生物化學實驗習題及參考答案

生物化學試驗習題及解答一、名詞解釋1、pI：指氨基酸的正離子濃度和負離子濃度相等時的pH值，用符號pI表達。2、層析：按照在移動相和固定相（可以是氣體或液體）之間的分派比例將混合成分分開的技術(shù)。3、透析：通過小分子通過半透膜擴散到水（或緩沖液）的原理，將小分子與生物大分子分開的一種分離純化技術(shù)。4、SDS-聚丙烯酰氨凝膠電泳：在去污劑十二烷基硫酸鈉存在下的聚丙烯酰氨凝膠電泳。SDS只是按照分子的大小，而不是根據(jù)分子所帶的電荷大小分離的。5、蛋白質(zhì)變性：生物大分子的天然構(gòu)象遭到破壞導致其生物活性喪失的現(xiàn)象。蛋白質(zhì)在受到光照，熱，有機溶濟以及某些變性濟的作用時，次級鍵受到破壞，導致天然構(gòu)象的破壞，使蛋白質(zhì)的生物活性喪失。6、復性：在一定的條件下，變性的生物大分子恢復成具有生物活性的天然構(gòu)象的現(xiàn)象。7、Tm值：核酸分子變性過程中，紫外吸取到達最大增量二分之一時的溶解溫度。8、同工酶：能催發(fā)相似的反應(yīng)類型但其理化性質(zhì)及免疫學性質(zhì)不一樣的酶。9、Km值：反應(yīng)速度為最大反應(yīng)速度二分之一時的底物濃度。是酶的特性物理學常數(shù)之一。近似表達酶與底物的親和力。10、DNA變性：DNA雙鏈解鏈，分離成兩條單鏈的現(xiàn)象。11、退火：既DNA由單鏈復性、變成雙鏈構(gòu)造的過程。來源相似的DNA單鏈經(jīng)退火后完全恢復雙鏈構(gòu)造的過程，同源DNA之間`DNA和RNA之間，退火后形成雜交分子。12、增色效應(yīng)：當雙螺旋DNA熔解（解鏈）時，260nm處紫外吸取增長的現(xiàn)象。二、基礎(chǔ)理論單項選擇題1、A；2、C；3、B；4、A；5、A；6、B；7、B；8、C；9、D；10、A；11、A；12、D；13、A；1、用下列措施測定蛋白質(zhì)含量，哪一種措施需要完整的肽鍵？（）A、雙縮脲反應(yīng)B、凱氏定氮C、紫外吸取D、羧肽酶法2、下列哪組反應(yīng)是錯誤的？（）A、葡萄糖——Molish反應(yīng)B、膽固醇——Libermann-Burchard反應(yīng)C、色氨酸——坂口（Sakaguchi）反應(yīng)D、氨基酸——茚三酮反應(yīng)3、Sanger試劑是（）A、苯異硫氰酸B、2，4-二硝基氟苯C、丹磺酰氯D、-巰基乙醇4、肽鍵在下列哪個波長具有最大光吸?。浚ǎ〢、215nmB、260nmC、280nmD、340nm5、下列蛋白質(zhì)組分中，哪一種在280nm具有最大的光吸??？（）A、色氨酸的吲哚基B、酪氨酸的酚環(huán)C、苯丙氨酸的苯環(huán)D、半胱氨酸的硫原子6、SDS凝膠電泳測定蛋白質(zhì)的相對分子量是根據(jù)多種蛋白質(zhì)（）A、在一定pH值條件下所帶的凈電荷的不一樣B、分子大小不一樣C、分子極性不一樣D、溶解度不一樣7、蛋白質(zhì)用硫酸銨沉淀后，可選用透析法除去硫酸銨。硫酸銨與否從透析袋中除凈，你選用下列哪一種試劑檢查？（）A、茚三酮試劑B、奈氏試劑C、雙縮脲試劑D、Folin-酚試劑8、蛋白質(zhì)變性是由于（）A、一級構(gòu)造變化B、亞基解聚C、空間構(gòu)象破壞D、輔基脫落9、用生牛奶或生蛋清解救重金屬鹽中毒是根據(jù)蛋白質(zhì)具有（）A、膠體性B、粘性C、變性作用

D、沉淀作用

