全國流行性腦脊髓膜炎防治指南試行

附件：全國流行性腦脊髓膜炎防治指南（試行）（Neseras，）通過呼吸道傳播所引起的化膿性腦膜炎，常在冬病。根據(jù)Nm群特異性抗原膜不般將Nm分為13個(gè)血清群，其以A、、C三群常見行的90%以染Nm主及，管Nm界。我國曾于19381949年1991967年和1977發(fā)生5以1967高達(dá)403/10萬，病死為5.49，自1985年開展規(guī)流腦A群接之000年以在0.210。我國以ABC年B和C群有增多的了C群Nm引起局行。處身》（以下簡(jiǎn)稱《傳染病防治法《突發(fā)公共衛(wèi)生事件應(yīng)急條例《醫(yī)疫防隔。一報(bào)監(jiān)測(cè)（一）疫告。執(zhí)行職務(wù)的醫(yī)護(hù)人員和檢疫人員、疾病預(yù)防控制人員、鄉(xiāng)村醫(yī)生構(gòu)。各級(jí)醫(yī)療機(jī)構(gòu)及其執(zhí)行職務(wù)的人員發(fā)現(xiàn)任何臨床診斷為流腦的有在農(nóng)在。在2逐。（測(cè)?。?、醫(yī)療機(jī)構(gòu)要盡可能在使用抗生素治療前采集病人腦脊液、血展。2、市縣級(jí)疾病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)要收集流腦病例的腦脊液或急性期例病人必須采樣，出現(xiàn)流行時(shí)病例的標(biāo)本采集率要達(dá)到以上。市縣級(jí)疾病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)在發(fā)現(xiàn)流腦首例病例后應(yīng)在病例密切接觸者預(yù)防集10—0人省。、發(fā)現(xiàn)首例病例后，對(duì)病例所在縣（市、區(qū)）的醫(yī)療機(jī)構(gòu)開展。中、人m要樣1標(biāo)本并的菌株一型防控。，現(xiàn)或上或在鎮(zhèn)現(xiàn)或以在縣現(xiàn)或疫：（1）當(dāng)?shù)丶膊☆A(yù)防控制機(jī)構(gòu)要立即開展主動(dòng)監(jiān)測(cè)和病例搜索工級(jí)、。（2）發(fā)生疫情的學(xué)校，應(yīng)實(shí)施晨檢制度，監(jiān)測(cè)每位學(xué)生的健康狀況報(bào)。（3）發(fā)生疫情的建筑工地，應(yīng)設(shè)立務(wù)工人員進(jìn)出登記制度，掌。、各級(jí)疾病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)要定期開展流腦疫情報(bào)告情況檢查和。。測(cè)查流高例流現(xiàn)病時(shí)由及合料果暴預(yù)病。，首。了人發(fā)過接人員綜分勢(shì)做初定或調(diào)療構(gòu)作索和觀。暴露的家庭成員的流腦發(fā)生概率為0—％，難以發(fā)現(xiàn)病例之間的必狀做。警級(jí)實(shí)測(cè)人疫時(shí)。三疫防血清抗體水展A群流腦糖、A+C接種，有將A群、A+C群糖。動(dòng)在管的。預(yù)防接種工作嚴(yán)格按照預(yù)防接種技術(shù)管理規(guī)程及國家對(duì)流腦疫。目前，根據(jù)我國薦A群與A+C：1、A群后—8月種2第2第1針于3個(gè)；3歲第3針，第2針接于1年。2、A＋C流：為2歲。（2過1針A種A+C群流腦種A群流腦多糖疫苗的時(shí)間間隔不得少于3；（22歲種2次或2上A群流腦糖苗接種A+C群種A群流腦多糖疫苗最后1間間隔不得少于1。（3種A+C接。施作》者取適的防施醫(yī)腦醫(yī)。原。各。理當(dāng)取避需的隔。醫(yī)療機(jī)構(gòu)要按照監(jiān)測(cè)要求在對(duì)病人進(jìn)行抗生素治療前采集腦脊。。理任人取下：1、醫(yī)學(xué)觀察：對(duì)密切接觸者進(jìn)行醫(yī)學(xué)觀察隨訪，時(shí)間至少為7天（自最后接觸之日算起，期間內(nèi)可不限制其活動(dòng)，但要告知其盡其戰(zhàn)高、所在鄉(xiāng)生。2、預(yù)防服藥：發(fā)生流腦流行時(shí)，可對(duì)密切接觸者采取的應(yīng)急預(yù)防。各地可以根據(jù)當(dāng)?shù)赝炅髂X細(xì)菌耐藥性的相關(guān)情況選擇當(dāng)?shù)仡A(yù)防藥類目。（）接種當(dāng)《病》的人結(jié)果接。A為－地發(fā)＋為周歲兒流對(duì)童接。護(hù)地和周圍環(huán)境開展?jié)袷角鍧?，必要時(shí)用1％漂白粉澄清液或其它含氯制劑消。負(fù)人交叉染播。防在兩縣或多縣交界地區(qū)，由該市衛(wèi)生行政部門負(fù)責(zé)協(xié)調(diào)處理該區(qū)域疫。各級(jí)疾控機(jī)構(gòu)要及時(shí)將有關(guān)疫情信息向相鄰省市縣疾病預(yù)防控。與1、堅(jiān)持預(yù)防為主的方針，在流行季節(jié)前，各地可通過各種媒體眾淡室。2、在衛(wèi)生部門與各有關(guān)部門參與或監(jiān)督下，托兒機(jī)構(gòu)、中小學(xué)空。3、發(fā)生流腦疫情后，衛(wèi)生行政部門要根據(jù)國家有關(guān)規(guī)定適時(shí)公嚴(yán)行群。4、各級(jí)衛(wèi)生行政部門和衛(wèi)生監(jiān)督部門要會(huì)同有關(guān)部門加強(qiáng)對(duì)轄區(qū)內(nèi)學(xué)校現(xiàn)。附件1 表病編號(hào)： □調(diào)單位：調(diào)： 調(diào)查：采： 采集：

