熒光免疫標(biāo)記技術(shù)課件

任務(wù)八熒光免疫標(biāo)記技術(shù)任務(wù)八1任務(wù)目標(biāo)1、重點掌握免疫熒光顯微技術(shù)、免疫熒光技術(shù)在醫(yī)學(xué)檢驗中的應(yīng)用2.熟悉熒光的基礎(chǔ)知識、熒光免疫分析常用儀器和設(shè)備3.了解熒光抗體的制備1、會使用熒光顯微鏡等常用儀器和設(shè)備2.會用熒光免疫技術(shù)檢測抗原抗體3.能將熒光免疫測定與臨床應(yīng)用相聯(lián)系通過學(xué)生相互鼓勵、嚴(yán)謹(jǐn)、認(rèn)真操作,各小組共同協(xié)作完成任務(wù),培養(yǎng)了與人合作、與人溝通的能力任務(wù)目標(biāo)2任務(wù)對象熒光標(biāo)熒光免其他熒記物的疫組織光免疫制備化學(xué)技技術(shù)術(shù)任務(wù)對象3任務(wù)過程復(fù)習(xí)提問<2案例導(dǎo)入22教學(xué)環(huán)節(jié)讓解與示教)(30學(xué)生操作40討論分析10遠(yuǎn)老5′課后思考題》1任務(wù)過程4案例導(dǎo)入患兒,男,間斷發(fā)熱五天,伴咳嗽3天。體溫最高39度,病程第2天查血常規(guī)正常,診斷“呼吸道感染”并靜滴“阿奇霉素”3天無明顯改變,即而出現(xiàn)咳嗽,為陣發(fā)性刺激性咳嗽,少痰,胸片提示:雙肺紋理增粗,右上肺片影。復(fù)查血常規(guī)仍正常患兒肺部感染系哪種病原體所致?如何快速診斷?案例導(dǎo)入5學(xué)生操作一位學(xué)生老師糾正學(xué)生分組操作演示點評再操作學(xué)生操作6實驗操作【主要試劑與器材】1抗原基質(zhì)片固定有核抗原,可采用小鼠肝組織切片或印片經(jīng)丙酮固定即可。目前有商品化試劑供應(yīng)。2標(biāo)記抗體FC標(biāo)記的羊抗人IgG,有商品化試劑供應(yīng)。臨用時稀釋至工作濃度30.01mol/LpH72PBS。4緩沖甘油9份甘油和1份PBS混勻。5待檢血清,陰性、陽性對照血清6其它熒光顯微鏡、染色缸、吸管、微量加樣器等。實驗操作7實驗操作【操作方法】◆1.自冰箱中取出抗原基質(zhì)片,平衡至室溫,用記號筆畫圈標(biāo)記。◆2將待檢血清和對照血清用PBs作1:10稀釋,用微量加樣器加50叫待檢血清或?qū)φ昭逵诨|(zhì)片上,水平置于濕盒中370C溫箱反應(yīng)30min3.以PBS沖洗抗原基質(zhì)片,再分別浸于盛有PBS染色缸中,反復(fù)漂洗3次,每次5min。◆4取出玻片,吹干,加50p最適工作濃度的標(biāo)記抗體,平置于濕盒內(nèi),370C溫箱反應(yīng)30min?！?重復(fù)步驟3,洗去未結(jié)合的熒光抗體◆6滴加緩沖甘油封片,用熒光顯微鏡觀察實驗操作8實驗操作【結(jié)果判斷】◆1熒光顯微鏡下見肝細(xì)胞核呈黃綠色,為陽性;反之為陰性?！?根據(jù)熒光分布情況,可分為四種熒光核型:◆(1)均質(zhì)型:細(xì)胞核呈均勻一致的熒光。今(2)周邊型:細(xì)胞核周圍呈現(xiàn)熒光,核中央染色弱或無熒光?！?3)斑點型:細(xì)胞核呈現(xiàn)斑點狀熒光?！?4)核仁型:核仁部分呈現(xiàn)熒光。實驗操作9實驗操作【注意事項】◆1滴加的血清或標(biāo)記抗體應(yīng)充分覆蓋滿抗原片。樣品之間防止交又污染。反應(yīng)時應(yīng)置于濕盒內(nèi),防止干燥。今2每次沖片應(yīng)徹底,防止非特異熒光的干擾。◆3.熒光受溫度影響較大,不能及時觀察時應(yīng)注意低溫避光保存。實驗操作10熒光免疫標(biāo)記技術(shù)課件11熒光免疫標(biāo)記技術(shù)課件12熒光免疫標(biāo)記技術(shù)課件13熒光免疫標(biāo)記技術(shù)課件14熒光免疫標(biāo)記技術(shù)課件15熒光免疫標(biāo)記技術(shù)課件16熒光免疫標(biāo)記技術(shù)課件17熒光免疫標(biāo)記技術(shù)課件18熒光免疫標(biāo)記技術(shù)課件19熒光免疫標(biāo)記技術(shù)課件20熒光免疫標(biāo)記技術(shù)課件21熒光免疫標(biāo)記技術(shù)課件22熒光免疫標(biāo)記技術(shù)課件23熒光免疫標(biāo)記技術(shù)課件24熒光免疫標(biāo)記技術(shù)課件25熒光免疫標(biāo)記技術(shù)課件26熒光免疫標(biāo)記技術(shù)課件27熒光免疫標(biāo)記技術(shù)課件28熒光免疫標(biāo)記技術(shù)課件29熒光免疫標(biāo)記技術(shù)課件30熒光免疫標(biāo)記技術(shù)課件31熒光免疫