中藥制劑的鑒別

第三章中藥制劑的鑒別熟悉性狀鑒別的內(nèi)容目的要求熟悉顯微鑒別的內(nèi)容熟悉理化鑒別的方法掌握理化鑒別中薄層色譜法定義中藥制劑的鑒別是根據(jù)中藥制劑的性狀、組方中各單味藥材的組織學(xué)特征及所含化學(xué)物質(zhì)的結(jié)構(gòu)特性，采用合適的分析方法來(lái)判斷該制劑的真?zhèn)巍Ｐ誀铊b別顯微鑒別理化鑒別內(nèi)容互相補(bǔ)充性狀與投料的原料質(zhì)量及工藝有關(guān)初步反映中藥制劑質(zhì)量狀況性狀鑒別中藥制劑的性狀是指除去包裝后的性狀，包括大小、色澤、表面特征、質(zhì)地、氣味等方面。顏色：與所含成分、制備工藝有關(guān)。內(nèi)容片劑、丸劑要觀察除去包衣后的顏色硬膠囊要觀察內(nèi)容物顏色復(fù)方制劑要考慮到儲(chǔ)藏期顏色變化形態(tài)：不同劑型，形態(tài)不一，固體、液體、半流體等。形狀：與設(shè)備模具有關(guān)（栓劑）氣：由嗅覺(jué)感應(yīng)的中藥制劑特征信息。嗅覺(jué)感應(yīng)不明顯用氣微香氣濃厚時(shí)用芳香濃郁特異清香腥臭芳香甜、酸、苦、澀、辛、涼、咸、辣、麻等味：由味覺(jué)感應(yīng)的中藥制劑特征信息。黃連：味極苦甘草：味甘1.制劑的性狀指成品的顏色、形態(tài)、氣味等2.有包衣的丸劑、片劑應(yīng)描述除去包衣后的片心、丸心的顏色及氣味3.硬膠囊應(yīng)寫(xiě)明除去膠囊后內(nèi)容物的性狀4.制劑色澤有兩種色調(diào)組合，描寫(xiě)時(shí)以后者為主，如棕紅色注意各種劑型的性狀描述丸劑各種劑型的性狀描述顆粒劑各種劑型的性狀描述片劑各種劑型的性狀描述錠劑各種劑型的性狀描述煎膏劑各種劑型的性狀描述膠劑各種劑型的性狀描述糖漿劑各種劑型的性狀描述合劑各種劑型的性狀描述滴丸劑各種劑型的性狀描述膠囊劑各種劑型的性狀描述茶劑各種劑型的性狀描述散劑各種劑型的性狀描述酒劑各種劑型的性狀描述酊劑各種劑型的性狀描述流浸膏劑與浸膏劑各種劑型的性狀描述膏藥各種劑型的性狀描述橡膠膏劑各種劑型的性狀描述軟膏劑各種劑型的性狀描述栓劑各種劑型的性狀描述注射劑物理常數(shù)測(cè)定部分品種規(guī)定物理常數(shù)相對(duì)密度、餾程、熔點(diǎn)、凝點(diǎn)、旋光度、折光率

中藥種類(lèi)繁多,品種復(fù)雜。中成藥而言，包括“丸、散、膏、丹、片”等多種劑型，僅靠傳統(tǒng)的性狀鑒定方法不能識(shí)別出其中的方藥組成和藥材的真?zhèn)巍Ｍ枭⒏嗟?、神仙難辨性狀鑒別的局限性定義

利用顯微鏡來(lái)觀察中藥制劑中原料藥材的組織碎片、細(xì)胞或內(nèi)含物等特征，從而鑒別制劑的處方組成。

顯微鑒別大黃草酸鈣簇晶棱角短鈍發(fā)展

我國(guó)著名生藥學(xué)家徐國(guó)鈞教授，開(kāi)創(chuàng)了中藥制劑顯微鑒定，從實(shí)際上解決了中藥材粉末和含有中藥原粉的中成藥制劑的真?zhèn)舞b定問(wèn)題。在我國(guó)歷版藥典中均有很大部分的中成藥采用顯微方法鑒定。

