禽雞抗蠕蟲(chóng)藥臨床有效性試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則概述

禽（雞）抗蠕蟲(chóng)藥臨床有效性試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則一\概述（-）定義與目的本指導(dǎo)原則適用于禽（雞）蠕蟲(chóng)感染的抗蠕蟲(chóng)藥物臨床有效性評(píng)價(jià)。禽（雞）用抗蠕蟲(chóng)藥II期臨床有效性試驗(yàn)?zāi)康氖橇私獠煌瑒┝康氖茉囁幬飳?duì)靶動(dòng)物的抗蠕蟲(chóng)效果，確定受試藥物的防治作用和劑量。禽（雞）用抗蠕蟲(chóng)藥ni期臨床有效性試驗(yàn)?zāi)康氖沁M(jìn)一步驗(yàn)證受試藥物對(duì)目標(biāo)適應(yīng)證的防治作用和給藥方案，確定受試藥物對(duì)目標(biāo)適應(yīng)證的臨床效果，觀察受試藥物的不良反應(yīng)和制定防治措施。對(duì)偏離本指導(dǎo)原則的試驗(yàn)研究，申請(qǐng)人應(yīng)進(jìn)行解釋說(shuō)明。（二）一般要求抗蠕蟲(chóng)藥擬用的所有寄生蟲(chóng)的每種適應(yīng)證均需進(jìn)行臨床有效性試驗(yàn)。在n期臨床有效性試驗(yàn)中，由于自身對(duì)照試驗(yàn)法在禽（雞）中不可靠，故只接受基于寄生蟲(chóng)成蟲(chóng)和/或幼蟲(chóng)計(jì)數(shù)的空白對(duì)照試驗(yàn)法。在ni期臨床有效性試驗(yàn)中，推薦使用蟲(chóng)卵計(jì)數(shù)和蟲(chóng)種鑒別的方法對(duì)藥效進(jìn)行評(píng)價(jià)。在n期臨床有效性試驗(yàn)中，一般采用人工誘發(fā)感染病例，條件不允許時(shí)也可選擇自然感染病例。幼蟲(chóng)階段的研究只能使用人工誘發(fā)感染動(dòng)物。對(duì)于罕見(jiàn)寄生蟲(chóng)蟲(chóng)種，也只能采取人工誘發(fā)感染來(lái)進(jìn)行試驗(yàn)。人工誘發(fā)感染一般更傾向于選擇最新野外分離的蠕蟲(chóng)株進(jìn)行誘導(dǎo)感染，因?yàn)樽钚乱巴夥蛛x株更能準(zhǔn)確地反映寄生蟲(chóng)的流行和對(duì)藥物敏感性的實(shí)際狀況。對(duì)于罕見(jiàn)的蠕蟲(chóng)蟲(chóng)種可以使用實(shí)驗(yàn)室保存的蠕蟲(chóng)株進(jìn)行誘導(dǎo)感染。可以同時(shí)用幾種確定的寄生蟲(chóng)蟲(chóng)種進(jìn)行混合人工誘發(fā)混合感染。在in期臨床有效性試驗(yàn)中，應(yīng)采用自然感染病例。二、試驗(yàn)設(shè)計(jì)（一）試驗(yàn)動(dòng)物.動(dòng)物選擇標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)前制定試驗(yàn)動(dòng)物的選擇標(biāo)準(zhǔn)。從有試驗(yàn)動(dòng)物資質(zhì)證明的飼養(yǎng)單位購(gòu)買(mǎi)。如果沒(méi)有資質(zhì)證明，動(dòng)物應(yīng)來(lái)源清楚，飼養(yǎng)規(guī)范。避免使用近期用過(guò)相關(guān)驅(qū)蟲(chóng)藥物（距離上次所用抗蠕蟲(chóng)藥物的6個(gè)半衰期內(nèi)未再次用過(guò)抗蠕蟲(chóng)藥物）的動(dòng)物、