年 月日 □□年 月日 □□室填： 填日期： 年月日 □□基況1患者姓名：2性別：男 ⑵女 □3出生日期：年月日□□4如無出生日期，年齡：歲月□5職業(yè)：：6戶籍地：7家庭現(xiàn)住址： 省 ） ） 鄉(xiāng)、）居）8居住情況：居9家長姓名：

（、）口他祥□聯(lián)系：1告單位：1病地點(diǎn)：1診醫(yī)療機(jī)構(gòu)：1治醫(yī)療機(jī)構(gòu)：1斷醫(yī)療機(jī)構(gòu)：1院日期： 年1亡日期： 年

報(bào)告： 年月發(fā)病： 年月初診： 年月住院： 年月診斷： 年月月 日月 日

日□□□□□□□□日□□□□□□□□日□□□□□□□□日□□□□□□□□日□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□□17流腦疫苗免疫史：無 有 詳 □1接種次數(shù)：次詳□1據(jù) 接卡⑵接證⑶憶 □17多糖疫苗接種時(shí)間：第針：：：

年月日□□□□□□□□年月日□□□□□□□□年 月 日□□□□□□□□17多糖疫苗接種時(shí)間：第一針：二：18同類（流腦）病人接觸史

年 月 日□□□□□□□□年 月 日□□□□□□□□18地點(diǎn)近期是否有同（流腦病人：有無詳 □18前一周與同（流腦病人接觸史：有無詳 □18接觸接觸方式：⑴同住護(hù)⑶同校⑷位它 □18內(nèi)同類（流腦）病人： ⑴有無⑶詳 □18邊（同宿舍、同班、同校）有同類（流腦）病人，根據(jù)情況填寫下表：者名 性別 年齡 與者關(guān)系 病況臨現(xiàn)1主要癥狀：1.?。?急緩⑶詳 □1.熱：1.呼吸道感染癥狀：

有無⑶詳 □有無⑶詳 □1.痛： 烈微無⑷詳 □1.心：1.吐：1.風(fēng)：1.厥：

有否⑶詳 □有否⑶詳 □有否⑶詳 □有否詳 □1.志：1.10.癥狀：2主要體征：2.溫： ℃2.部唇周色澤2.膚出血點(diǎn)

楚睡躁⑷迷詳 □白⑵紺常 □多⑵少無⑷詳 □2.有其部位是：肢⑵干⑶它：□2.膚瘀點(diǎn)瘀斑多少無詳□2.項(xiàng)強(qiáng)直：2.識(shí)障礙：2.弓反張：2.鹵隆起：2.征：2.征：2.體征：3診療情況3.1離

