微生物的分離純化-課件

模塊2微生物的純培養(yǎng)技術(shù)2微生物的分離純化模塊2微生物的純培養(yǎng)技術(shù)2微生物的分離純化1在自然界中，微生物呈混合狀態(tài)存在，要想獲得所需菌種，則必須把它們從中分離出來(lái)并加以純化培養(yǎng)。分離：將特定的微生物個(gè)體從群體中或從混雜的微生物群體中分離出來(lái)的技術(shù)叫作分離。純化：在特定環(huán)境中只讓1種來(lái)自同一祖先的微生物群體生存的技術(shù)叫作純化。概念在自然界中，微生物呈混合狀態(tài)存在，要想獲得所需菌種，則必須把2分離技術(shù)主要是稀釋和選擇培養(yǎng)。稀釋?zhuān)菏窃谝后w中或在固體表面上高度稀釋微生物群體，使單位體積或單位面積僅存留一個(gè)單細(xì)胞，并使此單細(xì)胞增殖為一個(gè)新的群體。最常用的為平板劃線法和稀釋涂布法。選擇培養(yǎng)：如果所要分離的微生物在混雜的微生物群體中數(shù)量極少或者增殖過(guò)慢而難以稀釋分離時(shí)，需要結(jié)合使用選擇培養(yǎng)法，即選用僅適合于所要分離的微生物生長(zhǎng)繁殖的特殊培養(yǎng)條件來(lái)培養(yǎng)混雜菌體，改變?nèi)后w中各類(lèi)微生物的比例，以達(dá)到分離的目的。概念分離技術(shù)主要是稀釋和選擇培養(yǎng)。概念3實(shí)驗(yàn)操作（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基稱(chēng)量溶化滅菌倒平板計(jì)算（二）接種純化大腸桿菌實(shí)驗(yàn)操作（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基稱(chēng)量溶化滅菌倒平板計(jì)4實(shí)驗(yàn)操作（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基稱(chēng)量溶化滅菌倒平板接種方法有：計(jì)算（二）接種純化大腸桿菌實(shí)驗(yàn)操作（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基稱(chēng)量溶化滅菌倒平板接5實(shí)驗(yàn)操作（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基稱(chēng)量溶化滅菌倒平板接種方法有：平板劃線法和稀釋涂布平板法計(jì)算（二）接種純化大腸桿菌實(shí)驗(yàn)操作（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基稱(chēng)量溶化滅菌倒平板接6稀釋平板分離法：將待分離樣品做系列稀釋?zhuān)箻悠分械奈⑸锛?xì)胞充分分散。取合適稀釋度的樣品與培養(yǎng)基混合，培養(yǎng)出現(xiàn)菌落。如稀釋度適合在培養(yǎng)基平板上即可出現(xiàn)的單個(gè)菌落。平板劃線分離法：用無(wú)菌接種環(huán)挑取待分離材料，在平板培養(yǎng)基表面劃線稀釋而獲得單菌落的方法。實(shí)驗(yàn)原理稀釋平板分離法：實(shí)驗(yàn)原理7細(xì)菌的接種工具接種針接種環(huán)涂布器細(xì)菌的接種工具接種針接種環(huán)涂布器81.平板劃線接種法：目的：使混合的細(xì)菌呈單個(gè)分散生長(zhǎng)，形成單個(gè)菌落，以獲得純菌。方法

分區(qū)劃線法：適用于含菌量較多的標(biāo)本

連續(xù)劃線法：適用于含菌量較少的標(biāo)本1.平板劃線接種法：9菌落當(dāng)單個(gè)或少數(shù)細(xì)菌在固體培養(yǎng)基上大量繁殖時(shí)，便會(huì)形成一個(gè)肉眼可見(jiàn)的、具有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞群體，叫做菌落。菌落當(dāng)單個(gè)或少數(shù)細(xì)菌在固體培養(yǎng)基上大量繁殖時(shí)，便會(huì)形成一個(gè)肉10微生物的分離純化-課件11微生物的分離純化-課件12分區(qū)劃線生長(zhǎng)現(xiàn)象分區(qū)劃線生長(zhǎng)現(xiàn)象13連續(xù)劃線生長(zhǎng)現(xiàn)象連續(xù)劃線生長(zhǎng)現(xiàn)象141.平板劃線法1.平板劃線法15微生物的分離純化-課件16微生物的分離純化-課件17討論每次使用接種環(huán)之前都要進(jìn)行灼燒，為什么？討論每次使用接種環(huán)之前都要進(jìn)行灼燒，為什么？18討論1.操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時(shí)，接種環(huán)上的菌種直接來(lái)源于上次劃線的末端，從而通過(guò)劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時(shí)菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落。劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能及時(shí)殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。討論1.操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上19討論2.以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。討論2.以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。20討論2.以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。3.劃線后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開(kāi)始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來(lái)的菌落。討論2.以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。3.劃線后，線條末212.稀釋涂布法2.稀釋涂布法222.稀釋涂布法（1）系列稀釋操作：2.稀釋涂布法（1）系列稀釋操作：232.稀釋涂布法（1）系列稀釋操作：依次1mL，注意更換移液管充分混勻2.稀釋涂布法（1）系列稀釋操作：依次1mL，注意更換移液管24（2）涂布平板操作（2）涂布平板操作25系列稀釋1個(gè)225mL無(wú)菌水2個(gè)9ml無(wú)菌水得10-125g或25mL樣品10-2,10-3的菌懸液1ml稀釋涂布平板法系列稀釋1個(gè)225mL無(wú)菌水2個(gè)9ml無(wú)菌水262.稀釋涂布法倒平板，待平板冷卻凝固后再加樣2.稀釋涂布法倒平板，待平板冷卻凝固后再加樣27取菌懸液2.稀釋涂布法取菌懸液2.稀釋涂布法28將菌液均勻涂