藥理學(xué)實驗報告范文(共6篇)

篇一：藥理學(xué)實驗報告1實驗三 1、地西泮抗驚厥作用【目的】觀察地西泮的抗驚厥作用。【原理】尼可剎米可吸收入血，以至出現(xiàn)興奮、抽搐、驚厥。地西泮作用于邊緣系統(tǒng)，加強(qiáng)了gaba能神經(jīng)元的抑制作用，可有效地對抗中毒性驚厥?！緞游铩考彝?只，體重2kg~3kg?！舅幤贰?.5%地西泮溶液、25%尼可剎米?！酒鞑摹客霉潭ㄏ?、臺式磅秤、注射器（5ml）、針頭（6號）?！痉椒ā咳〖彝?只，秤重并觀察正?；顒忧闆r，然后靜脈注射25%尼可剎米（0.5ml/kg給藥）。觀察動物的活動姿勢、肌張力及呼吸等變化。當(dāng)家兔出現(xiàn)明顯驚厥后，由耳靜脈緩慢推注0.5%地西泮（按0.5ml/kg~1ml/kg給藥），直到肌肉松弛為止?！窘Y(jié)果】將實驗結(jié)果填入下表。表地西泮對兔驚厥作用的影響給藥前家兔反應(yīng)正常尼可剎米給藥后驚厥、肌肉強(qiáng)直肌肉松弛、鎮(zhèn)靜、催眠注射地西泮【討論題】地西泮抗驚厥作用、作用機(jī)制及用途有哪些？【注意事項】家兔出現(xiàn)強(qiáng)直性驚厥后，應(yīng)緩慢推注地西泮，過快可抑制呼吸。2、用化學(xué)刺激法觀察藥物的鎮(zhèn)痛作用【目的】觀察藥物的鎮(zhèn)痛作用；學(xué)習(xí)化學(xué)刺激法篩選鎮(zhèn)痛藥或比較藥物鎮(zhèn)痛效果的方法?！驹怼扛鼓さ母杏X神分布廣泛，把醋酸等化學(xué)刺激物注入腹腔，使小鼠產(chǎn)生疼痛反應(yīng)，表現(xiàn)為腹部雙側(cè)凹陷，軀體扭曲，后肢伸展，臀部高起，稱扭體反應(yīng)。曲馬多有鎮(zhèn)痛作用，可明顯抑制扭體反應(yīng)?！緞游铩啃∈?只，體重28g~32g?！舅幤贰?.2%鹽酸曲馬多溶液、0.6%醋酸溶液、生理鹽水?！酒鞑摹刻炱?、注射器（1ml）、針頭（5號）、秒表?！痉椒ā?、 取小鼠2只，稱重后觀察正?；顒雍髽?biāo)號。2、 甲鼠腹腔注射鹽酸曲馬多溶液0.1ml/10g；乙鼠腹腔注射生理鹽水0.1ml/10g。3、 給藥30min后兩鼠均腹腔注射醋酸0.2ml/只，觀察記錄注射醋酸后15min內(nèi)兩鼠出現(xiàn)扭體反應(yīng)情況?！窘Y(jié)果】表藥物對醋酸所致小鼠疼痛作用的影響鼠號藥物用藥前扭體反應(yīng)次數(shù)甲乙醋酸---鹽酸曲馬多醋酸---生理鹽水419用藥后扭體反應(yīng)次數(shù)016【討論題】結(jié)合實驗結(jié)果說明曲馬多的鎮(zhèn)痛效果與臨床用途?！咀⒁馐马棥?、 醋酸溶液在實驗前臨時配制。2、 小鼠體重輕，扭體反應(yīng)出現(xiàn)率低。3、 扭體反應(yīng)任何一項表現(xiàn)即可為陽性，扭體反應(yīng)減少50%以上，才能認(rèn)為有鎮(zhèn)痛效力。篇二：藥理學(xué)實驗病理學(xué)》實驗報告實驗報告（一）實驗名稱實驗性肺水腫時間成績實驗?zāi)康氖煜げ±砩韺W(xué)和病理解剖學(xué)的實驗方法，掌握急性肺水腫的影響因素。材料：家兔、手術(shù)器材、靜脈輸液器材、生理鹽水、5%烏拉坦和1mg腎上腺素等。實驗方法：給麻醉家兔做氣管插管手術(shù)后，按80ml/kg給家兔頸總靜脈輸液，150~180滴/分。輸液完成后，靜脈注射0.5mg/5ml腎上腺素。觀察1家兔呼吸頻率和有無呼吸困難；2氣管插管處有無異常。出現(xiàn)后，夾住氣管，處死動物，開胸結(jié)扎支氣管，游離兩肺。吸干表面水分，稱肺重量，計算系數(shù)。（肺重/體重—正常4~5）。觀察肺臟及剖面。實驗結(jié)果:呼吸觀察：輸液完成，給腎上腺素后，呼吸頻率由60/分升高至100/分并呼吸增強(qiáng)；鼻、耳部皮膚青紫，氣管插管處可見粉紅色泡沫粘液。肺重系數(shù):0.175/2.5*100=7標(biāo)本觀察：肺暗紅色，彈性減弱。剖面有粉紅色泡沫液體流出。討論與結(jié)論：成功演繹急性肺水腫病理形成過程。大量快速輸液，使血漿膠體滲透壓下降50%左右，腎上腺素起到強(qiáng)心作用升高血壓，增加肺毛細(xì)血管壓。兩個因素使肺內(nèi)組織液快速大量生成，進(jìn)一步漏出進(jìn)入肺泡；毛細(xì)血管擴(kuò)張，少量滲出紅細(xì)胞，因此出現(xiàn)粉紅色泡沫液體。肺水腫影響肺換氣，出現(xiàn)發(fā)紺，皮膚青紫色。肺水腫表現(xiàn)器官重量增加。實驗報告（二）病理觀察觀察內(nèi)容：大葉性肺炎大體標(biāo)本，脂肪肝大體標(biāo)本。急性肝炎病理組織切片。