氣相色譜-負(fù)化學(xué)電離源質(zhì)譜法測(cè)定魚(yú)油中多氯聯(lián)苯

氣相色譜-負(fù)化學(xué)電離源質(zhì)譜法測(cè)定魚(yú)油中多氯聯(lián)苯

豐富的22-碳六經(jīng)（da）和20-碳五烯酸（epa）的含量具有抗炎性和抗炎性。它可以預(yù)防和治療動(dòng)脈硬化，降低癌癥的發(fā)病率。近些年的研究還顯示,DHA和EPA在嬰兒生長(zhǎng)發(fā)育等方面也有重要作用但是在持久性環(huán)境污染物(POPs)全球遷移及生物富集的情況下,魚(yú)油的品質(zhì)也受到影響魚(yú)油中存在多種PCBs殘留目前,PCBs的檢測(cè)方法主要有氣相色譜-電子捕獲檢測(cè)器法(GC-ECD)魚(yú)油中PCBs的前處理方法主要為凝膠滲透色譜法(GPC),但難于一次性去除所有的油脂,需再使用不同填料填充的固相萃取小柱進(jìn)一步除去剩余的油脂和雜質(zhì)1實(shí)驗(yàn)部分1.1化學(xué)試劑及試劑氣相色譜-質(zhì)譜儀(DSQ)配AS3000自動(dòng)進(jìn)樣器、TR-5MS彈性石英毛細(xì)管柱(30m×0.25mm×0.25μm)(美國(guó)Thermo公司)。正己烷(色譜純,德國(guó)CNW公司);濃硫酸(分析純,南京化學(xué)試劑有限公司);16種多氯聯(lián)苯(PCBs)標(biāo)準(zhǔn)溶液(質(zhì)量濃度為2mg/L,純度≥99.99%,百靈威公司)分別為:PCB77、PCB81、PCB123、PCB118、PCB114、PCB153、PCB105、PCB138、PCB126、PCB167、PCB156、PCB157、PCB180、PCB169、PCB170和PCB189。1.2標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制將多氯聯(lián)苯標(biāo)準(zhǔn)溶液用正己烷稀釋成1μg/L和20μg/L的儲(chǔ)備液。再用正己烷將1μg/L的儲(chǔ)備液稀釋成0.01、0.025、0.05、0.1μg/L的標(biāo)準(zhǔn)溶液;將20μg/L的儲(chǔ)備液稀釋成0.25、0.5、1、2.5、5、10μg/L的標(biāo)準(zhǔn)溶液。1.3濃硫酸溶液的制備稱取0.3g魚(yú)油樣品于玻璃離心管(1號(hào)管)中,加入5mL正己烷,渦旋混勻。邊輕輕搖晃離心管邊加入1mL濃硫酸,以3000r/min的速度離心8min,吸取上清液至2號(hào)管。在2號(hào)管中加入1mL濃硫酸,以3000r/min的速度離心8min,吸取上清液至3號(hào)管。在3號(hào)管中加入1mL濃硫酸,以3000r/min的速度離心8min,取上清液,經(jīng)氮吹儀吹干,用100μL正己烷復(fù)溶待測(cè)。1.4進(jìn)樣和質(zhì)譜條件色譜條件:初始溫度為70℃,保持1min;以20℃/min的速率升溫至150℃,保持2min;以20℃/min的速率升溫至300℃,保持5min;溶劑延遲時(shí)間為6.00min;載氣(氦氣)流速為1mL/min;輔助氣流速(甲烷)為1.2mL/min;進(jìn)樣口溫度為270℃;不分流進(jìn)樣,不分流時(shí)間為1min,進(jìn)樣量為1μL。質(zhì)譜條件:傳輸線溫度為280℃;離子源為CI,負(fù)離子模式,溫度為200℃;電子轟擊能量為70eV;發(fā)射電流為100μA;預(yù)四極桿電壓為-7.8V;選擇離子監(jiān)測(cè)模式。采用外標(biāo)法定量。2結(jié)果與討論2.1gc-ecd與濃硫酸凈化的比較魚(yú)油中大部分為脂肪,而多氯聯(lián)苯易蓄積在脂肪中,如何有效地從脂肪中提取多氯聯(lián)苯是試驗(yàn)的關(guān)鍵。傳統(tǒng)的方法在采用凝膠滲透色譜凈化后,還需進(jìn)一步利用弗羅里硅土小柱為比較濃硫酸凈化與其他方法在基質(zhì)干擾上的差別,樣品分別經(jīng)濃硫酸凈化、濃硫酸-弗羅里硅土凈化和濃硫酸-堿性氧化鋁凈化后,均用GC-ECD、GC-NCI-MS和GC-EI-MS3種方法測(cè)定。添加標(biāo)準(zhǔn)化合物(終質(zhì)量濃度為5μg/L)的魚(yú)油樣品經(jīng)過(guò)不同的前處理凈化后在GC-ECD上的檢測(cè)效果如圖2所示,單獨(dú)濃硫酸凈化的魚(yú)油樣品譜圖基線較高,目標(biāo)化合物出峰前有較多雜峰,而經(jīng)過(guò)弗羅里硅土或堿性氧化鋁進(jìn)一步凈化后的譜圖基線降低明顯,雜峰也較少。因此在采用GC-ECD檢測(cè)時(shí),濃硫酸處理后的魚(yú)油樣品需要進(jìn)一步的凈化。此法即為GB5009.190-2014中的第二種方法。GC-NCI-MS的檢測(cè)效果如圖3所示,單獨(dú)使用濃硫酸凈化樣品的譜圖與其他兩種凈化方法的效果一致,基線水平低且平穩(wěn),雜峰比其他兩種少。王建華等此外,還比較了只經(jīng)濃硫酸處理的樣品在GC-MS兩種不同離子源(EI和NCI)上的檢測(cè)效果。如圖4所示,經(jīng)GC-EI-MS檢測(cè)的譜圖中基線約在目標(biāo)化合物開(kāi)始出峰時(shí)逐漸提高,且大部分檢測(cè)到的PCBs靈敏度明顯低于GC-NCI-MS檢測(cè)結(jié)果,可見(jiàn)NCI源比EI源優(yōu)勢(shì)明顯。