微生物的實驗室培養(yǎng)2課件

2-1微生物的實驗室培養(yǎng)22023/8/8微生物的實驗室培養(yǎng)22-1微生物的實驗室培養(yǎng)22023/7/28微生物的實驗室培1特點：小簡低微生物病毒細菌放線菌真菌原生動物原核生物界原生生物界真菌界病毒界是一切肉眼看不見或看不清楚的微小生物的總稱。1.分類一、微生物微生物的實驗室培養(yǎng)2特點：小簡低微生物病毒原核生物界原生生物界真菌界2芽孢：細菌形成的橢圓形的休眠體微生物的實驗室培養(yǎng)2芽孢：細菌形成的橢圓形的休眠體微生物的實驗室培養(yǎng)23芽孢的壁很厚，對干旱、低溫、高溫等惡劣的環(huán)境有很強的抵抗力。芽孢又小又輕，可以隨風飄散。當環(huán)境適宜（如溫度、水分適宜）的時候，芽孢又可以萌發(fā)，形成一個細菌。微生物的實驗室培養(yǎng)2芽孢的壁很厚，對干旱、低溫、高溫等惡劣的環(huán)境有很強的抵抗4放線菌⑴結構：單細胞原核生物分支狀的菌絲（基內(nèi)菌絲、氣生菌絲）微生物的實驗室培養(yǎng)2放線菌⑴結構：微生物的實驗室培養(yǎng)25（2）繁殖孢子絲

|孢子微生物的實驗室培養(yǎng)2（2）繁殖孢子絲

|微生物的實驗室培養(yǎng)26菌落單個或少數(shù)細菌在固體培養(yǎng)基上大量繁殖時，就會形成一個肉眼可見的，具有一定形態(tài)結構的子細胞群體，叫做菌落。

微生物的實驗室培養(yǎng)2菌落單個或少數(shù)細菌在固體培養(yǎng)基上大量繁殖時，就會形成一7細菌的菌落特征因種而異菌落微生物的實驗室培養(yǎng)2細菌的菌落特征因種而異菌落微生物的實驗室培養(yǎng)28菌落單個或少數(shù)細菌在固體培養(yǎng)基上大量繁殖時，就會形成一個肉眼可見的，具有一定形態(tài)結構的子細胞群體，叫做菌落。菌落是鑒定菌種的

重要依據(jù)。微生物的實驗室培養(yǎng)2菌落單個或少數(shù)細菌在固體培養(yǎng)基上大量繁殖時，就會形成一9C、H、O、N、P、S五大營養(yǎng)物質(zhì)碳源氮源生長因子水無機鹽微生物化學元素組成：2.營養(yǎng)及功能微生物的實驗室培養(yǎng)2C、H、O、N、P、S五大營養(yǎng)物質(zhì)碳源氮源生長因子水無機鹽10二、培養(yǎng)基培養(yǎng)基（培養(yǎng)液）是由人工方法配制而成的，專供微生物生長繁殖使用的混合營養(yǎng)基質(zhì)。微生物的實驗室培養(yǎng)2二、培養(yǎng)基培養(yǎng)基（培養(yǎng)液）是由人工方法配11（1）按物理狀態(tài)分：固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基。（2）按功能分：選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基。（3）按成分分：天然培養(yǎng)基和合成培養(yǎng)基。1.培養(yǎng)基的類型微生物的實驗室培養(yǎng)2（1）按物理狀態(tài)分：固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基、半固體12固體培養(yǎng)基：菌落微生物的實驗室培養(yǎng)2固體培養(yǎng)基：菌落微生物的實驗室培養(yǎng)213液體培養(yǎng)基：表面生長均勻混濁生長沉淀生長微生物的實驗室培養(yǎng)2液體培養(yǎng)基：表面生長均勻混濁生長沉淀生長微生物的實驗室培養(yǎng)214半固體培養(yǎng)基：微生物的實驗室培養(yǎng)2半固體培養(yǎng)基：微生物的實驗室培養(yǎng)2152.不同的微生物往往需要采用不同的培養(yǎng)基配方3.不管哪種培養(yǎng)基，一般都含有水、碳源、氮源、無機鹽等營養(yǎng)物質(zhì)，另外還需要滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求。微生物的實驗室培養(yǎng)22.不同的微生物往往需要采用不同的培養(yǎng)基配方161000mL牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的營養(yǎng)構成培養(yǎng)基組分提供的主要營養(yǎng)牛肉膏5g碳源、磷酸鹽和維生素蛋白胨10g氮源和維生素NaCl5g無機鹽H2O定容在1000mL氫元素、氧元素微生物的實驗室培養(yǎng)21000mL牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的營養(yǎng)構成培養(yǎng)基組分提供的主要174.培養(yǎng)基的用途液體培養(yǎng)基：增菌、工業(yè)生產(chǎn)固體培養(yǎng)基：純化（分離），

