生物羊膜特點(diǎn)與應(yīng)用課件

生物羊膜特點(diǎn)與應(yīng)用江西住友生物工程技術(shù)有限公司1生物羊膜特點(diǎn)與應(yīng)用江西住友生物工程技術(shù)有限公司1自Davis(1910)首先利用羊膜作為生物敷料替代皮膚幫助燒傷創(chuàng)面修復(fù)以來(lái)，羊膜作為一種來(lái)源方便、取材容易和價(jià)格便宜等諸多優(yōu)點(diǎn)的生物膜在臨床上應(yīng)用越來(lái)越廣，如覆蓋燒傷的創(chuàng)面；修補(bǔ)陰道缺損；四肢潰瘍；脾破裂的修補(bǔ)和腎、胰移植時(shí)的包裹材料等等。Rotth(1940)首次應(yīng)用新鮮羊膜移植到瞼球粘連的患者，開(kāi)創(chuàng)了羊膜在眼科臨床應(yīng)用的先例，其后有少量的文獻(xiàn)報(bào)道。直到Kim和Tseng(1995)改良了羊膜的保存方法，移植到眼表后，用于治療結(jié)膜腫瘤；復(fù)發(fā)性翼狀胬肉切除；瞼球粘連青光眼濾過(guò)性手術(shù)等等，可起到一個(gè)良好的生物膠原支架作用。因此，羊膜移植已再次成為眼表重建的一大熱點(diǎn)。羊膜-理想的眼科生物材料2自Davis(1910)首先利用羊膜作為生物敷料替代皮膚幫助羊膜的組織結(jié)構(gòu)羊膜是人體胎盤組織的一部分羊膜光滑、無(wú)血管、神經(jīng)及淋巴，具有一定彈性。正常羊膜厚約0.02-0.5mm，是人體中最厚的基底膜。3羊膜的組織結(jié)構(gòu)羊膜是人體胎盤組織的一部分3羊膜的組織結(jié)構(gòu)上皮細(xì)胞層：由單層無(wú)纖毛立方上皮細(xì)胞組成基底層：位于上皮細(xì)胞下的網(wǎng)狀組織致密層纖維母細(xì)胞層海綿層4羊膜的組織結(jié)構(gòu)4一般僅將羊膜分為上皮面和基底膜面，上皮面包饒羊水，基質(zhì)面與絨毛膜之間有一潛在間隙，容易鈍性分離。1.上皮層：羊膜上皮可為單層立方形、在胎兒面上皮為柱狀，有時(shí)上皮呈假?gòu)?fù)層，其上皮層內(nèi)可見(jiàn)退化細(xì)胞。上皮細(xì)胞內(nèi)常含有脂肪滴。該層是新鮮的羊膜組織抗原性所在的部位。2.基底膜層：由狹窄的無(wú)細(xì)胞網(wǎng)狀纖維構(gòu)成，厚度不一。在胎盤處羊膜的基底膜最厚，該層組織PAS染色呈陽(yáng)性反應(yīng)。羊膜的組織結(jié)構(gòu)5羊膜的組織結(jié)構(gòu)53.致密層：薄而致密，是羊膜張力所在。此層與基底膜緊密相連，而與下面的纖維母細(xì)胞層連接較松。該層由網(wǎng)織纖維組成，HE染色呈淡伊紅色均質(zhì)帶。致密層極少因炎癥等原因引起水腫、增厚。在羊膜眼表移植后此層的結(jié)構(gòu)能阻止炎癥細(xì)胞穿透羊膜向病灶區(qū)浸潤(rùn)。4.纖維母細(xì)胞層：該層構(gòu)成羊膜的主要厚度。HE染色為有梭形的淡伊紅帶。纖維母細(xì)胞層染色淡是因?yàn)轲ひ汉扛摺１緦佑墒杷衫w維母細(xì)胞和網(wǎng)狀纖維構(gòu)成，纖維母細(xì)胞具有吞噬作用。5.