HCMV感染非常廣泛，普通呈現(xiàn)隱性感染，少數(shù)出現(xiàn)傳染性單核細(xì)胞增多癥。

（2）免疫功效缺損個(gè)體的感染：高危人群涉及器官移植的受者、接受化療放療的惡性腫瘤患者等。HCMV感染所致的間質(zhì)性肺炎是骨髓移植受者的首位死因。AIDS患者HCMV感染，以肺、中樞神經(jīng)系統(tǒng)和胃腸道感染最為常見。

（3）先天性和圍生期感染

1）先天感染：妊娠時(shí)，母體發(fā)生CMV感染，病毒經(jīng)胎盤傳至胎兒引發(fā)宮內(nèi)感染。

2）產(chǎn)時(shí)感染：新生兒出生時(shí)，通過與產(chǎn)道中的病毒相接觸，也可被感染。

3）產(chǎn)后感染：多數(shù)產(chǎn)后感染重要是通過與排病毒的個(gè)體親密接觸而獲得。（四）EB病毒

1.生物學(xué)性狀EB病毒（EBV）的形態(tài)與其它皰疹病毒相似，病毒顆粒為球形，EBV缺少良好的體外培養(yǎng)系統(tǒng)，不能用常規(guī)的皰疹病毒培養(yǎng)辦法進(jìn)行培養(yǎng)。普通用人臍血淋巴細(xì)胞或從外周血分離的B淋巴細(xì)胞培養(yǎng)。

根據(jù)病毒抗原體現(xiàn)時(shí)所處的病毒增殖周期的不同階段，將EBV抗原分為3類。1）潛伏期體現(xiàn)的抗原，涉及EBV核抗原（EBNA）和潛伏期膜蛋白；2）EBV增殖早期抗原（EA）；3）病毒增殖晚期抗原涉及EBV衣殼抗原（VCA）及EBV包膜抗原（MA）。2.微生物檢查

（1）直接檢查病毒：運(yùn)用抗補(bǔ)體免疫熒光法檢查淋巴細(xì)胞或上皮細(xì)胞EB病毒核抗原。運(yùn)用核酸雜交和PCR或RT-PCR技術(shù)檢測病毒。

（2）病毒分離培養(yǎng)及鑒定：標(biāo)本能夠是唾液、咽漱液、外周血細(xì)胞以及腫瘤組織。接種人臍帶血淋巴細(xì)胞對EB病毒進(jìn)行分離培養(yǎng)，孵育4周，病毒陽性培養(yǎng)物，通過抗補(bǔ)體免疫熒光法進(jìn)行EB鑒定。

（3）血清學(xué)診療：嗜異性抗體檢測可用于輔助診療傳染性單核細(xì)胞增多癥。進(jìn)行針對病毒VCA、EA和EBNA的抗體測定，不同疾病患者的體內(nèi)針對EBV不同的抗原成分所產(chǎn)生的抗體的構(gòu)成及水平都有一定的特性性。

3.臨床意義EBV流行廣泛，幼兒感染后多數(shù)無明顯癥狀，但終身攜帶病毒，或引發(fā)輕度咽炎和上呼吸道感染。青春期發(fā)生原發(fā)感染，約有50%出現(xiàn)傳染性單核細(xì)胞增多癥。病毒重要通過唾液傳輸，也可因輸血傳染。EBV重要侵犯B細(xì)胞，與EB病毒感染有關(guān)的疾病重要有：傳染性單核細(xì)胞增多癥、非洲小朋友惡性淋巴瘤、鼻咽癌、霍奇金病和其它某些淋巴瘤。

六、肝炎病毒

（一）甲型肝炎病毒

1.生物學(xué)性狀甲型肝炎病毒（HAV）屬小RNA病毒科，無包膜，核心為單正股RNA?，F(xiàn)在世界上分離的HAV均為一種血清型。HAV的抵抗力較其它小RNA病毒強(qiáng)，60℃加熱10～12小時(shí)后仍含有感染性，85℃加熱立刻滅活，對乙醚、氯仿及pH為3的酸性環(huán)境有抵抗力。