⑴有⑵否詳 □⑴有⑵無詳 □⑴有⑵無詳 □⑴有⑵無詳 □⑴有⑵無詳 □有⑵無詳 □⑴有 ⑵無 詳 □3.2離隔離地點(diǎn)⑴醫(yī)療機(jī)構(gòu)⑵家⑶其：□3.3生素類藥物：有無詳□3.使用藥物名稱：□3.使用效果：效⑵明顯⑶無效□3.6愈轉(zhuǎn)⑶未轉(zhuǎn)化亡□實(shí)檢果1血常規(guī)： ⑴有 無 □1.檢驗(yàn)日期：□□□□□□□□1.液白細(xì)胞總數(shù)個(gè)/；1.性粒細(xì)胞 ％2腦脊液常規(guī)：⑴有 無 □2.脊液標(biāo)本采集日期： 年 月 日2.驗(yàn)日期：

□□□□□□□□□□□□□□□□2.觀 晰 混⑶濁 □2.脊液蛋白質(zhì)（正常值<0.4L⑴常⑵增高 □2.細(xì)胞個(gè)μL正常值0-μ)常多□2.萄糖2.化物3病原培養(yǎng):3液

mmL少高□mmo常少高□⑴有 無 □⑴有 無 □NmNmNm3.1.培養(yǎng)結(jié)果性群性查□3.1.特異抗原檢查⑴性群陰性⑶查□3.1.特異DNA性群陰性查□3.液或出血點(diǎn)有無□NmNmNm3.采集日期： 年 月 日NmNmNm3.2.培養(yǎng)結(jié)果 性群NmNmNm

□□□□□□□□性⑶查 □3.2.特異抗原檢查陽性血群性查□3.2.4異DNA查性群陰性⑶查□Nm3.3.⑴有無 □3.采集日期：年月日□□□□□□□□Nm3.3.培養(yǎng)結(jié)果 ⑴陽性群 ⑵陰性⑶查 □3.4. 有無□3.采集日期： 年 月 日NmNm3.4.特異抗原檢查陽性血群NmNm

□□□□□□□□⑵陰性查 □3.4.特異DNAPCR性血清群 ⑵陰性⑶查 □血清學(xué)檢測(cè)：Nm4.一份血清：有無 □4.1.1采集日期： 年月日□□□□□□□□4.1.特異抗體滴度∶XNmNm4.1清分群⑴群⑵群□4.二份血清：⑴有⑵無□4.2.1采集日期：年月日□□□□□□□□Nm4.2.特異抗體滴度∶X4.2清分群⑴群⑵群□5藥敏結(jié)果：有無□5.1群感藥品：⑴ ⑵ ⑶⑷ ⑸5.2群感藥品：⑴ ⑵ ⑶ ⑷⑷ ⑸病類1最終病例診斷結(jié)果 似⑵臨床診斷⑶診 □密記表名