海綿層：由波浪狀網(wǎng)織纖維束構(gòu)成，象其它彈力纖維一樣具有伸展性。本層厚度變化大，主要依此層黏液和液體的多少而定。正常厚度為0.02~0.5mm，水腫時(shí)可增厚數(shù)百倍。羊膜的組織結(jié)構(gòu)63.致密層：薄而致密，是羊膜張力所在。此層與基底膜緊密相連，羊膜的作用機(jī)制羊膜移植的作用機(jī)制主要有5個(gè)方面延長(zhǎng)上皮細(xì)胞的生命，維持其克隆形成刺激上皮細(xì)胞的分化在置于含有成纖維細(xì)胞的結(jié)膜時(shí)能刺激杯狀細(xì)胞的分化通過(guò)抗蛋白酶的活性，清除炎癥細(xì)胞能抑制轉(zhuǎn)化因子的信號(hào)傳遞和抑制正常成纖維細(xì)胞分化為肌成纖維細(xì)胞7羊膜的作用機(jī)制羊膜移植的作用機(jī)制主要有5個(gè)方面75個(gè)方面的臨床效果加速上皮化維持正常上皮表型減輕炎癥反應(yīng)減輕血管化減少瘢痕形成等85個(gè)方面的臨床效果加速上皮化8人羊膜無(wú)HLA-A,B或DR抗原，故抗原性極低，移植至志愿者的皮下，其血液中也沒(méi)有找到相應(yīng)的抗體，幾乎不發(fā)生排斥反應(yīng)；人羊膜具有輕度非特異性抗病毒及抗細(xì)菌作用，與唇黏膜、鼻黏膜移植相比，移植后發(fā)生感染的風(fēng)險(xiǎn)較小人羊膜具有較強(qiáng)的抗粘連性，這對(duì)于嚴(yán)重OSD所引起的瞼球粘連和結(jié)膜穹隆縮窄十分以來(lái)。羊膜的特性9人羊膜無(wú)HLA-A,B或DR抗原，故抗原性極低，移植至志愿者羊膜手術(shù)適應(yīng)癥瞼球粘連、結(jié)膜囊缺失、翼狀胬肉、角膜潰瘍、化學(xué)灼傷和熱燒傷、燙傷、近視眼手術(shù)并發(fā)癥、干眼癥、眼表腫瘤、眼表多重手術(shù)損害、眼內(nèi)疤、先天性無(wú)虹膜、眼角炎、角膜白斑、青光眼手術(shù)、角膜新生血管、角膜病等。10羊膜手術(shù)適應(yīng)癥10眼表重建時(shí)完好的基底膜是非常重要的，而化學(xué)傷、熱燒傷的患者，其干細(xì)胞破壞的同時(shí)，多伴有基底膜的破壞，所以在羊膜移植重建的角膜基底膜的基礎(chǔ)上行角膜緣干細(xì)胞移植，會(huì)取得更好的眼表重建效果。刺激上皮增殖和分化：羊膜中含有各種蛋白成分，如層粘蛋白、纖維連接蛋白、型膠原纖維等，能刺激上皮的分化、增生，增強(qiáng)上皮細(xì)胞的黏附性，在上皮創(chuàng)傷愈合中起到重要作用清除炎癥：羊膜中含有各種蛋白酶，通過(guò)抑制相應(yīng)的蛋白酶而發(fā)揮其清除炎癥的作用；同時(shí)羊膜中抑制細(xì)胞因子表達(dá)和調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡的成分，可以避免炎細(xì)胞和細(xì)胞因子誘發(fā)的角膜基質(zhì)和膠原纖維的過(guò)度增生因此，在眼表重建時(shí)可以抑制局部炎癥，促進(jìn)表面愈合而不留瘢痕。臨床應(yīng)用的討論11眼表重建時(shí)完好的基底膜是非常重要的，而化學(xué)傷、熱燒傷的患者，

