無菌工藝驗(yàn)證培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)

無菌工藝驗(yàn)證培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心123|42

|Cont

tents培養(yǎng)基灌裝相關(guān)法規(guī)要求如何設(shè)計(jì)培養(yǎng)基灌裝方案

培養(yǎng)基灌裝的評(píng)價(jià)與調(diào)查常見問題及FDA

483缺陷

國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心3

|

無菌藥品基本理念無菌藥品的生產(chǎn)須滿足其質(zhì)量和預(yù)定用途的要求，應(yīng)最大限度降低微生物、各種微粒和熱原的污染。生產(chǎn)人員的技能、所接受的培訓(xùn)及其工作態(tài)度是達(dá)到上述目標(biāo)的關(guān)鍵因素?zé)o菌藥品的生產(chǎn)必須嚴(yán)格按照精心設(shè)計(jì)并經(jīng)驗(yàn)證的方法及規(guī)程進(jìn)行

|處理或成品檢驗(yàn)。國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心空調(diào)系統(tǒng)資質(zhì)職責(zé)公用設(shè)施人員操作生產(chǎn)設(shè)備環(huán)境監(jiān)控容器密封質(zhì)量保證|

質(zhì)量控制質(zhì)量受權(quán)人

過程控制4

|無菌特性組成清潔消毒

質(zhì)量保證更衣確認(rèn)

人員衛(wèi)生

文件體系物料質(zhì)量

無菌藥品風(fēng)險(xiǎn)分析為基礎(chǔ)國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心5

|

培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)---使用培養(yǎng)基作為藥品的替代品（Placebo）進(jìn)行無菌模擬生產(chǎn)，對(duì)無菌工藝進(jìn)行驗(yàn)證。

–

培養(yǎng)基灌裝在某種意義上是一種挑戰(zhàn)性試驗(yàn)，因?yàn)閹缀踉?/p>

所有情況下，微生物在培養(yǎng)基中的繁殖和生長(zhǎng)要比在實(shí)際

產(chǎn)品中更容易全面反映整個(gè)生產(chǎn)過程采用無菌工藝生產(chǎn)無菌產(chǎn)品的能力。

|各國藥品法規(guī)要求的基本內(nèi)容。國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心6

|培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)

相關(guān)法規(guī)要求

|國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心7

||

ng

US

FDA和EU

GMP的要求

FDA

CGMP

無菌工藝藥品指南An

aseptic

processing

operatio

on

should

be

validated

using

a

microbiological

growth

mediu

um

in

place

of

the

product.

This

process

simulati

ion,

also

known

as

a

media

fill.

EU

GMP

Annex1

無菌藥品的生產(chǎn)Validation

of

aseptic

processin

should

include

a

process

simulation

test

using

a

nutrient

t

medium

(media

fill).國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心8

|

2010版GMP附錄一：無菌制劑第四十七條

無菌生產(chǎn)工藝的驗(yàn)證應(yīng)包括培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)。

應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品的劑型以及培養(yǎng)基的選擇性、澄清度、濃度和滅菌的適用性選擇培養(yǎng)基。應(yīng)盡可能模擬常規(guī)的無菌生產(chǎn)工藝，包括所有對(duì)產(chǎn)品的無菌特性有影響的關(guān)鍵操作，及生產(chǎn)中可能出現(xiàn)的各種干預(yù)和最差條件。

培養(yǎng)基模擬灌

|

裝試驗(yàn)的首次驗(yàn)證，每班次應(yīng)連續(xù)進(jìn)行3次合格的試驗(yàn)。空氣凈化系統(tǒng)、設(shè)備、生產(chǎn)工藝及人員重大變更后，應(yīng)重復(fù)進(jìn)行培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)。培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)通常應(yīng)按生產(chǎn)工藝每班次半年進(jìn)行1次，每次至少一批。國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心9

|

2010版GMP附錄一：無菌制劑

培養(yǎng)基灌裝容器的數(shù)量應(yīng)足以保證評(píng)價(jià)的有效性。批量較小的產(chǎn)品，培養(yǎng)基灌裝的數(shù)量應(yīng)至少等于產(chǎn)品的批量。培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)的目標(biāo)是零污染，應(yīng)遵循以下要求：

（1）灌裝數(shù)量少于5000支時(shí)，不得檢出污染品；

（2）灌裝數(shù)量在5000至10000支時(shí)：

有1支污染，需調(diào)查，可考慮重復(fù)試驗(yàn)；

有2支污染，需調(diào)查后，進(jìn)行再驗(yàn)證。

（3)