2.2離子離子定性GC-ECD對(duì)電負(fù)性物質(zhì)有選擇性響應(yīng),具有一定的抗干擾能力,但在檢測(cè)時(shí)僅依靠保留時(shí)間進(jìn)行定性檢測(cè);GC-EI-MS雖然可以通過(guò)選擇離子及保留時(shí)間定性,但EI響應(yīng)的選擇性較差。GC-NCIMS兼具了兩者的優(yōu)點(diǎn),不僅對(duì)電負(fù)性物質(zhì)的響應(yīng)高,對(duì)大多數(shù)脂肪、色素等雜質(zhì)不響應(yīng),而且可以通過(guò)特征離子、保留時(shí)間定性。本文通過(guò)優(yōu)化GCNCI-MS中的輔助氣流量和離子源溫度,使檢測(cè)條件達(dá)到最佳,通過(guò)不同濃度水平基質(zhì)重復(fù)加標(biāo)試驗(yàn)驗(yàn)證方法的可靠性及穩(wěn)定性。2.2.1色譜條件時(shí)響應(yīng)魚(yú)油中PCBs的殘留含量大多在ppt~ppb級(jí),對(duì)儀器的檢測(cè)靈敏度要求較高。本文比較了不同輔助氣(甲烷)流速對(duì)PCBs響應(yīng)的影響。如圖5所示,PCB77、PCB81、PCB123/118、PCB114、PCB153、PCB105和PCB138(對(duì)應(yīng)圖2中1~8號(hào)色譜峰)在1.2mL/min流速時(shí)響應(yīng)最高,而圖5中的PCB126、PCB167、PCB156、PCB157、PCB180、PCB169、PCB170和PCB189(對(duì)應(yīng)圖2中9~16號(hào)色譜峰)在1.5mL/min流速時(shí)響應(yīng)最高,1.2mL/min時(shí)的響應(yīng)次之。綜合考慮同濃度條件下低氯代、相對(duì)分子質(zhì)量相對(duì)較小的PCB77~PCB138(峰號(hào)1~8)檢測(cè)靈敏度明顯低于高氯代、相對(duì)分子質(zhì)量相對(duì)較大的PCB126~PCB189(峰號(hào)9~16),最后確定甲烷流速為1.2mL/min。2.2.2離子源溫度的優(yōu)化考察了在200、210、220、230、240和250℃不同離子源溫度下多氯聯(lián)苯的響應(yīng),試驗(yàn)結(jié)果表明:大部分多氯聯(lián)苯在200℃時(shí)響應(yīng)最高;PCB180和PCB170在210℃時(shí)響應(yīng)最高,PCB169和PCB189在250℃時(shí)響應(yīng)最高。考慮到儀器離子源溫度依靠加熱板控溫,提高離子源溫度會(huì)縮短加熱板的使用壽命,并且16種PCBs中檢測(cè)靈敏度相對(duì)較低的低氯代多氯聯(lián)苯均在200℃時(shí)響應(yīng)最高,所以將離子源溫度設(shè)為200℃。在優(yōu)化后的條件下,16種PCBs中除PCB123與PCB118未得到很好的分離外,其余均分離良好(見(jiàn)圖6)。表1中列出了16種多氯聯(lián)苯的特征離子及保留時(shí)間。2.3線性關(guān)系和定量限對(duì)PCBs標(biāo)準(zhǔn)化合物進(jìn)行全掃描,可確定每種待測(cè)物質(zhì)的3個(gè)特征離子(見(jiàn)表1)及相對(duì)豐度比。樣品測(cè)定時(shí),檢出物質(zhì)的保留時(shí)間應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)化合物一致,并且出現(xiàn)的特征離子相對(duì)豐度比偏差應(yīng)在規(guī)定的范圍內(nèi)。試驗(yàn)中選擇的特征離子相對(duì)強(qiáng)度均大于50%,相對(duì)偏差在20%以內(nèi)。樣品中不同PCBs殘留水平差異較大,外標(biāo)法定量時(shí)采用分段標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中的PCBs殘留量。16種PCBs的線性范圍為0.01~10μg/L。各化合物分段標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)均大于0.99,線性關(guān)系良好。本次所檢測(cè)的樣品中PCBs的濃度基本被包含在上述濃度范圍內(nèi),具體的分段標(biāo)準(zhǔn)曲線見(jiàn)表2。在魚(yú)油中添加PCBs混合標(biāo)準(zhǔn)溶液,使其終質(zhì)量濃度分別為0.5μg/L和5μg/L,按建立的方法進(jìn)行檢測(cè)。如表3所示,16種PCBs的基質(zhì)加標(biāo)平均回收率在62.3%~121.8%之間,平行樣(n=3)之間的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)在1.0%~11.8%之間,穩(wěn)定性較好。以S/N=10時(shí)各化合物的濃度作為該P(yáng)CB的定量限。16種PCBs的定量限在3~67pg/g之間。以S/N=3時(shí)各化合物的濃度為檢出限,16種PCBs的檢出限在1.3~20pg/g之間,與馬召輝等2.4共平面多氯聯(lián)苯pcb105按本方法對(duì)魚(yú)油樣品中的PCBs進(jìn)行檢測(cè)。除檢出