丘腦下部催產(chǎn)素神經(jīng)元的定位及分布

丘腦下部催產(chǎn)素神經(jīng)元的定位及分布

丘腦底部是中樞神經(jīng)系統(tǒng)的重要部位，維持著身體的各種重要機制活動。催產(chǎn)素(Oxytocin,OT)是丘腦下部特殊分化的神經(jīng)細胞合成的重要生殖激素之一,具有促進子宮收縮(催產(chǎn))、乳腺排乳、卵泡發(fā)育及排卵、黃體形成和溶解,調(diào)節(jié)發(fā)情周期等重要作用,并參與神經(jīng)內(nèi)分泌調(diào)節(jié)系統(tǒng)的調(diào)節(jié),如丘腦下部-垂體-性腺軸,丘腦下部-垂體-腎上腺軸。近年來,許多關(guān)于催產(chǎn)素的研究多集中在妊娠、分娩、排乳等方面,而關(guān)于催產(chǎn)素在動物發(fā)育過程中的作用卻研究甚少。因此,本試驗對催產(chǎn)素在羔羊丘腦下部的定位及分布進行了研究,以為進一步闡明催產(chǎn)素對發(fā)育的影響及作用機制提供形態(tài)學(xué)依據(jù)。1材料和方法1.1實驗動物2～3月齡關(guān)中乳山羊母羊4只,臨床健康。1.2蔗糖磷酸緩沖液及丘腦表面形態(tài)觀察頸部動脈放血致死后用40mL/L多聚甲醛灌注固定,采集丘腦下部,用相同固定液繼續(xù)后固定24～48h,放入200mL/L蔗糖磷酸緩沖液中,直至組織塊沉底。1.3免疫組化sp法染色對丘腦下部做連續(xù)冰凍冠狀切片,片厚35μm,取其中3套。第1套進行免疫組化SP法染色;第2套進行Nissl染色,做核團定位;第3套用于對照,以確定反應(yīng)的特異性。1.4t工作濃度免疫組化染色程序按照試劑盒說明進行,第一抗體OT工作濃度為1∶5000,同時設(shè)陰性對照組,DAB呈色,貼片,梯度酒精脫水,二甲苯透明,觀察。陽性產(chǎn)物呈深藍色或藍色,陰性對照組無陽性產(chǎn)物。1.5形態(tài)分析軟件對陽性細胞的測量每組切片中相同核團隨機選取5個不同部位,Motic數(shù)碼顯微鏡拍照,用江蘇捷達801形態(tài)分析軟件對陽性細胞進行分析,測量陽性細胞的大小、灰度值和數(shù)目。2藍黑色的神經(jīng)纖維經(jīng)免疫組化SP法染色的切片,背景無色或淺藍色,OT免疫反應(yīng)陽性神經(jīng)元呈深淺不等的藍黑色,多為雙極神經(jīng)元或多極神經(jīng)元,也見單極神經(jīng)元;胞體呈不規(guī)則的圓形、卵圓形、梭形、三角形和多角形等,大小不等,細胞直徑約為5～20μm,成堆或分散分布。按胞體內(nèi)反應(yīng)顆粒著色的深淺分為強陽性、中等陽性和弱陽性3種。強陽性細胞藍黑色,胞體內(nèi)深藍色顆粒融合成團,染成一片,如視上核、室旁核(見圖1,圖2)。弱陽性細胞著色淺淡,細胞輪廓不清,在高倍鏡下方可見到胞質(zhì)中有少量淺藍色顆粒,如丘腦下部前區(qū)、腹內(nèi)側(cè)核。中等陽性細胞介于二者之間,如丘腦下部外側(cè)區(qū)、結(jié)節(jié)乳頭體核。胞核不著色呈空泡狀,居于中央或偏于一側(cè)(見圖1中A)。多數(shù)神經(jīng)元可見1～4個突起,長的突起還有分支,突起內(nèi)亦有反應(yīng)顆粒(見圖2中B)。有的神經(jīng)元的突起伸向第三腦室或伸向血管,如在環(huán)核中有的血管周圍被一些神經(jīng)元及纖維環(huán)繞(見圖3)。