灌裝數(shù)量超過10000支時(shí)：

|

有1支污染，需調(diào)查；

有2支污染，需調(diào)查后，進(jìn)行再驗(yàn)證。

（4）發(fā)生任何微生物污染時(shí)，均應(yīng)進(jìn)行調(diào)查。國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心批量（瓶）3000允許染菌的數(shù)量（瓶）010

|

注冊(cè)申報(bào)要求SFDA

化學(xué)藥品注射劑基本技術(shù)要求（2008）

…

培養(yǎng)基灌裝驗(yàn)證是對(duì)設(shè)備、環(huán)境以及人員操作的一種系統(tǒng)驗(yàn)證,是判斷無菌保證水平的關(guān)鍵手段…工藝驗(yàn)證工作主要為培養(yǎng)基灌裝驗(yàn)證試驗(yàn)。灌裝的批數(shù)、批量與合格標(biāo)準(zhǔn)見表1。

|4750

63007760≤1≤2≤3國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心fofo

|11

|

相關(guān)指南文件PDA

關(guān)于培養(yǎng)基模擬灌裝的技術(shù)報(bào)告

–

PDA

Technical

Repo

ort

No.

28,

Process

Simulation

Testing

or

Sterile

Bulk

Pharmaceutical

Chem

micals,

Revised

Supplement

2006

–

PDA

Technical

Repo

ort

No.22

1996,

Process

Simulation

Testing

or

Aseptically

Filled

Products

）國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心12

|培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)

試驗(yàn)設(shè)計(jì)

|國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心13

|

1、試驗(yàn)涵蓋范圍模擬必須包括產(chǎn)品成為無菌狀態(tài)后的所有的無菌生產(chǎn)工藝步驟(如轉(zhuǎn)運(yùn),

灌裝,

裝載/卸載,

凍干,

加塞,

軋蓋)

模擬必須包括所有的無菌處理(如灌裝線的設(shè)置,

無菌連接,人員的干擾操作)

培養(yǎng)基灌裝研究不包括非無菌混合操作或產(chǎn)品的除菌工藝(如無菌過濾)

培養(yǎng)基的制備和滅菌可以與產(chǎn)品的

|國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心14

|

2、多產(chǎn)品簡(jiǎn)化試驗(yàn)思路一條灌裝線生產(chǎn)多個(gè)產(chǎn)品時(shí)，

根據(jù)下列因素可被劃分為不同的類型組

灌裝工藝

不同的容器、密封方式由此選出兩個(gè)或更多個(gè)在下列方面能涵蓋所有其它相關(guān)產(chǎn)品的產(chǎn)品：

容器的大小、開放或密封的設(shè)計(jì)

灌裝線的速度和干預(yù)

|

凍干,

貯存容器的形式、轉(zhuǎn)移的方式推薦使用類似于矩陣式試驗(yàn)設(shè)計(jì)，選擇產(chǎn)品和工藝國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心15

|

模擬灌裝實(shí)驗(yàn)的設(shè)計(jì)包裝容器代表性選擇：

–

對(duì)于多規(guī)格、容器形狀不同的灌裝生產(chǎn)線，應(yīng)對(duì)不同大

小、形狀的容器進(jìn)行評(píng)估。

–

多數(shù)可能選用最大敞口直徑的容器和最低生產(chǎn)線速度；

–

有時(shí)也會(huì)選擇容易倒落的小型容器用來代表最差情況，

因可能需要更多的人工干預(yù)；

–

當(dāng)不能兼顧

|

時(shí)，應(yīng)考慮選取有代表性的幾種容器進(jìn)行培

養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)。國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心材質(zhì)與安裝質(zhì)量16

|

3、驗(yàn)證與確認(rèn)穩(wěn)定的產(chǎn)品質(zhì)量性能確認(rèn)及工藝驗(yàn)證（PQ/PV）可靠的設(shè)備性能

運(yùn)行確認(rèn)（OQ）安裝確認(rèn)（IQ）

|用戶需求與設(shè)計(jì)

設(shè)計(jì)確認(rèn)（DQ）國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心17

|

驗(yàn)證開始前的準(zhǔn)備工作設(shè)備設(shè)施確認(rèn)

HVAC及壓空系統(tǒng)（或氮?dú)猓┑拇_認(rèn)

