蛋白表達(dá)系統(tǒng)的選擇

蛋白質(zhì)表達(dá)系統(tǒng)的選擇大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)轉(zhuǎn)錄翻譯基因表達(dá)系統(tǒng)DNA蛋白質(zhì)RNA逆轉(zhuǎn)錄調(diào)控調(diào)控中心法則基因表達(dá)系統(tǒng)轉(zhuǎn)錄翻譯基因表達(dá)系統(tǒng)DNA蛋白質(zhì)RNA真核生物表達(dá)系統(tǒng)基因表達(dá)系統(tǒng)原核生物表達(dá)系統(tǒng)其它基因表達(dá)系統(tǒng)酵母

植物昆蟲哺乳動物細(xì)胞......無細(xì)胞系統(tǒng)

胚細(xì)胞......基因表達(dá)系統(tǒng)原核生物表達(dá)系統(tǒng)基因表達(dá)系統(tǒng)基因產(chǎn)物原核生物細(xì)胞外源基因原核表達(dá)系統(tǒng)結(jié)構(gòu)原件原核生物表達(dá)系統(tǒng)原核生物受體細(xì)胞原核表達(dá)載體大腸桿菌芽孢桿菌鏈霉菌藍(lán)藻原核表達(dá)系統(tǒng)結(jié)構(gòu)原件原核生物表達(dá)系統(tǒng)原核生物受體細(xì)胞原核表達(dá)載體大腸桿菌DNA復(fù)制及重組載體的選擇系統(tǒng)原核表達(dá)系統(tǒng)結(jié)構(gòu)原件大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)原核生物受體細(xì)胞原核表達(dá)載體外源目的基因的轉(zhuǎn)錄系統(tǒng)蛋白質(zhì)的翻譯系統(tǒng)DNA復(fù)制及重組載體的選擇系統(tǒng)原核表達(dá)系統(tǒng)結(jié)構(gòu)原件大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)原核生物受體細(xì)胞原核表達(dá)載體選擇標(biāo)記復(fù)制子選擇標(biāo)記大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)復(fù)制子是一段包含復(fù)制起始位點(diǎn)和反式因子作用區(qū)的DNA片段。

大腸桿菌基因表達(dá)載體一般是質(zhì)粒表達(dá)載體，有效的復(fù)制子包含在質(zhì)粒中使轉(zhuǎn)化體產(chǎn)生新的表型，以便于將轉(zhuǎn)化了的細(xì)胞從大量的菌群中分離出來顯性標(biāo)記選擇標(biāo)記大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)使轉(zhuǎn)化體產(chǎn)生新的表型，以便于將轉(zhuǎn)化了的細(xì)胞從大量的菌群中分離出來營養(yǎng)缺陷標(biāo)記氨芐青霉素抗性四環(huán)素抗性鏈霉素抗性氯霉素抗性卡那霉素抗性DNA復(fù)制及重組載體的選擇系統(tǒng)原核表達(dá)系統(tǒng)結(jié)構(gòu)原件大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)原核生物受體細(xì)胞原核表達(dá)載體外源目的基因的轉(zhuǎn)錄系統(tǒng)抑制基因啟動子終止子在適當(dāng)?shù)恼T導(dǎo)條件下可使抑制物失活，啟動子功能重新恢復(fù)。是一段能被宿主RNA聚合酶特異性識別和結(jié)合并指導(dǎo)目的基因轉(zhuǎn)錄的DNA序列

抑制基因大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)啟動子種類:誘導(dǎo)型啟動子,Lac、Trp、λPRtra組成型啟動子,T7噬菌體的啟動子是一種控制啟動子功能的蛋白質(zhì)，對啟動子的起始轉(zhuǎn)錄功能產(chǎn)生抑制作用防止產(chǎn)生不必要的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物，控制目的基因mRNA的長度，提高mRNA穩(wěn)定性，避免質(zhì)粒上其它基因的異常表達(dá)使轉(zhuǎn)錄在目的基因之后立即停止，避免多余的轉(zhuǎn)錄以節(jié)省宿主內(nèi)RNA的合成底物，提高目的基因的轉(zhuǎn)錄量是一段終止RNA聚合酶轉(zhuǎn)錄的DNA序列