鑒定、活菌計數(shù)、

保藏菌種半固體培養(yǎng)基：微生物的實驗室培養(yǎng)24.培養(yǎng)基的用途液體培養(yǎng)基：增菌、工業(yè)生產(chǎn)微生物的實驗室培養(yǎng)181.無菌技術的概念無菌操作泛指在培養(yǎng)微生物的操作中，所有防止雜菌污染的方法。成功地培養(yǎng)微生物的關鍵。三、無菌技術微生物的實驗室培養(yǎng)21.無菌技術的概念無菌操作泛指在培養(yǎng)微生物的操作中，所19（1）消毒定義：2.消毒與滅菌的概念及兩者的區(qū)別（2）滅菌的定義：3.常用的消毒與滅菌的方法微生物的實驗室培養(yǎng)2（1）消毒定義：2.消毒與滅菌的概念及兩者的區(qū)別（2）滅菌201.灼燒滅菌滅菌的方法：微生物的實驗室培養(yǎng)21.灼燒滅菌滅菌的方法：微生物的實驗室培養(yǎng)2212.干熱滅菌：160-170℃下加熱1-2h。3.高壓蒸氣滅菌100kPa、121℃下維持15-30min.微生物的實驗室培養(yǎng)22.干熱滅菌：微生物的實驗室培養(yǎng)2222.請你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅菌。如果需要，請選擇合適的方法。（1）培養(yǎng)細菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿（2）玻棒、試管、燒瓶和吸管（3）實驗操作者的雙手微生物的實驗室培養(yǎng)22.請你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅菌232.請你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅菌。如果需要，請選擇合適的方法。（1）培養(yǎng)細菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿（2）玻棒、試管、燒瓶和吸管（3）實驗操作者的雙手答：（1）、（2）需要滅菌；（3）需要消毒。微生物的實驗室培養(yǎng)22.請你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅菌24微生物實驗室培養(yǎng)的基本操作程序1.器具的滅菌2.培養(yǎng)基的配制3.培養(yǎng)基的滅菌4.倒平板5.微生物接種6.恒溫箱中培養(yǎng)7.菌種的保存微生物的實驗室培養(yǎng)2微生物實驗室培養(yǎng)的基本操作程序1.器具的滅菌微生物的實驗室25牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基配方牛肉膏5.0g蛋白胨10.0gNaCl5.0g瓊脂20.0g將上述物質(zhì)溶解后，添加自來水，定容至1000mL四、實驗操作微生物的實驗室培養(yǎng)2牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基配方牛肉膏5.0g蛋白胨261．計算、稱量2．溶化3．調(diào)pH：pH7．64．過濾：這一步可以省去。5．分裝：分裝過程中注意不要使培養(yǎng)基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。分裝三角燒瓶的量以不超過三角燒瓶容積的一半為宜。6．加塞7．包扎操作步驟微生物的實驗室培養(yǎng)21．計算、稱量操作步驟微生物的實驗室培養(yǎng)2278．滅菌:將50ml培養(yǎng)基用玻棒轉(zhuǎn)移至三角錐瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮紙，再放入高壓蒸氣滅菌鍋，在壓力為100kPa、溫度為121℃，滅菌15～30min。將培養(yǎng)基用舊報紙包裹，放入干熱滅菌箱內(nèi)，在160～170℃下滅菌2h。微生物的實驗室培養(yǎng)28．滅菌:微生物的實驗室培養(yǎng)228

9．倒平板:

待培養(yǎng)基冷卻到50℃左右時，在酒精燈附近倒平板。（倒平板操作見課本）2d后觀察平板，無雜菌污染才可用來接種。微生物的實驗室培養(yǎng)29．倒平板:微生物的實驗室培養(yǎng)229倒平板技術①將滅過菌的培養(yǎng)皿放在火焰旁的桌面上，右手拿裝有培養(yǎng)基的錐形瓶，左手撥出棉塞。1234微生物的實驗室培養(yǎng)2倒平板技術①將滅過菌的培養(yǎng)皿放在火焰旁的桌面上，右手拿裝30倒平板技術②右手拿錐形瓶，使瓶口迅速通過火焰。1234微生物的實驗室培養(yǎng)2倒平板技術②右手拿錐形瓶，使瓶口迅速通過火焰。1234微31倒平板技術1234③用左手拇指和食指將培養(yǎng)皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，右手將錐形瓶中的培養(yǎng)基(約10~20mL)倒入培養(yǎng)皿，左手立即蓋上培養(yǎng)皿的皿蓋。微生物的實驗室培養(yǎng)2倒平板技術1234③用左手拇指和食指將培養(yǎng)皿打開一條稍大于瓶32倒平板技術1234④等待平板冷卻凝固，大約需5~10min。然后，將平板倒過來放置，使皿蓋在下，皿底在上。微生物的實驗室培養(yǎng)2倒平板技術1234④等待平板冷卻凝固，大約需5~10mi33