設(shè)備的在線清洗和滅菌CIP

P,SIP滅菌工藝驗(yàn)證

濕熱、干熱滅菌工藝

除菌過濾驗(yàn)證及空氣過濾器的完整性檢測(cè)

容器/膠塞密封完好性測(cè)試人員培訓(xùn)

|

無菌更衣確認(rèn)環(huán)境監(jiān)控符合要求國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心18

|

4、模擬灌裝實(shí)驗(yàn)的設(shè)計(jì)最差狀況：高于或低于正常范圍的條件限度，與正常生產(chǎn)條件相比最有可能造成工藝或生產(chǎn)失敗的條件。宜盡可能模擬實(shí)際無菌生產(chǎn)過程，并包括產(chǎn)品加工中的“最差狀況”。其設(shè)計(jì)應(yīng)具有以下幾方面的代表性：

–

時(shí)間代表性

|

–

運(yùn)行代表性

–

包裝容器代表性國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心19

|

模擬灌裝實(shí)驗(yàn)的設(shè)計(jì)時(shí)間代表性：

–

應(yīng)選擇正常工作階段的不同的時(shí)間間隔，并考慮可能

的中斷、換班。培養(yǎng)基灌裝應(yīng)持續(xù)足夠長(zhǎng)的時(shí)間，覆

蓋允許的工藝時(shí)間限度，并包括實(shí)際加工中最常發(fā)生

的操作。操作代表性：

–

根據(jù)實(shí)際生產(chǎn)中可能發(fā)生的動(dòng)作或操作來設(shè)計(jì)培養(yǎng)基

|

中發(fā)生的、允許和禁止的干預(yù)事件的一覽表，并在試

驗(yàn)中進(jìn)行模擬。國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心20

|

模擬灌裝實(shí)驗(yàn)的設(shè)計(jì)運(yùn)行代表性：應(yīng)模擬包括“最差狀況”的生產(chǎn)條件下進(jìn)行培養(yǎng)基灌裝。（如：最大干預(yù)次數(shù)、模擬的加卸料、可能的生產(chǎn)線停機(jī)的糾正、灌裝針/管的調(diào)整和更換、人工軋蓋、在線過濾器的更換以及所用人員的數(shù)量等）

|國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心|21

|

最差條件的設(shè)計(jì)（1）儲(chǔ)存時(shí)間的驗(yàn)證灌裝設(shè)備、部件、儲(chǔ)罐、無菌物料、藥液在實(shí)際灌封前能夠放置的最長(zhǎng)時(shí)間

–

1.

灌封設(shè)備、灌封部件、儲(chǔ)罐、無菌物料需要再滅菌（除菌

）的時(shí)間間隔

?

用超出單項(xiàng)驗(yàn)證后確定的最長(zhǎng)保存時(shí)間的設(shè)備部件、儲(chǔ)

罐、無菌物料參與培養(yǎng)基灌裝試驗(yàn)

–

2.

產(chǎn)品從無菌過濾到灌封加塞完成所需要的時(shí)間

?

無菌過濾后存放在中間儲(chǔ)罐內(nèi)的培養(yǎng)基模擬實(shí)際生產(chǎn)時(shí)產(chǎn)

品的最大儲(chǔ)存時(shí)間后再灌封產(chǎn)品在灌裝后密封前的儲(chǔ)存時(shí)間國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心22

|

最差條件的設(shè)計(jì)（2）最長(zhǎng)灌裝的持續(xù)時(shí)間最保守的設(shè)計(jì)：在培養(yǎng)基灌封試驗(yàn)中，模擬生產(chǎn)用時(shí)最長(zhǎng)的批量所需要的時(shí)間，其中包括正常的干擾時(shí)間（換班、設(shè)備維修）。（一般不采用）其他的設(shè)計(jì)：1

1.在生產(chǎn)完成后接著進(jìn)行培養(yǎng)基灌封實(shí)驗(yàn)2.為了減少灌封瓶數(shù)，在每批試驗(yàn)開始、中間及結(jié)束前均灌裝培養(yǎng)基，