肉眼所見：標(biāo)本1病變肺葉腫脹，質(zhì)地硬；切面灰紅色，較粗糙。肺胸膜表面有纖維素滲出物附著。標(biāo)本2肝體積增大，被摸緊繃，表面油膩光亮，肝臟呈淡黃色。鏡下所見：高倍鏡：肝細(xì)胞體積腫大多見，胞漿淡染疏松狀；肝細(xì)胞點狀壞死，壞死細(xì)胞大小不等，細(xì)胞核凝固染色深，還可見細(xì)胞核碎裂呈小塊狀，還可見細(xì)胞核疏松近消失。匯管區(qū)和壞死區(qū)有明顯的炎性細(xì)胞侵潤。實驗報告（三）病例討論教師問題：這個病人的以下臨床表現(xiàn)各考慮是什么病變？1、 既往勞累、激動時發(fā)作，心前區(qū)痛，有伴隨癥狀，休息、治療后緩解。2、 此次下午心前區(qū)劇痛，呼吸困難，咳粉紅色泡沫痰，兩肺濕羅音。3、 晚間突然昏倒，神志不清，搶救無效死亡。死者尸檢心、腦、肺會有何種表現(xiàn)？學(xué)生分析初步結(jié)論心絞痛心肌梗死和左心衰腦梗死或腦出血支持初步結(jié)論的要有下例尸檢結(jié)果心臟：冠狀動脈狹窄或血栓栓塞；心肌梗死灶邊緣地圖狀，邊緣有出血帶；壞死組織色淺凝固狀。腦：體積增大腦水腫；腦動脈粥樣硬化、狹窄或血栓栓塞；腦梗死灶色淺，邊緣有出血帶；腦出血病灶。肺：兩肺體積增大，顏色暗紅，切面見暗褐色泡沫液體流出。小組討論摘要臨床表現(xiàn)和病理檢驗，診斷為動脈粥樣硬化癥引起心、腦等重要器官病變。教師總結(jié)理論聯(lián)系實際，收到良好的學(xué)習(xí)效果。篇三：藥理實驗報告藥理學(xué)實驗報告學(xué)校：學(xué)院：班級：學(xué)號：姓名：指導(dǎo)老師：元胡止痛片對小鼠鎮(zhèn)痛抗炎鎮(zhèn)痛活性研究組員：指導(dǎo)老師:摘要：目的：研究元胡止痛片是否具有鎮(zhèn)痛抗炎的效果。方法：使用小鼠熱板法、醋酸扭體法、耳腫脹法，并分別建立小鼠的鎮(zhèn)痛抗炎模型，觀察元胡止痛片對小鼠的鎮(zhèn)痛抗炎作用的影響。結(jié)果：1.熱板法：元胡止痛片對小鼠熱板法實驗中給藥60分鐘后有顯著性差異，陽性藥阿司匹林與生理鹽水組相比有明顯的痛閾降低，低濃度與生理鹽水組相比有痛閾降低。醋酸扭體法：實驗結(jié)果有顯著差異，阿司匹林陽性藥與高濃度元胡溶液相比有顯著性差異，陽性藥有明顯的鎮(zhèn)痛作用。而阿司匹林組與生理鹽水，低濃度與生理鹽水組沒有出現(xiàn)顯著性差異。3.熱腫脹法：結(jié)果顯示無顯著性差異，陽性藥阿司匹林沒有明顯的抗炎活性。結(jié)論：阿司匹林陽性藥有抗炎鎮(zhèn)痛作用，元胡止痛片無抗炎鎮(zhèn)痛作用。關(guān)鍵詞：元胡止痛片；鎮(zhèn)痛；抗炎；熱板法；醋酸扭體法；耳腫脹法元胡止痛片為中藥復(fù)方制劑，由延胡索（醋制）、白芷等中藥組成，延胡索（醋制）具辛、苦、溫，歸肝脾經(jīng)，由活血、理氣、止痛等功效；白芷辛溫，歸胃、大腸、肺經(jīng)，其功能與主治為散風(fēng)除濕、通竅止痛、消腫排膿。該制劑為中國藥典方，臨床上用于氣滯血淤的胃痛、脅痛、頭痛及月經(jīng)痛等。由于直腸給藥50％以上的藥物可以不通過肝臟而直接進(jìn)入血液作用于全身，可避免口服引起的胃腸道刺激，同時減少。胃液和肝臟對藥物的破壞和降解，從而提高藥效減輕藥物的不良反應(yīng)。另外，直腸給藥藥物吸收緩慢，可使藥效維持較長的時間。本實驗旨在對元胡止痛栓的鎮(zhèn)痛抗炎作用的研究。1材料與方法1.1動物健康昆明種小白鼠，體重25±8g，雌性32只，雄性32只。健康昆明種小白鼠，體重40±10g，雄性，32只。藥品與試劑元胡止痛片，廣西半宙天龍制藥有限公司，批號130807；0.9%氯化鈉注射液，新疆華世丹藥業(yè)股份有限公司，批號214070702；阿司匹林腸溶片，臨汾寶珠制藥有限公司，批號140401；二甲苯，天津市富宇精細(xì)化工有限公司，批號120411；冰乙酸，天津市光復(fù)科技發(fā)展有限公司，批號090527。1.3儀器yls-6b智能熱板儀，淮北正華生物儀器設(shè)備有限公司，出廠日期071018；天孚牌jyt-5架盤藥物天平，生產(chǎn)日期2011年8月；yls-25a電動耳腫打耳器，濟(jì)南益延科技發(fā)展有限公司，出廠日期20140521；電子天平。2實驗內(nèi)容2.1熱板法2.1.1動物篩選致痛潛伏期（痛閾值）為5~45s之間的合格雌性小鼠。32只，熱板法鎮(zhèn)痛試驗，篩選痛閾值合格的小鼠，取早小鼠于給藥前先用熱板儀于55±0.5°C分別測定每只小鼠的正常痛閾值［將小鼠放于智能熱板儀上至出現(xiàn)舔后足的所需時間作為痛閾值（s），連續(xù)2次，間隔30S,測定平均值即為正常痛閾值］。將舔后足時間＜5s或〉45s，或跳躍者不用于此實驗。