醫(yī)學(xué)機(jī)能實驗學(xué)：基本實驗技術(shù)

基本實驗技術(shù)實驗?zāi)康恼莆眨簞游锏淖ト」潭ǚ椒ê徒o藥方法、家兔的麻醉方法；熟悉：實驗動物取血法和處死的方法、家兔的氣管插管和頸總動脈插管方法；了解：常用儀器設(shè)備與手術(shù)器械的使用方法。

實驗動物：家兔。實驗器材：兔手術(shù)臺、手術(shù)器械、玻璃分針、氣管插管、動脈夾、塑料動脈插管、三通管、注射器（1ml、5ml）、壓力換能器、BL-420生物機(jī)能實驗系統(tǒng)。藥品與試劑：1.5％戊巴比妥鈉、肝素生理鹽水(500U／ml)。常用手術(shù)器械哺乳動物手術(shù)器材清單金屬用品玻璃/塑料用品消耗品粗剪1把氣管插管1個紗布手術(shù)剪1把動脈插管1根棉簽眼科剪1把玻璃分針1根絲線血管鉗4把三通管一個手術(shù)鑷1把注射器2支動脈夾1個9件家兔的抓取

用右手抓住家兔頸背部皮膚，輕輕把動物提起，迅速以左手托住其臀部，使家兔的體重落在左掌心上。家兔一般不咬人，但腳爪鋒利，捉取時需注意。【操作要點】

不得提抓家兔腰部、單手提兔背或提兔耳，否則會分別傷兩腎、造成皮下出血及傷兩耳。

XXX麻醉藥物應(yīng)用原則：依據(jù)動物體重計算麻醉藥物的劑量；依據(jù)動物生命體征變化控制給藥速度；掌握寧少勿多、分階段給藥的方式。針對不同的動物，選擇不同的麻醉藥物、實施不同的麻醉方法。家兔稱重家兔全身麻醉麻醉劑：1.5%戊巴比妥鈉，2ml/kg根據(jù)實驗動物的不同，可以配置1%-3%水溶液，一次給藥麻醉維持時間3-4小時，一次補充量不宜超過原給藥量的五分之一。家兔全身麻醉給藥方法：耳緣靜脈注射家兔全身麻醉拔去兔耳外側(cè)緣被毛，用手指彈動或者輕輕揉搓兔耳，使靜脈擴(kuò)張，充盈。術(shù)者左手的食指和中指輕夾耳緣靜脈的近心端，使其進(jìn)一步充盈擴(kuò)張，拇指和無名指固定耳廓的末端，并使其被拉直。右手持注射器（針尖斜面向上）由遠(yuǎn)心端刺入靜脈。再順著血管腔向心臟端刺進(jìn)約1cm，回抽針?biāo)?，如有血表示刺入靜脈，然后由左手的拇指，食指，中指將穿刺的靜脈段與針頭緊緊捏住以固定兩者之間的關(guān)系，右手推藥物入血。家兔全身麻醉如果感覺推注的阻力很大，并且局部腫脹，表示針頭已經(jīng)滑出血管，應(yīng)該重新穿刺。耳緣靜脈穿刺，應(yīng)該盡可能的從遠(yuǎn)心端穿刺。注意：麻醉具體操作：家兔全身麻醉前2/3快速推入，使動物能順利、快速地渡過興奮期；后1/3速度宜慢，且邊注射邊注意觀察動物的生命體征變化，當(dāng)確定已達(dá)到麻醉效果時，即停止給藥，不必急于將剩余的麻醉藥物全部推入。理想的麻醉狀態(tài)：家兔全身麻醉動物失去知覺，呼吸變慢平穩(wěn)，角膜反射消失或者極遲鈍，全身肌肉松弛，對夾捏肢體末端的掙扎反應(yīng)消失或者遲鈍。麻醉成功標(biāo)志角膜反射遲鈍肢體肌肉松弛疼痛反射消失家兔的固定與備皮固定：成功麻醉以后，將家兔固定，將兔仰臥位置于兔手術(shù)臺上，四肢展開用粗棉繩固定。布帶一端扎在前肢腕關(guān)節(jié)和后肢踝關(guān)節(jié)以上部位，兩前肢布帶在兔背后交叉穿過，分別壓住對側(cè)前肢后固定在解剖臺兩側(cè)。兩后肢左右分開，分別固定在實驗臺尾端。固定頭時，也可用一粗棉繩鉤住兔門齒，固定在兔臺頭端鐵柱上。備皮：剪刀貼住皮膚剪毛；提起毛再剪，易剪破皮膚

仰臥位固定在手術(shù)臺上，使頸部放正拉直。氣管插管術(shù)