|

–

任何干擾操作都應(yīng)在培養(yǎng)基灌裝時(shí)進(jìn)行

–

在正常生產(chǎn)過程中所需的最長(zhǎng)時(shí)間，包括可能發(fā)生的事件，人員的

換班等國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心|擬一次23

|

最差條件的設(shè)計(jì)（3）干預(yù)的設(shè)計(jì)所有干預(yù)都應(yīng)是預(yù)先設(shè)定和進(jìn)行記錄正常的—每班次都會(huì)發(fā)生（灌封線裝配，稱量調(diào)節(jié)，加膠塞/鋁蓋，處理倒瓶，中控取樣，環(huán)境監(jiān)測(cè)，手工補(bǔ)充軋蓋等）非正常的—非正常情況才會(huì)發(fā)生（設(shè)備故障，灌封線堵塞，軌道調(diào)節(jié)，拆卸/替換破損的部件）SOP中應(yīng)列出哪些干預(yù)是容許的，非正常的干預(yù)至少每年模干預(yù)的次數(shù)應(yīng)該等于正常生產(chǎn)時(shí)發(fā)生的次數(shù)國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心|設(shè)備組裝加入膠塞取出卡住的膠塞取走倒下的玻瓶手工裝載到凍干機(jī)放置熱電偶環(huán)境監(jiān)測(cè)-放置和取走培養(yǎng)皿操作人員進(jìn)出及更衣24

|干預(yù)舉例—冷凍干燥工藝不同區(qū)域玻瓶破碎設(shè)備故障更換灌裝針頭灌裝針頭位置調(diào)整自動(dòng)稱量故障自動(dòng)加塞故障國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心25

|

5、培養(yǎng)基灌裝試驗(yàn)的頻率新建的或生產(chǎn)工藝、設(shè)備、人員等重大變更后的無菌工藝生產(chǎn)線，必須經(jīng)至少連續(xù)三批合格的培養(yǎng)基灌裝試驗(yàn)常規(guī)生產(chǎn)條件下的再驗(yàn)證頻率，培養(yǎng)基模擬試驗(yàn)通常按生產(chǎn)工藝每班次半年進(jìn)行1次，每次至少一批。生產(chǎn)線生產(chǎn)不同規(guī)格的無菌產(chǎn)品，則應(yīng)考慮不同規(guī)格的產(chǎn)品的因素，培養(yǎng)基灌裝試驗(yàn)的最差狀況進(jìn)行評(píng)估。

|員，保證每年至少參加一次成功的培養(yǎng)基灌裝試驗(yàn)。國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心26

|

變更后培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)變更及其評(píng)估

對(duì)產(chǎn)品或生產(chǎn)線的每一種變更，均應(yīng)根據(jù)書面的變更控

制系統(tǒng)進(jìn)行評(píng)估

。

如果通過評(píng)估認(rèn)為此項(xiàng)變更會(huì)影響到無菌生產(chǎn)工藝產(chǎn)品

的無菌保證水平，則需要進(jìn)行增補(bǔ)性培養(yǎng)基模擬灌裝實(shí)

驗(yàn)。

比如，設(shè)施或設(shè)備的變化、生產(chǎn)線配置的變動(dòng)、人員重

|

環(huán)境監(jiān)控異常和無菌檢查結(jié)果陽性等。國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心|培養(yǎng)溫度27

|

6、實(shí)驗(yàn)用培養(yǎng)基和培養(yǎng)溫度的選擇培養(yǎng)基選擇

適應(yīng)廣譜微生物生長(zhǎng)，包括細(xì)菌和真菌

較好的澄明度，較小的粘度

液體培養(yǎng)基易于除菌過濾

常用培養(yǎng)基：3％大豆胰蛋白肉湯（TSB）

厭氧培養(yǎng)基僅在特殊情況下使用（FTM）

干粉工藝：具備與干粉產(chǎn)品流動(dòng)性能相似的無菌TSB干粉或

無菌安慰劑粉末（PEG,乳糖,甘露醇…)20-35℃，目標(biāo)值±2.5℃，不少于14天；如選擇兩個(gè)溫度，

則每一溫度下至少培養(yǎng)7天，從低溫開始。國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心28

|

惰性替代粉末的選擇惰性替代品選擇要求：

–

無活性、易滅菌

–

易溶解

–

對(duì)培養(yǎng)基促進(jìn)生長(zhǎng)作用無副作用

–

易灌裝，流動(dòng)性要好（培養(yǎng)基流動(dòng)性較差）常用替代品

–

聚乙二醇Polyethylene

glycol

系列(PEG

6000,PEG

8000）,

甘露醇Mannitol，乳糖Lactose等

|

–

事先需要伽馬輻照滅菌（鈷60，用量約15～25kGy）

–

應(yīng)進(jìn)行無菌性、抑菌性和溶解度的測(cè)試國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心29