2.1.2分組按體重隨機(jī)分組，分4組，編號，每組8只。2.1.3給藥1組生理鹽水空白對照組（按0.1mg/10g灌胃生理鹽水），2組阿司匹林陽性對照組（按4mg/10g灌胃20mg/ml的阿司匹林），3組元胡止痛片低劑量組（按0.6mg/10g灌胃2mg/ml的元胡止痛片溶液），4組元胡止痛片高劑量組（按1.3mg/10g灌胃10mg/ml的元胡止痛片溶液）。2.1.4測定痛閾值各鼠給藥前測定正常痛閾值。取智能熱板儀，調(diào)節(jié)溫度，使溫度恒定在55±0.5C,取每組合格雌性小鼠，按2.1.2灌胃不同藥液，測定給藥后每組15、30、60、90分鐘后各鼠痛閾值。2.1.5痛閾提高百分率用藥后平均熱痛閾值—用藥前平均痛閾痛閾提高百分率=用藥前平均痛閾值2耳腫脹法2.2.1分組取雄性小鼠25±8g，32只，隨機(jī)分為4組，編號，每組8只。2.2.2給藥1組生理鹽水空白對照組（按0.1mg/10g灌胃生理鹽水），2組阿司匹林陽性對照組（按4mg/10g灌胃20mg/ml的阿司匹林），3組元胡止痛片低劑量組（按0.6mg/10g灌胃2mg/ml的元胡止痛片溶液），4組元胡止痛片高劑量組（按1.3mg/10g灌胃10mg/ml的元胡止痛片溶液）。2.2.3測量每組給藥30分鐘后，給小鼠的右耳前后涂上二甲苯0.1ml/只，30分鐘后處死小鼠，沿耳廓對稱剪下兩只耳殼，用yls-25a電動耳腫打耳器取耳片，稱重，以兩耳重量差計算腫脹度。2.2.4計算腫脹率腫脹率（%）=［右耳片重（mg）-左耳片重（mg）］/左耳片重（mg）X100%2.3醋酸扭體法2.3.1分組取雄性小鼠40±10g，32只，隨機(jī)分為4組，編號，每組8只。2.2.2給藥1組生理鹽水空白對照組（按0.1mg/10g灌胃生理鹽水），2組阿司匹林陽性對照組（按4mg/10g灌胃20mg/ml的阿司匹林），3組元胡止痛片低劑量組（按0.6mg/10g灌胃2mg/ml的元胡止痛片溶液），4組元胡止痛片高劑量組（按1.3mg/10g灌胃10mg/ml的元胡止痛片溶液）。給藥1h后給每組小鼠按0.1ml/10g腹腔注射0.6%的醋酸（臨用前新鮮配制）。2.2.3觀察5min后記錄15分鐘內(nèi)各小鼠出現(xiàn)“扭體反應(yīng)”的次數(shù)。3結(jié)果3.1熱板法表1元胡止痛片對小鼠的痛閾影響（x?s，n=8）*100%組別生理鹽水空白對照組阿司匹林陽性藥對照組低濃度元胡止痛片對照組高濃度元胡止痛片對照組給藥劑量給藥60min后給藥15min后（s）給藥30min后（s）給藥90min后（s）mg/10g（s）**0.124.68±12.9029.52±19.4223.61±1.2837.82±22.0121.75±15.26 16.54±9.8520.96±8.6915.76±2.76*23.81±19.6614.90±2.77*30.72±16.10 18.73±3.8123.85±18.250.61.318.75±17.1016.64±6.3819.17±6.43**,60分鐘時各組出現(xiàn)顯著差異，p<0.01*,1生理鹽水空白對照組vs2阿司匹林陽性對照組，p<0.05 *,1生理鹽水空白對照組vs3低濃度元胡溶液組，圖片已關(guān)閉顯示，點此查看p<0.05圖1元胡止痛片給藥60分鐘后對小鼠熱板法實驗的鎮(zhèn)痛作用的影響耳腫脹法表3元胡止痛片對小鼠的抗炎作用（x?s,n=8）組別生理鹽水空白對照組給藥劑量mg/10g0.1腫脹率（%） 62±3367±4672±32 64±50阿司匹林陽性藥對照組4低濃度元胡止痛片對照組0.6高濃度元胡止痛片對照組1.3圖片已關(guān)閉顯示，點此查看圖2元胡止痛片對小鼠耳腫脹實驗抗炎作用的影響醋酸扭體法表2元胡止痛片對小鼠的鎮(zhèn)痛作用（x?s，n=8）組別生理鹽水空白對照組給藥劑量mg/10g0.1扭體次數(shù)*15±182±3‘20±1933±24阿司匹林陽性藥對照組4低濃度元胡止痛片對照組0.6高濃度元胡止痛片對照組1.3*,小鼠鎮(zhèn)痛作用出現(xiàn)顯著差異，p<0.052阿司匹林陽性對照組vs4高濃度元胡溶液組,p<0.05圖片已關(guān)閉顯示，點此查看圖3元胡止痛片對小鼠扭體實驗的鎮(zhèn)痛作用影響結(jié)果分析討論參考文獻(xiàn)：[1]李見春，黃繼漢，桂常青,鄭青山?元胡止痛栓鎮(zhèn)痛作用的實驗研究[j].中國臨床藥理學(xué)與治療學(xué),2004(04) [2]唐嵐.元胡止痛分散片藥學(xué)研究[j].成都中醫(yī)藥大學(xué),2002徐叔云(aufy)，卞如濂(banrl),陳修(chenx).藥理實驗方法學(xué)?