不同生物安全級別微生物菌種操作規(guī)程

微生物可根據(jù)其自身或其所產(chǎn)生的毒素的危害程度分為四個不同的生物安全等級。對健康成年人（動物）已知無致病作用的微生物的生物安全級別為一級；對人（動物）或環(huán)境具有中等潛在危害的微生物的生物安全級別為二級；主要通過呼吸途徑使人（動物）傳染上嚴(yán)重的甚至是致死疾病的致病微生物（通常已有預(yù)防傳染的疫苗）的生物安全級別為三級；對人體（動物）具有高度的危險性，通過氣溶膠途徑傳播或傳播途徑不明，目前尚無有效的疫苗或治療方法的致病微生物的生物安全級別為四級。

不同生物安全級別微生物菌種的操作，如分離、培養(yǎng)、鑒定和保藏，應(yīng)在相應(yīng)生物安全防護(hù)的條件下進(jìn)行。本規(guī)范根據(jù)當(dāng)前國家自然科技資源平臺建設(shè)的總體要求，結(jié)合微生物菌種資源的特點制定，便于在微生物菌種資源的收集、保存、鑒定、評價、研究和利用過程中，盡量避免環(huán)境和人員受到微生物本身及其代謝產(chǎn)物的危害，實現(xiàn)菌種資源的高效共享和可持續(xù)利用。不同生物安全級別微生物菌種操作規(guī)程1

范圍本規(guī)程規(guī)定了微生物生物安全分類標(biāo)準(zhǔn)，以及不同生物安全級別防護(hù)級別進(jìn)行微生物的操作規(guī)程。本規(guī)程適用于各菌種保藏單位所保藏的菌種資源的操作，如分離、培養(yǎng)、鑒定和保藏。2

規(guī)范性引用文件下列文件中的條款通過本規(guī)范的引用而成為本規(guī)范的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改（不包括勘誤內(nèi)容）或修訂版均不適用于本規(guī)范，然而，鼓勵根據(jù)本規(guī)范達(dá)成的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本規(guī)范?！恫≡⑸飳嶒炇疑锇踩芾項l例》（國務(wù)院第424條令）《獸醫(yī)實驗室生物安全管理規(guī)范》（2003年農(nóng)業(yè)部302號公告）WS233-2002

微生物和生物醫(yī)學(xué)實驗室生物安全通用準(zhǔn)則OIE

2003

國際動物衛(wèi)生法典WHO《實驗室生物安全手冊》第二版GB19489-2004《實驗室生物安全通用要求》3

術(shù)語、定義、符號、縮寫語3.1一類微生物對個體和群體危害程度高，通常引起人和/或動物嚴(yán)重疫病且暫無有效的預(yù)防和治療措施的致病微生物。通過氣溶膠傳播的，有高度傳染性、致死性的人和/或動物致病微生物；未知危險的人或動物致病微生物；我國尚未發(fā)現(xiàn)或已經(jīng)宣布消滅的微生物。3.2二類微生物對個體危害程度高，對群體危害較高。能通過氣溶膠傳播引起嚴(yán)重或致死性疫病，導(dǎo)致嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失的致病微生物，或者比較容易直接或間接在人與人、動物與人、動物與動物間傳播的微生物。對人引發(fā)的疾病具有有效的預(yù)防和治療措施。3.3三類微生物對個體危害程度為中度，對群體危害較低，主要通過皮膚、黏膜、消化道傳播。對人和/或動物有致病性，但一般對實驗人員、動物、環(huán)境不會造成嚴(yán)重危害、傳播風(fēng)險有限的致病微生物，具有有效的預(yù)防和治療措施。3.4四類微生物對個體和群體危害程度低，通常情況下不會對健康成年人和/或動物致病的微生物。3.5一級生物安全防護(hù)水平能夠安全操作對實驗室工作人員和/或動物無明顯致病性的，對環(huán)境危害程度微小的，特性清楚的病原微生物的生物安全水平。3.6二級生物安全防護(hù)水平能夠安全操作對實驗室工作人員和/或動物致病性低的，對環(huán)境有輕微危害的病原微生物的生物安全水平。3.7三級生物安全防護(hù)水平能夠安全地從事本國和外來的、具有可能經(jīng)呼吸道傳播以及引起嚴(yán)重的或致死性疾病的、對人引發(fā)的疾病具有有效的預(yù)防和治療措施的病原微生物工作的生物安全水平。與上述相近的或有抗原關(guān)系的，但尚未完全認(rèn)知的病原體，也應(yīng)在此種水平條件下進(jìn)行操作，只有取得足夠的數(shù)據(jù)后才能確定最后的生物安全水平等級。3.8四級生物安全防護(hù)水平能夠安全地從事從國外傳入能通過氣溶膠傳播，實驗室感染高度危險，嚴(yán)重威脅人和或動物生命和危害環(huán)境的，沒有特效預(yù)防和治療方法的微生物工作的生物安全水平。與上述相近的或有抗原關(guān)系的，但尚未完全認(rèn)知的病原體，也應(yīng)在此種水平條件下進(jìn)行操作，只有取得足夠的數(shù)據(jù)后才能確定最后的生物安全水平等級。3.9氣溶膠