2.微生物檢查甲型肝炎患者病期不長，預(yù)后良好，普通不需要進(jìn)行病原學(xué)檢查。微生物檢查以測定病毒抗原或抗體為主。感染早期普通可用RIA或ELISA檢測患者血清中抗-HAVIgM。它出現(xiàn)早，消失快，是HAV新近感染的重要指標(biāo)。對于理解既往感染史或進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查，需檢測抗-HAVIgG。也可運(yùn)用ELISA或EIA、RT-PCR、核酸雜交技術(shù)直接檢測抗原。

3.臨床意義HAV可引發(fā)甲型肝炎，HAV重要通過糞-口傳輸，傳染源多為人類，潛伏期15～50天，平均28天。病毒常在患者血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）升高前5～6天就存在于患者的血清和糞便中，2～3周后，隨血清特異性抗體的產(chǎn)生，血清和糞便的傳染性逐步消失。甲型肝炎患者的糞便污染水源、食物以及某些海產(chǎn)品，可造成散發(fā)式大流行。典型的甲型肝炎?？煞譃辄S疸前期、黃疸期及恢復(fù)期。（二）乙型肝炎病毒

1.生物學(xué)性狀

（1）形態(tài)與構(gòu)造：乙型肝炎病毒（HBV）感染的患者血清，在電鏡下可見3種特有顆粒。①大球形顆粒：為含有感染性的HBV完整顆粒，呈球形，又稱Dane顆粒。它的外衣殼，相稱于普通病毒的包膜，HBV的表面抗原（HBsAg）鑲嵌于包膜的脂質(zhì)雙層中。去除病毒的外衣殼，即暴露出內(nèi)衣殼，它是HBV的核心抗原（HBcAg）。用酶或去垢劑作用后，可暴露出e抗原（HBeAg）。

②小球形顆粒：成分為HBsAg，不含病毒核酸DNA及DNA多聚酶，無傳染性；③管型顆粒：成分亦是HBsAg，是由多個(gè)小球形顆?！按?lián)而成”，也不含病毒核酸。

HBV的基因組是獨(dú)特的帶有部分單鏈區(qū)的雙鏈DNA環(huán)狀模式。長鏈為負(fù)鏈，短鏈為正鏈?；蚪M高度壓縮，重復(fù)運(yùn)用。（2）抗原成分：HBV重要有HBsAg、HBcAg及HBeAg。

1）HBsAg是HBV感染的重要標(biāo)志，由病毒DNA的S區(qū)編碼。

2）HBcAg被HBsAg所覆蓋，血中不易檢出。由病毒DNA的CORF編碼。HBcAg免疫原性強(qiáng)，抗-HBcIgG在血清中持續(xù)時(shí)間長，抗-HBcIgM提示HBV處在復(fù)制狀態(tài)。

3）HBeAg為可溶性蛋白質(zhì)，游離在血中，其消長與病毒體及DNA多聚酶的消長基本一致，故HBeAg已作為HBV復(fù)制及含有強(qiáng)感染性的一種指標(biāo)。由病毒DNA的CORF編碼。

（3）抵抗力：對理化因素有較強(qiáng)抵抗力。60℃加熱10小時(shí)，98℃加熱1分鐘，以及乙醚、pH為2.4的酸性環(huán)境解決6小時(shí)均不能有效滅活病毒。2.微生物檢查

（1）標(biāo)本的采集與解決：臨床上常采集血液標(biāo)本，HBV的血清標(biāo)志物較穩(wěn)定。

（2）檢查辦法：臨床實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)在重要靠RIA和ELISA等血清學(xué)辦法檢測HBsAg、HBeAg、抗-HBs、抗-HBc、抗-HBe。其中HBsAg的檢測最為重要，可發(fā)現(xiàn)無癥狀攜帶者，是獻(xiàn)血者篩選的必檢指標(biāo)。近年來，PCR檢測HBVDNA也用于乙型肝炎的臨床診療。