第3版[m].北京：人民衛(wèi)生出版社，2002．886，911，934，1408．楊巧芳，孟慶剛.炎癥動物模型探要[j].中華中醫(yī)藥學(xué)刊,2008,26(3):516[5]林定齊?非甾體類抗炎藥及解熱鎮(zhèn)痛藥用藥情況分析[j]當(dāng)代醫(yī)學(xué)2012(02)劉和莉，李月玲，薛永志.不同溫度和醋酸濃度對小鼠扭體疼痛模型的影響[j].包頭醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2012(02)中華人民共和國衛(wèi)生部藥政管理局.中藥新藥研究指南(藥學(xué)、藥理學(xué)、毒理學(xué))[m].1994；87篇四：藥理學(xué)實驗報告(3)模版藥理學(xué)實驗(人體解剖部分)報告(3)圖片已關(guān)閉顯示，點此查看篇五：藥理學(xué)實驗總結(jié)流式細(xì)胞術(shù)背景：細(xì)胞凋亡是細(xì)胞的基本特征之一，它在機(jī)體的胚胎發(fā)育、組織修復(fù)、內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定和一些疾病發(fā)生過程等方面起著十分重要的作用。在正常細(xì)胞中，磷脂酰絲氨酸(ps)只分布在細(xì)胞膜脂質(zhì)雙層的內(nèi)側(cè)，而在細(xì)胞凋亡早期，細(xì)胞膜中的磷脂酰絲氨酸又脂膜內(nèi)側(cè)翻向外側(cè)。在體內(nèi)，巨噬細(xì)胞可以識別翻轉(zhuǎn)到細(xì)胞膜表面的ps從而將這些程序性死亡的細(xì)胞清除，因此凋亡過程中并不伴隨局部的炎癥反應(yīng)，而在細(xì)胞壞死的過程中則常常伴隨著炎癥反應(yīng)。annexinv是一種分子量為35-36kd的ca2+依賴性磷脂結(jié)合蛋白，能與細(xì)胞凋亡過程中翻轉(zhuǎn)到膜外的ps高親和力特異性結(jié)合。ps外翻發(fā)生在細(xì)胞核破裂，dna片段化以及凋亡相關(guān)蛋白出現(xiàn)之前，這使得annexinv與ps的結(jié)合成為凋亡早期的一種重要檢測標(biāo)志事件。檢測原理：用標(biāo)記了fitc的annexinv作為熒光探針，利用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡可檢測細(xì)胞凋亡的發(fā)生。細(xì)胞壞死的過程中也會發(fā)生細(xì)胞膜損傷，壞死的細(xì)胞會結(jié)合annexinv-fitc。正常細(xì)胞核早期凋亡的細(xì)胞膜是完整的，propidiumiodide(pi)是一種核酸染料，它不能透過完整的細(xì)胞膜，但在凋亡中晚期的細(xì)胞和壞死細(xì)胞，pi能夠透過細(xì)胞膜與細(xì)胞核結(jié)合呈現(xiàn)紅色。將annexinv與pi匹配使用，可以將凋亡早期的細(xì)胞和晚期的細(xì)胞以及死細(xì)胞區(qū)分開來。壞死細(xì)胞可以同時與annexinv-fitc和pi結(jié)合顯色，而pi則被排除在活細(xì)胞(fitc陰性)和早期凋亡細(xì)胞(fitc陽性)之外。在沒有巨噬細(xì)胞的情況下，凋亡的最后階段會像細(xì)胞壞死一樣發(fā)生整個細(xì)胞的解體，從而使凋亡晚期的細(xì)胞也同時被fitc和pi結(jié)合染色呈現(xiàn)雙陽性。在雙變量流式細(xì)胞儀的散點圖上，左下象限顯示活細(xì)胞，為(fitc-/pi-)；右上象限是非活細(xì)胞，即壞死細(xì)胞，為(fitc+/pi+)；而右下象限為凋亡細(xì)胞，顯現(xiàn)(fitc+/pi-)。樣品染色：1、 離心收集懸浮細(xì)胞，棄培養(yǎng)基。貼壁細(xì)胞用不含edta的胰酶消化后離心(300g*8min),收集細(xì)胞。胰酶消化時間不宜過長，以防引起假陽性。2、 用冷pbs洗滌細(xì)胞兩次，盡可能吸盡pbs。3、用400ul(200ul)1xannexinv結(jié)合液懸浮細(xì)胞，濃度大約1x10*6cells/ml。4、在細(xì)胞懸浮液中加入5ulannexinv-fitc染色液，輕輕混勻后于2-8度避光條件下孵育15分鐘。5、加入10ulpi染色液后輕輕混勻于2-8度避光條件下孵育5分鐘。6、立即用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡檢測。注意事項：1、螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體收集至管底，避免開蓋時液體灑落。