免疫反應(yīng)陽性神經(jīng)纖維呈藍黑色細絲狀或串珠狀,顆粒大小不一,形態(tài)多樣,在室旁核、視上彌散核、視上核、交叉上核、結(jié)節(jié)乳頭體核等核團可見到少量,在正中隆起(見圖4)。第三腦室附近有較多數(shù)量的陽性神經(jīng)纖維。對照組切片均為陰性(見表1)。3羊丘腦下ot的分布及形態(tài)3.1Monika發(fā)現(xiàn),在哺乳動物OT神經(jīng)元主要存在于丘腦下部大細胞核、視上核和室旁核,其神經(jīng)纖維主要投射到垂體后葉和正中隆起。段曉勤等、楊明等和沈霞芬等在多種動物的室旁核、視上核、穹窿周核、室周核、丘腦下部外側(cè)區(qū)、丘腦下部前核、環(huán)核、前聯(lián)合核等見到OT神經(jīng)元。本試驗也在上述區(qū)域出現(xiàn)陽性神經(jīng)元及數(shù)量不等的陽性纖維。此外,在視前內(nèi)側(cè)核、視前外側(cè)核、視上彌散核、丘腦下部前區(qū)、背內(nèi)側(cè)核、腹內(nèi)側(cè)核、腹外側(cè)核、弓狀核、結(jié)節(jié)乳頭體核、丘腦下部背區(qū)、丘腦下部后核、丘腦下部小細胞核、交叉上核和乳頭體各核團中亦可見一定數(shù)量的神經(jīng)元。陽性神經(jīng)纖維僅見于室旁核、視上彌散核、視上核、交叉上核、結(jié)節(jié)乳頭體核,在正中隆起、第三腦室附近有較多數(shù)量的陽性神經(jīng)纖維。結(jié)果表明,OT在羔羊丘腦下部分布很廣泛。3.2本試驗結(jié)果表明,在羔羊丘腦下部,OT主要存在于室旁核和視上核,其陽性神經(jīng)元數(shù)目最多,分別為224和138個,單個陽性神經(jīng)元所含OT顆粒較多,染色呈強陽性,平均灰度值分別為35.5566±11.7469和32.9732±8.5810。在視前外側(cè)核、腹內(nèi)側(cè)核、丘腦下部前區(qū)的神經(jīng)元所含OT顆粒較少,染色呈弱陽性,平均灰度值分別為192.3700±20.6657、172.7141±17.9308、171.5635±36.5881。此結(jié)果與發(fā)情期、乏情期乳山羊丘腦下部OT免疫反應(yīng)神經(jīng)元的分布相似,但神經(jīng)元的數(shù)目、大小、樹突分支情況和陽性神經(jīng)纖維的數(shù)目還存在差異。Stern等發(fā)現(xiàn),動物在不同的生理周期,其細微結(jié)構(gòu)會有所變化,主要表現(xiàn)在神經(jīng)元的位置、數(shù)目、大小以及樹突分支情況、陽性神經(jīng)纖維數(shù)目、細胞膜內(nèi)在成分和突觸數(shù)的變化。Rankin等發(fā)現(xiàn),母豬從出生后到繁殖早期丘腦下部含OT的神經(jīng)元的大小、體積、數(shù)目均持續(xù)增加。乳山羊幼年期性腺才剛發(fā)育,對性欲的需求不大,所以羔羊丘腦下部分泌的OT要少于發(fā)情期、乏情期乳山羊。3.3在第三腦室附近的一些核團中有一些神經(jīng)元的突起及神經(jīng)纖維伸向第三腦室,楊宏等證實,第三腦室室周區(qū)的OT神經(jīng)元可向垂體后葉投射,OT免疫陽性觸液神經(jīng)元在腦脊液和垂體后葉之間起功能上的聯(lián)系作用,腦脊液可影響垂體后葉的分泌。因此,OT免疫陽性觸液神經(jīng)元可分別通過神經(jīng)、體液2種途徑對神經(jīng)垂體進行往返調(diào)節(jié)。同時,在室旁核、