減輕角膜炎性反應(yīng)，促進(jìn)角膜上皮化，恢復(fù)正常的角膜上皮表型。研究證明：羊膜移植可以有效的治療持續(xù)性角膜上皮缺損，單純羊膜移植可以治療角膜緣干細(xì)胞的部分失代償，并提高干細(xì)胞的移植成功率。但羊膜促進(jìn)上皮化的機(jī)制尚不清楚，可能與羊膜中含有促上皮生長(zhǎng)因子。另外移植的羊膜可以作為干細(xì)胞的載體，加速上皮的移行。作為球結(jié)膜的替代物，人羊膜基底膜的Ⅳ型膠原結(jié)構(gòu)同球結(jié)膜極其相似，這就可能是羊膜移植在眼表重建中成功的原因。羊膜移植能提供一個(gè)健康的基質(zhì)及基底膜，便于結(jié)膜的上皮細(xì)胞分化、增殖并移行，達(dá)到重建結(jié)膜表面的效果。羊膜具有促進(jìn)結(jié)膜非杯狀細(xì)胞和杯狀細(xì)胞的增殖，抑制其創(chuàng)面的纖維細(xì)胞增生和新生血管形成及促進(jìn)炎癥細(xì)胞凋亡等生物學(xué)效應(yīng)。作為臨時(shí)的遮蓋物治療角膜炎：羊膜覆蓋可以治療活動(dòng)期病毒性角膜炎、細(xì)菌性角膜潰瘍主要是羊膜可以抑制IL-1β的表達(dá)，可以調(diào)理生物趨化因子和抑制多核白細(xì)胞溶解酶的活性，抵抗由此引起的角膜溶解。12減輕角膜炎性反應(yīng)，促進(jìn)角膜上皮化，恢復(fù)正常的角膜上皮表型減少瘢痕形成：羊膜可以快速抑制TGF-β的mRNA表達(dá)，而抑制纖維母細(xì)胞的形成，因此，羊膜移植在治療急性Stevens-Johnson綜合征和急性堿燒傷中的作用就不難理解。羊膜中含有抗新生血管化蛋白可以減少新生血管的形成，因此，羊膜移植在眼表重建中應(yīng)用十分廣泛。修補(bǔ)青光眼濾過(guò)泡破損、角膜穿孔、封閉淚小點(diǎn)及眼部整形等。治療翼狀胬肉:盡管翼狀胬肉的確切發(fā)病機(jī)制尚不明確，部分學(xué)者認(rèn)為它的發(fā)病與角膜緣干細(xì)胞缺乏有關(guān)。臨床上采取胬肉切除聯(lián)合自體角膜緣干細(xì)胞移植治療，取得較為理想的效果。13減少瘢痕形成：羊膜可以快速抑制TGF-β的mRNA表達(dá)，但對(duì)于復(fù)發(fā)性胬肉或缺乏相對(duì)正常自體干細(xì)胞的患者，許多學(xué)者試用羊膜移植治療翼狀胬肉，其術(shù)后復(fù)發(fā)率明顯低于單純切除組。這可能與羊膜本身沒(méi)有抗原性，不會(huì)誘發(fā)免疫反應(yīng)；同時(shí)羊膜能抑制炎性反應(yīng)，阻止新生血管長(zhǎng)入；羊膜有接觸抑制，本身可以阻止變性結(jié)膜組織生長(zhǎng)，防止胬肉復(fù)發(fā)。⑻解決屈光手術(shù)引起的角膜混濁(Haze)。多數(shù)人認(rèn)為角膜混濁的產(chǎn)生與激光手術(shù)產(chǎn)生的局部炎癥反應(yīng)及新生上皮產(chǎn)生的多種生長(zhǎng)因子引起前基質(zhì)細(xì)胞和膠原的異常增生有關(guān)，因此羊膜移植可以減輕手術(shù)區(qū)域的炎癥反應(yīng)及局部刺激因素，有望減輕角膜混濁。⑼作為體外細(xì)胞培養(yǎng)的載體：隨著角膜緣干細(xì)胞理論與實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)技術(shù)的發(fā)展羊膜作為沒(méi)有抗原性、有較好的生物相容性等，使其成為載體的最佳選擇，但有關(guān)這種上皮羊膜上培養(yǎng)后抗原性改變，移植上皮眼表的分化及功能的維持都需要雞長(zhǎng)時(shí)間的探討。14但對(duì)于復(fù)發(fā)性胬肉或缺乏相對(duì)正常自體干細(xì)胞的患者，許多學(xué)者試用目前羊膜存在的問(wèn)題無(wú)標(biāo)準(zhǔn)化產(chǎn)品無(wú)權(quán)威性的安全質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)潛在危險(xiǎn)：HIV、HBV、HCV、梅毒螺旋體等法律保障--醫(yī)患糾紛羊膜保存時(shí)間短，運(yùn)輸不方便，不能隨時(shí)滿足臨床要求15目前羊膜存在的問(wèn)題無(wú)標(biāo)準(zhǔn)化產(chǎn)品15瑞濟(jì)生物羊膜低溫冷凍干燥技術(shù)鈷60輻照滅菌技術(shù)羊膜細(xì)胞處于“休眠狀態(tài)”延長(zhǎng)其保存期