Aerosol懸浮于氣體介質(zhì)中粒徑為0.001-100μm的固體、液體微小粒子形成的膠溶狀態(tài)分散體系。3.10生物安全柜

biosafety

cabinet處理危險性微生物時所用的箱形空氣凈化安全裝置。4確定微生物的危害等級時必須考慮的因素4.1微生物本身的致病特征：微生物的致病性和毒力；宿主范圍；所引起疾病的發(fā)病率和死亡率；疾病的傳播媒介；動物體內(nèi)或環(huán)境中病原的量和濃度；排出物傳播的可能性；病原在自然環(huán)境中的存活時間；病原的地方流行特性；交叉污染的可能性；獲得有效疫苗、預(yù)防和治療藥物的程度。4.2其它因素：產(chǎn)生氣溶膠的可能性；操作方法（體外、體內(nèi)或攻毒）；對重組微生物還應(yīng)評估其基因特征（毒力基因和毒素基因）、宿主適應(yīng)性改變、基因整合、增殖力和回復(fù)野生型的能力等。5.微生物實驗室生物安全防護(hù)的基本原則微生物實驗室生物安全防護(hù)的內(nèi)容包括安全設(shè)備、個體防護(hù)裝置和措施，實驗室的特殊設(shè)計和建設(shè)要求，嚴(yán)格的管理制度和標(biāo)準(zhǔn)化的操作程序及規(guī)程。6不同生物安全級別防護(hù)微生物菌種操作規(guī)程6.1生物安全等級防護(hù)Ⅰ級微生物菌種操作規(guī)程6.1.1安全設(shè)備和個體防護(hù)6.1.1.1一般無須使用生物安全柜等專用安全設(shè)備。6.1.1.2禁止非工作人員進(jìn)入實驗室。參觀實驗室等特殊情況須經(jīng)實驗室負(fù)責(zé)人批準(zhǔn)后方可進(jìn)入。6.1.1.3接觸微生物或含有微生物的物品后，脫掉手套后和離開實驗室前要洗手。6.1.1.4禁止在工作區(qū)飲食、吸煙、處理隱形眼鏡、化妝及儲存食物。6.1.1.5以移液器吸取液體，禁止口吸。6.1.1.6制定尖銳器具的安全操作規(guī)程。6.1.1.7降低濺出和氣溶膠的產(chǎn)生。6.1.1.8每天至少消毒一次工作臺面，活性物質(zhì)濺出后要隨時消毒。6.1.1.9所有培養(yǎng)物、廢棄物在運出實驗室之前必須進(jìn)行滅活，如高壓滅活。需運出實驗室滅活的物品必須放在專用密閉容器內(nèi)。6.1.1.10制定有效的防鼠防蟲措施。6.1.1.11工作人員在實驗時應(yīng)穿工作服，戴防護(hù)眼鏡。6.1.1.12工作人員手上有皮膚破損或皮疹時應(yīng)戴手套。6.1..2實驗室設(shè)計和建造的特殊要求6.1.2.1每個實驗室應(yīng)設(shè)洗手池，宜設(shè)置在靠近出口處。6.1.2.2實驗室圍護(hù)結(jié)構(gòu)內(nèi)表面應(yīng)易于清潔。地面應(yīng)防滑、無縫隙，不得鋪設(shè)地毯。6.1.2.3實驗臺表面應(yīng)不透水，耐腐蝕、耐熱。6.1.2.4實驗室中的家具應(yīng)牢固并易于清潔。6.1.2.5實驗室如有可開啟的窗戶，應(yīng)設(shè)置紗窗。6.2生物安全等級II級防護(hù)微生物菌種操作規(guī)程6.2.1安全設(shè)備和個體防護(hù)6.2.1.1可能產(chǎn)生致病微生物氣溶膠或出現(xiàn)濺出的操作均應(yīng)在生物安全柜(II