以藥材粉碎成細(xì)粉后直接制成制劑或添加有部分藥材粉末的制劑，原藥材的顯微特征仍保留。使用范圍牛黃解毒片：大黃用草酸鈣簇晶做為鑒別特征顯微鑒定，制作良好的切片或標(biāo)準(zhǔn)片是關(guān)鍵。把切片或粉末標(biāo)準(zhǔn)片用適當(dāng)?shù)脑囈哼M(jìn)行處理和封藏，試液的選擇必須具有合理性。制片方法載玻片蓋玻片1.水或稀甘油：細(xì)胞壁顏色及淀粉粒、油滴、樹(shù)脂2.水合氯醛：組織構(gòu)造和細(xì)胞形狀及葉片、花和花粉粒，尤其適于觀察草酸鈣結(jié)晶3.5%氫氧化鉀液：可溶解糊粉粒、淀粉粒及蛋白質(zhì)，使細(xì)胞壁膨脹，從而增強(qiáng)透明度4.氯化堿液：試劑可漂白切片及除去葉綠素5.1:1乙醚乙醇液：用于脫去種子類(lèi)藥材切片中的脂類(lèi)及揮發(fā)油類(lèi)成分

試液的選擇不同劑型的制片方法粉末+載玻片+適當(dāng)?shù)脑囈?蓋玻片顯微觀察散劑、膠囊劑：取少量藥品粉末裝片片劑：正中切開(kāi)，由切開(kāi)面由外至內(nèi)刮取少量樣品丸劑、顆粒劑：研成粉末，裝片蜜丸：正中切開(kāi)，由切開(kāi)面由外至內(nèi)刮取少量樣品，除蜜，裝片5%氫氧化鉀液適量蜜丸+試管中+5%氫氧化鉀液加熱至玻璃棒擠壓能離散為止，傾出堿液+水洗滌，取出少量+試液處理觀察蜜丸除蜜方法硝鉻酸法適量蜜丸+試管中+硝鉻酸液放置玻璃棒擠壓能離散為止，傾出酸液+水洗滌，取出少量+試液處理觀察適量蜜丸+試管中+硝酸溶液及氯酸鉀少量緩緩加熱至產(chǎn)生的氣泡漸少時(shí)+氯酸鉀少量玻璃棒擠壓能離散為止，傾出酸液+水洗滌，取出少量+試液處理觀察氯酸鉀法：離心分離法：蜜丸切碎+水洗滌離心管中離心分離沉淀（多次）取出少量+試液處理觀察局限性1.藥材粉末特征間的交叉干擾。2.經(jīng)過(guò)提取的藥材，其化學(xué)成分已被浸出，但仍然保持著原來(lái)的細(xì)胞形態(tài)特征，所以?xún)H通過(guò)顯微觀察不能完全解決內(nèi)在的質(zhì)量問(wèn)題。3.一種藥材具有多種植物來(lái)源，通常粉末的特征各不相同4.藥材在處方中所占的比例小(如貴重藥、毒劇藥)專(zhuān)屬性特征出現(xiàn)的幾率更??；有的粉末粒度過(guò)細(xì)(如水飛法制得的礦物藥粉末)，使特征變得不明顯。

定義利用物理的、化學(xué)的或物理化學(xué)的方法對(duì)制劑中所含的化學(xué)成分進(jìn)行定性鑒別，從而判斷制劑的真?zhèn)巍７椒ɑ瘜W(xué)反應(yīng)法升華法熒光法光譜法

色譜法理化鑒別

一般化學(xué)反應(yīng)法

中藥制劑化學(xué)成分的性質(zhì)+合適的提取溶劑提取待檢測(cè)成分排除其他成分干擾

一般化學(xué)反應(yīng)法——注意事項(xiàng)