大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)終止子DNA復(fù)制及重組載體的選擇系統(tǒng)原核表達(dá)系統(tǒng)結(jié)構(gòu)原件大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)原核生物受體細(xì)胞原核表達(dá)載體外源目的基因的轉(zhuǎn)錄系統(tǒng)蛋白質(zhì)的翻譯系統(tǒng)起始密碼子SD序列終止密碼子是原核基因轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)下游的一段DNA序列

大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)大腸桿菌中表達(dá)真核基因或本身所含SD序列較弱的原核基因，必須從外部同時提供啟動子和有效的SD序列。SD序列大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)翻譯終止密碼子與核糖體相遇時，能使核糖體從mRNA模板上脫落下來，終止蛋白質(zhì)的翻譯過程

終止密碼子

起始密碼子是翻譯的起始位點(diǎn)，通常為AUG（編碼met），是首選的起始密碼子。有極少數(shù)生物利用其它密碼子作為翻譯的起始密碼子，如GUG、UUG等起始密碼子劣勢缺乏對真核生物蛋白質(zhì)的復(fù)性功能

缺乏對真核生物蛋白質(zhì)的修飾加工系統(tǒng)內(nèi)源性蛋白酶降解空間構(gòu)象不正確的異源蛋白細(xì)胞周質(zhì)內(nèi)含有種類繁多的內(nèi)毒素優(yōu)勢全基因組測序，共有4405個開放型閱讀框架基因克隆表達(dá)系統(tǒng)成熟完善繁殖迅速、培養(yǎng)簡單、操作方便、遺傳穩(wěn)定已發(fā)展為一種安全的基因工程實(shí)驗(yàn)體系，擁有各類適用的寄主菌株和不同類型的載體系列Thankyou2013.01.08植物表達(dá)載體

Ti質(zhì)粒表達(dá)載體Ti質(zhì)粒Ti質(zhì)粒為植物根癌土壤桿菌菌株中存在的質(zhì)粒，其特定部位與植物核內(nèi)DNA組合來表達(dá)信息，使植物細(xì)胞腫瘤化。Ti質(zhì)粒是在根瘤土壤桿菌細(xì)胞中存在的一種染色體外自主復(fù)制的環(huán)形雙鏈DNA分子。它控制根瘤的形成，可作為基因工程的載體。農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒中的一段DNA序列,可以從農(nóng)桿菌中轉(zhuǎn)移并穩(wěn)定整合到植物核基因組中。這段DNA序列叫做T-DNA序列。農(nóng)桿菌侵染植物后，Ti質(zhì)粒中的T-DNA區(qū)段脫離質(zhì)粒而整合到受體植物的染色體上。因此，如果把外源基因插入T-DNA中，就有可能攜帶進(jìn)入受體植物并整合到染色體上。農(nóng)桿根瘤菌之所以會感染植物根部是因?yàn)橹参锔繐p傷部位分泌出酚類物質(zhì)乙酰丁香酮和羥基乙酰丁香酮，這些酚類物質(zhì)可以誘導(dǎo)Vir（Virulenceregion)基因的啟動表達(dá)，Vir基因的產(chǎn)物將Ti質(zhì)粒上的一段T－DNA單鏈切下，而位于根瘤染色體上的操縱子基因產(chǎn)物則與單鏈T－DNA結(jié)合，形成復(fù)合物，轉(zhuǎn)化植物根部細(xì)胞。Ti質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)Ti質(zhì)?？梢苑譃?個區(qū)：

