鮮鐵皮石斛遺傳毒性研究

鮮鐵皮石斛遺傳毒性研究

常綠石頭。這是多年生蕨類植物科的一種多年生蕨類植物。它是中國罕見的中藥。主要分布在西南部和東部省份，表皮呈綠色。據(jù)《本草綱目》記載鐵皮石斛能“除痹、下氣、補五臟虛勞贏瘦、強陰益精;久服、厚腸胃、補內(nèi)絕不足、平胃氣、長肌肉、益智除驚、輕身延年”。鐵皮石斛化學(xué)成分多樣,主要含有生物堿、多糖、氨基酸等材料表面1液氮罐和超凈工作臺702超低溫冰箱(美國Thermo公司);HVE50高壓滅菌鍋(美國Thermo公司);Cryosysterm2000液氮罐(美國MVE公司);Nu425400E超凈工作臺(美國NUARE公司);DM4000/DM2500/DM1000正置顯微鏡及圖像分析系統(tǒng)(德國Leica公司);DMIL倒置顯微鏡(德國Leica公司);3111二氧化碳培養(yǎng)箱(美國Thermo公司);HU400BM榨汁機(韓國Hurom公司)。2化水制備汁鮮鐵皮石斛(FD,杭州中美華東制藥有限公司,批號:20120608);取鮮鐵皮石斛10g加200mL純化水榨汁,過濾;取藥渣,再加300mL純化水榨汁,合并2次濾液并濃縮,得到濃度為100mg(生藥)·mL組氨酸營養(yǎng)缺陷型鼠傷寒沙門菌(TA97,TA98,TA100,TA102和TA1535)均購自美國Moltox公司,臨用前從主平板上選取菌落,37℃恒溫培養(yǎng)箱靜止培養(yǎng)12h,增菌液濃度為每mL(1~2)×103細胞20細胞研究進展中國倉鼠肺成纖維細胞(CHL)購于中國科學(xué)院上海細胞研究所。SPF級ICR小鼠由上海斯萊克實驗動物有限責(zé)任公司提供,許可證號:SCXK(滬)2007-0005,動物合格證號:0037907。方法1平板加入實驗條件采用標(biāo)準(zhǔn)Ames法,非代謝活化(-S9)和代謝活化(+S9),2種平板摻入實驗條件。FD設(shè)5個劑量組(5000,1000,200,40,8μg·plate2fd中國糧倉肺纖維細胞chl染色體畸變實驗FD的IC3fd大鼠骨髓檢測采用紅細胞微微滴落試驗雄性ICR小鼠30只,按體重隨機分成5個實驗組,每組6只,包括FD高、中、低(2,1,0.5g·kg結(jié)果1兩組抑菌率比較非活化系統(tǒng)條件下FD各劑量組回復(fù)突變菌落數(shù)均未超過陰性對照2倍,其中TA97在每皿5000μg劑量條件下回復(fù)突變菌落數(shù)減少,較正常對照組抑菌現(xiàn)象明顯(P<0.05)?；罨瘲l件下FD各劑量組回復(fù)突變菌落數(shù)均未超過陰性對照2倍,其中TA100和TA102均有1個劑量組出現(xiàn)明顯抑菌現(xiàn)象(P<0.05)。陰性對照組5種鼠傷寒沙門菌回復(fù)突變菌落數(shù)均在正常突變范圍內(nèi),各陽性對照組5種菌株的回復(fù)突變菌落數(shù)均超過陰性對照的2倍以上,且統(tǒng)計學(xué)差異明顯(P<0.01),表明該實驗系統(tǒng)合理,結(jié)果見表1。2染色體畸變試驗非活化代謝條件下,陰性對照組染色體畸變率均小于5%,在正常范圍內(nèi),FD各劑量組畸變率在0.5%~4%之間,與陰性對照組比較無明顯差異(P>0.05)。陽性對照組,染色體結(jié)構(gòu)畸變率大于10%,明顯高于陰性對照組(P<0.01),顯示陽性結(jié)果,詳見表2。結(jié)果表明FD各劑量組畸變率均<5%,未誘導(dǎo)CHL細胞染色體畸變。3兩組微核試驗率比較,2ICR小鼠分別經(jīng)ig給予FD高、中、低3個劑量組后微核率與陰性對照組比較,均無明顯差異(P>0.05),而陽性對照組較正常對照組微核率顯著增加(P<0.01)。各組嗜多染紅細胞與總紅細胞比值[PCE/(PCE+NCE)]均在0.36~0.60之間,屬于正常范圍。且各組嗜多染紅細胞占總紅細胞總數(shù)均未少于陰性對照組20‰,見表3。結(jié)果表明,FD各劑量的微核率均小于5‰。發(fā)酵鐵皮石斛的抗菌作用本實驗通過對鮮鐵皮石斛遺傳毒性研究發(fā)現(xiàn),在本實驗條件下,鮮鐵皮石斛Ames實驗中未見菌株回復(fù)突變數(shù)增加,甚至在高劑量時出現(xiàn)對個別菌株的抑制作用,說明鮮鐵皮石斛可能有抗菌作用,與石