孕產(chǎn)婦及其所生兒童艾滋病檢測技術要點介紹

孕產(chǎn)婦及其所生兒童艾滋病檢測

技術要點介紹 .1精選ppt

規(guī)范化檢測及管理

管理：檢測工作管理辦法檢測：檢測技術規(guī)范質控：質控指南信息實驗室網(wǎng)絡通訊2精選ppt3HIV(-)HIV急性感染HIV長期感染艾滋病期抗體檢測核酸檢測 核酸檢測 抗原檢測 抗原檢測 CD4細胞 抗原檢測 病毒分離 病毒分離 病毒載量 病毒分離 耐藥監(jiān)測 耐藥檢測耐藥檢測

CD4細胞 CD4細胞 新感染檢測 3精選ppt4精選ppt內容孕產(chǎn)婦艾滋病檢測技術要點HIV暴露嬰兒早期診斷技術要點5精選ppt一、孕產(chǎn)婦艾滋病檢測

參照《全國艾滋病檢測技術規(guī)范（2014年修訂版）》中臨床診斷相關的檢測策略進行孕產(chǎn)婦艾滋病檢測。6精選ppt《全國艾滋病檢測技術規(guī)范（2014年修訂版）》中的變化2009年版2014年版7精選ppt檢測流程

孕產(chǎn)婦初次接受孕產(chǎn)期保健時，首先進行艾滋病抗體篩查試驗。篩查試驗結果有反應者，使用原有試劑和另外一種篩查試劑進行復檢，也可使用原有試劑雙份進行復檢。根據(jù)復檢結果，確定是否進行補充試驗。依據(jù)補充試驗結果，判定感染狀況（詳見圖2）。臨產(chǎn)時才尋求助產(chǎn)服務的孕產(chǎn)婦，需同時應用兩種不同的快速檢測試劑進行篩查，根據(jù)篩查檢測結果，及時提供后續(xù)服務（詳見圖3）。8精選ppt圖2：孕期艾滋病檢測及服務流程

9精選ppt圖3.產(chǎn)時艾滋病抗體檢測及服務流程

（適用于孕期未接受HIV檢測的產(chǎn)婦）

10精選ppt補充試驗（核酸）11精選ppt感染HIV后各種標志物消長變化12精選ppt檢測方法

孕產(chǎn)婦艾滋病檢測方法包括抗體篩查試驗和補充試驗?？贵w篩查試驗包括快速檢測（RT）、酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）、化學發(fā)光免疫試驗（CLIA）、明膠顆粒凝集試驗（PA）等。補充試驗包括抗體補充試驗和核酸補充試驗等。建議首選抗體補充試驗，如蛋白免疫印跡試驗（WB，原確證試驗）、條帶/線性免疫試驗（RIBA/LIA）。13精選ppt1.快速檢測試驗（RT）——原理*免疫層析（IF）/免疫滲濾（FT）顆粒凝集（PA）*最新快速HIV試劑檢測HIV抗體比第三代EIA晚2－8天14精選ppt無反應有反應15精選ppt16快速檢測結果判定樣品流動方向點樣區(qū)HIV抗原質控區(qū)俯視圖側視圖16精選ppt（2）明膠顆粒凝集試驗（PA）樣品稀釋，分別加入經(jīng)抗原致敏的和未致敏的明膠顆粒，混勻后保溫（室溫）。血清中有HIV抗體時，經(jīng)抗原致敏的明膠顆粒與抗體發(fā)生抗原-抗體反應；根據(jù)凝集情況判讀結果。17精選pptPA定性試驗C對照顆粒S致敏顆粒18精選ppt19精選ppt20快速檢測試驗的特點HIV抗體快速檢測方法有以下一些主要特點：（1）HIV抗體快速檢測試劑大部分均為一步法，一般在15～30分鐘可獲得結果。（2）HIV抗體快速檢測判定結果一般采用目測，而且操作方便，不需要特殊儀器設備。20精選ppt21（3）HIV抗體快速檢測技術本身對檢測技術人員要求不高，適用于各級實驗室。（4）產(chǎn)前未接受過HIV抗體檢測的急產(chǎn)、臨產(chǎn)的產(chǎn)婦進行快速檢測，可及時得到結果，便于采取措施，有效阻斷母嬰傳播。（5）在發(fā)生職業(yè)暴露后，為了做好暴露后預防，如果不明確暴露源是否是HIV感染者，應立即進行抗體快速檢測，陽性者再進行病毒載量測定。21精選ppt不同廠家的試劑操作要求廠家樣品要求血量(ul)樣品稀釋是否加緩沖液最小反應時間(分鐘)最大反應時間(分鐘)試劑儲存要求明膠顆粒法(PA)血清/血漿251:32N120/2-10℃DETERMINE血清/血漿/全血50N用全血時加1滴15602-30℃SD血清10NN5201-30℃,不能置冰箱保存杭州艾康血清/血漿/全血25NY10202-30℃,勿凍存上?？迫A血清/血漿40NY/304-30℃廈門新創(chuàng)血清/血漿/全血60NY1304-30℃廣州萬孚血清/血漿/全血80-100N用全血時加2滴10304-30℃,勿凍存北京萬泰血清/血漿80N用全血時加1滴/30室溫儲存，可置2-8℃22精選ppt2化學發(fā)光試驗試劑和原理化學發(fā)光免疫分析（Chemiluminescence

