離體蛙心灌流省名師優(yōu)質(zhì)課獲獎(jiǎng)?wù)n件市賽課一等獎(jiǎng)?wù)n件

離體蛙心灌流第1頁【目標(biāo)要求】1、學(xué)習(xí)斯氏離體蛙心灌流法。2、觀察離子及藥品等對(duì)離體心臟活動(dòng)影響。第2頁【基本原理】心臟正常節(jié)律性活動(dòng)需要一個(gè)適宜內(nèi)環(huán)境（如Na＋，K＋，Ca2＋等濃度及百分比、pH值和溫度），內(nèi)環(huán)境改變直接影響到心臟正常節(jié)律性活動(dòng)。將失去神經(jīng)支配離體心臟保持于適宜理化環(huán)境中（任氏液Ringersolution），在一定時(shí)間內(nèi)仍能產(chǎn)生自動(dòng)節(jié)律性興奮和收縮。第3頁

離子對(duì)心臟活動(dòng)影響改變?nèi)问弦航M成成份，離體心臟活動(dòng)就會(huì)受到影響。K+參加心肌細(xì)胞復(fù)極化和自律細(xì)胞4期自動(dòng)去極化過程，其改變不但取決于細(xì)胞內(nèi)外K+濃度梯度，還與細(xì)胞膜對(duì)K+通透性相關(guān)，所以其影響是多方面。Ca2+對(duì)Na+內(nèi)流存在競(jìng)爭(zhēng)抑制作用，稱膜屏障作用，對(duì)靜息電位無影響。[Ca2+]o↑，可使心肌細(xì)胞興奮性降低，傳導(dǎo)減慢，收縮力增強(qiáng)。第4頁在體心臟受交感神經(jīng)和迷走神經(jīng)雙重支配交感神經(jīng)末梢釋放去甲腎上腺素，與心肌細(xì)胞β受體結(jié)合，使心肌收縮力加強(qiáng)，傳導(dǎo)速度加緊，心率加緊；阻斷劑心得安迷走神經(jīng)末梢釋放乙酰膽堿，與心肌細(xì)胞M受體結(jié)合，使心肌收縮力減弱，心肌傳導(dǎo)速度減慢，心率減慢；阻斷劑阿托品第5頁【動(dòng)物、器材與試劑】蟾蜍或蛙、紗布、毀髓針、眼科鑷、手術(shù)剪、眼科剪、蛙板、蛙釘、玻璃分針、滴管、細(xì)棉線、蛙心夾、鐵支架、萬能滑輪、小燒杯、斯氏蛙心套管、雙凹夾、套管夾、張力換能器、生物信號(hào)計(jì)算機(jī)采集系統(tǒng)任氏液、0.65%NaCl、2%CaCl2、1%KCl、1/10000腎上腺素、1/10000乙酰膽堿、阿托品、300U/ml肝素。第6頁【方法與步驟】1、儀器準(zhǔn)備2、離體蛙心制備3、連接試驗(yàn)裝置4、試驗(yàn)觀察第7頁1、儀器準(zhǔn)備打開計(jì)算機(jī)生物信號(hào)采集系統(tǒng)，選擇試驗(yàn)項(xiàng)目-循環(huán)試驗(yàn)-離體蛙心灌流。熟悉試驗(yàn)標(biāo)識(shí)使用。參考：生理模擬試驗(yàn)軟件-離子和藥品對(duì)離體蛙心影響第8頁2、離體蛙心制備（斯氏蛙心插管法）在左主動(dòng)脈下方穿線，靠上端結(jié)扎，作插管時(shí)牽引用在主動(dòng)脈干下方穿線，在動(dòng)脈圓錐上方打一活結(jié)備用（用以結(jié)扎和固定插管）。取蛙或蟾蜍，雙毀髓后背位置于蛙板上，暴露心臟。仔細(xì)識(shí)別心臟周圍大血管。第9頁左手提起左主動(dòng)脈上方結(jié)扎線，右手用眼科剪在結(jié)扎線下方、沿向心方向?qū)?dòng)脈管壁剪一斜口（注意要剪破血管內(nèi)膜，每次心縮時(shí)有血自切口涌出，但不要把血管剪斷，剪口位置視套管尖端長(zhǎng)度與心臟大小而定）。