|

培養(yǎng)基的適應(yīng)性檢查培養(yǎng)基適應(yīng)性檢查

應(yīng)符合培養(yǎng)基的無菌性檢查及靈敏度檢查的要求。本檢

查培養(yǎng)基灌裝試驗(yàn)前或同時(shí)進(jìn)行。

必須用藥典要求的標(biāo)準(zhǔn)微生物或工廠特定微生物（分離

自環(huán)境人員監(jiān)測(cè)及無菌試驗(yàn)）來進(jìn)行

通常為枯草芽孢桿菌、白色念珠菌，菌液濃度控制約在

100個(gè)菌/ml

加入的菌液應(yīng)小于100

CF

FU/單位

|

生長(zhǎng)良好，判該培養(yǎng)基的適應(yīng)性檢查符合規(guī)定國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心30

|

7、灌裝體積與數(shù)量單位灌裝體積

選擇的體積要使培養(yǎng)基能適當(dāng)?shù)亟佑|容器內(nèi)表面，并且適當(dāng)翻

轉(zhuǎn)或旋轉(zhuǎn)，接觸到密封件的內(nèi)表面。

每只容器的灌裝體積一般不少于總?cè)莘e的1/3，但也要考慮保

留25

%

至40

%的頂空能確?？夏艽嬖诘奈⑸铽@得足夠的氧

氣生長(zhǎng)。

對(duì)于厭氧灌裝:

用惰性氣體代替氧氣，

并使之完全充滿容器灌封試驗(yàn)數(shù)量

綜合考慮統(tǒng)計(jì)學(xué)要求和實(shí)際生產(chǎn)批量。

|

5000瓶，則培養(yǎng)基灌封至少應(yīng)為實(shí)際生產(chǎn)線的最大批次量。

PIC

(>3000瓶)：如果正常生產(chǎn)的批次量低于3000瓶，則培養(yǎng)

基灌封至少應(yīng)為實(shí)際生產(chǎn)線的最大批次量。國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心|31

|

8、培養(yǎng)基模擬灌裝實(shí)驗(yàn)的陽性對(duì)照培養(yǎng)基陽性對(duì)照實(shí)驗(yàn)：

隨機(jī)選取已經(jīng)完成14天培養(yǎng)的灌裝培養(yǎng)基樣品，按照藥典要求

–

常用枯草芽孢桿菌、白色念珠球菌或工廠特定菌作為陽性菌

–

將每個(gè)菌種準(zhǔn)備含<100cfu

u/0.1ml的菌液，每個(gè)菌種接種2支

培養(yǎng)基樣品，同時(shí)并平板計(jì)數(shù)（雙份）

–

對(duì)真菌在20-25°C下培養(yǎng)，對(duì)細(xì)菌在30-35

°C下培養(yǎng)，每天

檢查，5天內(nèi)需有生長(zhǎng)跡象國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心I.32

|MP

9、培養(yǎng)基灌封實(shí)驗(yàn)的合格標(biāo)準(zhǔn)FDA、EU

GMP

和中國新版GM

無菌附錄：灌封量<5000瓶時(shí)，若有1瓶污染，需徹底調(diào)查，并重新驗(yàn)

證(3批)。II.

灌封量為5000-10000瓶時(shí)，若有1瓶污染，視調(diào)查結(jié)果決定

是否需要重新進(jìn)行1批培養(yǎng)基灌封試驗(yàn)；若有兩瓶污染，必

須重新驗(yàn)證（3批），同時(shí)進(jìn)行徹底調(diào)查。III.

灌封量>10000瓶時(shí)，若有1瓶污染，需徹底調(diào)查；若有兩瓶

|國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心污染瓶數(shù)01234595%置信限值333

|

培養(yǎng)基灌封實(shí)驗(yàn)的合格標(biāo)準(zhǔn)PIC及SFDA研發(fā)注冊(cè)標(biāo)準(zhǔn)：在95

5%置信限時(shí)污染率低于0.1%。

計(jì)算公式：污染率

=

(95%置信限值)/(灌封容器數(shù))

×

100%

污染瓶數(shù)與95%置信限值間的關(guān)系678910

|4.74

6.3

7.75

9.15

10.

.51

11.84

13.15

14.43

15.7116.9

6國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心菌空氣破真空（不使用惰性氣體），全壓塞、軋蓋1.2.3.4.

1.

2.