級生物安全柜為宜)或其他物理防護(hù)設(shè)備中進(jìn)行，并使用個體防護(hù)設(shè)備。6.2.1.2處理高濃度或大容量感染性材料均必須在生物安全柜(II級生物安全柜為宜)或其他物理防護(hù)設(shè)備中進(jìn)行，并使用個體防護(hù)設(shè)備。上述材料的離心操作如果使用密封的離心機(jī)轉(zhuǎn)子或安全離心杯，則可在實驗室中進(jìn)行，但只能在生物安全柜中開閉和裝載感染性材料。6.2.1.3當(dāng)微生物的操作不可能在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行而必須采取外部操作時，為防止感染性材料濺出或霧化危害，必須使用面部保護(hù)裝置(護(hù)目鏡、面罩、個體呼吸保護(hù)用品或其他防濺出保護(hù)設(shè)備)。6.2.1.4在實驗室中應(yīng)穿著工作服或罩衫等防護(hù)服。離開實驗室時，防護(hù)服必須脫下并留在實驗室內(nèi)。不得穿著外出，更不能攜帶回家。用過的工作服應(yīng)先在實驗室中消毒，然后統(tǒng)一洗滌或丟棄。6.2.1.5當(dāng)手可能接觸感染材料、污染的表面或設(shè)備時應(yīng)戴手套。如可能發(fā)生感染性材料的溢出或濺出，宜戴兩副手套。不得戴著手套離開實驗室。工作完全結(jié)束后方可除去手套。一次性手套不得清洗和再次使用。6.2.1.6實驗時，禁止他人進(jìn)入實驗室，或必須經(jīng)實驗室負(fù)責(zé)人同意后方可進(jìn)入。免疫耐受或正在使用免疫抑制劑的工作人員必須經(jīng)實驗室負(fù)責(zé)人同意方可在實驗室工作。6.2.1.7實驗室入口處須貼上生物危險標(biāo)志，注明危險因子、生物安全級別、需要的免疫、負(fù)責(zé)人姓名和電話、進(jìn)入實驗室的特殊要求及離開實驗室的程序。6.2.1.8工作人員應(yīng)接受必要的免疫接種和檢測(如乙型肝炎疫苗、卡介苗等)。6.2.1.9必要時收集從事危險性工作人員的基本血清留底，并根據(jù)需要定期收集血清樣本，應(yīng)有檢測報告，如有問題及時處理。6.2.1.10工作人員要接受有關(guān)的潛在危險知識的培訓(xùn)，掌握預(yù)防暴露以及暴露后的處理程序。每年要接受一次最新的培訓(xùn)。6.2.1.11嚴(yán)格遵守下列規(guī)定，防止利器損傷：6.2.1.11.1除特殊情況(腸道外注射和靜脈切開等)外，盡可能使用塑料器材代替玻璃器材。6.2.1.11.2盡可能應(yīng)用一次性注射器，用過的針頭禁止折彎、剪斷、折斷、重新蓋帽、從注射器取下，禁止用手直接操作。用過的針頭必須直接放人防穿透的容器中。非一次性利器必須放入厚壁容器中并運送到特定區(qū)域消毒，最好進(jìn)行高壓消毒。6.2.1.11.3盡可能使用無針注射器和其他安全裝置。6.2.1.11.4禁止用手處理破碎的玻璃器具。裝有污染針、利器及破碎玻璃的容器在丟棄之前必須消毒。6.2.1.11.5培養(yǎng)基、組織、體液及其他具有潛在危險性的廢棄物須放在防漏的容器中儲存、運輸及消毒滅菌。6.2.1.11.6實驗設(shè)備在運出修理或維護(hù)前必須進(jìn)行消毒。6.2.1.11.7人員暴