2、細(xì)胞處理要小心操作，盡量避免人為的損傷細(xì)胞。3、 annexinv-fitc和propidiumiodide(pi)是光敏物質(zhì)，在操作時請注意避光，盡量減少它們暴露在光下的時間。有必要時可以使用帶蓋子的冰盒或鋁箔紙避光。4、 由于細(xì)胞凋亡是一個快速和動態(tài)的過程，因此最好在染色后立即進(jìn)行分析。5、 使用annexinv-fitc試劑盒檢測凋亡需要針對活細(xì)胞。不需要固定細(xì)胞，固定操作會對結(jié)果產(chǎn)生干擾。6、 如果細(xì)胞樣品中含有血小板，如血液樣品，請使用含有edta的緩沖劑并200g離心洗去血小板。因為血小板含有ps,能與annexinv結(jié)合。7、 流式細(xì)胞儀檢測時，細(xì)胞數(shù)量應(yīng)不低于1x10*5。8、 如果細(xì)胞收集過程中使用了胰酶，需注意用pbs洗凈去除殘留的胰酶。殘留的胰酶會消化并降解annexinv-fitc,最終導(dǎo)致染色失敗。9、 對于貼壁細(xì)胞，消化是一個關(guān)鍵步驟。貼壁細(xì)胞誘導(dǎo)凋亡時如有漂浮細(xì)胞，需收集漂浮細(xì)胞和貼壁細(xì)胞后合并染色；處理貼壁細(xì)胞時要小心操作，盡量避免人為的損傷細(xì)胞，胰酶的消化時間過短，細(xì)胞需要用力吹打才能脫落，容易造成細(xì)胞膜的損傷，pi攝入過多；消化時間過長，細(xì)胞膜同樣易造成損傷，甚至?xí)绊懠?xì)胞膜上磷脂酰絲氨酸與annexinv-fitc的結(jié)合。消化時將胰酶鋪滿孔板底后，輕搖使胰酶與細(xì)胞充分接觸，然后倒掉大部分胰酶，利用剩余的少量胰酶再消化一段時間，待細(xì)胞空隙增大，瓶底呈花斑狀即可終止。在消化液中應(yīng)不用edta，edta影響annexinv與ps的結(jié)合。10、 成功的檢測凋亡受以下幾種因素的影響，如細(xì)胞類型、細(xì)胞膜上ps的密度、發(fā)生凋亡時ps翻轉(zhuǎn)的比例、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的方法、所用試劑、誘導(dǎo)凋亡的時間以及實驗過程中機(jī)械損傷的程度等，把這些影響因素進(jìn)行優(yōu)化對試驗成功與否至關(guān)重要。務(wù)必根據(jù)每次實驗樣本類型和操作流程對這些步驟進(jìn)行優(yōu)化。11、 有極少數(shù)細(xì)胞株其細(xì)胞膜上ps的密度極低，難以染色，此時不適合用annexinv方法檢測凋亡。細(xì)胞、組織基因組dna提取試劑盒(離心柱型)樣品預(yù)處理：動物組織：1、 切取5-20mg的動物組織材料，在液氮中將組織研磨成粉末，并轉(zhuǎn)移至1.5ml的離心管中。2、 然后加400ulaclsolution入和10ul的proteinasek。如有凝結(jié)塊，可以用槍頭吹吸打碎。3、 震蕩混勻1分鐘，然后置于55c放置20分鐘一3小時，在此期間間或取出混勻，有助于充分裂解。裂解完全的樣品應(yīng)澄清透明。不同來源的組織，完全裂解時間可能差異較大。4、 取出樣品，待降至室溫時輕輕震蕩混勻。嚙齒類動物(如鼠等)尾巴：1、從動物尾部末端切取0.5—1cm的組織材料，在液氮中將組織研磨成粉末，并轉(zhuǎn)移至1.5ml的離心管中。2、然后加入400ulaclsolution和10ul的proteinasek。3、震蕩混勻1分鐘，然后置于55c水浴10—20分鐘，在此期間可以適當(dāng)取出混勻，有助于充分裂解。4、取出樣品，待降至室溫時輕輕震蕩混勻。培養(yǎng)成熟的動物細(xì)胞：1、在500~1000rpm下離心約3~5分鐘，收集細(xì)胞。2、加入400ulaclsolution和10ul的proteinasek。3、震蕩混勻1分鐘，然后置于55c水浴10—20分鐘，在此期間可以適當(dāng)取出混勻，有助于充分裂解。4、取出樣品，待降至室溫時輕輕震蕩混勻。dna提取：經(jīng)過上面預(yù)處理的樣品按照下面步驟提取基因組dna。5、 在經(jīng)過預(yù)處理好的樣品中，依次加入300ulextsolution和300ulabsolution,用力搖勻，然后12000rpm離心5分鐘。溶液將分層，上層為藍(lán)色的抽屜層，下層為透明水相，兩層溶液中間可能會有部分沉淀層，dna在下層水相中。注：如樣品量較少或溶液澄清不粘稠，可不添加extsolution，只添加300ulabsolution,搖勻后離心。6、 將槍頭穿過上層溶液，深入到下層溶液，將下層溶液仔細(xì)吸出到gencleancolumn中，盡量避免吸到上層溶液及中間層的沉淀。