3.34

|

10

0、舉例-凍干工藝方式A：模擬灌裝、裝載/卸載過程，縮短放置時(shí)間容器內(nèi)灌封好培養(yǎng)基，以半壓塞狀態(tài)裝入凍干機(jī)凍干機(jī)內(nèi)部分抽真空，在室溫放置一定的時(shí)間，不進(jìn)行冷凍。用無菌空氣破真空（不使用惰性氣體），全壓塞、軋蓋缺點(diǎn):真空度不能過高，不能照成培養(yǎng)基沸騰。方式B：以經(jīng)稀釋的培養(yǎng)基模擬凍干過程容器內(nèi)灌封好經(jīng)稀釋的培養(yǎng)基，以半壓塞狀態(tài)裝入凍干機(jī)模擬凍干過程，直到容器內(nèi)的培養(yǎng)基大致達(dá)到正常濃度。用無

|缺點(diǎn)：耗時(shí)長(zhǎng)，需開發(fā)特殊的凍干程序，營養(yǎng)支持性不均一，影響微生物的存活力。

國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心1.2.35

|

凍干工藝方式C：模擬灌裝、裝載/卸載過程，縮短放置時(shí)間，不抽真空或補(bǔ)充空氣容器內(nèi)灌封好培養(yǎng)基，以半壓塞狀態(tài)裝入凍干機(jī)凍干機(jī)不抽真空或者邊抽真空邊補(bǔ)充無菌空氣。在室溫放

置一定的時(shí)間，不進(jìn)行冷凍。注意：用培養(yǎng)基完全模擬凍干工藝非常困難(

如時(shí)間長(zhǎng)、真空、低溫等)

應(yīng)該首先識(shí)別有污染風(fēng)險(xiǎn)的活動(dòng)，并加以模擬(

如未完全密封小瓶

|

小瓶必須不被冷凍

注意確保培養(yǎng)基的需氧狀態(tài)國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心|注意事項(xiàng)36

|

舉例-無菌粉末分裝工藝方法A

在灌裝線上手工或增加灌裝設(shè)備，先灌裝液體培養(yǎng)基，再分裝無

菌替代品粉末后壓塞、軋蓋。方法B

在灌裝線上手工或增加灌裝設(shè)備，先分裝無菌替代品粉末，再灌

裝液體培養(yǎng)基后壓塞、軋蓋。方法C

先灌裝干粉培養(yǎng)基，再手工或增加設(shè)備加入注射用水所用惰性劑或干粉培養(yǎng)基需事先經(jīng)過輻射滅菌。常用替代品粉末有聚乙二醇、甘露醇、乳糖等。應(yīng)對(duì)添加替代品的量和對(duì)培養(yǎng)基適應(yīng)性的影響進(jìn)行研究和評(píng)估。國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心|37

|

舉例-無菌原料藥原料藥生產(chǎn)工藝中常有結(jié)晶步驟，因結(jié)晶過程有相變產(chǎn)生，也使模擬過程存在困難?？捎靡环N液體介質(zhì)模擬結(jié)晶過程，讓其流經(jīng)除菌過濾器和所有管路加到結(jié)晶罐中。若結(jié)晶過程有加晶種的操作，模擬過程中也應(yīng)有這樣的操作，晶種也可用模擬介質(zhì)代替。為使晶體粒度均勻，有些結(jié)晶過程需要降溫，在模擬過程中一般不應(yīng)降溫，因在低溫下抑制微生物生長(zhǎng)。離心、洗滌和干燥環(huán)節(jié)一般采用常溫，以免溫度對(duì)微生物的影響。國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心38

|

11、環(huán)境及人員監(jiān)測(cè)環(huán)境和人員監(jiān)測(cè)－按照相應(yīng)的規(guī)程和方案進(jìn)行，應(yīng)涵蓋無菌工藝各工序，頻次數(shù)與正常生產(chǎn)一致。包括：

空氣粒子數(shù)

沉降菌

浮游菌

表面微生物

人員監(jiān)測(cè)

|國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心39

|

12、其他建議要點(diǎn)模擬灌裝全過程建議應(yīng)進(jìn)行錄像，便于事后調(diào)查分析和原因查找，也有利于員工培訓(xùn)。如有可能，應(yīng)有專人觀察和記錄操作人員的有意或無意的干預(yù)行為及時(shí)間。在試驗(yàn)設(shè)計(jì)時(shí)，有時(shí)還要考慮人員狀態(tài)，如夜班人員的注意力往往不夠集中。培養(yǎng)基灌封后可以進(jìn)行生產(chǎn)，但要等培養(yǎng)基灌封合格后產(chǎn)品才能放行

|樣品或按照托盤應(yīng)進(jìn)行編號(hào)，以便

于調(diào)查和追溯國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心40

|培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)