3.臨床意義乙型肝炎病毒可致乙型肝炎。病毒是通過破損的皮膚和黏膜侵入機(jī)體，傳染源是HBV攜帶者和患者的血液、唾液、精液和陰道分泌物等。HBV的傳輸途徑大致可分為血液、血制品傳輸、性傳輸、母嬰傳輸。

乙型肝炎臨床體現(xiàn)呈多樣性。在多數(shù)急性感染患者中，肝炎癥狀不明顯，既無癥狀，也無黃疸。有某些患者有癥狀但無黃疸，尚有某些患者現(xiàn)有黃疸又有癥狀。肝炎的癥狀能夠是輕度而短暫的，也能夠是重度和遷延性的?；颊吣軌蛲耆謴?fù)健康。也可因暴發(fā)性肝炎而致死或成為慢性肝炎。部分HBV持續(xù)感染者可發(fā)生原發(fā)性肝癌。（三）丙型肝炎病毒

1.生物學(xué)性狀丙型肝炎病毒（HCV）是小的有包膜的單正股RNA病毒，可感染黑猩猩并在體內(nèi)持續(xù)傳代，引發(fā)慢性肝炎?，F(xiàn)在尚不能用體外細(xì)胞培養(yǎng)進(jìn)行分離。世界各地分離的HCV毒株可分為20余個(gè)基因型。其抗原成分重要涉及核衣殼蛋白，包膜蛋白及非構(gòu)造蛋白。HCV對多個(gè)理化因素的抵抗力較弱，對酸、熱均不穩(wěn)定。沸水煮5分鐘或60℃加熱30分鐘均可使感染性喪失。對氯仿、乙醚等有機(jī)溶劑敏感。

2.微生物檢查現(xiàn)在臨床上慣用的HCV檢測辦法重要有兩類：血清學(xué)辦法及PCR辦法。血清學(xué)辦法重要是以EIA測定抗-HCV。分子生物學(xué)辦法檢測HCVRNA。HCV抗體檢測重要是ELISA法作為篩選實(shí)驗(yàn)，采用條帶免疫法作確認(rèn)實(shí)驗(yàn)。

3.臨床意義HCV重要經(jīng)輸血或其它非腸道途徑（如共用針頭、血透析等）進(jìn)行傳輸。但有近半數(shù)的HCV感染中，傳輸途徑尚不清晰。

HCV的亞臨床感染，臨床上無自覺癥狀，而ALT不正常，是丙型肝炎的重要傳染源。丙型肝炎根據(jù)臨床病程可劃分為急性和慢性，以6個(gè)月為分辨界限。HCV感染的一種重要特點(diǎn)就是慢性化的幾率很高，感染過程很長，存在不同程度的肝組織病變，并呈慢性進(jìn)行性?？砂l(fā)展為肝硬化，與原發(fā)性肝癌關(guān)系十分親密。（四）丁型肝炎病毒

1.生物學(xué)特性丁型肝炎病毒（HDV）為球形，外被HBsAg包繞，核心含HDV抗原（HDAg）和HDV-RNA基因組，基因組為一單負(fù)鏈環(huán)狀RNA。HDV不能獨(dú)立復(fù)制，需要HBV輔助才干增殖。對HDV敏感的動(dòng)物有黑猩猩、東方土撥鼠等。

2.微生物檢查通過檢測HDV感染的血清學(xué)標(biāo)志物以及HDVRNA，結(jié)合HBV感染的檢測，可作出HDV感染的實(shí)驗(yàn)室診療。