患過(guò)傳染病或可能過(guò)敏或中毒的動(dòng)物。以成年動(dòng)物為主，若藥物擬用于幼齡動(dòng)物,則需要選擇幼齡動(dòng)物。.自然感染病例選用符合受試藥物目標(biāo)適應(yīng)證的自然感染病例，應(yīng)與受試藥物申請(qǐng)應(yīng)用的動(dòng)物種屬相同，品種不限，報(bào)告中需注明動(dòng)物品種、體重、性別和年齡。蠕蟲(chóng)感染大致種類(lèi)可以通過(guò)檢測(cè)糞便中的蟲(chóng)卵形態(tài)特征來(lái)確定；或者從試驗(yàn)雞群中剖檢5-8只雞，分離其體內(nèi)的蠕蟲(chóng)，進(jìn)行種屬鑒定。蠕蟲(chóng)感染種類(lèi)的確定需要提供相應(yīng)的寄生蟲(chóng)照片。.人工誘發(fā)感染病例應(yīng)選擇臨床健康動(dòng)物，且在與受試藥物靶動(dòng)物的年齡、性別以及種屬中具有代表性的蠕蟲(chóng)陰性禽（雞）。通常情況下，應(yīng)挑選對(duì)蠕蟲(chóng)感染敏感的幼禽用于試驗(yàn)。避免應(yīng)激（例如飲食不良）因素造成寄生蟲(chóng)感染；禽舍條件應(yīng)能防止意外感染（即工人誘發(fā)感染以外的其它蠕蟲(chóng)感染）。人工誘發(fā)感染試驗(yàn)中推薦使用的寄生蟲(chóng)種類(lèi)與數(shù)量：表1所示為不同分離種的蟲(chóng)卵/似囊尾螃的推薦感染蟲(chóng)量。推薦使用能夠達(dá)到充分感染所需的最低數(shù)量感染性階段蟲(chóng)體。表1,禽（雞）抗蠕蟲(chóng)藥臨床有效性研究中達(dá)到充分感染所需的蟲(chóng)卵/幼蟲(chóng)/似囊尾坳數(shù)量范圍寄生蟲(chóng)種屬 蟲(chóng)卵/似囊尾蝸數(shù)量范圍（條）雞蛔蟲(chóng)Asci打力4 200~500100?300200~30050~100200~600鴿毛細(xì)線(xiàn)蟲(chóng)Capillariaohsignata雞異刺線(xiàn)蟲(chóng)Heterakisgallinarum有輪賴(lài)?yán){蟲(chóng)Raillietinacesticillus100?300200~30050~100200~600在最終報(bào)告中，應(yīng)記錄人工誘發(fā)感染所用的蟲(chóng)卵/幼蟲(chóng)/似囊尾蜘的最終數(shù)量和照片，說(shuō)明試驗(yàn)中用于人工誘發(fā)感染的寄生蟲(chóng)的歷史背景。應(yīng)說(shuō)明所用的每一種實(shí)驗(yàn)室分離株的特性，如來(lái)源、保種方法、藥物敏感性、培養(yǎng)方法、傳代次數(shù)和對(duì)宿主的感染速度等。對(duì)于野外分離株，同樣需要說(shuō)明來(lái)源、日期、分離地點(diǎn)、對(duì)已有驅(qū)蠕蟲(chóng)藥的暴露情況和保存方法等信息。.動(dòng)物數(shù)量盡管試驗(yàn)動(dòng)物的數(shù)量需要根據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)原理來(lái)計(jì)算獲得，但是為了達(dá)到協(xié)調(diào)一致的目的，II期臨床有效性試驗(yàn)應(yīng)確保每項(xiàng)適應(yīng)證每組不少于（含）6只（nN6）,III期臨床有效性試驗(yàn)應(yīng)確保每項(xiàng)適應(yīng)證每組不少于（含）30只（n>30）o.確定禽（雞）充分感染的蟲(chóng)量因?yàn)樵u(píng)價(jià)試驗(yàn)用蠕蟲(chóng)的屬、種、蟲(chóng)株存在著差異，且不同試驗(yàn)株也可能具有不同的易感性和病原特性，所以充分感染的定義不能用統(tǒng)一的公式表示。因此,在制定研究方案時(shí)，尤其是在統(tǒng)計(jì)學(xué)、寄生蟲(chóng)學(xué)、每個(gè)對(duì)照動(dòng)物的感染水平與臨床表現(xiàn)的相關(guān)性、每種感染的對(duì)照動(dòng)物數(shù)量時(shí)，應(yīng)對(duì)充分感染進(jìn)行定義。