HLA基因檢測(cè)課件

HLA基因檢測(cè)1編輯版ppt1.HLA和HLA分型檢測(cè)2.HLA分型方法比較3.強(qiáng)直柱脊椎炎TableofContents2編輯版ppt1.HLA和HLA分型檢測(cè)2.HLA分型方法比較3.強(qiáng)直柱脊椎炎TableofContents3編輯版ppt什么是HLAMHC、HLA、亞型、關(guān)聯(lián)什么是HLA分型I型，II型，III型，IV型HLA分型與疾病檢測(cè)骨髓與器官移植，免疫性疾病，代謝性疾病，神經(jīng)內(nèi)科疾病，骨科疾病等

基本概念4編輯版ppt

人類白細(xì)胞抗原h(huán)umanleukocyteantigen,HLA

MHCMajorhistocompatibilitycomplex，主要組織相容性復(fù)合體（包括HLA、H-2、ChLA、RhLA、DLA、

SLA、RLA、GpLA、B等）5編輯版ppt1940年代，Snell和Gorer小鼠間的腫瘤及皮膚移植試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)：決定小鼠間移植排斥與否（即組織相容性）的基因位于17號(hào)染色體短臂命名為組織相容性-2（H-2）

H-2是一個(gè)由許多緊密連鎖的基因位點(diǎn)構(gòu)成的復(fù)雜系統(tǒng)6編輯版ppt1950年代Dausset經(jīng)產(chǎn)婦血清進(jìn)行個(gè)體之間抗體與白細(xì)胞凝集和細(xì)胞毒試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)人的MHC，命名為HLA基因位于第6號(hào)染色體短臂

7編輯版ppt1960年代，Benacerraf

不同品系的豚鼠對(duì)一些抗原的免疫應(yīng)答能力比較發(fā)現(xiàn)：控制機(jī)體對(duì)不同抗原的免疫應(yīng)答能力的基因（Ir基因）位于MHC基因復(fù)合體內(nèi)。8編輯版pptBenacerraf、Dausset和Snell三位科學(xué)家分別從不同角度對(duì)MHC的免疫遺傳學(xué)進(jìn)行的開(kāi)拓性研究，榮膺1980年的諾貝爾醫(yī)學(xué)和生理獎(jiǎng)。9編輯版pptHLA共分為4型：I型分子包括HLA-A、HLA-B和HLA-C，廣泛存在與各種組織細(xì)胞中；II型分子包括HLA-DP、HLA-DQ和HLA-DR，存在于B細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和活化T細(xì)胞中；III型分子為補(bǔ)體系統(tǒng)，包括C2和C4位點(diǎn)，存在于血清中；IV型分子可能是一些分化抗原，只存在于淋巴細(xì)胞、某些細(xì)胞毒性T細(xì)胞和白細(xì)胞中。HLA分型10編輯版ppt

HLA基因系統(tǒng)的多態(tài)性及一些主要基因座位的等位基因數(shù)正式命名顯示多態(tài)性的HLA基因座位有31個(gè)，共2320個(gè)等位基因。

圖中所示為常見(jiàn)基因座位的等位基因數(shù)。及一些主要基因座位的等位基因數(shù)正式命名顯示多態(tài)性的HLA基因座位有31個(gè)，共2320個(gè)等位基因。

圖中所示為常見(jiàn)基因座位的等位基因數(shù)。11編輯版ppt12編輯版pptHLA分型的基本檢測(cè)方法：細(xì)胞學(xué)方法測(cè)抗原特異性（型）

血清學(xué)方法測(cè)抗原特異性（型）（微量淋巴細(xì)胞毒試驗(yàn)）

分子生物學(xué)方法測(cè)等位基因

PCR/SSPPCR/LuminexPCR/SBTPCR/二代測(cè)序

PCR/流式細(xì)胞儀13編輯版pptHLA抗原和等位基因命名:用血清學(xué)及細(xì)胞學(xué)方法檢測(cè)抗原特異性:HLA-B27,HLA-DR4（血清學(xué)方法）