1.避免附加成分的干擾：如注射劑、顆粒劑及糖漿劑2.慎重使用專(zhuān)屬性不好的分析反應(yīng)：如泡沫反應(yīng)、三氯化鐵顯色反應(yīng)3.對(duì)樣品進(jìn)行分離、精制：除去干擾分析反應(yīng)的物質(zhì)，借此改善鑒別方法的專(zhuān)屬性4.采用陰性及陽(yáng)性對(duì)照方式，對(duì)擬定的鑒別方法進(jìn)行反復(fù)驗(yàn)證：防止出現(xiàn)假陽(yáng)性

一般化學(xué)反應(yīng)法——例

牛黃解毒片中大黃、黃芩的定性鑒別反應(yīng)取本品6片(包衣者除去包衣)，研細(xì)，加乙醇1Oml，溫?zé)?0分鐘，過(guò)濾，濾液作如下反應(yīng)(1)取濾液5ml，加鎂粉少量與鹽酸0.5ml，加熱，即顯紅色。(2)另取濾液4ml，加氫氧化鈉試液，即顯紅色，再加30%過(guò)氧化氫溶液，加熱，紅色不消失，加酸或酸性時(shí)，則紅色變?yōu)辄S色。升華法

定義：將具有升華性質(zhì)的成分，在一定的溫度下從制劑中分離出來(lái)，并以升華物所具有的某些理化性質(zhì)作為制劑鑒定的依據(jù)。制劑中若有2種以上的藥味都含有升華物，升華的溫度不同，可控制加熱的溫度分段收集升華物，分別進(jìn)行鑒定。升華法操作方法：取金屬片安放在有圓孔(直徑約2cm)的石棉板上，在金屬片上放一小金屬圈(內(nèi)徑約1.5cm，高約0.8cm)，對(duì)準(zhǔn)石棉板上的圓孔，圈內(nèi)放入預(yù)先研細(xì)成粉末的中藥制劑一薄層，圈上覆蓋載玻片，在石棉板下圓孔處用酒精燈緩緩加熱，至粉末開(kāi)始變焦，去火待冷，載玻片上有升華物凝集。將載玻片反轉(zhuǎn)后，置顯微鏡下觀察結(jié)晶形狀、色澤，或取升華物加試液觀察反應(yīng)。升華法——例

牛黃解毒丸微量升華鑒別

取本品進(jìn)行微量升華，先得白色升華物后，繼得黃色升華物。將升華物分別置顯微鏡下光譜法熒光法可見(jiàn)－紫外分光光度法紅外分光光度法光譜法——熒光法有些中藥材中含有能產(chǎn)生熒光的化學(xué)成分：在可見(jiàn)光or紫外光照射下發(fā)出熒光，有的須經(jīng)試劑處理后發(fā)出熒光含有這類(lèi)藥材的中藥制劑:熒光法鑒別操作方法:取制劑的提取液點(diǎn)在濾紙上或試紙上，置紫外光燈下(365nmor254nm)觀察，有時(shí)則是加一定的試劑后再進(jìn)行觀察。光譜法——熒光法

例：板藍(lán)根沖劑的熒光鑒別取本品0.5g，加水5ml使溶解，靜置，取上清液點(diǎn)于濾紙上，晾干，置紫外光燈(365nm)下觀察，顯藍(lán)紫色。光譜法——可見(jiàn)－紫外分光光度法中藥材有些化學(xué)成分在可見(jiàn)紫外光區(qū)有選擇性吸收，顯示特征吸收光譜。不同的藥材所含的成分不同，在一定條件下吸收光譜的特征可用于鑒別藥材，因此該法也可用于中藥制劑的鑒別。