試驗(yàn)方案中，必須根據(jù)所試驗(yàn)地區(qū)的相關(guān)寄生蟲(chóng)病流行情況、流行病史以及現(xiàn)有統(tǒng)計(jì)學(xué)數(shù)據(jù)，確定本研究中能產(chǎn)生寄生蟲(chóng)充分感染的感染數(shù)量，并在試驗(yàn)前應(yīng)對(duì)感染動(dòng)物進(jìn)行檢查。試驗(yàn)動(dòng)物的感染水平及其分布應(yīng)符合有效性標(biāo)準(zhǔn)，滿(mǎn)足統(tǒng)計(jì)和生物置信限的要求。也可采用多重感染，但每種蠕蟲(chóng)均需達(dá)到最低感染水平。在對(duì)照組所有動(dòng)物均感染的情況下，計(jì)算對(duì)照組載蟲(chóng)量幾何平均值的95%置信下限值。如果該值大于對(duì)照組載蟲(chóng)量幾何平均值的10%,則認(rèn)為是充分感染。當(dāng)對(duì)照組中存在未感染動(dòng)物（計(jì)數(shù)=0）時(shí)，可用中位值替代幾何平均值，并根據(jù)對(duì)照組載蟲(chóng)量中位值計(jì)算95%置信限。關(guān)于蠕蟲(chóng)充分感染的最小數(shù)量，根據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)、歷史數(shù)據(jù)和文獻(xiàn)綜述等確定并在最終報(bào)告中提交。用于支持標(biāo)簽中所標(biāo)示的某項(xiàng)適應(yīng)證成立時(shí)，禽（雞）充分感染的成蟲(chóng)數(shù)量，可因蟲(chóng)種不同而不同。一般來(lái)講，雞充分感染雞蛔蟲(chóng)成蟲(chóng)的平均數(shù)量為20條，充分感染雞異刺線(xiàn)蟲(chóng)、鴿毛細(xì)線(xiàn)蟲(chóng)、有輪賴(lài)?yán){蟲(chóng)的平均數(shù)量可以降低。結(jié)合試驗(yàn)動(dòng)物的病史、寄生蟲(chóng)學(xué)檢查結(jié)果以及統(tǒng)計(jì)標(biāo)準(zhǔn)，所有試驗(yàn)禽（雞）應(yīng)感染過(guò)足量的寄生蟲(chóng)。.試驗(yàn)動(dòng)物管理試驗(yàn)動(dòng)物的動(dòng)物設(shè)施、飼養(yǎng)及護(hù)理需要嚴(yán)格遵照動(dòng)物福利的要求來(lái)進(jìn)行，包括按照試驗(yàn)場(chǎng)的免疫程序進(jìn)行疫苗免疫等，并在最終報(bào)告中記錄相關(guān)信息。建議試驗(yàn)動(dòng)物在抵達(dá)試驗(yàn)點(diǎn)后進(jìn)行最少10天的適應(yīng)期。試驗(yàn)過(guò)程中，應(yīng)因地提供充足的飼養(yǎng)空間、飼料和飲水。試驗(yàn)期間，需要每天定時(shí)觀察試驗(yàn)動(dòng)物，及時(shí)發(fā)現(xiàn)藥物相關(guān)的不良反應(yīng)。每個(gè)試驗(yàn)組的每只動(dòng)物應(yīng)當(dāng)加以標(biāo)記，療效評(píng)價(jià)各項(xiàng)指標(biāo)按每只動(dòng)物進(jìn)行測(cè)定，并在最終的報(bào)告中標(biāo)明。.病例淘汰標(biāo)準(zhǔn)未按推薦療程給藥的動(dòng)物；因伴發(fā)其他疾病或需要聯(lián)合用藥，或中斷試驗(yàn)的動(dòng)物，均應(yīng)予以淘汰。（-）試驗(yàn)藥物.受試藥物受試藥物應(yīng)與擬上市的制劑完全一致，有完整的產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，有合乎規(guī)定格式的說(shuō)明書(shū)。