（1）HDAg檢測：將患者標(biāo)本，如肝組織或血清等，用去垢劑解決，去除表面的HBsAg，然后用RIA或ELISA檢測HDAg。

（2）HDVRNA檢測：能夠運(yùn)用核酸雜交或RT-PCR技術(shù)對HDVRNA進(jìn)行檢測。

（3）抗-HDV抗體檢測：HDV感染后2周左右產(chǎn)生抗-HDIgM，一種月達(dá)高峰，隨即快速下降，抗-HDIgG出現(xiàn)較遲，在恢復(fù)期出現(xiàn)。丁型肝炎抗體不能去除病毒，如持續(xù)高效價(jià)，可作為慢性丁肝的指標(biāo)。運(yùn)用ELISA等辦法檢測患者血清中抗-HDVIgM或抗-HDVIgG。通過檢測抗-HBsIgM或IgG以及HBeAg和抗-HBe，作出同時(shí)感染和重疊感染的診療。3.臨床意義HDV可引發(fā)與HBV有關(guān)聯(lián)的急性和慢性肝病。HDV感染普通引發(fā)嚴(yán)重和進(jìn)行性的肝病。HDV傳輸方式重要是經(jīng)血傳輸，也可通過親密接觸與母嬰間垂直傳輸。HDV感染只有在感染了HBV的人群或是與HBV同時(shí)侵入才干發(fā)生。根據(jù)與HBV感染的關(guān)系，可將HDV感染分為兩種類型：同時(shí)感染指與HBV同時(shí)或者先后感染；重疊感染指在慢性HBV感染的基礎(chǔ)上發(fā)生HDV感染。重疊感染極易造成慢性化。（五）戊型肝炎病毒

1.生物學(xué)特性戊型肝炎病毒（HEV）為球形，無包膜，基因組為正單股RNA，體外培養(yǎng)不易獲得成功，敏感的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為靈長目。特別是獼猴和黑猩猩。HEV對高鹽、氯化銫、氯仿和重復(fù)凍融敏感。

2.微生物檢查可用電鏡或免疫電鏡技術(shù)檢測患者糞便中的HEV顆粒，也可用PCR辦法檢測標(biāo)本中HEVRNA，但臨床慣用的診療辦法是檢測血清中的抗HEVIgM或IgG。

3.臨床意義HEV可引發(fā)戊型肝炎。HEV重要經(jīng)糞-口途徑傳輸，患者多見于成人，未成年者大多為隱性感染。戊型肝炎的潛伏期約為10～60天，潛伏期末和急性期初的患者糞便中病毒量較大，傳染性最強(qiáng)，是戊型肝炎的重要傳染源。臨床體現(xiàn)以黃疸為主多數(shù)患者發(fā)病6周即可好轉(zhuǎn)并痊愈，不發(fā)展為慢性肝炎。七、反轉(zhuǎn)錄病毒

反轉(zhuǎn)錄病毒科的病毒因帶有以RNA為模板合成DNA的反轉(zhuǎn)錄酶而得名。分為三個(gè)亞科七個(gè)屬。

人類免疫缺點(diǎn)病毒人類免疫缺點(diǎn)病毒（HIV）在病毒分類學(xué)上屬反轉(zhuǎn)錄病毒科慢病毒亞科慢病毒屬。已發(fā)現(xiàn)有HIV-1和HIV-2兩型。HIV-1是引發(fā)全球艾滋病流行的病原體，HIV-2重要局限于西部非洲。

1.生物學(xué)特性

（1）形態(tài)構(gòu)造：病毒為RNA病毒，呈球形，核心含有RNA、反轉(zhuǎn)錄酶和核衣殼蛋白，外被脂蛋白包膜，其中鑲嵌有g(shù)p120和gp41兩種特異的糖蛋白。gP120與CD4受體蛋白結(jié)合。gp41為跨膜蛋白。

（2）基因組構(gòu)造：由兩條拷貝的單股正鏈RNA在5’端通過氫鍵結(jié)合而形成的二聚體?；蚪M從5’至3’端依次排列為LTR、gag、pol、env、LTR，尚有6個(gè)調(diào)節(jié)基因，即tat、rev、nef、vif、vpr、vpu/vpx。gag基因編碼病毒的核心蛋白，其中衣殼蛋白p24特異性最強(qiáng)。pol基因編碼病毒復(fù)制所需的酶類。env基因編碼合成兩種包膜糖蛋白gp120和gp41。（3）病毒的復(fù)制：病毒包膜糖蛋白gP120與細(xì)胞上的CD4受體結(jié)合，病毒包膜與細(xì)胞膜發(fā)生融合。核衣殼進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)內(nèi)脫殼，釋放核心RNA。在病毒反轉(zhuǎn)錄酶的作用下，以RNA為模板進(jìn)行復(fù)制。子代RNA與某些合成的構(gòu)造蛋白裝配成核衣殼，從宿主細(xì)胞膜獲得包膜構(gòu)成完整的有感染性的子代病毒，以出芽方式釋放到細(xì)胞外。