光譜法——可見(jiàn)－紫外分光光度法中藥制劑成分復(fù)雜，具吸收的加和性，樣品不純化，所得光譜為混合光譜，專(zhuān)屬性差。樣品純化后測(cè)定吸收光譜，常見(jiàn)方法：1.規(guī)定吸收波長(zhǎng)法2.對(duì)照品對(duì)比法3.規(guī)定吸收波長(zhǎng)和吸收度法4.規(guī)定吸收波長(zhǎng)和吸收度比值法5.多溶劑光譜法光譜法——可見(jiàn)－紫外分光光度法1.規(guī)定吸收波長(zhǎng)法：樣品經(jīng)適當(dāng)處理后，測(cè)定吸收光譜，在一定波長(zhǎng)處有最大吸收。如復(fù)方丹參滴丸中丹參的鑒別：取本品15丸，研細(xì)，分次加水少量，攪拌、濾過(guò)、濾液移至1OOml量瓶中，并加水至刻度，取溶液2ml，加水至25ml，照分光光度法測(cè)定，在283nm的波長(zhǎng)處有最大吸收。

復(fù)方丹參片紫外光譜圖283nm光譜法——可見(jiàn)－紫外分光光度法2.對(duì)照品對(duì)比法：取對(duì)照品或?qū)φ账幉募肮┰嚻方?jīng)處理后，制成對(duì)照品及供試品溶液，分別測(cè)定吸收光譜，比較二者吸收光譜的一致性。

光譜法——可見(jiàn)－紫外分光光度法2.對(duì)照品對(duì)比法例：大山馇丸的紫外光譜鑒定供試液的制備：取大楂丸2g，加水30ml，研磨均勻，濾過(guò)，濾液加水至30ml，備用。山楂對(duì)照液的制備：取山楂對(duì)照藥材粉末1g，加水浸漬1小時(shí)，濾過(guò)，濾液備用。紫外光譜的測(cè)定：分別取供試液、對(duì)照液各1ml，加水稀釋至適當(dāng)濃度，以水作空白，置1cm石英吸收池中，于200～400nm范圍內(nèi)測(cè)定紫外吸收光譜。樣品與對(duì)照品在280±2nm處皆有最大吸收，在254±4nm處皆有最小吸收。

光譜法——可見(jiàn)－紫外分光光度法3.規(guī)定吸收波長(zhǎng)和吸收度法：取樣品經(jīng)處理后，測(cè)定吸收光譜，在吸收光譜的規(guī)定波長(zhǎng)下，應(yīng)有若干個(gè)吸收峰，并有相應(yīng)的吸收度值。

光譜法——可見(jiàn)－紫外分光光度法4.規(guī)定吸收波長(zhǎng)和吸收度比值法：樣品在一定波長(zhǎng)下應(yīng)產(chǎn)生相應(yīng)的吸收峰，并且吸收度與對(duì)照峰吸收度比值應(yīng)在一定的范圍至內(nèi)。需有對(duì)照品或參照物。

光譜法——紅外分光光度法廣泛用于合成藥的鑒別于中藥制劑的鑒別還存在不少困難：成分復(fù)雜，組分吸收峰疊加，專(zhuān)屬性重現(xiàn)性不理想方法：固體供試品采用溴化鉀壓片法液體供試品采用夾片法

光譜法——紅外分光光度法對(duì)于中藥材的真?zhèn)舞b別及摻雜檢查可提供有價(jià)值的信息主要成分的質(zhì)和量大致相同，而且基本恒定，所得紅外光譜也呈現(xiàn)很好的相似性，可重復(fù)，因而可作真?zhèn)舞b別依據(jù)：I不太復(fù)雜的混合體系，圖譜有特征性II統(tǒng)一分離提取方法，圖譜特征強(qiáng)重復(fù)性好

光譜法——紅外分光光度法對(duì)于中藥材的真?zhèn)舞b別及摻雜檢查可提供有價(jià)值的信息例1：用紅外光譜法對(duì)不同產(chǎn)地的珍珠、蟾蜍、蛤蟆油、冬蟲(chóng)夏草和五靈脂等中藥進(jìn)行真?zhèn)蝺?yōu)劣鑒別，結(jié)果表明，同一品種不同產(chǎn)地的樣品，其紅外光譜的一致性很好，重現(xiàn)性也好