HLA-DPw2（細(xì)胞學(xué)方法）用分子生物學(xué)方法檢測(cè)等位基因：

HLA-DRB1*04

05

位點(diǎn)名主型等位基因序號(hào)HLA-B*27

0714編輯版ppt例如HLA-B27HLA-B*2701HLA-B*2702HLA-B*2703HLA-B*2704HLA-B*27051HLA-B*27052HLA-B*2706HLA-B*2707HLA-B*2708HLA-B*2709HLA-B*2710HLA-B*2711...HLA-B*272315編輯版pptLociConsideredtobeMatchedACBDRDQDP4MbpFather’sMother’sHLA:無(wú)血源相關(guān)10/10

同胞兄妹單倍型全相合，半相合父母親半相合

16編輯版ppt17臍血干細(xì)胞移植外周血干細(xì)胞移植骨髓干細(xì)胞移植17編輯版ppt18編輯版ppt

常見(jiàn)HLA與疾病關(guān)聯(lián)疾病HLA抗原相對(duì)風(fēng)險(xiǎn)—————————————————————————強(qiáng)直性脊椎炎B2789.8Behcet綜合征B5110-15多發(fā)性硬化癥DR24.8乳糜瀉DR310.8Grave’s病DR33.7系統(tǒng)性紅斑狼瘡DR35.8類風(fēng)關(guān)DR44.2胰島素依賴型糖尿病DR3/DR425.0重癥肌無(wú)力DR32.519編輯版ppt小結(jié)HLA的三個(gè)特性使其成為熱點(diǎn)：決定組織相容性高度多態(tài)性與疾病關(guān)聯(lián)20編輯版ppt1.HLA和HLA分型檢測(cè)2.HLA分型方法比較3.強(qiáng)直柱脊椎炎TableofContents21編輯版pptHLA基因分型

低分辨:SSP22編輯版pptrSSOLuminexbeadforclassI&classII中等分辨HLA分型23編輯版ppt24Nextgenerationsequencing高分辨高通量HLA分型24編輯版pptIlluminaSequencingbySynthesis(SBS)chemistryMiSeq25編輯版pptPacificBiosciences-Single-moleculereal-timesequencing26編輯版ppt27Sequencingbasedtyping(SBT)高等分辨HLA分型27編輯版pptSanger測(cè)序原理28編輯版pptSanger測(cè)序原理ATAGCTAGTGAACGTCAGT3’5’TATCGA5’3’ACGTACGdNTPddNTP-DyesATAGCTAGTGAACGTCAGT3’5’TATCGCA5’3’TATAGCTAGTGAACGTCAGT3’5’TATCGCA5’3’TTGATAGCTAGTGAACGTCAGT3’5’TATCGCA5’3’TGCTGAACACGTACGT29編輯版pptSanger測(cè)序原理ATAGCTAGTGAACGTCAGT3’5’TATCGA5’3’ATAGCTAGTGAACGTCAGT3’5’TATCGCA5’3’TATAGCTAGTGAACGTCAGT3’5’TATCGCA5’3’TGATAGCTAGTGAACGTCAGT3’5’TATCGCA5’3’TGCTGAAC30編輯版pptHLA分型模板的擴(kuò)增LongPCR(each:HLA-A,-B,-C,-DR,-DQ,DP,MICA)2.Amplicons(PCR:exon+loci)31編輯版pptLongPCRtoamplifythetargetgene/cgi/doi/10.1073/pnas.120661410932編輯版pptAssemblyandAlignment33編輯版pptProblemsinsequenceassembly34編輯版pptAmplicons-HLACoverageHLA-AHLA-BHLA-CHLA-DQB1HLA-DPB1HLA-DQA1HLA-DRB1HLA-DRB3HLA-DRB4HLA-DRB5HLA-DPA14.1kb2.6kb4.2kb10.3kb9.7kb7.3kb7.1kb4.1kb35編輯版ppt1.HLA和HLA分型檢測(cè)2.HLA分型方法比較3.強(qiáng)直柱脊椎炎TableofContents36編輯版ppt37編輯版pptAS的病因基因有關(guān)：HLA-B27的轉(zhuǎn)基因大鼠成功地培育出強(qiáng)直性脊柱炎的動(dòng)物模型。目前已發(fā)現(xiàn)包括B27在內(nèi)的3種基因與此病相關(guān)；并且有明顯家族發(fā)病傾向。免疫有關(guān)：MHC，T-Cells感染有關(guān)：相關(guān)學(xué)說(shuō)認(rèn)為，來(lái)自尿道、前列腺、精囊的抗原經(jīng)Batson循環(huán)到達(dá)骶髂關(guān)節(jié)、脊柱和眼睛等部位而發(fā)生相關(guān)病變，解釋了男性好發(fā)的原因。38編輯版ppt39編輯版pptAS的經(jīng)典檢查體征：