10、有關(guān)變性的錯誤描述為（）A、蛋白質(zhì)變性后，其一級構(gòu)造和空間構(gòu)造變化B、蛋白質(zhì)變性后，其理化性質(zhì)和生物學活性變化C、加熱、紫外線照射、超聲波等可以引起蛋白質(zhì)變性D、變性蛋白質(zhì)粘度增長，易被酶水解，易沉淀11、雙鏈DNA熱變性后（）A、黏度下降B、沉降系數(shù)下降C、浮力密度下降D、紫外吸取下降12、酶的活化和去活化循環(huán)中，酶的磷酸化和去磷酸化位點一般在酶的哪一種氨基酸殘基上？（）A、天冬氨酸B、脯氨酸C、賴氨酸D、絲氨酸13、在生理條件下，下列哪種基團既可以作為H+的受體，也可以作為H+的供體？（）A、His的咪唑基B、Arg的胍基C、Cys的巰基D、Trp的吲哚基三、填空1、脯氨酸和羥脯氨酸與茚三酮反應(yīng)產(chǎn)生（）色物質(zhì)，而其他氨基酸與茚三酮產(chǎn)生（）色的物質(zhì)。2、一般可用紫外分光光度法測定蛋白質(zhì)的含量，這是由于蛋白質(zhì)分子中的（）、（）、（）三種氨基酸的共軛雙鍵有紫外吸取能力。3、移液槍在每次試驗后應(yīng)將刻度調(diào)至（），讓彈簧答復原型以延長移液槍的使用壽命，并嚴禁吸?。ǎ?、使用離心機時，如有噪音或機身振動時，應(yīng)立即（），并且離心管須對稱放入套管中，防止機身振動，若只有一支樣品管，則此外一支要用（）替代。5、測定蛋白質(zhì)濃度的措施重要有（）、（）、（）。6、運用蛋白質(zhì)不能通過半透膜的特性，使它和其他小分子物質(zhì)分開的措施有（）和（）等。7、核酸在260nm附近有強吸取，這是由于（）。8、雙鍵DNA熱變性后，或在pH2如下，或在pH12以上時，其OD260（），同樣條件下，單鍵DNA的OD260（）。9、硝酸纖維素膜可結(jié)合（）鏈核酸。將RNA變性后轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上再進行雜交，稱（）印跡法。10、常用二苯胺法測定（）含量，用苔黑酚法測定（）含量。11、變性DNA的復性與許多原因有關(guān)，包括（）、（）、（）、（）、（）。12、溫度對酶活力影響有如下兩方面：首先（），另首先（）。13、維生素C是（）酶的輔酶，此外還具有（）作用。14、在分光光度計的使用或檢定中，（）的精確度是衡量儀器工作性能的一項重要指標，它的精確程度直接關(guān)系到所測數(shù)據(jù)的可信性及科學性。（）的誤差越大，測試成果的可信性越差,從而影響到測試數(shù)據(jù)的精確性。四、問答1、紫外分光光度法測定核酸含量的原理。答：核酸、核苷酸及其衍生物都具有共軛雙鍵系統(tǒng)，能吸取紫外光，RNA和DNA的紫外吸取峰在260nm波長處。一般在260nm波長下，每1ml含1μgRNA溶液的光吸取值為0.022~0.024，每1m1含1μgDNA溶液的光吸取值約為0.020，故測定未知濃度RNA或DNA溶液在260nm的光吸取值即可計算出其中核酸的含量。此法操作簡便，迅速。若樣品內(nèi)混雜有大量的核苷酸或蛋白質(zhì)等能吸取紫外光的物質(zhì)，則測光誤差較大，故應(yīng)設(shè)法事先除去。2、蛋白質(zhì)變性與沉淀的關(guān)系。答：沉淀可以是由蛋白質(zhì)變性從而產(chǎn)生沉淀，也可以是由于鹽析。蛋白質(zhì)變性是指光照，熱，有機溶濟以及某些變性劑（如重金屬鹽）的作用時蛋白質(zhì)的空間構(gòu)造被破壞，使得蛋白質(zhì)喪失活性，該過程不可逆。鹽析是指向蛋白質(zhì)的溶液中加入輕金屬鹽，使得蛋白質(zhì)沉淀析出，這是由于加入鹽減少了蛋白質(zhì)得溶解度而析出，該過程可逆，加水蛋白質(zhì)又會溶解。兩者本質(zhì)上是不一樣的。3、牛乳中制備酪蛋白的原理和措施。答：牛奶具有半乳糖、蛋白質(zhì)、脂肪成分。蛋白質(zhì)中的酪蛋白通過等電點沉淀，再通過離心而獲得，糖類小分子由于處在清夜中而分離，沉淀物中所具有的脂肪通過有機溶劑抽提而清除，最終得到純白色、晶狀酪蛋白。措施：取新鮮牛乳，用酸堿調(diào)PH到酪蛋白的等電點沉淀析出酪蛋白，然后洗滌，醇醚吸水至干燥得粉末稱重，計算提取率。環(huán)節(jié)：保溫→調(diào)PH→沉淀→離心→洗滌→干燥→稱量4、試述凝膠成像系統(tǒng)操作時應(yīng)注意的事項。答：1）紫外凝膠攝影時要防止EB污染\o"儀器信息"儀器，在紫外透射燈樣品臺上墊上藍色和白色膠片，開關(guān)凝膠成像系統(tǒng)前面板那、操作GeneSnap\o"軟件下載"軟件之時都不可以戴手套。