基因工程練習(xí)

#K2SK2S1重組質(zhì)粒HindIIIBamHISalI細(xì)菌 煙草細(xì)胞愈傷組織轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草幼苗重組質(zhì)粒HindIIIBamHISalI細(xì)菌 煙草細(xì)胞愈傷組織轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草幼苗.構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)，應(yīng)選用限制酶對(duì)進(jìn)行切割，以保證它們定向連接。限制酶切斷的是DNA分子中特定部位的兩個(gè)脫氧核苷酸之間的鍵，具體說就是和之間的鍵。.如果目的基因直接注入煙草細(xì)胞，一般會(huì)被煙草細(xì)胞 。質(zhì)粒的作用是.切割后的目的基因與質(zhì)粒由酶連接成重組質(zhì)粒。篩選導(dǎo)入重組質(zhì)粒的細(xì)菌，應(yīng)在其培養(yǎng)基中加入，理由是 。.煙草細(xì)胞經(jīng) 形成愈傷組織。某研究性學(xué)習(xí)小組以愈傷組織為材料進(jìn)行了下列實(shí)驗(yàn)：一組在培養(yǎng)基中加30%的蔗糖，另一組不加蔗糖，接種后，每組再分成兩個(gè)小組，分別在光下和黑暗中培養(yǎng)。1個(gè)月后，觀察其生長、分化情況，結(jié)果見下表：培養(yǎng)條件加蔗糖不加蔗糖光照正常生長，分化不生長，死亡黑暗只生長，不分化不生長，死亡你能得出什么結(jié)論？。.從個(gè)體水平鑒定抗鹽轉(zhuǎn)基因煙草是否培育成功的方法是 。八、下表中列出了幾種限制酶識(shí)別序列及其切割位點(diǎn)，圖、圖中箭頭表示相關(guān)限制酶的酶切位點(diǎn)。請回答下列問題：（分）BamH1II!BamH1II!限制酹BamW\HindHIEmR1Sma1識(shí)別序列及GGATCCAgcttG*AATTCCCCViGG切割位點(diǎn)CCTAGfTTCGA^ACTTAA^GGGG^CC