7、 8000rpm離心1分鐘，取下gencleancolumn，倒掉收集管中廢液。8、 將gencleancolumn放回收集管中，加入500ulwashsolution,8000rpm，室溫離心1分鐘。9、 重復(fù)步驟8一次。10、 取下genclean柱，棄去收集管中的廢液。將柱放回收集管中，12000rpm,室溫離心1分鐘，以除去殘留washsolution。11、 將柱放入新的潔凈1.5ml的離心管中，在柱中央加入50~100ulelutionnbuffer,室溫或55c放置2分鐘。然后12000rpm,室溫離心1分鐘。離心管中的液體即為基因組dna。根據(jù)用途，樣品可于4c或-20c保存。乳酸脫氫酶（ldh）測定試劑盒一、 試劑盒組成及配制：試劑一：基質(zhì)緩沖液試劑二：輔酶1，配制：每支粉劑加1.3ml雙蒸水溶解，溶解后冷凍可保存2周，如需多次使用建議分裝冷凍。試劑三：2,4-二硝基苯肼試劑四：4mol/lnaoh，0.4mol配制：10倍稀釋。試劑五：2umol/l丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)液。二、 測定步驟：圖片已關(guān)閉顯示，點此查看三、 計算及舉例：血清中l(wèi)dh活性（u/l）=測定od值-對照od值/標(biāo)準(zhǔn)od值-空白o(hù)d值x標(biāo)準(zhǔn)品濃度xnx1000（n為待測樣本測定前稀釋倍數(shù)）乳酸脫氫酶釋放率=培養(yǎng)基中酶活性/培養(yǎng)基中酶活性+細(xì)胞層酶活性。試驗中需要同時檢測培養(yǎng)基和細(xì)胞裂解后細(xì)胞懸液中的乳酸脫氫酶。四、測定原理：ldh乳酸圖片已關(guān)閉顯示，點此查看丙酮酸37c水浴丙酮酸+2,4-二硝基苯肼丙酮酸二硝基苯腙（紅棕色）堿性根據(jù)比爾定律，可測乳酸脫氫酶活性。五、標(biāo)準(zhǔn)曲線制備：1、前處理：將2umol/ml的丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)品用雙蒸水分別200倍、100倍、50倍、20倍、10倍、5倍、2倍稀釋后按照操作表制作標(biāo)準(zhǔn)曲線?；靹?，室溫放置5分鐘，波長450nm，酶標(biāo)儀測定吸光度。免疫細(xì)胞化學(xué)（免疫熒光染色）一、試劑及材料：六孔板、蓋玻片、移液槍、槍頭、丙酮、pbs、tritonx-100、h2o2、bsa、一抗、二抗、濕盒、甘油。二、方法：將已滅菌的蓋玻片置于6孔培養(yǎng)板中，按10*4~10*5/ml的密度將細(xì)胞接種于培養(yǎng)板中進(jìn)行爬片，培養(yǎng)6~12小時，待細(xì)胞貼壁后，3~5天進(jìn)行免疫細(xì)胞組織化學(xué)染色鑒定。pbs清洗時將玻片置于小培養(yǎng)皿中。步驟如下：1、 pbs清洗標(biāo)本3次，各3min.2、 95%酒精（或冰丙酮等其它固定劑）固定15min.3、 空氣干燥5min。4、 pbs清洗標(biāo)本3次，各3min。5、 0.3%tritonx-100（pbs配）孵育1次15min.6、 pbs清洗標(biāo)本3次，各3min.7、 3%h2o2（pbs配）孵育15min.8、 pbs清洗標(biāo)本3次，各3min.9、 5%bsa（,pbs配）封閉標(biāo)本3min.10、 一抗（1%bsa配，1:100~1:200）4c過夜。陰性對照最好用一抗來源血清，否則用pbs液（濕盒）11、 pbs清洗標(biāo)本3次，各3min.12、 二抗孵育（濕盒）1%bsa配，30min，避光；13、 pbs清洗標(biāo)本3次，各3min，dapi染核5min，pbs清洗標(biāo)本3次，各3mino 14、95%甘油封片防止熒光猝滅。注意：沖洗時只需輕輕震蕩培養(yǎng)皿（易脫片）加一抗、二抗后沖洗時第一次需將玻片傾斜。核蛋白提取試劑盒一、產(chǎn)品組成：提取液a、提取液b、蛋白酶抑制劑混合物、磷酸酶抑制劑混合物。1、 蛋白酶抑制劑混合物避免反復(fù)凍融；2、 如果試劑盒不能短時間內(nèi)用完，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。3、蛋白提取液、磷酸酶抑制劑2~8c保存；4、蛋白酶抑制劑-20c保存。二、使用方法：使用注意事項：1、 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。