白光透射光源放置在紫外透射光源上面時要把藍色和白色膠片取出。2）注意開機次序，先開凝膠成像系統(tǒng)，再打開電腦進入GeneSnap\o"軟件下載"軟件。3）在使用紫外光源攝影的過程中，不可以打開凝膠成像系統(tǒng)前面板。5、若樣品中具有蛋白質(zhì)和核苷酸等雜質(zhì)，怎樣排除干擾？答：用去垢劑（如SDS，十二烷基磺酸鈉）使蛋白質(zhì)變性，RNA通過RNase消化清除。6、體液血糖測定有哪些措施？答：測定血糖的措施常用的有三種：靜脈血漿葡萄糖（VPG），毛細血管全血葡萄糖（CBG）和靜脈全血葡萄糖（VBG）。7、DNA在電場中的遷移率取決于哪些原因？答：1）DNA的分子大小及構(gòu)型：?8^不一樣構(gòu)型DNA的移動速度次序為：供價閉環(huán)DNA（covalentlyclosedcircular，cccDNA）>直線DNA>開環(huán)的雙鏈環(huán)狀DNA。2）瓊脂糖濃度：一種給定大小的線狀DNA分子,其遷移速度在不一樣濃度的瓊脂糖凝膠中各不相似。DNA電泳遷移率的對數(shù)與凝膠濃度成線性關(guān)系。凝膠濃度的選擇取決于DNA分子的大小。3）DNA分子的構(gòu)象：當DNA分子處在不一樣構(gòu)象時,它在電場中移動距離不僅和分子量有關(guān),還和它自身構(gòu)象有關(guān)。相似分子量的線狀、開環(huán)和超螺旋DNA在瓊脂糖凝膠中移動速度是不一樣樣的,超螺旋DNA移動最快,而線狀雙鏈DNA移動最慢。"4）電源電壓：瓊脂糖凝膠分離大分子DNA試驗條件的研究成果表明，在低濃度、低電壓下，分離效果很好。5)嵌入染料的存在：熒光染料溴化乙啶用于檢測瓊脂糖凝膠中的DNA,染料會嵌入到堆積的堿基對之間并拉長線狀和帶缺口的環(huán)狀DNA，使其剛性更強,還會使線狀DNA遷移率減少15％。6）離子強度影響：電泳緩沖液的構(gòu)成及其離子強度影響DNA的電泳遷移率。8、瓊脂糖凝膠有哪些注意事項？答：1）緩沖液的使用要對的，長時間高壓電泳時，常更新緩沖液或在兩槽間進行緩沖液的循環(huán)是可取的。2）瓊脂糖的影響。3）凝膠中所加緩沖液應(yīng)與電泳槽中的相一致。4）樣品加入量的多少。5）電泳系統(tǒng)的變化會影響DNA的遷移，加入DNA原則參照物進行鑒定是必要的。6）DNA樣品中的鹽濃度也影響DNA的遷移率。7）DNA遷移率取決于瓊脂糖凝膠的濃度、遷移分子的形狀及大小。9、考馬斯亮藍G-250法測定蛋白質(zhì)含量的原理是什么？答：考馬斯亮藍G-250（CoomassiebrilliantblueG-250）染料，在游離狀態(tài)下溶液呈棕紅色，當它與蛋白質(zhì)結(jié)合后變?yōu)樗{色。蛋白質(zhì)含量在0~1000μg范圍內(nèi)，蛋白質(zhì)-色素結(jié)合物在595nm下的吸光度與蛋白質(zhì)含量成正比，故可用比色法進行定量分析。考馬斯亮藍G-250法（Bradford法）是比色法與色素法相結(jié)合的復合措施，簡便快捷，敏捷度高，穩(wěn)定性好，是一種很好的蛋白質(zhì)常用分析措施。10、何謂Rf值？影響Rf值的重要原因是什么？答：Rf為氨基酸的比移值。影響紙層析遷移率Rf值的重要原因：1、樣品自身的性質(zhì)和構(gòu)造；2、溶劑的性質(zhì)；3、PH值；4、溫度；5、濾紙性質(zhì)。11、蛋白質(zhì)分離和純化的一般措施？答：重要有如下某些措施：透析及超濾法；丙酮沉淀、鹽析及免疫沉淀；電泳；層析；超速離心。12、怎樣對的選擇核酸電泳指示劑？答：核酸電泳常用的指示劑有溴酚蘭和二甲苯青及銀染色。溴酚蘭在堿性液體中呈紫蘭色，在0.6%、1%、1.4%和2%瓊脂糖凝膠電泳中，溴酚蘭的遷移率分別與1Kb、0.6Kb、0.2Kb和0.15Kb的雙鏈線性DNA片段大體相似.二甲苯青的水溶液呈蘭色，它在1%和1.4%瓊脂糖中電泳時，其遷移速率分別與2Kb和1.6Kb的雙鏈線性DNA大體相似。染色劑：核酸電泳后，需經(jīng)染色后才能顯現(xiàn)出帶型，最常用的是溴化乙錠染