（4）病毒受體與細(xì)胞親嗜性：HIV的重要靶細(xì)胞是CD4T淋巴細(xì)胞和單核-巨噬細(xì)胞亞群。皮膚的Langerhans細(xì)胞、淋巴結(jié)濾泡的樹突狀細(xì)胞、腦小膠質(zhì)細(xì)胞等也是感染的對象。CD4分子是HIV的重要受體，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)兩種輔助受體CXCR4和CCR5。前者是HIV的親T細(xì)胞病毒株的輔助受體，后者是HIV的親巨噬細(xì)胞病毒株的輔助受體。

（5）培養(yǎng)特性：HIV感染的宿主范疇和細(xì)胞范疇較窄。在體外僅感染表面有CD4受體的T細(xì)胞、巨噬細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)室慣用新鮮分離的正常人T細(xì)胞或患者本身分離的T細(xì)胞培養(yǎng)病毒。

（6）抵抗力：病毒抵抗力較弱，56℃30分鐘可滅活?？杀幌緞缁?。但在室溫病毒活性可保持7天。2.微生物檢查HIV感染的標(biāo)志可分為病毒標(biāo)志、免疫標(biāo)志和有關(guān)標(biāo)志。

（1）病毒標(biāo)志是指病毒培養(yǎng)或用分子生物學(xué)辦法直接從感染者體內(nèi)分離HIV或其基因物質(zhì)。

（2）免疫標(biāo)志是指HIV抗原及抗體等免疫復(fù)合物。

1）抗原檢測：慣用間接ELISA法檢測P24抗原。

2）抗體檢測：抗核心蛋白p24及其前體P55的抗體在血清中出現(xiàn)最早，隨即出現(xiàn)抗包膜糖蛋白gp120/160的抗體。這些被認(rèn)為是早期感染的最穩(wěn)定的指標(biāo)?？固堑鞍譖41的抗體常在P24抗體出現(xiàn)后數(shù)周才出現(xiàn)。

①初篩實(shí)驗(yàn)酶免法（EIA）、免疫熒光法（IFA）、凝集實(shí)驗(yàn)等。

②確證明驗(yàn)免疫印跡實(shí)驗(yàn)（Westernbolt，WB）、放射免疫沉淀實(shí)驗(yàn)。

3）有關(guān)標(biāo)志：是指與艾滋病病情發(fā)展或HIV感染親密有關(guān)而存在于體內(nèi)的某些生化或化學(xué)物質(zhì)。如CD4細(xì)胞、新蝶呤、白細(xì)胞介素等。3.臨床意義HIV是獲得性免疫缺點(diǎn)綜合征（AIDS，艾滋病）的病原體。AIDS是以侵犯CD4細(xì)胞為主，造成細(xì)胞免疫功效缺點(diǎn)，并繼發(fā)體液免疫功效缺損為基本特性的傳染病。其傳染源是HIV無癥狀攜帶者和艾滋病患者。傳輸途徑重要有：性接觸傳輸、血液傳輸、母嬰傳輸。

從HIV感染到發(fā)展為典型AIDS分為4個(gè)時(shí)期，即急性感染期、無癥狀感染期、艾滋病有關(guān)綜合征、艾滋?。ò滩⊥耆停?。

HIV的致病機(jī)制重要有下列幾個(gè)觀點(diǎn)：HIV直接損傷或間接損傷CD4T細(xì)胞；HIV克制抗原遞呈細(xì)胞功效；HIV誘發(fā)本身免疫性疾病及誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡；HIV造成CD8T細(xì)胞喪失抗病毒活性等。

