高效液相色譜法中國(guó)藥品檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范2010年版

規(guī)定的流動(dòng)相泵入裝有填充劑的色譜柱,對(duì)供的供試品,由流動(dòng)相帶入柱內(nèi),各組分在柱內(nèi)被分離所用的儀器為高效液相色譜儀,由輸液泵、據(jù)處理系統(tǒng)組成,儀器應(yīng)按現(xiàn)行國(guó)家技術(shù)監(jiān)督局“性填充劑,以十八烷基鍵合硅膠最為常用,辛基硅硅膠(如氰基鍵合硅烷和氨基鍵合硅烷等)也有使用。正相度、含碳量和鍵合類型等)以及色譜柱的填充,直接影度的鍵合硅膠填充劑、包覆聚合物填充劑、有機(jī)-無(wú)機(jī)雜化生空間位阻保護(hù)作用的二異丙基或二異丁基取代十八烷基硅烷鍵合硅膠填充劑,或用低波長(zhǎng)檢測(cè)時(shí),還應(yīng)考慮有機(jī)相中有機(jī)溶劑時(shí),首選乙腈-水系統(tǒng)),如經(jīng)使用不適合時(shí),再選用其他有緩沖液的流動(dòng)性,必須使用時(shí),應(yīng)盡可能選用含較低其余如色譜柱內(nèi)徑、長(zhǎng)度、載體粒度、流動(dòng)溫、進(jìn)樣量、檢測(cè)器的靈敏度等,均可適當(dāng)改變適用性試驗(yàn)溶液在規(guī)定的色譜系統(tǒng)進(jìn)行試驗(yàn),必要時(shí),可對(duì)色譜系統(tǒng)進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整,柱上的色譜行為不同,采用理論板數(shù)作為衡量柱效能的指標(biāo)時(shí),應(yīng)指明測(cè)定物質(zhì),一在規(guī)定的色譜條件下,注入供試品溶液或各品種項(xiàng)度,是衡量色譜系統(tǒng)效能的關(guān)鍵指標(biāo)?？梢酝ㄟ^(guò)測(cè)定待測(cè)也可以通過(guò)測(cè)定待測(cè)組分與某一添加的指標(biāo)性成分(內(nèi)標(biāo)對(duì)照峰之間有較好的分離度。除另有規(guī)定外,待測(cè)組分2.3重復(fù)性用于評(píng)價(jià)連續(xù)進(jìn)樣后,色譜系統(tǒng)響應(yīng)值的重復(fù)性能。采用外標(biāo)法時(shí),2.4拖尾因子(T)用于評(píng)價(jià)色譜峰的對(duì)按各品種項(xiàng)下的規(guī)定,精密稱(量)取對(duì)照品再取各品種項(xiàng)下含有內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的供試品溶液測(cè)定雜質(zhì)含量時(shí),可采用加校正因子的主成各品種項(xiàng)下的規(guī)定,精密稱(量)取雜質(zhì)對(duì)照品溶液校正因子可直接載入各品種項(xiàng)下,用于校正雜質(zhì)測(cè)定雜質(zhì)含量時(shí),按各品種項(xiàng)下規(guī)定的雜質(zhì)樣量(以柱子不過(guò)載為限),使對(duì)照溶液的主成測(cè)定雜質(zhì)含量時(shí),若沒(méi)有雜質(zhì)對(duì)照品,也可測(cè)量供試品色譜圖上各雜質(zhì)的峰面積并與對(duì)照溶若供試品所含的部分雜質(zhì)未與溶劑峰完全分色譜圖Ⅰ,再記錄等體積純?nèi)莘e的色譜圖Ⅱ用于雜質(zhì)檢查時(shí),由于峰面積歸一化法測(cè)定誤4.1流動(dòng)性的制備與保存用高純度的試劑配制流動(dòng)相在系統(tǒng)內(nèi)逸出氣泡,影響泵的工作、色譜柱的分離流動(dòng)相一般貯存于玻璃、聚四氟乙烯容器內(nèi)有機(jī)溶劑如甲醇、乙腈等可浸出塑料表面的增塑劑4.2溶液的配制與保存除另有規(guī)定外,采用規(guī)定溶液,定量測(cè)定時(shí),對(duì)照品溶液和供試品溶液均產(chǎn)生污染或影響色譜分離。應(yīng)根據(jù)試驗(yàn)要求和供試品的相流路的方向與色譜柱標(biāo)簽上箭頭所示方向一致用,否則會(huì)導(dǎo)致色譜柱柱效明顯降低,無(wú)法恢復(fù)液(50%)沖洗,最后用高濃度的甲醇/乙腈-水溶液(804.4流動(dòng)相的調(diào)整為滿足色譜系統(tǒng)名適用性要求,積分儀,由于記錄儀的滿量程是固定的,因此檢測(cè)的滿刻度是可調(diào)的,所以通常是調(diào)節(jié)滿刻度的設(shè)定值的取舍限值,或沒(méi)有設(shè)定靈敏度測(cè)試溶液,則在實(shí)際檢驗(yàn)設(shè)定積分參數(shù)和最小峰面積,由此也出現(xiàn)了同批樣品的后,采用對(duì)照溶液逐步稀釋法配制系列溶液來(lái)確4.6梯度洗脫梯度洗脫所用的溶劑純度要求更高