性年別齡

業(yè) 住 址

觸況 疫苗住位居種史

注表報(bào)期： 年 月 日 □□□□□□□□填表說明1.您用圓珠筆或鋼筆填寫。2凡是數(shù)字，都填寫阿拉伯?dāng)?shù)字如：、、、、……。3請(qǐng)將所選擇答案的序號(hào)寫在題后的“□”內(nèi)。4第－位為縣級(jí)國標(biāo)碼，－位為縣級(jí)單位的病例順序編號(hào)。5調(diào)查日期：所有日期需填寫到日，填寫公歷時(shí)間。6第1項(xiàng)中初診單位如果是正規(guī)醫(yī)療機(jī)構(gòu)，應(yīng)詳細(xì)填寫醫(yī)療機(jī)構(gòu)名稱，如果是個(gè)體，細(xì)。附件2 流行性腦脊髓膜炎的樣品采集和運(yùn)送適宜的檢測(cè)樣品為腦脊液血液皮膚粘膜出血點(diǎn)擠出液血清及鼻咽拭子等病例的腦脊液血液皮膚粘膜出血點(diǎn)擠出液中檢出腦膜炎奈瑟菌可直接作為確診依據(jù)。一、樣品采集：咽拭子：用長柄棉拭子采咽后壁兩側(cè)分泌物立即接種于卵黃雙抗培養(yǎng)基（E或巧克力血平板，也可將咽拭子放入液體雙抗增菌管內(nèi)，增菌8-12小時(shí)以后分離培養(yǎng)。2：采集3-毫升腦脊液，可直接接種于巧克力或E板，也可。3血3-毫升，立即加于5毫升的葡萄；．淤血點(diǎn)：選病人皮膚上的新鮮淤斑或淤血點(diǎn)，消毒后用針頭挑破，擠出組織液，用無菌棉簽蘸取先接種含雙抗的葡萄糖增菌肉湯管中增菌8-時(shí)后分離培養(yǎng)或直接接種E板再涂片染色直接鏡檢制成涂片干后革蘭染色，直接鏡檢；涂片也可做免疫熒光檢查。．血清：采集病人發(fā)病早期和恢復(fù)期（1-周內(nèi)）雙份血清，檢測(cè)血清中特異性抗體呈倍或倍以上升高。二、樣品的處理和運(yùn)送．及時(shí)處理樣品：腦膜炎奈瑟菌比較脆弱，采集樣品后，應(yīng)盡可能地做到床邊接種，若無可能則應(yīng)再最短的時(shí)間內(nèi)送至實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行接種培養(yǎng)。2．早期采集樣品：應(yīng)盡可能采集病人用藥前的早期樣品，這可以明顯提高病原的撿出水平。3．保溫運(yùn)送：腦膜炎奈瑟菌對(duì)溫度較為敏感，溫度過低或過高均可導(dǎo)致菌株死亡。在運(yùn)送樣品或培養(yǎng)物時(shí)，應(yīng)保持樣品處于20℃36℃之間，切記不能低。要求每份血液標(biāo)本不少于3毫升分離血清后低溫(<2保存待檢測(cè)流腦抗體測(cè)定和或細(xì)菌分離與鑒定。附件－A流行性腦脊髓膜炎病原學(xué)診斷方法A1病原體腦膜炎奈瑟氏菌Neissminｄｉs)離從疑似流腦患者采集C急性期血液分離NmA1.標(biāo)本的采集A1.1.C無菌操作，吸出CSFm即放到無菌試管內(nèi)離心(20003000rmim滅菌過的毛細(xì)管吸取沉淀物直接接種到1％羊血巧克力色瓊脂上(C清液部分供檢測(cè)N特異抗原，亦可將其置于－2℃待測(cè)，％二氧化碳環(huán)境3℃培養(yǎng)2～7每日檢查細(xì)菌生長的情況及時(shí)分離純培養(yǎng)物。A1.1.血液：采取病人急性期靜脈血液6m，無菌操作，向盛有30m增菌用葡萄糖肉湯的三角瓶?jī)?nèi)注入4m血液余下的2m血液離心后吸出血清，供檢測(cè)N特異抗原和抗體，亦可將其置于一2℃待測(cè)，％二氧化碳環(huán)境，培養(yǎng)2～7每日進(jìn)行觀察、。A1.接種和菌種鑒定A1.2.細(xì)菌形態(tài)N應(yīng)為革蘭陰性，呈卵圓形或腎形，0.μ6μm。。A1.2.菌落N接種于巧克力色瓊脂平皿上％二氧化碳3℃培養(yǎng)2，其菌落直徑約1m，表面突起、光滑、濕潤、圓整、略帶灰白色、半透明、不溶中。A1.2.生長及抗原特性絕大多數(shù)N菌株分解葡萄糖和麥芽糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。。