中醫(yī)標(biāo)準(zhǔn)化模型的研究與應(yīng)用

中醫(yī)標(biāo)準(zhǔn)化模型的研究與應(yīng)用

中醫(yī)動物模型的發(fā)展是在中醫(yī)學(xué)的全體觀念和辨證論治的指導(dǎo)下，運(yùn)用藏象論和病因病機(jī)理論，模擬動物疾病原型的各種特征。標(biāo)準(zhǔn)化中醫(yī)動物模型的復(fù)制是推動中醫(yī)藥現(xiàn)代化的重要環(huán)節(jié),對中醫(yī)藥事業(yè)的發(fā)展具有重要的意義。為了解中醫(yī)藥研究中常用實(shí)驗(yàn)動物的造模方法,筆者通過檢索中國全文期刊數(shù)據(jù)庫(CNKI)全文數(shù)據(jù)庫,全文檢索詞為“中醫(yī)動物模型”,檢索時間為1990年-2012年,共檢索到766篇文獻(xiàn),排除理論性研究文獻(xiàn)、一稿多投文獻(xiàn)和綜述性文獻(xiàn),余293篇。從文獻(xiàn)來看,目前所采用的中醫(yī)動物造模方式包括中醫(yī)傳統(tǒng)病因動物模型(占14.8%)、模擬西醫(yī)病因病理動物模型(占18.1%)、病證結(jié)合動物模型(占66.6%)及其他類型動物模型(占0.5%)。中醫(yī)傳統(tǒng)病因模型模擬中醫(yī)傳統(tǒng)病因建立動物模型是在中醫(yī)理論指導(dǎo)下,將中醫(yī)學(xué)中導(dǎo)致疾病產(chǎn)生的病因施加于實(shí)驗(yàn)動物,力求模擬出符合中醫(yī)學(xué)特點(diǎn)的動物模型。此類造模方法有單因素造模和復(fù)合因素造模兩種。如根據(jù)“恐傷腎”的中醫(yī)情志致病理論,采用“貓嚇鼠法”建立腎虛動物模型;根據(jù)“苦寒之藥損其脾胃”(《脾胃論》)的理論采用大黃水浸劑灌服研制脾虛證動物模型;根據(jù)“怒傷肝”的理論,采用激怒刺激法研制肝郁證動物模型;根據(jù)“風(fēng)寒濕三氣雜至,合而為痹”理論,采用人工制作的風(fēng)寒濕環(huán)境裝置,研制風(fēng)寒濕痹動物模型。如采用苦寒瀉下、飲食失節(jié)加勞倦過度法研制脾氣虛動物模型;采用煙熏加寒冷刺激復(fù)制寒飲蘊(yùn)肺證家兔病理模型;根據(jù)中醫(yī)“勞倦過度,房室不節(jié)”,運(yùn)用強(qiáng)迫小鼠游泳法加Colldege效應(yīng)誘導(dǎo)雄性小鼠房室不節(jié),建立腎陽虛動物模型;采用慢性夾尾激怒加高濃度大黃灌胃研制肝郁脾虛證動物模型。模擬中醫(yī)傳統(tǒng)病因的造模方法是在中醫(yī)理論指導(dǎo)下,模擬中醫(yī)傳統(tǒng)發(fā)病原因或“審證求因”的中醫(yī)病因,研制的模型從病因、病機(jī)、癥狀、客觀指標(biāo)和藥物反證方面與中醫(yī)理論較吻合。但是此模型存在不足之處:(1)中醫(yī)病因概念自身的模糊性。中醫(yī)病因?qū)W的形成和發(fā)展受到當(dāng)時歷史條件的制約,往往具有半真實(shí)性和抽象性的特點(diǎn)。(2)中醫(yī)病因與疾病或證候間因果關(guān)系不明確。中醫(yī)學(xué)中,僅有一種或幾種確定的病因所致的中醫(yī)疾病或證候類型很少,大多數(shù)是同一種病因可以導(dǎo)致多種疾病或證候,或是一種疾病或證候又是由多種不確定的病因引起的,抑或是多種不確定病因交雜影響導(dǎo)致疾病或證候產(chǎn)生。(3)施加病因的可控性差。中醫(yī)傳統(tǒng)病因引起致病的時間、強(qiáng)度難以標(biāo)準(zhǔn)化處理,以及考慮模型的自然恢復(fù)問題,這些造成了造模時施加病因的可控性差。因此,這類動物模型的穩(wěn)定性、可靠性和可重復(fù)性差。中醫(yī)熱質(zhì)神經(jīng)模型的制備此類動物模型以西醫(yī)病因?qū)W為依據(jù),施加特定的化學(xué)、生物、機(jī)械和物理致病因素,復(fù)制出西醫(yī)或中醫(yī)病名的動物模型,再利用動物表征評價(jià)、動物證候評價(jià)、理化指標(biāo)或中醫(yī)方藥反證等系統(tǒng)佐證模型成功與否。