結(jié)果分析與調(diào)查

|國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心41

|

培養(yǎng)后檢查目檢培養(yǎng)基是否渾濁，是否有微生物生長(zhǎng)要由經(jīng)過培訓(xùn)、并且有資質(zhì)能夠發(fā)覺微生物生長(zhǎng)跡象的人員進(jìn)行檢查如果在兩個(gè)溫度下培養(yǎng)時(shí)，必須在溫度切換時(shí)進(jìn)行中間判讀可疑單位立即交給質(zhì)量控制的微生物

人員，進(jìn)行進(jìn)

|一步分離培養(yǎng)和鑒定。根據(jù)染菌單位數(shù)，判斷是否達(dá)到驗(yàn)

證接受標(biāo)準(zhǔn)國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心污染

率|42

|灌裝污染曲線圖

1

污染可能來源于液體培養(yǎng)基

(

如與培養(yǎng)基貯罐非無菌連接，

在循環(huán)管路中受到污染，微生

物持續(xù)繁殖)。在灌裝結(jié)束時(shí)，

應(yīng)注意保持培養(yǎng)基貯罐處于無菌密閉狀態(tài)，在儲(chǔ)罐內(nèi)取樣測(cè)

試，可以核實(shí)這樣的假設(shè)。灌裝過程(時(shí)間或灌裝數(shù)量)國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心污染率|43

|灌裝污染曲線圖

2

表明污染僅發(fā)生在試驗(yàn)初

期，可能污染來自起始的

生產(chǎn)設(shè)備中（

膠塞容器/

軌道,

計(jì)量泵

/

針頭)，在灌裝過程中污染被部分或

全部“清洗掉”。灌裝過程(時(shí)間或灌裝數(shù)量)國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心染率

污

|灌裝過程(時(shí)間或灌裝數(shù)量)44

|灌裝污染曲線圖

3

出現(xiàn)一個(gè)尖峰（在短時(shí)段的一

些產(chǎn)品被污染）可能與在灌裝

過程中不正確操作或干預(yù)導(dǎo)致

的污染有關(guān)。

很關(guān)鍵的是必須知道被污染產(chǎn)

品灌裝的準(zhǔn)確時(shí)間，以及當(dāng)時(shí)

實(shí)施的干預(yù)措施（灌裝操作過

程的錄像是非常有用的），這

樣會(huì)比較容易調(diào)查到原因。國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心率

污染灌裝過程(時(shí)間或灌裝數(shù)量)45

|

灌裝污染曲線圖

4

同樣可能是某個(gè)如果錯(cuò)誤

的干預(yù)措施所造成的，不

同的是該污染影響到液體

的管路/回路時(shí)（如培養(yǎng)

基貯罐的變化，泵或針的|

替換），導(dǎo)致微生物持續(xù)

繁殖。國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心污染率

|灌裝過程(時(shí)間或灌裝數(shù)量)46

|灌裝污染曲線圖

5

非常不幸的是，這種現(xiàn)象

是最常出現(xiàn)的，也是最難

調(diào)查的。如果這種現(xiàn)象在

多次試驗(yàn)中反復(fù)出現(xiàn)，可

能說明這個(gè)工藝存在不確

定因素，需要采取根本的

措施（如

更衣/著裝、消

毒劑和氣流模式的改變)國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心47

|

失敗調(diào)查流程|國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心

–

人員樣

–

表面樣

–

環(huán)境空氣樣2.

對(duì)培養(yǎng)基污染的評(píng)估

–

培養(yǎng)條件

–

對(duì)污染培養(yǎng)基的菌種必須進(jìn)行

鑒定

–

確定培養(yǎng)基污|染可能發(fā)生的時(shí)

間3

3.

惰性粉末無菌測(cè)試的評(píng)估48

|

培養(yǎng)基灌裝失敗調(diào)查

11.

生產(chǎn)環(huán)境的監(jiān)控?cái)?shù)據(jù)評(píng)估

4.

對(duì)氣體取樣結(jié)果的評(píng)估

–

壓縮空氣

–

氮?dú)獾?.

對(duì)水的微生物的評(píng)估

–

純水

–

WFI6

6.

