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文檔簡介

脯氨酸含量的測定

植物組織游離脯氨酸含量的測定一試驗原理植物在逆境條件下,游離脯氨酸便會大量積累,且積累指數(shù)與植物的抗逆性有關(guān)。

因此,脯氨酸可作為植物抗逆性的一項生化指標。

采納磺基水楊酸提取植物體內(nèi)的游離脯氨酸,不僅大大削減了其他氨基酸的干擾,快速簡便,而且不受樣品狀態(tài)干或鮮樣限制。

在酸性條件下,脯氨酸與茚三***反應生成穩(wěn)定的紅色縮合物,用甲苯萃取后,此縮合物在波長520處有一最大汲取峰。

脯氨酸濃度的凹凸在肯定范圍內(nèi)與其消光度成正比。

二試驗材料、儀器設備及試劑1材料植物葉片2儀器設備分光光度計,恒溫水浴鍋,漏斗,具塞刻度試管20,移液槍1和5,5和1刻度試管,燒杯,吸水紙,玻璃棒,試管架,比色皿等。

3試劑13%磺基水楊酸溶液:萬分之一電子天平稱取3磺基水楊酸,然后將稱好藥品溶于100蒸餾水中。

2甲苯3%酸性茚三***顯色液:冰乙酸和6-磷酸以3:2混合,作為溶劑進行配制,此液在4℃下2~3天有效此步驟重要。

***放入燒杯中用混合液50放入70℃水浴鍋中溶解,冷卻。

.專業(yè)可編輯4脯氨酸標準溶液:精確?????稱取25脯氨酸,用蒸餾水溶解后定容至250,其濃度為100。

再取此液10,用蒸餾水稀釋至100,即成10的脯氨酸標準液。

1取7支具塞刻度試管按表2加入各試劑。

混勻后加玻璃球塞,在沸水中加熱40。

.***顯色液3333333脯氨酸含量μ02481216202取出冷卻后向各管加入5甲苯充分振蕩,以萃取紅色物質(zhì)。

靜置待分層后吸取甲苯層以0號管作為對比在波長520下比色。

3以消光值為縱坐標,脯氨酸含量為橫坐標,繪制標準曲線,求線性回歸方程。

.專業(yè)可編輯2樣品測定1脯氨酸提取:從-80℃冰箱中取出樣品,放入事先裝好液氮的保溫桶中。

,分別置于大試管中,加入5%磺基水楊酸溶液3,管口加蓋玻璃球,于沸水浴中浸提10。

2取出試管,待冷卻至室溫后,吸取上清液2,加2冰乙酸和3顯色液,于沸水浴中加熱40,下步操作按標準曲線制做方法進行甲苯萃取和比色向各管加入5甲苯充分振蕩,以萃取紅色物質(zhì)。

靜置待分層后吸取甲苯層以0號管作為對比在波長520下比色。

3結(jié)果計算:從標準曲線中查出測定液中脯氨酸濃度脯氨酸含量的百分數(shù)。

脯氨酸[-1干或鮮重]=-1式中:一提取液中脯氨酸濃度,由標準曲線求得:-提取液總體積測定時所吸取得體積樣品重.專業(yè)可編輯數(shù)據(jù)統(tǒng)計表提取液中脯氨測定時所吸取標準曲提取液總體積樣品重脯氨酸含量海拔處理編號吸光度稀釋倍數(shù)酸含量的體積平均值線斜率\5125**5235246116126133600614--1

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