9．倒平板:

待培養(yǎng)基冷卻到50℃左右時，在酒精燈附近倒平板。（倒平板操作見課本）2d后觀察平板，無雜菌污染才可用來接種。10．無菌檢查：將滅菌的培養(yǎng)基放入37℃的溫室中培養(yǎng)24—48小時，以檢查滅菌是否徹底。微生物的實驗室培養(yǎng)29．倒平板:微生物的實驗室培養(yǎng)234（二）純化大腸桿菌接種方法有：平板劃線法和稀釋涂布平板法微生物的接種技術：微生物的實驗室培養(yǎng)2（二）純化大腸桿菌接種方法有：微生物的接種技術：微生物的實驗35平板劃線的操作方法微生物的實驗室培養(yǎng)2平板劃線的操作方法微生物的實驗室培養(yǎng)236微生物的實驗室培養(yǎng)2微生物的實驗室培養(yǎng)237微生物的實驗室培養(yǎng)2微生物的實驗室培養(yǎng)238微生物的實驗室培養(yǎng)2微生物的實驗室培養(yǎng)239微生物的實驗室培養(yǎng)2微生物的實驗室培養(yǎng)240微生物的實驗室培養(yǎng)2微生物的實驗室培養(yǎng)241微生物的實驗室培養(yǎng)2微生物的實驗室培養(yǎng)242微生物的實驗室培養(yǎng)2微生物的實驗室培養(yǎng)243微生物的實驗室培養(yǎng)2微生物的實驗室培養(yǎng)244微生物的實驗室培養(yǎng)2微生物的實驗室培養(yǎng)245微生物的實驗室培養(yǎng)2微生物的實驗室培養(yǎng)246一旦劃破，會造成劃線不均勻，難以達到分離單菌落的目的；二是存留在劃破處的單個細胞無法形成規(guī)矩的菌落，菌落會沿著劃破處生長，會形成一個條狀的菌落。微生物的實驗室培養(yǎng)2一旦劃破，會造成劃線不均勻，難以達到分離單菌47一旦劃破，會造成劃線不均勻，難以達到分離單菌落的目的；二是存留在劃破處的單個細胞無法形成規(guī)矩的菌落，菌落會沿著劃破處生長，會形成一個條狀的菌落。微生物的實驗室培養(yǎng)2一旦劃破，會造成劃線不均勻，難以達到分離單菌48微生物的實驗室培養(yǎng)2微生物的實驗室培養(yǎng)249微生物的實驗室培養(yǎng)2微生物的實驗室培養(yǎng)250稀釋涂布平板法微生物的實驗室培養(yǎng)2稀釋涂布平板法微生物的實驗室培養(yǎng)2511.將分別盛有9mL水的6支試管滅菌，并按101~106的順序編號。微生物的實驗室培養(yǎng)21.將分別盛有9mL水的6支試管滅菌，并按101~106522.用移液管吸取1mL培養(yǎng)的菌液，注入第二支試管中。用手指輕壓移液管上的橡皮頭，吹吸三次，使菌液與水充分混勻。微生物的實驗室培養(yǎng)22.用移液管吸取1mL培養(yǎng)的菌液，注入第二支試管中533.從101倍稀釋的試管中吸取1mL稀釋液，注入102倍稀釋的試管中，重復第2步的操作。依次類推，直到完成最后一支試管的稀釋。微生物的實驗室培養(yǎng)23.從101倍稀釋的試管中吸取1mL稀釋液，注入102倍稀釋54注意：移液管需要經(jīng)過滅菌。操作時，試管口和移液管離火焰1~2cm處.微生物的實驗室培養(yǎng)2注意：微生物的實驗室培養(yǎng)255微生物的實驗室培養(yǎng)2微生物的實驗室培養(yǎng)256微生物的實驗室培養(yǎng)2微生物的實驗室培養(yǎng)257微生物的實驗室培養(yǎng)2微生物的實驗室培養(yǎng)258微生物的實驗室培養(yǎng)2微生物的實驗室培養(yǎng)259涂布平板的所有操作都應在火焰附近進行。結合平板劃線與系列稀釋的無菌操作要求，想一想，第2步應如何進行無菌操作？問題討論微生物的實驗室培養(yǎng)2涂布平板的所有操作都應在火焰附近進行。結合平60涂布平板的所有操作都應在火焰附近進行。結合平板劃線與系列稀釋的無菌操作要求，想一想，第2步應如何進行無菌操作？應從操作的各個細節(jié)保證“無菌”。例如，酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適、吸管頭不要接觸任何其他物體、吸管要在酒精燈火焰周圍等等。問題討論微生物的實驗室培養(yǎng)2涂布平板的所有操作都應在火焰附近進行。結合平61微生物的恒溫培養(yǎng)微生物的恒溫培養(yǎng)微生物的實驗室培養(yǎng)2微生物的恒溫培養(yǎng)微生物的恒溫培養(yǎng)微生物的實驗室培養(yǎng)262微生物的恒溫培養(yǎng)微生物的實驗室培養(yǎng)2微生物的恒溫培養(yǎng)微生物的實驗室培養(yǎng)263菌種的保存1.臨時保藏：接種到固體斜面培養(yǎng)基，菌落長成后置于4℃冰箱保存。2.長期保存：甘油冷凍管藏法微生物的實驗室培養(yǎng)2菌種的保存1.臨時保藏：微生物的實驗室培養(yǎng)264四、課題成果評價（一）培養(yǎng)基的制作是否合格如果未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫1～2d后無菌落生長，說明培養(yǎng)基的制備是成功的，否則需要重新制備。微生物的實驗室培養(yǎng)2四、課題成果評價（一）培養(yǎng)基的制作是否合格微生物的實驗室培65（二）接種操作是否符合無菌要求如果培養(yǎng)基上生長的菌落的顏色、形狀、大小基本一致，并符合大腸桿菌菌落的特點，則說明接種操作是符合要求的；如果培養(yǎng)基上出現(xiàn)了其他菌落，則說明接種過程中，無菌操作還未達到要求，需要分析原因，再次練習。微生物的實驗室培養(yǎng)2（二）接種操作是否符合無菌要求微生物的實驗室培養(yǎng)266（三）是否進行了及時細致的觀察與記錄培養(yǎng)12h與24h后的大腸桿菌菌落的大小會有明顯不同，及時觀察記錄的同學會發(fā)現(xiàn)這一點，并能觀察到其他一些細微的變化。這一步的要求主要是培養(yǎng)學生良好的科學態(tài)度與習慣。微生物的實驗室培養(yǎng)2（三）是否進行了及時細致的觀察與記錄微生物的實驗室培養(yǎng)267從細胞的化學元素組成來看，培養(yǎng)基中為什么都含有這些營養(yǎng)成分？C、H、O、N、P、S五大營養(yǎng)物質(zhì)碳源氮源生長因子水無機鹽微生物化學元素組成：思考1微生物的實驗室培養(yǎng)2從細胞的化學元素組成來看，培養(yǎng)基中為什么都含有這些營養(yǎng)成分？68無菌技術除了用來防止實驗室的培養(yǎng)物被其他外來微生物污染外，還有什么目的？