選擇大小適宜斯氏蛙心套管，盛入少許任氏液（內(nèi)加一滴肝素溶液，套管內(nèi)2－3cm高度）。左手用眼科鑷提起切口緣，右手將注有任氏液斯氏套管插入動(dòng)脈干內(nèi)，然后左手持左側(cè)血管分支上結(jié)扎線向外拉，右手將蛙心套管送入動(dòng)脈圓錐。第10頁當(dāng)套管尖端抵達(dá)動(dòng)脈圓錐基部時(shí)，應(yīng)將套管稍向后退（因主動(dòng)脈內(nèi)有螺旋瓣會(huì)妨礙插管前進(jìn)），并將套管尾端稍向右主動(dòng)脈方向及腹側(cè)面傾斜，使插管尖端向動(dòng)脈圓錐背部后下方及心尖方向推進(jìn)，在心室收縮時(shí)經(jīng)主動(dòng)脈瓣進(jìn)入心室。第11頁注意插管不可插得過深，插管斜面應(yīng)朝向心室腔，以免插管下口被心室壁堵住。此時(shí)可見血液沖入套管，并使液面隨心臟搏動(dòng)而上下移動(dòng)，表明操作成功（不然需退回并重新插入）用滴管吸去套管中血液，換新鮮任氏液。第12頁穩(wěn)定住套管后，輕輕提起備用線，將左、右主動(dòng)脈連同插入套管用雙結(jié)扎緊（不得翻液），再將結(jié)線固定在套管小玻璃鉤上，然后剪斷結(jié)扎線上方血管?？辞屐o脈竇位置，在心臟下方繞一線，將左右肺靜脈及前后腔靜脈一起結(jié)扎（注意切勿損壞靜脈竇）。輕輕提起套管和心臟，于靜脈竇下方剪斷有牽連組織，僅保留靜脈竇與心臟聯(lián)絡(luò)，使心臟離體。第13頁用任氏液重復(fù)沖洗心室內(nèi)余血，使套管內(nèi)灌流液不再有殘留血液。保持套管內(nèi)液面高度一致（1.5－2cm，或在套管下1/3處結(jié)一線作為標(biāo)志，每次換任氏液時(shí)使液面與此線相平），即可進(jìn)行試驗(yàn)。第14頁其它方法技巧用蛙心夾提起心尖，使心室與動(dòng)脈圓錐約呈100°-200°鈍角，然后當(dāng)心室縮緊時(shí)把套管平直往心室方向推進(jìn)。當(dāng)感覺套管進(jìn)入心室后再把心尖放平，隨即將套管稍向心室推進(jìn)，調(diào)整適當(dāng)位置，可見套管內(nèi)液面隨心跳而升降。第15頁3、連接試驗(yàn)裝置將套管固定在支架上，用蛙心夾在心舒期夾住少許心尖部肌肉（不要夾多，以免夾破心室而漏液）。將蛙心夾上系線繞過一個(gè)滑輪與張力傳感器相連。勿使灌流液滴到傳感器上。調(diào)整統(tǒng)計(jì)儀器上收縮曲線幅度適中。第16頁4、試驗(yàn)觀察1)統(tǒng)計(jì)正常心搏曲線。2)改用0.65%NaCl溶液灌流，并作好加藥標(biāo)識(shí)，觀察心搏改變。待曲線出現(xiàn)顯著改變時(shí)，馬上吸去套管中灌流液，同時(shí)做好沖洗標(biāo)識(shí)，并用新鮮任氏液清洗2－3次，待心搏恢復(fù)正常。注意：換液時(shí)切勿碰套管，以免影響描記曲線基線，同時(shí)保持灌流液面一致（下同）。第17頁3)向套管內(nèi)加2－6滴5%NaCl溶液，作好加藥標(biāo)識(shí)，觀察心搏曲線頻率及振幅改變。當(dāng)曲線出現(xiàn)顯著改變時(shí)，應(yīng)馬上吸去套管中灌流液，并做好沖洗標(biāo)識(shí)，快速用新鮮任氏液清洗2－3次，待心搏恢復(fù)正常。4)向套管內(nèi)加1－2滴2%CaCl2溶液，作好加藥記號(hào)，觀察心搏曲線頻率及振幅改變。標(biāo)識(shí)、沖洗至心搏恢復(fù)正常5)向套管內(nèi)加入1－2滴1%KCl溶液，統(tǒng)計(jì)心搏曲線改變。