骶髂關(guān)節(jié)炎檢查：“4”字試驗(yàn)、骶髂關(guān)節(jié)壓迫試驗(yàn)、髂棘推壓試驗(yàn)、骨盆擠壓試驗(yàn)附著點(diǎn)炎檢查：坐骨結(jié)節(jié)、肋軟骨、肋胸關(guān)節(jié)、恥骨聯(lián)合等壓痛脊柱和胸廓檢查：Schober試驗(yàn)、指地距、枕墻距、胸廓活動(dòng)度等40編輯版ppt骶髂關(guān)節(jié)

AS的經(jīng)典檢查41編輯版pptB27測(cè)序的AS檢查42編輯版pptHLA-B27陰性的AS約5-10%的AS患者為HLA-B27陰性AS患者的HLA-B27陽(yáng)性率達(dá)90-95%我國(guó)漢族人群HLA-B27陽(yáng)性率2-7%（3千萬(wàn)-1億），AS患病率為0.3%（＞4百萬(wàn)），大部分HLA-B27陽(yáng)性者并不發(fā)生AS。HLA-B27與AS43編輯版ppt患病率：0.3%，20-30歲，男女比例10:1，有家族傾向；主要侵犯：中軸關(guān)節(jié)（骶髂關(guān)節(jié)、脊柱骨突、脊柱旁軟組織）可伴發(fā)外周關(guān)節(jié)及關(guān)節(jié)外表現(xiàn)，嚴(yán)重者發(fā)生脊柱畸形和關(guān)節(jié)強(qiáng)直B27檢測(cè)可作為有相關(guān)癥狀或高危人群AS早期的篩選方法！AS不是RA的一種特殊類型！強(qiáng)直性脊柱炎類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎地區(qū)分布種族差異大世界性性別分布男＞女女＞男年齡20-3030-50家族史明顯不明顯類風(fēng)濕因子（－）（）44編輯版pptHLA基因座位的等位基因和真正的疾病易感基因處于緊密連鎖不平衡，而HLA基因本身并不是引起疾病的真正基因，僅僅是遺傳標(biāo)志。連鎖不平衡學(xué)說(shuō)分子模擬學(xué)說(shuō)關(guān)節(jié)源性肽假說(shuō)其他：

T細(xì)胞受體庫(kù)假說(shuō)

超抗原假說(shuō)

B27修飾因子假說(shuō)

Cys67模型B27抗原與某些G（-）菌之間存在類似的分子結(jié)構(gòu)，能發(fā)生分子模擬或交叉反應(yīng)，機(jī)體免疫系統(tǒng)把B27當(dāng)作病原體抗原產(chǎn)生免疫應(yīng)答，對(duì)機(jī)體產(chǎn)生免疫損害。認(rèn)為關(guān)節(jié)源性肽只存在于關(guān)節(jié)組織中，特異性地由HLA—B27提呈，正常情況下遞呈水平低，反應(yīng)T細(xì)胞處于耐受狀態(tài)；當(dāng)某些具有同源結(jié)構(gòu)蛋白的病毒或細(xì)菌感染