實(shí)現(xiàn)生物羊膜的產(chǎn)業(yè)化、標(biāo)準(zhǔn)化，解決生物羊膜制備的安全性和常溫保存、運(yùn)輸?shù)碾y題滿足臨床需要16瑞濟(jì)生物羊膜低溫冷凍干燥技術(shù)鈷60輻照滅菌技術(shù)羊膜細(xì)胞處于實(shí)羊膜冷凍干燥的概念盡可能的保存羊膜原有的生物學(xué)性能，使羊膜在冷凍的條件下進(jìn)行真空干燥。冷凍干燥羊膜的質(zhì)量要求保持羊膜原有的組織結(jié)構(gòu)、原有的基本化學(xué)組成、適用于臨床要求的組織韌性和生理pH值、含水量低適于常溫長(zhǎng)期保存。冷凍干燥的控制17羊膜冷凍干燥的概念冷凍干燥的控制17保護(hù)液處理后預(yù)凍抽真空水分升華凍干羊膜對(duì)溫度的控制壓力的控制溫度的控制時(shí)間的控制冷凍干燥工藝過(guò)程18保護(hù)液處理后預(yù)凍抽真空水分升華凍干羊膜對(duì)溫度的控制壓力的控１０萬(wàn)級(jí)凈化車間生產(chǎn)環(huán)境19１０萬(wàn)級(jí)凈化車間生產(chǎn)環(huán)境19羊膜來(lái)源的安全控制對(duì)妊娠第三個(gè)月的婦女進(jìn)行檢測(cè)，了解其家族史情況，對(duì)符合要求的健康者跟蹤服務(wù)。取羊膜第一步（初檢）已跟蹤孕婦在產(chǎn)前再次檢測(cè)，在其知情的情況下，剖腹產(chǎn)后取羊膜取羊膜第二步（復(fù)檢）確認(rèn)被采集的產(chǎn)婦在第三個(gè)月及產(chǎn)前各檢測(cè)結(jié)果均是陰性后，再將羊膜進(jìn)行加工制備。取羊膜第三步（核實(shí)）被采集產(chǎn)婦的詳細(xì)資料，每片羊膜有安全的來(lái)源。取羊膜第四步（備案）20羊膜來(lái)源的安全控制對(duì)妊娠第三個(gè)月的婦女進(jìn)行檢測(cè)，了解其家族史質(zhì)量保證輻照滅菌技術(shù)