答：無菌技術還能有效避免操作者自身被微生物感染。思考2微生物的實驗室培養(yǎng)2無菌技術除了用來防止實驗室的培養(yǎng)物被其他外來691.培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50℃左右時，才能用來倒平板。你用什么辦法來估計培養(yǎng)基的溫度？答：可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時，就可以進行倒平板了。問題討論微生物的實驗室培養(yǎng)21.培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50℃左右時，才70需要使錐形瓶的瓶口通過火焰的目的是什么？思考3答：通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。微生物的實驗室培養(yǎng)2需要使錐形瓶的瓶口通過火焰的目的是什么？思考371平板冷凝后，為什么要將平板倒置？答：平板冷凝后，皿蓋上會凝結水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地揮發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。思考4微生物的實驗室培養(yǎng)2平板冷凝后，為什么要將平板倒置？答：平板冷凝后72在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？思考5答：空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個平板培養(yǎng)微生物。微生物的實驗室培養(yǎng)2在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位731.為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結束時,仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？思考6微生物的實驗室培養(yǎng)21.為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒74答：第一步灼燒是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線前灼燒是為了殺死上次劃線結束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時，接種環(huán)上的菌種直接來源上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落。劃線結束后灼燒，能及時殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細菌污染環(huán)境和感染操作者。微生物的實驗室培養(yǎng)2答：第一步灼燒是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染752.在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進行劃線？答：以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。思考7微生物的實驗室培養(yǎng)22.在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進行76答：劃線后，線條末端細菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個細菌繁殖而來的菌落。在作第二次以及其后的劃線操作時，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？思考8微生物的實驗室培養(yǎng)2答：劃線后，線條末端細菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次77配制斜面培養(yǎng)基的作用是什么？試管為什么要加棉塞？思考9增大接種面積。棉塞保持通氣并防止雜菌感染等微生物的實驗室培養(yǎng)2配制斜面培養(yǎng)基的作用是什么？試管為什么要加棉塞？思考9增大接78例1.有關微生物營養(yǎng)物質(zhì)的敘述中，正

確的()A.是碳源的物質(zhì)不可