Immunoassay，CLIA）是將具有高靈敏度的化學發(fā)光測定技術與高特異性的免疫反應相結合，用于各種抗原、半抗原、抗體、激素、酶、脂肪酸、維生素和藥物等的檢測分析技術?；瘜W發(fā)光免疫分析法以標記方法的不同而分為兩種：（1）化學發(fā)光標記免疫分析法：其化學反應簡單、快速、無須催化劑；檢測小分子抗原采用競爭法，大分子抗原則采用夾心法，非特異性結合少，本底低；與大分子的結合不會減小所產(chǎn)生的光量，從而增加靈敏度。.（2）化學發(fā)光酶免疫分析法：從標記免疫分析角度，化學發(fā)光酶免疫分析（ChemiluminescentEnzymeImmunoassay，CLEIA）應屬酶免疫分析，只是反應的底物是發(fā)光劑，操作步驟與ELISA分析完全相同。以酶標記生物活性物質（如酶標記的抗原或抗體）進行免疫反應，免疫反應復合物上的酶再作用于發(fā)光底物，在信號試劑作用下發(fā)光，用發(fā)光信號測定儀進行發(fā)光測定。23精選ppt24代次包被抗原類型或抗體窗口期（天）方法檢測對象特點第一代純化的HIV-1病毒裂解液抗原30-60間接法IgG1985年批準，特異性、敏感性均較低；僅針對HIV-1，但對防治輸血傳播HIV起重要作用第二代HIV-1+2基因重組抗原、合成肽抗原28-35間接法IgG1990年批準，敏感性、特異性均較第一代有所提高第三代HIV-1+2基因重組抗原、合成肽抗原14-25雙抗原夾心法IgG+IgM、IgA1994年批準，敏感性、特異性進一步提高(1996年出現(xiàn)HIV1/2/O試劑）第四代HIV-1+2基因重組抗原、合成肽抗原，P24單克隆抗體10-18雙抗原夾心法、抗體捕獲IgG+IgM、IgA和P24抗原1998年批準，檢測HIV1/2/O抗體和P24抗原，進一步降低血源篩查的殘余危險度24精選ppt抗體檢測中的問題初篩實驗中的假陽性血液惡性病變自身免疫性疾病多發(fā)性膽汁型肝硬化酒精性肝炎疫苗接種（流感，乙肝）多發(fā)性骨髓瘤腎移植或慢性腎衰竭瘧疾或絲蟲病其他25精選ppt

抗體檢測中的問題

初篩實驗中的假陰性窗口期免疫移植換血輸血惡性腫瘤免疫功能喪失（B細胞功能缺損）其他（試劑或操作原因）26精選ppt2011～2013年HIV抗體檢測試劑臨床質量評估結果匯總表27精選ppt2011～2013年HIV抗體檢測試劑臨床質量評估結果匯總表28精選ppt2011～2013年HIV抗體檢測試劑臨床質量評估結果匯總表

29精選ppt三、孕產(chǎn)婦抗病毒治療的相關檢測

用藥前，進行CD4+T淋巴細胞計數(shù)、病毒載量檢測及其他相關檢測（包括血常規(guī)、尿常規(guī)、肝功能、腎功能、血脂、血糖等）。用藥過程中，每三個月進行1次CD4+T淋巴細胞計數(shù)及其他相關檢測（同前）。孕晚期，進行1次病毒載量檢測，并在分娩前獲得檢測結果。30精選ppt應用復方新諾明預防機會性感染

應用對象包括：CD4+T淋巴細胞計數(shù)<200個細胞/mm3的艾滋病感染孕產(chǎn)婦和CD4+T淋巴細胞百分比<15%的艾滋病感染兒童。復方新諾明用藥方法、停藥指征及注意事項等詳見《預防艾滋病母嬰傳播技術指導手冊》。31精選ppt323232治療的首要直接目的是抑制病毒的復制。病毒載量主要用于衡量治療藥物的效力達到此目的程度病毒載量通過定量測定HIVRNA的含量來確定每毫升血漿中病毒的粒子數(shù)每毫升血漿中能夠檢測到的HIV拷貝數(shù)的范圍在50到100萬之間（取決于含量測定）病毒載量32精選ppt3333

在HIV/AIDS中進行病毒載量檢測的意義一、早期診斷和輔助診斷二、病程監(jiān)控、預測疾病進程三、開始進行抗病毒治療的指針四、評價藥物的療效（無效、耐藥）33精選ppt3434評價藥物的療效檢測的頻度應在基線后每3-4月進行1次新藥應在2-4周進行。病毒載量下降≥50%(0.3log10)才有意義治療理想的反應：第4周病毒載量下降1.5-2log10,12-16周小于500cp/ml,16-24周小于50cp/ml34精選ppt3535精選ppt3636CD4細胞計數(shù)