當(dāng)心搏曲線改變時(shí)，同法更換灌流液，待心搏恢復(fù)正常。第18頁6)同法統(tǒng)計(jì)套管中加入1－2滴腎上腺素溶液(1/10000)后心搏曲線改變。7)同法統(tǒng)計(jì)套管中加入1－2滴乙酰膽堿溶液(1/10000)后心搏曲線改變。8)同法統(tǒng)計(jì)套管中先加入阿托品后再加1－2滴乙酰膽堿溶液(1/10000)后心搏曲線改變。第19頁【注意事項(xiàng)】1、制備離體心臟標(biāo)本時(shí)，勿傷及靜脈竇。2、蛙心夾應(yīng)在心室舒張期一次性夾住心尖，防止因夾難過臟而造成漏液。3、每一觀察項(xiàng)目都應(yīng)先描記一段正常曲線，然后再加藥并統(tǒng)計(jì)其效應(yīng)。加藥時(shí)應(yīng)在心跳曲線上給予標(biāo)識(shí)，方便觀察分析。4、各種滴管應(yīng)分開，不可混用。5、在試驗(yàn)過程中，插管內(nèi)灌流液面高度應(yīng)保持恒定；儀器各種參數(shù)一經(jīng)調(diào)好，應(yīng)不再變動(dòng)。第20頁6、標(biāo)本制備好后，若心臟功效狀態(tài)不好（不搏動(dòng)），可向插管內(nèi)滴加1～2滴2%CaCl2或1：10000腎上腺素，以促進(jìn)（起動(dòng)）心臟搏動(dòng)。在試驗(yàn)程序安排上也可考慮促進(jìn)和抑制心臟搏動(dòng)藥品交換使用。7、給藥后若效果不顯著，可再適量滴加，并親密注意藥品劑量添加后試驗(yàn)結(jié)果。給藥量必須適度，加藥出現(xiàn)改變后，就應(yīng)馬上更換任氏液，不然會(huì)造成不可挽回后果，尤其是K＋稍有過量，即可造成難以恢復(fù)心臟停跳。8、謹(jǐn)防灌流液沿絲線流入張力傳感器內(nèi)而損壞其電子元件。第21頁試驗(yàn)結(jié)果試驗(yàn)項(xiàng)目收縮強(qiáng)度心率處理前處理后處理前處理后0.65%NaCl2%CaCl21%KCl1：10000E1：10000Ach阿托品+Ach第22頁第23頁第24頁第25頁CaCl2灌流[Ca2+]o↑Ca2+內(nèi)流↑[Ca2+]i↑興奮-收縮耦聯(lián)↑收縮力↑第26頁第27頁第28頁KCl灌流[K+]o↑AP平臺(tái)期縮短Ca2+內(nèi)流↓興奮-收縮耦聯(lián)↓收縮力↓第29頁第30頁第31頁1:10000E灌流4期If、ICaT通道↑4期自動(dòng)去極速度↑自律性↑心率↑與心肌β1受體結(jié)合Ca2+內(nèi)流↑肌漿網(wǎng)釋放Ca2+↑興奮-收縮耦聯(lián)↑收縮力↑c(diǎn)AMP第32頁第33頁第34頁1:10000Ach灌流與心肌M受體結(jié)合K+外流↑,Ca2+內(nèi)流↓E-C耦聯(lián)↓收縮力↓最大復(fù)極電位↑4期K+外流↑

自律性↓心率↓[Ca2+]i↓第35頁【思索題】1、心臟灌流說明心肌哪些生理特征？2、用試驗(yàn)說明內(nèi)環(huán)境相對(duì)恒定主要意義。3、試分析任氏液中適量鈉離子、鈣離子與鉀離子對(duì)心肌作用。4、為何強(qiáng)調(diào)試驗(yàn)中保持灌流液面恒定?灌流量對(duì)心臟活動(dòng)會(huì)有什么影響？5、試想，活機(jī)體在心交感神經(jīng)興奮或心迷走神經(jīng)興奮時(shí)對(duì)心臟會(huì)有什么影響？第36頁試