氣管插管是指將一個金屬、玻璃的Y形導(dǎo)管插入動物的氣管，普遍應(yīng)用于哺乳動物急性實驗中。

氣管插管的意義在于保持麻醉動物呼吸道通暢，便于清除氣道內(nèi)分泌物。1、麻醉固定、頸部皮膚去毛、備皮2、在頸前區(qū)（喉的下緣和胸骨上緣之間），沿正中線作一約5-7cm的切口3、鈍性分離皮下組織、肌肉，游離出氣管，穿線備用。用止血鉗反復(fù)撐開組織的方法，沿正中線縱向分離皮下組織，暴露頸前肌肉群，再沿著正中線順肌肉走形方向鈍性分離肌肉，暴露氣管。3、鈍性分離皮下組織、肌肉，游離出氣管，穿線備用。沿氣管走形方向分離氣管兩側(cè)及其與食道之間的結(jié)締組織，游離氣管，在氣管的下方穿一根棉線。游離一段氣管、穿線、剪倒T口氣管插管軟骨心臟頭4、在甲狀軟骨下方第3-4個環(huán)狀軟骨上作一倒“T”形切口，插入“Y”形氣管插管。檢查通氣是否良好（方法：將少許兔毛放在插管口，觀察兔毛是否被吹動）并用線將氣管與氣管插管一起結(jié)扎，并固定，以防止氣管插管滑脫。頸總動脈插管

頸動脈插管是指將一根充滿肝素或者其它抗凝劑溶液的導(dǎo)管插入頸總動脈，可用于檢測多種生理、病理、藥物因素作用時動脈血壓的變化，也可以用于采集動脈血樣。1、由頸正中剪開一約5-7cm的口2、鈍性分離皮下筋膜3、分離一側(cè)頸總動脈，穿雙線備用。術(shù)者左手拇指，食指捏起頸部皮膚切口緣和部分頸前肌肉稍向外牽拉其余三指將背側(cè)皮膚向腹側(cè)輕輕頂起，即可清晰的顯露頸總動脈，右手持玻璃分針順頸總動脈走行方向輕輕劃開其周圍的結(jié)締組織，游離頸總動脈3cm，并在其下方穿2根絲線備用。（同時準(zhǔn)備充滿肝素生理鹽水的動脈導(dǎo)管，排盡導(dǎo)管內(nèi)氣泡。）動脈插管心臟頭4、結(jié)扎遠(yuǎn)心端，在距結(jié)扎線約2-3cm處用動脈夾夾閉頸總動脈近心端。5、在靠近結(jié)扎線處用眼科剪剪一“v”形切口，切口大小約為動脈口徑的1/3-1/2。術(shù)者左手小指自下方托起血管，右手持眼科剪在靠近結(jié)扎線處成45o角剪開頸總動脈，剪口的大小約為動脈直徑的1/3-1/2，將動脈導(dǎo)管向心臟端插入頸總動脈1cm，用絲線結(jié)扎動脈與動脈導(dǎo)管，固定導(dǎo)管，防止滑脫。放開動脈夾，既可以檢測動脈血壓。動脈插管6、將壓力換能器與動脈插管連接好并充滿肝素，向近心端插入動脈插管，用線結(jié)扎牢固。三通管的使用：進(jìn)入BL－410/420系統(tǒng)。或選擇“輸入信號”→選擇“通道”→“壓力”→點擊“開始”實驗按鈕，即可在屏幕上觀察到正常的血壓曲線。選擇“實驗項目”→選擇“循環(huán)實驗”→“兔動脈血壓調(diào)節(jié)”實驗?zāi)K。（默認(rèn)1通道）7、打開換能器開關(guān)，觀察并記錄動脈血壓。

一級波（心搏波）：由心室舒縮引起的血壓波動，心縮時上升，心舒時下降，頻率與心率一致。二級波（呼吸波）：由呼吸運動引起的血壓波動，其頻率與呼吸頻率一致。動脈插管注意事項動脈插管和血壓換能器內(nèi)注滿肝素生理鹽水以排氣抗凝。壓力換能器與動物心臟等高。動脈插管與頸總動脈呈一條直線，方向一致。掌握好三通管的方向。結(jié)扎固定牢固。

動物實驗常用插管技術(shù)

氣管插管術(shù)頸動脈插管術(shù)頸靜脈插管術(shù)輸尿管插管術(shù)插管技術(shù)的基本步驟1.動物稱重、麻醉、固定。2.插管部位皮膚去毛、備皮。3.皮膚切開。4.皮下組織結(jié)構(gòu)的分離。5.目標(biāo)器官或組織結(jié)構(gòu)的游離。6.導(dǎo)管的插入或固定。實驗動物的捉拿和固定方法

1.小鼠

捉拿時先用右手將鼠尾抓住提起，放在較粗糙的臺面或鼠籠上，在其向前爬行時，右手向后拉尾，用左手拇指和食指抓住小鼠的兩耳和頭頸部皮膚，將其固定于左手手心中，拉直四肢并用左手無名指壓緊尾和后肢，右手即可作注射或其他實驗操作。取尾血及尾靜脈注射時，可將小鼠固定在金屬或木制的固定器上。小鼠、大鼠灌胃法器械：灌胃器由注射器和特殊的灌胃針構(gòu)成。小鼠灌胃針長4～5cm直徑1mm大鼠灌胃針長6～8cm直徑1.2mm小鼠灌胃法按正確方法用左手抓取和固定動物。使腹部朝上，頸部拉直固定后，右手持持接灌胃針的注射器吸取藥液（或事先將藥液吸好），將針頭從口角插入口腔內(nèi)，然后用灌胃針頭壓其頭部，使口腔與食管成一直線，再將灌胃針頭沿上腭壁輕輕進(jìn)入，轉(zhuǎn)動針頭刺激動物吞咽，然后沿咽后壁慢慢插入食道。若動物掙扎厲害，應(yīng)退出后灌胃針，待動物安靜后重新插入。切不可強行插入，以免損傷食道或誤入氣管導(dǎo)致