受試藥物應(yīng)來(lái)源于同一批號(hào)，由申報(bào)單位自行研制并在GMP驗(yàn)收合格的車(chē)間生產(chǎn)的樣品，并提供中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所或農(nóng)業(yè)農(nóng)村部認(rèn)定的其他獸藥檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)出具的產(chǎn)品檢驗(yàn)合格報(bào)告。.對(duì)照藥物對(duì)照藥物應(yīng)當(dāng)是已經(jīng)在我國(guó)批準(zhǔn)上市，與受試藥物作用相似、適應(yīng)證相同的藥物。由申報(bào)單位提供，并提供中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所或農(nóng)業(yè)農(nóng)村部認(rèn)定的其他獸藥檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)出具的產(chǎn)品檢驗(yàn)合格報(bào)告。（三）給藥方案應(yīng)在預(yù)試驗(yàn)或相關(guān)文獻(xiàn)資料的基礎(chǔ)上選擇有效劑量的劑量范圍，并提供劑量選擇依據(jù)。按照受試藥物擬在臨床推薦的給藥方案給藥，包括給藥方法、給藥劑量、多次給藥的給藥間隔時(shí)間和療程等。對(duì)照藥物應(yīng)嚴(yán)格按照批準(zhǔn)的說(shuō)明書(shū)給藥。對(duì)于混飼給藥的，需要進(jìn)行適口性/采食量研究。加藥后的飲水和或混藥后的飼料均應(yīng)采樣檢測(cè)，檢測(cè)后驗(yàn)證樣品中的藥物濃度。應(yīng)記錄試驗(yàn)中每只試驗(yàn)禽（雞）所消耗的藥物量，以確定試驗(yàn)治療劑量是否符合標(biāo)簽所推薦的治療劑量。（四）試驗(yàn)周期對(duì)于人工感染成蟲(chóng)的試驗(yàn)，給藥通常不能早于每種蠕蟲(chóng)的潛在（隱）期（prepatentperiod）,一般在感染后28天。在給藥前，推薦至少使用6只哨兵動(dòng)物對(duì)寄生蟲(chóng)種類(lèi)進(jìn)行鑒別和定量。對(duì)于人工感染第四期幼蟲(chóng)的試驗(yàn)，針對(duì)大多數(shù)蟲(chóng)種，宜在感染后7天給藥；針對(duì)雞蛔蟲(chóng)和雞異刺線(xiàn)蟲(chóng)，應(yīng)在感染后16天給藥。對(duì)于自然感染病例，根據(jù)蠕蟲(chóng)的生活周期及藥物針對(duì)的寄生蟲(chóng)生活史階段，確定抗蠕蟲(chóng)藥物的給藥時(shí)間和試驗(yàn)周期。（五）試驗(yàn)分組試驗(yàn)動(dòng)物應(yīng)隨機(jī)分組。根據(jù)試驗(yàn)禽（雞）的體重、性別、年齡和/或暴露于寄生蟲(chóng)的情況進(jìn)行隨機(jī)分組，有助于減少系統(tǒng)誤差。也可以通過(guò)糞便中蟲(chóng)卵計(jì)數(shù)對(duì)試驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行隨機(jī)分組。各試驗(yàn)組的禽（雞）在體重、年齡、品種、性別和背景上相同。每組試驗(yàn)動(dòng)物的年齡、體型大小、體重范圍、性別等應(yīng)盡量一致。.II期臨床有效性試驗(yàn)（1）選用人工誘發(fā)感染病例試驗(yàn)要求分成以下六組：不感染不給藥組、空白對(duì)照組（感染不給藥）、受試藥物推薦劑量加倍組、受試藥物推薦劑量組、受試藥物推薦劑量減半組、藥物對(duì)照組。