光譜法——紅外分光光度法對(duì)于中藥材的真?zhèn)舞b別及摻雜檢查可提供有價(jià)值的信息例2：對(duì)冬蟲(chóng)夏草及其偽品地蠶、五靈脂及其偽品泯靈脂、熊膽及其偽品黃柏浸膏加糖、麝香和摻假麝香等進(jìn)行紅外光譜鑒別，正品與偽品的光譜有明顯不同中藥制劑的鑒別理化鑒別光譜法——紅外分光光度法對(duì)于中藥材的真?zhèn)舞b別及摻雜檢查可提供有價(jià)值的信息例3：熊膽、牛膽、豬膽的紅外圖譜比較

在特征區(qū)和指紋區(qū)三者則有明顯的差別光譜法——紅外分光光度法對(duì)于中藥材的真?zhèn)舞b別及摻雜檢查可提供有價(jià)值的信息例3：夏天無(wú)與延胡索

夏天無(wú)提取物與延胡索提取物的紅外光譜圖色譜法紙色譜

TLC法GC法HPLC法

色譜法—紙色譜法

載體：紙固定相：紙上所含水分或其他物質(zhì)展開(kāi)劑供試品、對(duì)照品、對(duì)照藥材

色譜法—紙色譜法

例：化癓回生片中益母草的紙色譜定性鑒別供試品溶液的制備：取本片20片，研細(xì)，加80%乙醇5Oml，加流回流1小時(shí)，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)?%鹽酸溶液5ml使溶解，濾過(guò)，濾液滴加碳酸鈉試液調(diào)節(jié)PH至8.0，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)右掖?ml使溶解，作為供試品溶液。益母草對(duì)照藥材溶液的制備：按供試品制備方法。點(diǎn)樣量：2Oμl；薄層扳：層析濾紙展開(kāi)劑：正丁醇-醋酸-水(4：1：1)；顯色：噴以稀碘化鉍鉀試液結(jié)果鑒定：供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的條斑色譜法—TLC法定義：將適宜的吸附劑或載體涂布于玻璃板、塑料或鋁基片上，成一均勻薄層。待點(diǎn)樣、展開(kāi)后，與適宜的對(duì)照物按同法在同板上所得的色譜圖對(duì)比，并可用薄層掃描儀掃描，用于中藥制劑的鑒定供試品溶液的制備

薄層板的制備點(diǎn)樣展開(kāi)顯色與檢視

色譜法—TLC法操作步驟色譜法—TLC法

供試品溶液的制備：

單一溶劑萃取法：采用單一溶劑萃取出樣品中待測(cè)成分，舍棄其他成分色譜法—TLC法

供試品溶液的制備：

分段萃取法液－液萃取法固－液萃取法TLC法使用的材料：色譜法—TLC法

薄層板涂布器點(diǎn)樣器材層析缸顯色與檢測(cè)儀器TLC法使用的材料—薄層板

手工自制板：玻璃：1～2mm優(yōu)質(zhì)平板玻璃光潔、平整洗凈至不掛水珠，晾干

預(yù)制板：普通薄層板和高效薄層板色譜法—TLC法

TLC法使用的材料—薄層板

載體：硅膠G（石膏作粘合劑）

硅膠GF254（熒光劑）硅膠H硅膠HF254（熒光劑）聚酰胺薄膜（含有酚羥基的化合物，特別是黃酮）色譜法—TLC法

粘合劑：羧甲級(jí)纖維素鈉水溶液（0.2％～0.5％）C18鍵合相；氨基鍵合相薄層板氰基鍵合相；二醇基鍵合相薄層板操作方法—薄層板的制備

市售薄層板：臨用前，110℃活化30min

聚酰胺薄膜不用活化

自制薄層板1份固定相+3份水（or含粘合劑的水溶液），在研缽中向同一方向研磨混勻，驅(qū)除氣泡，鋪板（0.2～0.3mm).置水平臺(tái)上室溫晾干，110℃活化30min，置有干燥劑的干燥箱中備用。使用前檢驗(yàn)均勻度、麻點(diǎn)、氣泡、有無(wú)污染色譜法—TLC法TLC法使用的材料—涂布器手工、半自動(dòng)、全自動(dòng)固定厚度或可調(diào)節(jié)厚度色譜法—TLC法