CD4細胞計數(shù)檢查系一項對每立方毫米血液中的CD4細胞進行計數(shù)的檢測，可直接測定患者免疫系統(tǒng)的狀態(tài)。因此，CD4細胞計數(shù)既是HIV感染治療需要的測定，也是治療工作成功與否的衡量標準因此，CD4細胞計數(shù)既是治療需要的測定，也是治療成功與否的衡量標準檢測時，對細胞表面帶有CD4分子的T淋巴細胞進行標記并計數(shù)36精選ppt3737CD4+T細胞絕對數(shù)的臨床意義評價免疫功能減退的程度和AIDS進程指導治療策略的制訂確定預防機會感染的最佳時機監(jiān)控抗逆轉錄病毒（ARV）治療、細胞因子治療和保護治療性疫苗的療效

37精選ppt檢測HIV/AIDS中CD4/CD8的意義確定抗HIV的治療時間藥物療效的重要判斷指標（治療8周后CD4+T淋巴細胞數(shù)量增加50/ul））38精選ppt內容孕產(chǎn)婦艾滋病檢測技術要點HIV暴露嬰兒早期診斷技術要點39精選ppt及早診斷對個體的必要性1、對于感染兒童：及早干預與治療，功能性治愈2、對于陰性結果：40精選ppt7.4%7.1%7.47.17.47.141精選ppt感染兒童的高死亡率第一年35%第二年53%感染者未感染者總體未知累積死亡機率42精選ppt母親HIV抗體經(jīng)胎盤進入胎兒，出生時新生兒和嬰兒早期抗體陽性，不一定是感染出生時母親的抗體，80~90%在生后9~12個月消失，出生后18個月基本上全部消失18個月后兒童HIV仍然陽性，視為自身感染產(chǎn)生的抗體18個月以下嬰幼兒的HIV診斷43精選ppt18個月以下嬰幼兒的HIV診斷檢測HIVDNA或RNA但推薦檢測HIVDNA,因為HIV前病毒DNA以細胞內前病毒感染狀態(tài)存在，所以它不受母親圍產(chǎn)期抗病毒治療的影響和嬰幼兒預防性抗病毒治療的影響.不得使用臍帶血.44精選ppt《嬰兒艾滋病感染早期診斷工作方案》對HIV陽性產(chǎn)婦所生兒童于出生后6周和3個月時，分別采集血標本，進行嬰兒感染早期診斷。詳見圖6嬰兒艾滋病感染早期診斷檢測及服務流程。未進行嬰兒早期診斷檢測或嬰兒早期診斷檢測結果為陰性的兒童，應于12、18月齡進行艾滋病抗體篩查及必要的補充試驗，以明確艾滋病感染狀態(tài)。兒童抗體檢測及服務流程見圖7。45精選ppt艾滋病感染孕產(chǎn)婦所生兒童艾滋病抗體檢測及服務流程（圖7）

46精選ppt圖6.艾滋病感染孕產(chǎn)婦所生兒童艾滋病感染早期診斷檢測及服務流程47精選pptWS293-2008_艾滋病和艾滋病病毒感染診斷標準48精選ppt檢測方法(定性）

1）COBASAmplicor/COBASTaqManHIV-1QualTest2)雅培HIV-1嬰兒核酸診斷試劑盒3）IN-HOUSE（國內開展，2014年檢測技術規(guī)范）49精選pptHIV復制周期50精選ppt雅培HIV-1嬰兒核酸診斷試劑盒同時擴增檢測HIV-1RNA和DNAWHO推薦同時檢測HIV-1RNA和DNA樣本類型:干血斑和血漿(0.2mL)靶區(qū)域:INT/pol

熒光探針設計:獨特的部分雙鏈探針設計保證對各種不同亞型HIV-1的準確檢測儀器平臺：全自動m2000系統(tǒng)(m2000sp

和m2000rt)51精選ppt使用打孔器打下2個血斑雅培RealTimeHIV-1檢測試劑盒

樣本準備:干血斑將干血斑置于含1.4mL雅培裂解緩沖液中常溫孵育20分鐘，間斷混勻將上清液轉移至樣本管準備上機檢測7.m2000儀器自動化完成核酸處理和檢測52精選ppt雅培RealTimeHIV-1檢測試劑盒

53精選pptIN-HOUSE方法：

樣品類型：外周淋巴細胞、全血、濾紙片干血斑、血漿檢測HIV-1DNA三個區(qū)gag區(qū)的引物F2、e2（外測）B1、b2（內側）pol區(qū)的引物RT1、RT2（外測）RT3、RT4（內側）env區(qū)的引物ED5、ED12（外測）ENV7、ENV8（內側）54精選ppt55精選ppt干血斑在HIV-1感染檢測中的應用HIV-1DNAwashChelex100releaseDNADBS56精選ppt實驗結果判定1、β2球蛋白的基因擴增2、陽性對照3、陰性對照

4、空白對照57精選ppt檢測方法（定量檢測）58精選ppt樣本類型末梢血制備DBS抗凝靜脈血制備DBS59精選ppt60HIV-1濾紙片干血斑樣品檢測技術

（Dr