Nm新分離菌株具有下列主要抗原：血清群特異性莢膜多糖，主要外膜蛋白－OMP(血清型特異的23O亞型特異的類O及與類OMP)鐵調(diào)節(jié)蛋白，脂寡糖(L蛋白、菌毛抗原等，根據(jù)群特異性莢膜多糖的結(jié)構(gòu)與組成成分，N可分為1個(gè)血清群(A、、、2、、、、W135、、Z)其中9％以上的病例是由、B和C群Nm引起的。根據(jù)2/3OMP可將群與群N分成2個(gè)血清型但差不多半數(shù)菌株目前尚不能分型在可分型菌株中，以1、和型，P1P1P1.、21.P1.型多見；對(duì)于群N現(xiàn)有與2兩個(gè)血清型，以P1P1型多見。N還可以分成1個(gè)L疫型，其中群以L0L多見，群中以L，，復(fù)合型多見。N群特異性莢膜多糖、型和亞型的OMPL抗原成分對(duì)流腦發(fā)病與流行及其菌苗的研究均具有重要價(jià)值。附件－B 流行性腦脊髓膜炎血清學(xué)診斷方法B1玻片凝集試驗(yàn)B1.1的應(yīng)用玻片凝集試驗(yàn)對(duì)N病原菌株或帶菌者菌株進(jìn)行血清學(xué)分群。B1.2料B1.2.1的N菌株純培養(yǎng)物。B1.2.診斷血清：多價(jià)I包含、、、D群，多價(jià)Ⅱ〔包含188(Y)18992，9E)［包含319(811(K)群］及1群?jiǎn)蝺r(jià)血清，共計(jì)1種。B1.2潔凈載玻片。B1.2生理鹽水。B1.試驗(yàn)方法B1.3先將診斷血清按說明書稀釋成所需的濃度，滴一滴在潔凈的玻片上。B1.3用白金耳刮取菌苔少許在玻片上沾取少量血清在一旁研磨均勻再與清勻。B1.3輕輕搖動(dòng)玻片數(shù)次，在～2m出現(xiàn)明顯凝集者，即為陽性。B1.3檢查從病人分離的疑似N時(shí)，先試群血清，若不與其發(fā)生凝集，則試用或群血清，仍不凝集時(shí)，則試用多價(jià)Ⅱ或多價(jià)Ⅲ血清。若發(fā)生凝集，再似N對(duì)現(xiàn)有診斷血清皆不凝集者則送研究單位進(jìn)一步鑒定。B1.3.5片上與各群診斷血清鹽水或正常兔血清皆發(fā)生凝集者即定為自凝菌。B2酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(EL試劑盒說明書進(jìn)行操作。B3殺菌力試驗(yàn)B3.1的應(yīng)用微量殺菌力試驗(yàn)(T測(cè)定病人急性期和恢復(fù)期血清中對(duì)N的殺菌抗體水平。此方法也可用于健康人群的血清抗體測(cè)定。B3.2料B3.2靶菌：對(duì)補(bǔ)體的自然殺菌作用具有耐受性，但對(duì)殺菌抗體反應(yīng)敏感的Nm群29群和C群N)B3.2.2稀釋液：Dulbe緩沖鹽水液：氯化鈉(NaCl)80氯化鉀(KCl)0.2，磷酸氫二鈉(Na2HPO4)115g磷酸二氫鉀(KH2PO4)02蒸餾水800L液：氯化鈣(CaCl2)0.1，蒸餾水100m；C水100m。上述三液分別滅菌121℃，15m，n℃?zhèn)溆谩Ｐ栌脮r(shí)按液份，液和C液各1份的比例混合，p為7.。使用時(shí)每100m稀釋液加滅活兔血清1m萬古霉素50μg多粘菌素2500單位或硫酸抗敵霉素500單位。稀釋液盛于小瓶中，置℃?zhèn)溆?，可存?周。B3.2.滴定板底部“U”形的9孔有機(jī)玻璃微滴板并備用同樣大小的普通玻璃作蓋板將它們平放在80的烤箱內(nèi)烤2后備用試驗(yàn)完畢以約80的熱水泡板1殺死靶菌，再以自來水沖洗干凈，并用棉棒拭凈不潔凈的孔。最后以蒸餾水沖洗一次，37烤干后同上于8℃干烤。滴定板使用一段時(shí)間后或遇到雜菌污染較嚴(yán)重時(shí)可用熱水殺死靶菌并沖洗干凈；在比較稀的硫酸重鉻酸鉀清潔液內(nèi)浸泡4h沖洗干凈后同上處理備用。B3.2.兔補(bǔ)體：可以購買成品。B3.2.氯化三苯四氮唑(TriphlrazCloriTe)脂培養(yǎng)基(TC脂)B3.2.5.1C脂配方：牛肉膏0.％，氯化鈉0.％，日本蛋白胨3.