2、 實驗過程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20c冰箱預(yù)冷。整個過程需保持樣品處于低溫。3、 蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。4、 可以根據(jù)自己試驗需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。5、 western試驗內(nèi)參可以選用lamina、laminb、tbp、histonh3.細(xì)胞蛋白的提取：1、 提取液制備：每200ul冷的蛋白提取液a和b中分別加入2ul蛋白酶抑制劑混合物和磷酸酶抑制劑，混勻后置冰上備用。2、 取5~10x10*6個細(xì)胞，在4c，500xg條件下離心2~3分鐘，小心吸取培養(yǎng)基，盡可能吸干，收集細(xì)胞。3、 用冷pbs洗滌細(xì)胞兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。4、 每20ul細(xì)胞壓積中加入200ul冷的提取液a,高速渦旋震蕩15秒或吹打混勻，置冰上15分鐘，中間每隔5分鐘渦旋震蕩或吹打混勻。5、 再次高速渦旋震蕩5秒，然后在4c，12000g條件下離心5分鐘。6、 快速將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，即可得到胞漿蛋白，請置于冰上或-80冰箱保存?zhèn)溆谩?、 沉淀用pbs洗滌一次，然后再4c，12000g條件下離心5分鐘，棄上清。8、 在沉淀中加入200ul冷的提取液b,高速渦旋震蕩15秒。9、 置冰上40分鐘，每隔10分鐘高速渦旋震蕩15秒。10、 在4c，12000g條件下離心10分鐘。11、 快速將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，即可得到核蛋白。12、 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠卧囼灐Ｗⅲ篴..細(xì)胞數(shù)量根據(jù)試驗情況調(diào)整，每次的提取液用量并不是一定的，請根據(jù)實際情況調(diào)整。b.建議用bca法進(jìn)行蛋白定量。c,蛋白樣品-80存放一年沒有問題。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被細(xì)菌污染。組織蛋白的提?。?、 提取液制備：每200ul冷的蛋白提取液a和b中分別加入2ul蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。2、 取適量組織樣本剪碎，加冷pbs，用組織勻漿器勻漿至無明顯肉眼可見固體（或用液氮研磨），冰上靜置5分鐘，小心將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管。3、 在4c，500g條件下離心2-3分鐘，棄上清。4、每20ul細(xì)胞壓積中加入200ul冷的提取液a，高速渦旋震蕩15秒或吹打混勻， 置冰上15分鐘，中間每隔5分鐘渦旋震蕩或吹打混勻。5、 再次高速渦旋震蕩5秒鐘，然后在4c，12000g條件下離心5分鐘。6、 快速將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，即可得到胞漿蛋白，請置于冰上或-80冰箱保存?zhèn)溆谩?、 沉淀用pbs洗滌一次，然后在4c，12000g條件下離心5分鐘，棄上清。8、在沉淀中加入200ul冷的提取液b，高速渦旋震蕩15秒。9、置冰上40分鐘，每隔10分鐘高速渦旋震蕩15秒。10、在4c，12000g條件下離心10分鐘。11、快速將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，即可得到核蛋白。12、將上述蛋白提取物定量后分裝于-80保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌嶒?。注：a,用液氮研磨的方法更佳。b建議用bca方法進(jìn)行蛋白定量。c,蛋白樣品-80存放一年沒有問題。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被細(xì)菌污染。篇六：藥理實驗報告1圖片已關(guān)閉顯示，點此查看中樞藥物篩選與有效性研究設(shè)計性實驗圖片已關(guān)閉顯示，點此查看圖片已關(guān)閉顯示，點此查看題目：作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)興奮藥物ld50的測定。