（2）選用自然感染病例試驗(yàn)要求分成以下五組：空白對(duì)照組（不給藥）、受試藥物推薦劑量加倍組、受試藥物推薦劑量減半組、受試藥物推薦劑量組、藥物對(duì)照組。.m期臨床有效性試驗(yàn)選用自然感染病例，一般試驗(yàn)要求分成以下三組：空白對(duì)照組（不給藥）、受試藥物組、藥物對(duì)照組。若無(wú)批準(zhǔn)的相同適應(yīng)證的藥物，則不需要藥物對(duì)照組。（六）觀察指標(biāo)詳細(xì)觀察并記錄試驗(yàn)開(kāi)始前、試驗(yàn)開(kāi)始后、給藥過(guò)程中和停藥后各個(gè)階段受試動(dòng)物的生理狀態(tài)、臨床癥狀，以及癥狀的發(fā)生、發(fā)展、消失和轉(zhuǎn)歸情況；并按照試驗(yàn)設(shè)計(jì)，檢測(cè)必要的血液常規(guī)指標(biāo)和生化指標(biāo)；檢測(cè)與抗蠕蟲(chóng)效果有關(guān)的指標(biāo)，并盡量使用定量指標(biāo)來(lái)評(píng)估藥效。.臨床檢查：觀察飲水情況、采食情況等，觀察給藥后臨床癥狀的消失和轉(zhuǎn)歸情況。.糞便蠕蟲(chóng)成蟲(chóng)和蟲(chóng)卵檢查：在試驗(yàn)前后分別檢查每只動(dòng)物糞便中排出的蠕蟲(chóng)數(shù)量、每克糞便中蟲(chóng)卵的數(shù)量（EPG）等，計(jì)算蟲(chóng)卵減少率，提供蟲(chóng)卵照片。.體內(nèi)成蟲(chóng)和幼蟲(chóng)的檢查：對(duì)n期臨床、25%m期臨床的試驗(yàn)動(dòng)物，應(yīng)根據(jù)蠕蟲(chóng)感染特點(diǎn)，對(duì)寄生的組織或臟器在給藥后10天內(nèi)進(jìn)行剖檢，觀察體內(nèi)蟲(chóng)體感染情況，提供蟲(chóng)體照片和蟲(chóng)種鑒定照片。.病理剖檢：應(yīng)對(duì)II期臨床、25%m期臨床和死亡的試驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行病理剖檢,并進(jìn)行相關(guān)的組織病理學(xué)檢查，并提供剖檢與組織病理學(xué)觀察的照片，以確定藥物的毒副作用以及死亡與藥物之間是否存在一定關(guān)系。in期臨床有效性試驗(yàn)，應(yīng)保留臨床觀察結(jié)果、生產(chǎn)性能指標(biāo)和死亡記錄，并與購(gòu)買(mǎi)的飼養(yǎng)單位的歷史數(shù)據(jù)進(jìn)行比較。（七）統(tǒng)計(jì)分析應(yīng)在數(shù)據(jù)分析前的方案設(shè)計(jì)階段確定所采用的統(tǒng)計(jì)分析類(lèi)型，如參數(shù)統(tǒng)計(jì)或非參數(shù)統(tǒng)計(jì)。選擇合適的統(tǒng)計(jì)分析程序，對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。將受試藥物組間、受試藥物組與對(duì)照組（包括空白對(duì)照組、藥物對(duì)照組或感染不給藥對(duì)照組）進(jìn)行顯著性檢驗(yàn)，確定受試藥物的治療效果及其劑量。（八）結(jié)果評(píng)價(jià)治療組和空白對(duì)照組的寄生蟲(chóng)計(jì)數(shù)結(jié)果需要在統(tǒng)計(jì)學(xué)具有顯著性差異（p<0.05）。臨床有效性可采用一些反映治療效果的寄生蟲(chóng)參數(shù)進(jìn)行評(píng)價(jià)，包括糞便中蟲(chóng)卵計(jì)數(shù)和蟲(chóng)體計(jì)數(shù)以及體內(nèi)蟲(chóng)體計(jì)數(shù)。無(wú)論采用幾何平均值還是算術(shù)平均值，均能表示有效性的差異。