％，可溶性淀粉0.2％，以蒸調(diào)pH77.，瓊脂0.％。B3.2.5.TC脂制作上述培養(yǎng)基成分熔化后按每10m或20m分裝于大試管121℃滅菌15min冷卻后置℃?zhèn)溆?。臨用前將培養(yǎng)基加熱熔化，每10m培養(yǎng)基加50葡萄糖注射液0.1mL1％TC溶液(℃避光保存)0.1mL混勻放在4℃水溶液中待用。B3.2.5.陽性參考血清用N免疫兔制備的診斷血清，未加防腐劑，經(jīng)預(yù)試測(cè)定其殺菌抗體滴度較高(1∶320以上)。B3.殺菌抗體測(cè)定步驟B3.3.靶菌液的制備B3.3.1.1開啟B或群N菌種接種到巧克力色瓊脂平皿上37二氧化碳孵箱或燭缸培養(yǎng)1～20挑取～個(gè)菌落涂于另一平皿同上培養(yǎng)10～15hB3.3.1.用N診斷血清和生理鹽水進(jìn)行玻片凝集及顯微鏡檢查以核實(shí)菌種。B3.3.1.菌種被確證以后取其菌苔混勻于2菌脫脂牛奶管中制成濃菌液，分裝若干支小試管，每管約0.2置—20以下保存，N可存活～6個(gè)月。B3.3.1.需用靶菌時(shí)，取出一支上述牛奶菌種管，熔化后立即轉(zhuǎn)種并放在℃冰箱內(nèi)保存，供每日分離靶菌制作菌懸液，可備用周。在測(cè)定抗體的過程中，。B3.3.1.從所分離的靶菌平皿上挑取～個(gè)典型菌落，涂抹轉(zhuǎn)種1/巧克力色瓊脂平皿，3℃燭缸培養(yǎng)～6，刮取菌苔，于盛有3.5右稀釋液的試管壁上用白金耳將其充分研磨，制成輕度混濁的均勻菌懸液，其光密度值相當(dāng)于0.。B3.3.1.取出上述菌懸液2到0.5比色杯內(nèi)在波長為540分光光度計(jì)上測(cè)其光密度值。B3.3.1.稀釋液用量按(B1)計(jì)算：＝OD×10—0.1……………(B1)式中——稀釋液用量，mLO——光密度值。按照(B1計(jì)算稀釋液用量然后往里加入0.1m靶菌懸液此時(shí)相當(dāng)于光密度值為0.1的靶菌液作了10倍稀釋吹吸均勻后由其開始再連續(xù)作10倍稀釋至10－稀釋度，以菌液的最終濃度為每毫升400個(gè)菌落形成單位為宜。B3.3.1.稀釋好的靶菌懸液在1內(nèi)用完。B3.3.殺菌抗體的測(cè)定B3.3.2.1在微滴板每孔內(nèi)加1滴相當(dāng)于25的稀釋液。B3.3.2.2移液器從每排第一孔內(nèi)加25經(jīng)5630m活的待檢血清吹吸～10次后吸出25至下一孔如此作連續(xù)倍比稀釋至最后一孔每份血清分別用一支移液槍頭。B3.3.2低溫冰箱內(nèi)取出補(bǔ)體，于3℃溫水中搖動(dòng)將其速溶，每孔加一滴。后即刻使用。B3.3.2.4一滴稀釋成合適濃度的靶菌菌液微滴板置微型振蕩器上中速振蕩5min在3℃培養(yǎng)25出后重復(fù)上述振蕩。B3.3.2.5滴已熔化冷至45左右的T脂后，微滴板置37燭缸內(nèi)培養(yǎng)152觀察結(jié)果。B3.3.2.6驗(yàn)需做下列對(duì)照：陽性參考血清對(duì)照；4孔補(bǔ)體對(duì)照稀釋液、補(bǔ)體、菌液各一滴，檢查補(bǔ)體自然殺菌活性；孔細(xì)菌生長對(duì)照稀釋液、滅活補(bǔ)體和靶菌菌液各滴。每次檢測(cè)時(shí)至少每塊微滴板中應(yīng)有一組上述三種對(duì)照試驗(yàn)。B3.3.2.7滴完靶菌菌液之后應(yīng)將該菌液兩滴分別滴加到一個(gè)巧克力色瓊脂平皿的一端，沿著劃好的兩條線傾斜下流，于37燭缸內(nèi)同時(shí)培養(yǎng)，次日檢查每滴靶菌的菌落數(shù)及其純度。B3.3.2.8果時(shí)先檢查上述三種對(duì)照試驗(yàn)的結(jié)果補(bǔ)體的和細(xì)菌生長對(duì)照的各孔應(yīng)出現(xiàn)眾多的紅色點(diǎn)狀小菌落陽性參考血清應(yīng)達(dá)到原來確定的殺菌滴度若所試各孔中紅色點(diǎn)狀菌落數(shù)目明顯地少于補(bǔ)體對(duì)照孔或不出現(xiàn)紅色點(diǎn)狀菌落時(shí)則判斷為殺菌陽性如果所試孔中的菌落數(shù)目接近補(bǔ)體對(duì)照孔的一半或更多時(shí)，則判斷為殺菌陰性。