姓名：何嘉?。ò鄤e，實驗組別,學(xué)號全號）藥物制劑12（1）班實驗2組1203502116【摘要】目的：作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)藥物通?？煞秶愖饔糜谥袠猩窠?jīng)系統(tǒng)的藥物主要影響遞質(zhì)和受體而發(fā)揮作用，而其藥理效應(yīng)主要表現(xiàn)是中樞神經(jīng)系統(tǒng)的增強(qiáng)或抑制；通過觀察動物的藥物反應(yīng)，可初步區(qū)分藥物的特性。通過藥物ed50或者ld50的測定，分析其有效性和安全性。中樞神經(jīng)興奮藥是一類能選擇性興奮中樞神經(jīng)藥物，提高其功能活動的藥物。按中樞興奮藥物的特點劃分：1神經(jīng)振奮藥；2蘇醒藥；3改善腦代謝的藥物。1中樞興奮藥物的作用部位可隨劑量的增加而擴(kuò)大，大劑量可引起中樞神經(jīng)系統(tǒng)的廣泛興奮導(dǎo)致驚厥。我們采用平均分配法測量藥物的ld0、ld100的大致區(qū)間，再在正式試驗中測量小鼠的死亡率，從而得到藥物具體的ld50。小鼠的注射方式都為腹腔注射。從結(jié)果我們可以判斷出來，預(yù)實驗中可判斷l(xiāng)d0為20%稀釋母液，ldl00為60%稀釋母液，該興奮藥的半數(shù)致死量為…從而我們得出結(jié)論：該興奮藥的半數(shù)致死量為??！娟P(guān)鍵詞】中樞神經(jīng)興奮藥平均分配法腹腔注射半數(shù)致死量量效關(guān)系、八.、■前言現(xiàn)今社會人們對健康的要求有了更高的要求，作為治療、預(yù)防和診斷疾病的藥物，人們對它的安全性的研究技術(shù)也不斷發(fā)展。對制藥行業(yè)來說，作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)（cns）藥物或許是最具挑戰(zhàn)性，同時又是回報最豐厚的市場之一。快速增的cns藥物市場中，仍有許多尚未得到滿足的臨床需求以及新的治療方法，近年來,研究人員針對中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的特點開發(fā)了多種療效高、使用方便的藥物新制劑，對人類治療中樞系統(tǒng)疾病有重要的作用。作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)的藥物主要是影響遞質(zhì)和受體，中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)不但神經(jīng)遞質(zhì)種類較多,而且神經(jīng)激素及神經(jīng)調(diào)質(zhì)等亦起重要作用。目前作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)的藥物種類很多，如抗焦慮藥、抗抑郁藥、催眠藥、抗震顫麻痹藥和抗精神失常藥等。這類藥物用藥時間長，副作用出現(xiàn)頻率高，有可能出現(xiàn)不可逆的后遺癥；有的藥物過量服用，還能引起致死性中毒。對此必須高度重視。一.實驗?zāi)康膶W(xué)習(xí)如何篩選有效的藥物，通過設(shè)計性實驗鍛煉和提高科學(xué)研究的思維方式、1庫寶善主編，神經(jīng)精神藥理學(xué)，北京大學(xué)醫(yī)學(xué)出版社，2006,1藥理學(xué)實驗設(shè)計原則和方案。最終達(dá)到提高學(xué)生發(fā)現(xiàn)問題、提出問題、分析問題和解決問題能力，提高學(xué)生的自學(xué)能力、實踐能力和團(tuán)隊協(xié)作能力，培養(yǎng)學(xué)生的科學(xué)思維和創(chuàng)新能力。二.實驗原理作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)的藥物主要影響遞質(zhì)和受體而發(fā)揮作用，而其藥理效應(yīng)主要表現(xiàn)是中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能的增強(qiáng)或抑制，通過觀察動物的藥物反應(yīng)，可初步區(qū)分藥物的特性。通過藥物ed50或ld50的測定，分析其有效性和安全性。藥物給藥藥劑量與動物死亡率間呈正態(tài)分布。以對數(shù)劑量為橫坐標(biāo)、累加死亡率為縱坐標(biāo)作圖，即可得到一對稱s型曲線，其兩端較平坦，中間較陡，說明兩端處劑量稍有變化時死亡率的改變不易表現(xiàn)出來，在50%死亡率處斜率最大，該處劑量稍有變化時，其死亡