（1）T-DNA區(qū)（transferDNAregion,轉(zhuǎn)化DNA區(qū)）

（2）Vir區(qū)（virulenceregion,致病區(qū)）

（3）Ori區(qū)（orignofreplication質(zhì)粒復(fù)制起始區(qū)）

（4）Con區(qū)（regionencodingconjugations,結(jié)合轉(zhuǎn)移區(qū)）

其中，T-DNA可以整合到植物細(xì)胞染色體上。由于T-DNA上的基因帶有植物細(xì)胞可識別的表達(dá)調(diào)控信號，因此它能夠依賴植物細(xì)胞中的RNA聚合酶II進(jìn)行轉(zhuǎn)錄。T-DNA上的基因從T-DNA上已經(jīng)鑒定出了多種基因。他們包括章魚堿合成酶基因ocs、合成細(xì)胞分裂素的基因tmr、編碼異戊烯轉(zhuǎn)移酶的基因、合成生長素的基因tms1和tms2。由于tmr、tms1和tms2能合成植物激素，使植物細(xì)胞能分裂而不分化，產(chǎn)生冠癭瘤，所以這三個基因又稱致癌基因。Ti質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化過程T-DNA的邊界在T-DNA區(qū)的兩端有一個25bp的正向重復(fù)序列，這兩個片段是高度保守的。其中右邊界的序列是至關(guān)重要的。如果右邊界的序列發(fā)生突變，會使T-DNA的轉(zhuǎn)移功能徹底喪失或者是大大降低；但是如果突變左邊序列則影響比較小。實(shí)驗(yàn)證實(shí)，只有T-DNA兩端的序列存在并且方向正確，那么在兩序列之間插入任何一個DNA片段都有可能被轉(zhuǎn)移整合到植物基因上去。在Ti質(zhì)粒轉(zhuǎn)化植物細(xì)胞時，Ti質(zhì)粒攜帶的外源DNA可達(dá)50kb以上。對T-DNA區(qū)改造的具體方面切除致癌基因增加能插入外源DNA的單一限制酶切位點(diǎn)。插入選擇性標(biāo)記基因裝配高效啟動子和轉(zhuǎn)錄終止信號Ti載體系統(tǒng)（雙元載體系統(tǒng)）雙元載體是由兩個質(zhì)粒組成。一個是不含有T-DNA的Ti質(zhì)粒，提供Vir功能；另一個是具有廣宿主范圍的小質(zhì)粒，帶有T-DNA兩側(cè)末端重復(fù)序列以及選擇標(biāo)記基因、克隆位點(diǎn)等等。小質(zhì)粒重組了外源的DNA后，從大腸桿菌轉(zhuǎn)導(dǎo)農(nóng)桿菌，再去感染植物細(xì)胞。農(nóng)桿菌感染植物細(xì)胞的方法（1）葉圓片法：用打孔器打取幾毫米直徑的葉圓片，表面消毒，進(jìn)入農(nóng)桿菌液數(shù)秒后，置于適當(dāng)培養(yǎng)基上培養(yǎng)2天，，再轉(zhuǎn)到含有卡那霉素和羧芐青霉素的選擇培養(yǎng)基上培養(yǎng)20天，通過脫分化、再分化長成新的含有目的基因的植株。（2）整株感染：在無菌培養(yǎng)的整株植株的適當(dāng)部位上人工造成傷口，用農(nóng)桿菌液接種，待形成腫瘤后切下，在含有抗生素且無激素的培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)并除菌。（3）原生質(zhì)體和農(nóng)桿菌共培養(yǎng)法：將除去細(xì)胞壁的原生質(zhì)體與農(nóng)桿菌共培養(yǎng)，然后再分化細(xì)胞壁、脫分化、再分化得到含有目的基因的植物植株。

酵母表達(dá)系統(tǒng)Concept

酵母表達(dá)系統(tǒng)的產(chǎn)生

酵母表達(dá)系統(tǒng)的組成

主要酵母表達(dá)系統(tǒng)

不同酵母表達(dá)系統(tǒng)的特點(diǎn)

酵母表達(dá)系統(tǒng)的方法123451.酵母表達(dá)系統(tǒng)的產(chǎn)生基因工程技術(shù)的發(fā)展為用