機(jī)體感染HIV后可產(chǎn)生多個(gè)抗體，病毒也可刺激機(jī)體產(chǎn)生細(xì)胞免疫應(yīng)答，但仍然無法去除病毒，這與病毒能逃逸免疫作用有關(guān)。

八、狂犬病病毒

（一）生物學(xué)性狀狂犬病病毒外形似子彈狀，病毒體內(nèi)含單負(fù)股RNA，外面是脂蛋白包膜，其表面有許多糖蛋白刺突，與病毒的感染性和毒力有關(guān)。是一種嗜神經(jīng)性病毒。該病毒可感染的動(dòng)物范疇較廣。在易感動(dòng)物或人類的中樞神經(jīng)細(xì)胞中增殖時(shí)，在胞質(zhì)內(nèi)形成嗜酸性包涵體，稱內(nèi)基小體，在診療上很有價(jià)值。（二）微生物檢查

1.隔離觀察動(dòng)物人類被犬和其它動(dòng)物咬傷后，將該動(dòng)物隔離觀察，若7～10天不發(fā)病，普通認(rèn)為該動(dòng)物沒有患狂犬病或咬人時(shí)唾液中尚無狂犬病病毒。

2.印片、切片檢查若以上隔離動(dòng)物在觀察期間發(fā)病，即將其殺死，取海馬回部組織作切片或涂片，用HE染色檢查內(nèi)基小體或用直接熒光抗體法（DFA）檢測病毒抗原，或用ELISA法查抗原。

3.細(xì)胞培養(yǎng)將感染的動(dòng)物或人類的對應(yīng)組織懸液接種敏感細(xì)胞，培養(yǎng)40～48小時(shí)后，用DFA進(jìn)行病毒抗原檢測，如果陰性進(jìn)行第二代培養(yǎng)，經(jīng)3～4天，再用DFA檢查與否有病毒生長，如果二次培養(yǎng)均陰性，則最后視為陰性。

4.血清學(xué)診療慣用辦法有中和實(shí)驗(yàn)、補(bǔ)體結(jié)合實(shí)驗(yàn)、血凝克制實(shí)驗(yàn)、ELISA實(shí)驗(yàn)等辦法。

5.分子生物學(xué)能夠運(yùn)用RT-PCR技術(shù)檢測標(biāo)本中狂犬病毒RNA，此辦法敏感、快速、特異。

（三）臨床意義狂犬病病毒可引發(fā)人類狂犬病，人類狂犬病大多數(shù)是由病犬咬傷所致，有時(shí)也可因貓、狼以及其它帶病毒動(dòng)物咬傷所致。人類發(fā)病時(shí)的典型體現(xiàn)是神經(jīng)興奮性增高，吞咽或飲水時(shí)喉頭肌痙攣，甚至聞水聲或其它輕微刺激涉及光線均可引發(fā)全身痙攣發(fā)作，又稱恐水病。發(fā)病3～5天后患者轉(zhuǎn)入麻痹期，最后因昏迷、呼吸循環(huán)衰竭而死亡。死亡率幾乎達(dá)100%。

九、人乳頭瘤病毒

（一）生物學(xué)性狀人乳頭瘤病毒由病毒衣殼和雙鏈環(huán)狀DNA構(gòu)成。含有宿主和組織特異性，只能感染人的皮膚、黏膜的上皮細(xì)胞，在易感細(xì)胞核內(nèi)增殖形成核內(nèi)嗜酸性包涵體?，F(xiàn)在HPV組織培養(yǎng)尚未成功。

（二）微生物檢查臨床常根據(jù)病史及典型的臨床體現(xiàn)即可作出診療。癥狀不典型的可作病理學(xué)檢查或用免疫組化技術(shù)等辦法檢查病變組織中的HPV抗原?，F(xiàn)在慣用的分子生物學(xué)診療辦法有：核酸分析、原位雜交、DNA印跡、PCR。

（三）臨床意義HPV可通過性接觸感染，引發(fā)鋒利濕疣。嬰幼兒可在分娩過程中感染，或與母親親密接觸而感染。病毒感染僅局限于局部皮膚和黏膜中，引發(fā)該部位多個(gè)疣，