國(guó)家藥監(jiān)局對(duì)輻照滅菌中針對(duì)HIV、HBV、HCV、梅毒等病毒殺滅的有效性進(jìn)行了反復(fù)放射學(xué)與病毒學(xué)專家論證，確認(rèn)了鈷６０輻照生物羊膜可以達(dá)到高水平的病毒安全性。21質(zhì)量保證輻照滅菌技術(shù)21鈷60輻照滅菌權(quán)威論證專家病毒學(xué)專家－軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院微生物流行病研究所消毒研究室主任、研究員中國(guó)消毒學(xué)雜志主編張文福醫(yī)學(xué)博士放射醫(yī)學(xué)和輻射化學(xué)專家－蘇州大學(xué)輻照研究所所長(zhǎng)朱南康教授病毒學(xué)專家－中國(guó)科學(xué)院武漢病毒所所長(zhǎng)胡志紅研究員病毒學(xué)專家－江西醫(yī)學(xué)院病毒學(xué)教研室主任鄭民實(shí)教授22鈷60輻照滅菌權(quán)威論證專家病毒學(xué)專家－軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院微生物流質(zhì)量保證瑞濟(jì)羊膜理化性能檢測(cè)：

外觀：清潔、透明、無(wú)雜質(zhì)、無(wú)破損水份：水份＜10%縫合拉力：應(yīng)不小于1.0g，5分鐘酸堿度測(cè)定：羊膜浸出液與同批空白對(duì)照液之間，PH值之差不超過(guò)1.523質(zhì)量保證瑞濟(jì)羊膜理化性能檢測(cè)：23瑞濟(jì)冷凍干燥生物羊膜--與新鮮羊膜的比較24瑞濟(jì)冷凍干燥生物羊膜--與新鮮羊膜的比較24新鮮羊膜冷凍干燥羊膜冷凍干燥羊膜與新鮮羊膜的各層組織結(jié)構(gòu)相同生物羊膜組織的透射電鏡檢測(cè)25新鮮羊膜冷凍干燥羊膜冷凍干燥羊膜與新鮮羊膜的各層組織結(jié)構(gòu)相同生物羊膜組織的掃描電鏡檢測(cè)新鮮羊膜冷凍干燥羊膜冷凍干燥羊膜與新鮮羊膜均保存了上皮細(xì)胞層

上皮細(xì)胞上皮細(xì)胞26生物羊膜組織的掃描電鏡檢測(cè)新鮮羊膜冷凍干燥羊膜冷凍干燥羊膜與生物羊膜組織化學(xué)的檢測(cè)（免疫組化試驗(yàn)）

膠原Ⅳ:ZyMed公司、鼠抗人單克隆抗體

冷凍干燥羊膜與新鮮羊膜相比較，組織結(jié)構(gòu)沒(méi)有發(fā)生明顯變化新鮮羊膜冷凍干燥羊膜膠原層膠原層上皮細(xì)胞上皮細(xì)胞27生物羊膜組織化學(xué)的檢測(cè)（免疫組化試驗(yàn)）膠原Ⅳ:ZyMed公臨床試驗(yàn)A組用新鮮羊膜B組用瑞濟(jì)冷凍干燥輻照羊膜28臨床試驗(yàn)28臨床試驗(yàn)

病種A組B組合計(jì)復(fù)發(fā)翼狀胬肉383674

眼表燒傷11617

青光眼156

瞼球粘連459Stevens-Johnson綜合征112

角膜潰瘍5813

合計(jì)6061121病種分布情況29臨床試驗(yàn)病種A組臨床試驗(yàn)臨床試驗(yàn)結(jié)果組別顯效有效無(wú)效合計(jì)

A1440660B1939361合計(jì)33799121統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)果：校正卡方檢驗(yàn)，Ｘ２＝188.012，Ｐ>0.0530臨床試驗(yàn)臨床試驗(yàn)結(jié)果組別顯效有效新鮮羊膜與冷凍干燥羊膜的比較對(duì)比項(xiàng)目新鮮剝制羊膜冷凍干燥羊膜質(zhì)量保障