TLC法使用的材料—點(diǎn)樣器材定量點(diǎn)樣毛細(xì)管：0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、10μl微量注射器（針尖平頭）半自動(dòng)、自動(dòng)點(diǎn)樣器

色譜法—TLC法操作方法—點(diǎn)樣方法：垂直方向，成圓點(diǎn)狀or窄細(xì)的條帶狀（增大上樣量）注意：點(diǎn)樣時(shí)勿損傷薄層表面操作方法—展開(kāi)

展開(kāi)劑的制備：新鮮配制展開(kāi)：點(diǎn)樣后的薄層板放入加有展開(kāi)劑的層析缸中，密閉，一般上行展開(kāi)，薄層板浸入展開(kāi)劑深度一般要求溶劑最初的前沿距原點(diǎn)約5mm，展開(kāi)至規(guī)定展距后立即將薄層板取出，晾干，以備檢測(cè)。展距：一般8～15cm，高效板5～8cm色譜法—TLC法操作方法—展開(kāi)

特殊情況處理若需要展開(kāi)劑或其他溶劑的蒸汽平衡者可在雙槽展開(kāi)箱的一側(cè)加適量的溶劑若需達(dá)到飽和狀態(tài)，可在展開(kāi)箱內(nèi)壁貼一被溶劑濕潤(rùn)的濾紙使展開(kāi)箱易于被蒸汽平衡

若薄層板需同時(shí)預(yù)平衡者，應(yīng)將薄層板放入箱內(nèi)沒(méi)有溶劑的一側(cè)槽中，平衡后再將溶劑傾入此槽中展開(kāi)TLC法使用的材料—顯色與檢測(cè)儀器色譜法—TLC法TLC法使用的材料—顯色與檢測(cè)儀器色譜法—TLC法記錄照相掃描圖譜描畫(huà)色譜法—TLC法1.樣品的預(yù)處理及供試液的制備2.薄層色譜的點(diǎn)樣技術(shù)3.吸附劑的活性與相對(duì)濕度的影響4.空氣溫度、濕度的影響色譜法—TLC法主要影響因素1.

樣品的預(yù)處理及供試液的制備：制備樣品供試液的溶劑要求，溶解度不宜太大，粘度不易太高，沸點(diǎn)適中供試液凈化處理相當(dāng)重要溶解樣品溶劑沸點(diǎn)不宜太高（如正丁醇）or太低（如乙醚）

色譜法—TLC法2.薄層色譜的點(diǎn)樣技術(shù)：

點(diǎn)樣量不宜過(guò)大，最好控制在10μl以下不要破壞薄層板

色譜法—TLC法3.吸附劑的活性與相對(duì)適度的影響

吸附劑的活性取決于實(shí)驗(yàn)室環(huán)境的相對(duì)濕度控制展開(kāi)時(shí)的相對(duì)濕度：在雙槽展開(kāi)箱的一側(cè)用一定濃度的硫酸溶液，密閉放置一定時(shí)間，再加入展開(kāi)劑于另一側(cè)展開(kāi)將點(diǎn)樣后的薄層板放入內(nèi)有一定濃度的硫酸溶液或其他調(diào)節(jié)相對(duì)濕度的無(wú)機(jī)鹽水溶液的容器中，密閉放置一定時(shí)間后，取出，立即在箱中展開(kāi)記錄試驗(yàn)濕度色譜法—TLC法對(duì)照物選擇

對(duì)照品對(duì)照陰陽(yáng)對(duì)照對(duì)照藥材和對(duì)照品同時(shí)對(duì)照色譜法—TLC法對(duì)照物選擇色譜法—TLC法