B3.3.2.9色點(diǎn)狀菌落數(shù)目的多少，以符號(hào)“＋”記錄試驗(yàn)結(jié)果。若補(bǔ)體，，＋。當(dāng)所試各孔與其比較，菌落數(shù)減少30以下，記為“＋＋＋；減少50左右記“＋＋減少70左右記“＋每孔少于1個(gè)菌落則記“±。菌。附件－C 流行性腦脊髓膜炎膠乳凝集試驗(yàn)C1目的應(yīng)用膠乳凝集試驗(yàn)測(cè)定病人C急性期血清和尿中N群特異抗原，輔助流腦臨床診斷。C2材料可購買成品膠乳檢測(cè)試劑，按照說明書進(jìn)行操作。C3.2膠乳凝集試驗(yàn)檢測(cè)疑似流腦病人標(biāo)本內(nèi)N群特異性抗原。C3.2.1標(biāo)本的處理：CSF心(3000，/minn)清，沉淀部分作細(xì)菌培養(yǎng)；急性期血液(2離血清，置5℃將其滅活30性期尿液5mL20水乙醇，置℃～2，離心(3000，15m，棄上清，收集沉淀部分加0.2將其溶解，同前離心，小心地吸取上清液待測(cè)，不要。C3.2在上述病人標(biāo)本中只要有一種標(biāo)本與抗任何一群N的I致敏的Lx有N相應(yīng)群特異的抗原，即可輔助臨。附件－D 定對(duì)于不能用血清學(xué)分群的腦膜炎奈瑟菌疑似菌株或無法進(jìn)行腦膜炎奈瑟菌分離培養(yǎng)的腦脊液血液血清標(biāo)本可采用ＰＣＲ方法進(jìn)行ＤＮＡ擴(kuò)增輔助檢測(cè)鑒定。3.1的基因：唾液酸轉(zhuǎn)移酶基因si因：可以作為P增的目的片段來區(qū)分Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｗ１３５、Ｙ等五個(gè)常見流腦血清群Cror：可作為流腦奈瑟菌屬的特異性基因。3.2聚核苷酸引物序列crgAF:5’-gctggcgccgctggcaa,R:a’ttc-3-cttctgcagatt’cggcgtgccgt-3Orf-2(A’F:5cgcaataggtgtatatattc5t’c-3,-cgtaatagtttc’tatgccttctt-3SiaD(B)F:5-ggatcatttcagtgttttcR:5a-3-gcatgctggagg’ataagcattaa-3SiaD(C)F:tcaaatgagtttgc’aatagaaggt-3-caatcacgatttgcccaattgac-3SiaD(Y)F:5-ctcaaagc，aaggctttggR:5’3-ctgaagcgttttcattataattgctaa-3SiaD(W135)F:5-cagaaag’gagggatttcc’ta-3-cacaaccattttcattatagttactgt-33.3品處理可采用目前市售的ＤＮＡ提取試劑盒提取樣品ＤＮＡ也可采取直接煮沸方法，將樣品煮沸３０分鐘，離心，取上清作為擴(kuò)增樣品。3.4增及檢測(cè)條件92，540，2。3個(gè)循環(huán)，反應(yīng)產(chǎn)物用1.5瓊2%脂糖凝膠檢測(cè)，電壓6Vcm別 業(yè)2女) ）A+C;歲)別 業(yè)2女) ）A+C;歲) 3.AAC編號(hào)（位，前位為國標(biāo)為）

類名(;齡見（1.A;+2.接種次數(shù)4未種;祥）

最后一次接種日期月日年)A群

抗體滴度（：）B群 C群

養(yǎng)果（1.A;2.B;注3.C;4.Y;5.W-135;Y群6其他;分）監(jiān)群測(cè)庫中。編號(hào)：為位，前位為國標(biāo)碼，后三位為對(duì)象編號(hào)。性別：、男；、女職業(yè)編碼：1幼托兒童;散居兒童;3.（大中小學(xué)）;4.;5.員及保姆;6.食品業(yè);7.服務(wù);8.人員;9.;;;;船）民;職員;人員;及待業(yè);及不詳附件4 表 ：集日菌 菌種來源種期編原菌株離分分標(biāo)檢號(hào)編來（病離離本定號(hào)人密接/地 日