如皮下注射皮質(zhì)酮損害睪丸組,建立腎陽虛動物模型;采用結(jié)扎大鼠左冠狀動脈,移植心肌梗死致心力衰竭研制心氣虛動物模型;采用在D-半乳糖制作亞急性衰老模型基礎(chǔ)上,咖啡因腹腔注射疊加多平臺水環(huán)境持續(xù)睡眠剝奪法建立老年陰虛失眠動物模型;采用腹腔注射抗原液致敏,卵蛋白霧化吸入誘喘,建立中醫(yī)寒哮動物模型初探;采用尾靜脈注射醋酸鉛、5-羥色胺后,經(jīng)胃內(nèi)灌內(nèi)毒素脂多糖E(LPS)建立腸熱腑實(shí)動物模型。此類模型將西醫(yī)化學(xué)、生物、機(jī)械和物理致病因素定量定性施地加于實(shí)驗(yàn)動物,其建立的動物模型在癥狀、體征和理化指標(biāo)方面可重復(fù)性和穩(wěn)定性強(qiáng)。但是該造模方法有不足之處:(1)與中醫(yī)理論脫節(jié)。僅從單方面模擬西醫(yī)致病因素,創(chuàng)建的模型割裂了致病因素之間、動物自身臟腑多系統(tǒng)之間相互聯(lián)系相互影響的關(guān)系,這與中醫(yī)學(xué)整體觀念不符,模擬的模型與中醫(yī)學(xué)所闡釋的病、證有一定差距;(2)模型的真實(shí)性難以定論。該模型施加造模方法的單一性和片面性使得模型較“純化”,而中醫(yī)致病是致病因素、正邪斗爭、機(jī)體反應(yīng)的一個復(fù)雜的過程,證候是病因、病機(jī)、病程、致病特點(diǎn)等綜合規(guī)律的概括,因此,僅靠單因素的理化、生物損傷,模擬出的動物模型很難說能真實(shí)地反應(yīng)證候特點(diǎn)。中醫(yī)證候模型為進(jìn)一步了解病證結(jié)合動物模型在現(xiàn)代中醫(yī)藥研究中的應(yīng)用趨勢,筆者通過CNKI全文數(shù)據(jù)庫,檢索主題詞設(shè)為“病證結(jié)合”and“動物模型”,共檢索到文獻(xiàn)446篇,占66.6%而成為主要趨勢。自1991年出現(xiàn)第一篇論述病證結(jié)合動物模型的文章,此后論述或采用病證結(jié)合動物模型的文獻(xiàn)有逐年增加的趨勢(見圖1)。病證結(jié)合動物模型是指通過臨床調(diào)查研究、選擇有密切聯(lián)系的疾病和證候,即尋找兩者在臨床的結(jié)合點(diǎn),分別或同時復(fù)制兩者特征用于觀察研究的模型動物。病證結(jié)合動物模型包括3種類型,即中西醫(yī)結(jié)合病因病理類型、西醫(yī)疾病模型探尋中醫(yī)的“證”類型及中醫(yī)證候模型探尋西醫(yī)的“病”類型。此類模型是指分別(或同時)采用傳統(tǒng)中醫(yī)學(xué)病因和西醫(yī)病因或病理復(fù)合因素施加于實(shí)驗(yàn)動物,力求模擬出既具備西醫(yī)疾病動物模型的可重復(fù)性、穩(wěn)定性和可靠性強(qiáng)的特點(diǎn)又符合中醫(yī)學(xué)疾病或證候特點(diǎn)的動物模型。此類模型包括:(1)“中醫(yī)傳統(tǒng)病因”+“西醫(yī)病因”。如采用大鼠限制飲食加皮下注射利血平注射液研制脾虛病證結(jié)合動物模型;采用高脂飲食、腦垂體后葉素皮下注射及寒冷刺激方法建立冠心病心陽虛血瘀證大鼠模型;(2)“中醫(yī)傳統(tǒng)病因”+“西醫(yī)病理”。如采用21d慢性束縛合并手術(shù)后雙側(cè)杏仁核微量注射α-氨基羥甲基惡唑丙酸(AMPA)受體的拮抗劑CNQX,研制肝郁脾虛證大鼠模型;采用高脂飼料喂養(yǎng)合并主動脈內(nèi)膜球囊損傷術(shù)研制動脈粥樣硬化痰瘀證大鼠模型。此類模型是指以西醫(yī)疾病動物模型為模板,在模型建立過程中或建立后,通過動物表現(xiàn)的癥狀、體征等外在表征及病理指標(biāo),來探尋西醫(yī)疾病或疾病過程中體現(xiàn)的中醫(yī)證候類型。