一個(gè)圖所示的質(zhì)粒分子經(jīng) I切割前后，分別含有個(gè)游離的磷酸基團(tuán)。用圖中的質(zhì)粒和外源構(gòu)建重組質(zhì)粒，不能使用 I切割，原因是與只使用 相比較，使用 I和 m兩種限制酶同時(shí)處理質(zhì)粒、外源的優(yōu)點(diǎn)在于可以防止。為了獲取重組質(zhì)粒，將切割后的質(zhì)粒與目的基因片段混合，需加入酶。重組質(zhì)粒中抗生素抗性基因的作用是為了。為了從 文庫中分離獲取蔗糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因，將重組質(zhì)粒導(dǎo)入喪失吸收蔗糖能力的大腸桿菌突變體，然后在的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，以完成目的基因表達(dá)的初步檢測。52.若用限制酶EcoRV、MboI單獨(dú)或聯(lián)合切割同一種質(zhì)粒，得至4DNA片段長度如下圖（1kb即1000個(gè)堿基對(duì)），請?jiān)诖痤}卡的指定位置畫出質(zhì)粒上EcoRV、MboI的切割位點(diǎn)。九、回答有關(guān)生物工程的問題。（11分）質(zhì)粒質(zhì)粒轉(zhuǎn)基因抗病香蕉的培育過程如上圖所示。圖中PstI、SmaI、EcoRI、ApaI等為限制酶，質(zhì)粒和抗病基因上的箭頭表示限制酶的切割位點(diǎn)。下圖表示四種限制酶的識(shí)別序列及酶切位點(diǎn)。限制酶PstISmaIEcoRIApaI識(shí)別序列及\-CTGCAG--CCCGGG-J-GAATTC-J-GGGCCC-酶切位點(diǎn)-GACGTC-f-GGGCCC-f-CTTAAGf-CCCGGGf.若要獲得抗病基因，能否用限制酶Smal對(duì)圖中對(duì)應(yīng)的位點(diǎn)進(jìn)行切割？，說明理由。要獲得含抗病基因的重組質(zhì)粒能否用PstI、ApaI限制酶切割質(zhì)粒？。.卡那霉素會(huì)抑制香蕉愈傷組織細(xì)胞的生長。欲利用含卡那霉素的培養(yǎng)基篩選已導(dǎo)入抗病基因的香蕉細(xì)胞，重組質(zhì)粒中應(yīng)同時(shí)含有 基因，作為標(biāo)記基因。.利用組織培養(yǎng)技術(shù)能將香蕉組織細(xì)胞培育成植株，這是因?yàn)橄憬督M織細(xì)胞具有，圖中①一②、②一③依次表示香蕉組織細(xì)胞的和的過程。.②、③階段是否可使用同種培養(yǎng)基？；理由是④階段是否可使用不添加植物激素的培養(yǎng)基？；理由是十、五、回答下列關(guān)于基因工程的相關(guān)問題。質(zhì)粒是基因工程中的一種常用的工具之一，經(jīng)修飾改造后的質(zhì)粒如下圖七所示。上的 基因編碼B半乳糖苷酶的一條多肽鏈，其表達(dá)產(chǎn)物與菌落顏色有關(guān)；經(jīng)“修飾”后的“多克隆位點(diǎn)”位于 基因之中。 是抗氨卞青霉素基因。（分）圖i七）-2將目的摩導(dǎo)人大蹄菌.PUC118上的基因AmpR作用的是：“多克隆位點(diǎn)”中含有多種限——A制酶的識(shí)別序列，如Hindm,其切割后產(chǎn)生的DNA片斷中含有的部分序列是——TTC則限制酶Hindm的識(shí)別序列是。.圖（七）-2示意將目的基因?qū)氪竽c桿菌的操作步驟。其中，I?V表示操作過程；A?F表示使用的相關(guān)工具，其中的E1和E2表示有關(guān)的酶。試問：E2應(yīng)是（酶）；經(jīng)過E2的切割，供體染色體中的DNA片段中游離的磷酸基團(tuán)總數(shù)的變化是：。在策略上，圖（七）-1中的“多克隆位點(diǎn)”包含了多種、多個(gè)識(shí)別序列，請說出設(shè)計(jì)這種“多克隆位點(diǎn)”的目的：。LacZ基因可以使細(xì)菌在含有X-gal（5-溴-4-氯-3-吲哚書-D-半乳糖）底物和IPTG（一種乳糖類似物）的培養(yǎng)基上形成藍(lán)色的菌落，即X-gal被lacZ基因編碼產(chǎn)生的B半乳糖苷酶水解成藍(lán)色；若要形成重組質(zhì)粒，則在含X-gal的培養(yǎng)基上將形成白色菌落（而不是藍(lán)色的）。請據(jù)圖（七）-2分析下列問題：.用本無PUC118的大腸桿菌作為受體細(xì)胞，將培養(yǎng)瓶C中被連接處理后的DNA混合物傾入含X-gal、IPTG和的D培養(yǎng)基平板上，其目的是。菌落生長結(jié)果如圖（七）-2中所示。.過程V進(jìn)行轉(zhuǎn)移培養(yǎng)，則該應(yīng)該挑選X、Y、Z中的 菌落進(jìn)行液體培養(yǎng)。形成該顏色的生理原因是。如此目的基因便被克隆了！十一、回答下列有關(guān)遺傳信息傳遞和表達(dá)的問題。（10分）.如圖18所示，若用兩種識(shí)別切割序列完全不同的限制酶E和F從基因組DNA上切下目的基因，并將之取代質(zhì)粒pZHZ1（3.7kb,1kb=1000對(duì)堿基）上相應(yīng)的E——F區(qū)域（0.2kb）,那么所形成的重組質(zhì)粒pZHZ2。A.既能被E也能被F切開 B.能被E但不能被F切開C.既不能被E也不能被F切開 D.能被F但不能被E切開圖18.已知在質(zhì)粒pZHZl中，限制酶G切割位點(diǎn)距限制酶E切割位點(diǎn)0.8kb,限制酶H切割位點(diǎn)距限制酶F切割位點(diǎn)O.5kb。若分別用限制酶G和H酶切兩份重組質(zhì)粒pZHZ2樣品,據(jù)表4所列酶切結(jié)果判斷目的基因的大小為————kb;并將目的基因內(nèi)部的限制酶G和H切割位點(diǎn)標(biāo)注在圖19中。

?一翌?一羋―雪?一翌?一羋―雪:??二：?一」 」”二：一：?質(zhì)粒區(qū)域 目的基因（每小格代表0』kb）GH1.6kb 1.2kb3.1kb 3.5kb.若想在山羊的乳汁中收獲上述目的基因的表達(dá)產(chǎn)物，則需將重組質(zhì)粒pZHZ2導(dǎo)入至山羊的細(xì)胞中。若pZHZ2進(jìn)入細(xì)胞后插入在一條染色體DNA上，那么獲得轉(zhuǎn)基因純合子山羊的方式是 。.上述目的基因模板鏈中的。TGA序列對(duì)應(yīng)一個(gè)密碼子，翻譯時(shí)識(shí)別該密碼子的tRNA上相應(yīng)的堿基序列是 。一般而言，一個(gè)核糖體可同時(shí)容納分子的tRNA。.下列四幅圖中能正確反映目的基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物內(nèi)部結(jié)構(gòu)的是 。TSS：轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)，TTS：轉(zhuǎn)錄終止位點(diǎn)，STC：起始密碼子，SPC：終止密碼子STCSPC TSSTTSTTSSPCSTCTSSSTCSPC TSSTTSTTSSPCSTCTSS十二、回答下列有關(guān)基因工程的問題。（10分）.基因工程中使用的限制酶，其特點(diǎn)是。下圖四種質(zhì)粒含有E1和E2兩種限制酶的識(shí)別，Apr表示抗青霉素的抗性基因，Tcr表示抗四環(huán)素的抗性基因。.將兩端用E1切開的Tcr基因與用E1切開的質(zhì)粒X—1混合連接，連接后獲得的質(zhì)粒類型有。（可多選）A.X—1 B.X—2 C.X—3 D.X—4.若將上圖所示X—1、X—2、X—3、X—4四種質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌，然后分別涂布在含有青霉素或四環(huán)素的兩種培養(yǎng)基上。在這兩種培養(yǎng)上均不能生長的大腸桿菌細(xì)胞類型有、。.如果X—1用E1酶切，產(chǎn)生