由于蟲(chóng)體數(shù)或蟲(chóng)卵數(shù)經(jīng)對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換比未經(jīng)對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換的數(shù)值更易趨于正態(tài)分布，因此幾何平均值比算術(shù)平均值更適用于集中趨勢(shì)的評(píng)估，以減少誤判。本指導(dǎo)原則要求采用幾何平均值計(jì)算有效百分率。數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為幾何平均數(shù)后，計(jì)算藥物的臨床有效性，必須達(dá)到或者高于90%,方可判定該產(chǎn)品有效。幾何平均值是基于對(duì)照組所有數(shù)據(jù)進(jìn)行計(jì)算的，如對(duì)照組中計(jì)數(shù)為零的數(shù)據(jù)可刪除，但相應(yīng)給藥組計(jì)數(shù)為零的數(shù)據(jù)則不允許刪除。藥物的臨床有效性=［（空白對(duì)照組蟲(chóng)體數(shù)或蟲(chóng)卵數(shù)的GM）-（給藥組動(dòng)物蟲(chóng)體數(shù)或蟲(chóng)卵數(shù)的GM）］引空白對(duì)照組蟲(chóng)體數(shù)或蟲(chóng)卵數(shù)的GM］（GM:幾何平均值）X100%。三、術(shù)語(yǔ)充分感染（adequateinfection）：在試驗(yàn)方案中定義的自然感染或人工感染水平，當(dāng)比較給藥動(dòng)物和空白對(duì)照動(dòng)物的寄生蟲(chóng)參數(shù)（如寄生蟲(chóng)數(shù)量）時(shí)，用以評(píng)價(jià)藥物的治療有效性。適應(yīng)證（claim）：標(biāo)簽上所列的對(duì)某種驅(qū)蠕蟲(chóng)藥敏感（90%或更高的有效性）的寄生蟲(chóng)種屬（成蟲(chóng)和/或幼蟲(chóng)）?？瞻讓?duì)照試驗(yàn)（controlledtest）：采用多個(gè)試驗(yàn)組進(jìn)行藥物有效性研究，1個(gè)試驗(yàn)動(dòng)物空白對(duì)照組（不給藥），至少1個(gè)試驗(yàn)動(dòng)物給藥組。各給藥組和空白對(duì)照組的試驗(yàn)動(dòng)物均為寄生蟲(chóng)充分感染的動(dòng)物；給藥后經(jīng)一定的時(shí)間，將試驗(yàn)動(dòng)物剖檢，對(duì)寄生蟲(chóng)進(jìn)行鑒定和計(jì)數(shù)。藥物的有效性按下式計(jì)算：寄生蟲(chóng)或特定生命期的驅(qū)蟲(chóng)率％=100［（空白對(duì)照組蟲(chóng)體數(shù)的GM）-（給藥組動(dòng)物蟲(chóng)體數(shù)的GM）］日空白對(duì)照組蟲(chóng)體數(shù)的GM］（6乂=幾何平均值）。當(dāng)樣本數(shù)量相同時(shí)通常采用此計(jì)算方法。自身對(duì)照試驗(yàn)（criticaltest）：試驗(yàn)動(dòng)物給藥后排出的寄生蟲(chóng)蟲(chóng)體數(shù)，加上尸檢時(shí)腸道內(nèi)蟲(chóng)體數(shù)作為給藥期間動(dòng)物體內(nèi)寄生蟲(chóng)的總數(shù)。如有效性試驗(yàn)按下式計(jì)算：各試驗(yàn)動(dòng)物的有效性％=［排出的蟲(chóng)體數(shù)］引（排出的蟲(chóng)體數(shù)）+（殘存的蟲(chóng)體數(shù)）］o有效性（effectiveness）：標(biāo)簽上生產(chǎn)商聲稱(chēng)的、已有數(shù)據(jù)支持的有效程度，