如采用距大鼠尾根1cm處夾尾1min,24h內(nèi)禁食禁水,4℃冰水強(qiáng)迫游泳5min,頻率1500Hz,92dB的噪音刺激1h,限制行為3h,45℃烘箱熱烘5min,潮濕環(huán)境飼養(yǎng)24h,孤養(yǎng),晝夜顛倒,9種刺激隨機(jī)安排到21d內(nèi),刺激時間和刺激類型均隨機(jī),建立抑郁癥大鼠模型,通過大鼠表征和行為學(xué)檢測判別為肝郁脾虛證候模型;采用將排卵期(性皮腫最明顯)的雌猴趕入壓縮籠,擠壓,以獼猴稍能活動為限,每天擠壓7h,擠壓造模7d,研制經(jīng)前期綜合征(肝氣逆證)獼猴模型;采用高脂飼料喂養(yǎng)合并腹腔注射小劑量鏈脲佐菌素(STZ)的方法復(fù)制2型糖尿病大鼠模型,連續(xù)采集兩組大鼠表征并進(jìn)行陰虛內(nèi)熱證和氣陰兩虛證證型判定;動態(tài)采集自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)宏觀表征、血壓及行為學(xué)實(shí)驗(yàn),結(jié)果判別SHR14-18周齡表現(xiàn)為肝火亢盛證證型。此類模型是先利用中醫(yī)傳統(tǒng)病因造模方式初步模擬證候動物模型,再通過模型的外在表征、理化指標(biāo)及代表性方藥反證模型,在證候模型確定的前提下,尋找可能相關(guān)的臨床疾病進(jìn)行驗(yàn)證。如采用自制木質(zhì)束縛架對大鼠進(jìn)行捆綁束縛,束縛時間隨機(jī),每天3h,連續(xù)21d,成功建立大鼠肝郁脾虛模型,再運(yùn)用驗(yàn)證抑郁癥的糖水偏愛實(shí)驗(yàn)、曠場試驗(yàn)及新環(huán)境進(jìn)食抑制實(shí)驗(yàn)來驗(yàn)證肝郁脾虛動物模型,結(jié)果證明該證候模型和抑郁癥模型一致;采用大黃煎煮液灌胃結(jié)合夾尾、番瀉葉煎煮液灌胃結(jié)合束縛的方法建立肝郁脾虛大鼠模型,再通過統(tǒng)計(jì)大鼠造模前后體質(zhì)量變化、大鼠給藥后排稀便的時間及造模結(jié)束10d后,在5:00和24:00的糞點(diǎn)數(shù)3種驗(yàn)證腸易激綜合征的評價(jià)方法,來評價(jià)該肝郁脾虛大鼠模型是否與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的腸易激綜合征一致。由上述圖1不難看出,病證結(jié)合動物模型是現(xiàn)代中醫(yī)藥研究模式的發(fā)展趨勢。在探索中西醫(yī)結(jié)合和中醫(yī)證候本質(zhì)研究中,病證結(jié)合模型之所以成為比較理想的動物模型,筆者認(rèn)為此模型具有以下幾點(diǎn)優(yōu)勢:(1)符合中醫(yī)理論,貼近中醫(yī)證候特點(diǎn)。無論是采用中西醫(yī)結(jié)合病因病理造模還是采用中醫(yī)證候模型探尋西醫(yī)的“病”造模,造模之初是在中醫(yī)理論和中醫(yī)病因?qū)W指導(dǎo)下,模型建立后又依靠動物表征評價(jià)、動物證候評價(jià)及以方測證等符合中醫(yī)特點(diǎn)的模型評價(jià)方法評價(jià)模型,能較真實(shí)地模擬中醫(yī)證候。(2)穩(wěn)定性、可靠性及易行性強(qiáng)。該模型中的利用西醫(yī)疾病模型探尋中醫(yī)的“證”類型,以西醫(yī)疾病模型為基礎(chǔ),彌補(bǔ)了中醫(yī)傳統(tǒng)病因致病的模糊性、非特異性及不可控性缺點(diǎn),加強(qiáng)了模型的可重復(fù)性和可靠性。(3)實(shí)際應(yīng)用意義重大。病證結(jié)合動物模型使很多“證”的不確定因素由于“病”的限制變得更加清晰,更加符合臨床實(shí)際,更能精確地闡明中醫(yī)證候本質(zhì),更有望使中醫(yī)藥基礎(chǔ)研究拓展應(yīng)用到臨床。病證結(jié)合模型的建立綜上所述,與中醫(yī)傳統(tǒng)病因動物模型、西醫(yī)病因病理動物模型相比,病證結(jié)合動物模型在中醫(yī)藥現(xiàn)代化研究中具有明顯的優(yōu)勢。特別是中醫(yī)證候模型評價(jià)的深入研究,如通過舌象、唇象、爪象、耳輪、尾尖、眼球、皮毛、體質(zhì)量以及動物行為學(xué)等一系列生物表征評價(jià)模型;基于“方證相應(yīng)”原理,對建立的模型投以相應(yīng)的方藥,取得模型某些表征和理化指標(biāo)改善來評價(jià)模型;采集大小鼠四診信息,創(chuàng)建大小鼠四診工作站,實(shí)現(xiàn)大小鼠四診標(biāo)準(zhǔn)化、計(jì)量化,便于對模型計(jì)量化辨證及計(jì)量化評價(jià)等,這些新的研究思路和方法的引入都使得病證結(jié)合動物模型漸趨成熟。然而到目前為止,