心腦血管藥理、食管癌放療增敏研究 mnsod基因單核苷酸多態(tài)性與食管癌放療敏感性課件

MnSOD基因單核苷酸多態(tài)性與

食管癌放療敏感性的關(guān)系河北醫(yī)科大學第四醫(yī)院放療科王雅棣程云杰劉青2009.11.21MnSOD基因單核苷酸多態(tài)性與

食管癌放療敏感性的關(guān)系河北醫(yī)1研究背景研究背景2錳超氧化物歧化酶（MnSOD）存在于線粒體中，可使細胞代謝過程中產(chǎn)生的超氧陰離子（O2-.）轉(zhuǎn)化為H2O2，H2O2又在谷胱甘肽過氧化物酶（GPx）和過氧化氫酶（CAT）兩酶的作用下，生成水和氧，使細胞無毒化，是體內(nèi)重要的抗氧化物質(zhì)。MnSOD的作用機制

O2-.H2O2H2O＋O2

MnSODGPxCAT研究背景錳超氧化物歧化酶（MnSOD）存在于線粒體中，可使細胞代3MnSOD與放射敏感性放射治療直接作用：放射線損傷DNA細胞死亡MnSOD間接作用：

H2OO2-·、·OH和H·自由基與生物大分子相互作用，形成不可逆損傷放射線研究背景MnSOD與放射敏感性放射治療直接作用：放射線損傷DNA細胞4MnSOD對放射敏感性的影響中國倉鼠卵巢細胞系造血干細胞32Dcl3細胞系MnSOD↑放射敏感性↓新型抑癌基因

胃癌、前列腺癌、乳腺癌等多種腫瘤組織中存在MnSOD低表達或不表達

MnSOD高表達使細胞轉(zhuǎn)移能力和腫瘤形成能力降低MnSOD的相關(guān)性研究研究背景MnSOD對放射敏感性的影響中國倉鼠卵巢細胞系MnSOD↑5

染色體基因組水平上單個核苷酸變異引起的DNA序列多態(tài)性。包括單堿基的轉(zhuǎn)換、顛換，不包括插入、缺失等其它的遺傳變化類型。它是人類可遺傳的變異中最常見的一種。

單核苷酸多態(tài)性（singlenucleotidepolymorphism,SNP）研究背景染色體基因組水平單核苷酸多態(tài)性研究背景6編碼基因序列的改變SNP原理示意圖蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的變化蛋白質(zhì)功能的改變研究背景編碼基因SNP原理示意圖蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)功能研究背景7SuttonAetal.Pharmacogenetics2003;13(3):145~157

3.MnSOD的多態(tài)性：SuttonA等研究顯示：啟動子上游第9位點T→C纈氨酸(Val)→丙氨酸(Ala)Ala-MnSOD<Val-MnSOD30%~40%MnSOD啟動子區(qū)多態(tài)性位點啟動子上游第102位點C→T研究背景SuttonAetal.Pharmacogeneti8MnSOD（-9T>C）SNP與腫瘤放射敏感性AmbrosoneCB回顧性研究顯示：

接受放療后乳腺癌患者中，同時攜帶MnSOD（C/C）基因型和髓過氧化物酶（MPO）G/G基因型的的預(yù)后好。MartinRC研究顯示：

MnSOD（-102C>T）SNP延長了放療后乳腺癌患者的無復發(fā)生存時間。

以上兩項研究提示MnSOD基因多態(tài)性可能作為預(yù)測放射敏感性及預(yù)后的一個分子學指標研究背景MnSOD（-9T>C）SNP與腫瘤放射敏感性Ambro9研究目的研究目的10探討MnSOD基因啟動子區(qū)上游第9位點T→C多態(tài)性與食管癌放射敏感性的關(guān)系目的探討MnSOD基因啟動子區(qū)上游第9位點T→C多態(tài)性與食11材料與方法材料與方法122006.9~2007.12我科收治的食管鱗狀細胞癌患者93例。符合放療入組標準，完成所有放療計劃且可行放療后評價。研究對象

患者為初治，活檢病理證實為食管鱗狀細胞癌。臨床分期Ⅰ期～III期（采用UICC1997年TNM分期標準，T分期采用CT-T分期

）。年齡18歲～85歲之間，KPS評分≥80分。放射治療前常規(guī)檢查無遠地轉(zhuǎn)移，無惡性腫瘤病史。患者有完整的臨床資料，包括：纖維食管鏡、食管鋇餐造影、胸部和上腹部強化CT、腹部超聲等。李彩英，劉明,彰俊杰，等.中國醫(yī)學影像技術(shù)，2002，18:236-237.

材料與方法入組標準2006.9~2007.12我科收治的食管鱗狀細胞癌患者91323例照射范圍：食管原發(fā)灶上下外擴3~5cm，野寬5~8cm照射方式：等中心照射技術(shù)，三野或四野照射，

照射劑量：60~64Gy/30~32次/6~6.5W普通70例照射范圍：

GTV：食管原發(fā)灶（長度以影像學和內(nèi)鏡檢查為主要依據(jù)，前后左右以CT顯示大?。┖烷L徑＞1cm腫大淋巴結(jié)CTV：臨床靶區(qū)包括原發(fā)灶上下外擴3cm、周圍外擴0.8~1.0cm及相應(yīng)的淋巴引流區(qū)PTV：計劃靶區(qū)為CTV均勻外擴0.5cm適形放射治療照射劑量：60~64Gy/30~32次/6~6.5W，材料與方法23例普通70例適形放射治療照射劑量：60~64Gy/3014療

效評價

萬鈞等“食管癌近期療效評價標準”CR：X片上顯示粘膜像，可見粘膜基本恢復正?；蛟龃?；若食管鋇餐造影充盈片邊緣光滑，鋇劑通過順利，但管壁可稍僵硬，管壁無狹窄或稍顯狹窄，病變上最寬處橫徑與病變最狹窄處橫徑之比，小于或等于1.5PR：食管鋇餐食管走行無明顯扭曲或成角，無明顯潰瘍，鋇劑通過尚順利，但邊緣欠光滑，有小的充盈缺損及或小龕影，或邊緣雖光滑，但管腔有明顯的狹窄，病變上最寬處橫徑與病變最狹窄處橫徑之比大于1.5NR：食管鋇餐片病變?nèi)杂袣埩艋蚩床怀霾∽冇忻黠@好轉(zhuǎn)，仍有明顯的充盈缺損及龕影或狹窄加重材料與方法療效評價療萬鈞等“食管癌近期療效評價標準”CR：X片上顯示粘膜像，可15療

效評價

材料與方法隨訪截止時間為2009年2月22日，共計隨訪患者93例，失訪3例，隨訪率97%，總體中位生存時間（mediansurvivaltime，MST）18.0個月。

療效評價療材料與方法隨訪截止時間為2009年2月22日，共計隨訪患療16提取基因組DNAPCR-RFLPMnSOD基因型分析采集外周血5ml各組間基因型分析食管癌患者實驗流程圖材料與方法提取基因組DNAPCR-RFLPMnSOD基因型分析采集外周17PCR-RFLP（聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長度多態(tài)性）預(yù)變性酶切預(yù)變性：95℃5min變性：95℃30s退火：64.5℃30s延伸：72℃1min延伸：72℃5minPCR產(chǎn)物電泳

延伸酶切產(chǎn)物35個循環(huán)延伸退火變性上游引物：5’-ACCAGCAGGCAGCTGGCGCCGG-3’下游引物：

5’-GCGTTGATGTGAGGTTCCAG-3’材料與方法PCR-RFLP（聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長度多態(tài)性）預(yù)變性18卡方檢驗分析不同MnSOD基因型之間即期療效的差異采用Kaplan-Meier法計算生存率，差異顯著性檢驗采用Logrank法檢驗分析不同MnSOD基因型之間預(yù)后的差異，顯著性水平為P<0.05統(tǒng)計采用SPSS11.5統(tǒng)計軟件包

材料與方法統(tǒng)計學處理卡方檢驗分析不同MnSOD基因型之間材料與方法統(tǒng)計學處理19結(jié)果結(jié)果20123456100200300500107bpbpMnSOD基因PCR產(chǎn)物123456100200300500107bp89bp結(jié)果酶切后產(chǎn)物1234521不同MnSOD基因型與食管癌即期療效的關(guān)系療效n基因型χ2值P值T/T(%)C/T+C/C(%)CR2213(59.1)9(40.9)3.2230.200PR6349(77.8)14(22.2)NR85(62.5)3(37.5)≤5cmCR1210(83.3)2(16.7)2.6580.149PR+NR2514(56.0)11(44.0)﹥5cmCR105(50.0)5(50.0)4.90.041PR+NR4638(82.6)8(17.4)結(jié)果不同MnSOD基因型與食管癌即期療效的關(guān)系療效n基因型22不同MnSOD基因型與食管癌生存率的關(guān)系基因型例數(shù)MST（月）1年生存率P值T/T671768%>0.05C/C或C/T262273%結(jié)果不同MnSOD基因型與食管癌生存率的關(guān)系基因型例數(shù)MST（月23討論討論24AmbrosoneCB研究顯示：放療后乳腺癌患者同時攜帶MnSOD（-9C/C）基因型和髓過氧化物酶（MPO）G/G基因型生存期↑

MartinRC研究顯示：MnSOD（-102C>T）SNP使乳腺癌患者無復發(fā)時間↑本研究結(jié)果顯示：MnSOD（-9T>C）SNP在食管癌病變長度﹥5cm患者中攜帶T/C或C/C基因型患者即期療效好于攜帶T/T基因型患者討論MnSOD（-9T→C）SNP與腫瘤放射敏感性AmbrosoneCB研究顯示：放療后乳腺癌患者同時攜帶25討論纈氨酸(Val)→丙氨酸(Ala)30%~40%Ala-MnSOD<Val-MnSODMnSOD啟動子上游第9位點T→C多態(tài)MnSOD活性放射敏感性ROS清除能力MnSOD（-9T→C）SNP與腫瘤放射敏感性討論纈氨酸(Val)→丙氨酸(Ala)30%~40%A26結(jié)論結(jié)論27病變長度＞5cm患者中，攜帶T/C或C/C基因型患者即期療效優(yōu)于攜帶T/T基因型患者，即MnSOD（T/C＋C/C）