對(duì)培養(yǎng)基評(píng)估

–

培養(yǎng)基的配制和消毒記錄

–

培養(yǎng)基預(yù)培養(yǎng)的條件

–

培養(yǎng)基預(yù)培養(yǎng)的結(jié)果中國家大容量注射劑工程技術(shù)研究

48

心1.

粒子監(jiān)控評(píng)估–––––粒子測(cè)試監(jiān)控情況層流風(fēng)速報(bào)警記錄煙霧測(cè)試歷史的監(jiān)控情況和趨勢(shì)2.

清潔和消毒評(píng)估

–

設(shè)備的清潔

|消毒3.

消毒劑的配制檢查

–

來源或配制比例記錄

–

效期及效力

49

|培養(yǎng)基灌裝失敗調(diào)查

24

4.

人員的評(píng)估–––––灌裝間最多的人數(shù)操作人員連續(xù)工作時(shí)間其它人員更衣情況手消毒及污染可能中

5

5.

干預(yù)操作的評(píng)估

–

頻次，是否有非預(yù)期干預(yù)

–

危險(xiǎn)的程度

–

污染的樣品與干預(yù)的關(guān)聯(lián)國家大容量注射劑工程技術(shù)研究

49

心50

|

培養(yǎng)基灌裝失敗調(diào)查

3設(shè)備的評(píng)估

–

滅菌柜

?

滅菌裝載情況，滅菌程序和記錄等

?

最近的穿透試驗(yàn)，泄漏試驗(yàn)和干燥試驗(yàn)的結(jié)果

–

隧道烘箱，洗瓶機(jī)等

?

運(yùn)行狀態(tài)，參數(shù)是否正確

?

隧道烘箱各段層流壓差是否正確

–

灌裝設(shè)備的

|狀態(tài)

?

設(shè)備是否存在偏差和非計(jì)劃干預(yù)

–

過濾器完整性測(cè)試評(píng)估

?

產(chǎn)品和空氣過濾器完整性測(cè)試的結(jié)果中國家大容量注射劑工程技術(shù)研究

50

心51

|

培養(yǎng)基灌裝失敗后續(xù)措施調(diào)查結(jié)論與風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估

培養(yǎng)基灌裝實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效

暫停生產(chǎn)，直至確定污染來源并采取有效的糾偏措施。

對(duì)培養(yǎng)基灌封實(shí)驗(yàn)后和此前所生產(chǎn)的產(chǎn)品，進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估

培養(yǎng)基灌裝實(shí)驗(yàn)結(jié)果無效，重新進(jìn)行培養(yǎng)基模擬灌裝

實(shí)驗(yàn)

無菌灌裝區(qū)的物理?xiàng)l件不滿足要求

|后續(xù)措施

根據(jù)調(diào)查情況，采取糾偏措施后，進(jìn)行一批或多批的培養(yǎng)

基模擬灌裝試驗(yàn)。國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心52

|要點(diǎn)提示：

任何失敗的樣品都應(yīng)單獨(dú)進(jìn)行分離培養(yǎng)和鑒定，因?yàn)榭赡懿恢挥幸粋€(gè)污染源。

人員與環(huán)境等監(jiān)控的微生物也應(yīng)進(jìn)行分離鑒定，并與污染菌相比較。

避免試驗(yàn)室引入新的污染，導(dǎo)致誤判

|國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心53

|培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)

常見問題及缺陷

|國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心|54

|

常見問題如何判斷哪些灌裝樣品不需要進(jìn)行培養(yǎng)？

破損，影響到密封性的樣品

完整性測(cè)試（泄漏測(cè)試）失敗的樣品

文件中明確規(guī)定予以丟棄的中控測(cè)試樣品

設(shè)備自動(dòng)剔除的樣品

文件中明確規(guī)定，每次干擾后應(yīng)予手工剔除的樣品

（規(guī)定應(yīng)詳細(xì)、明確，并需證明其可操作性和穩(wěn)定可

信性）。

剔除的樣品應(yīng)進(jìn)行記錄注明丟棄原因國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心55

|

常見問題是否需要厭氧工藝的模擬灌裝實(shí)驗(yàn)？

如果工藝中存在沖氮?dú)獾榷栊詺怏w操作時(shí)

如果在環(huán)境監(jiān)測(cè)樣品或無菌試驗(yàn)中檢出厭氧菌

有公司認(rèn)為，即使常規(guī)無菌工藝，也應(yīng)定期使用硫乙醇酸

鹽培養(yǎng)基進(jìn)行厭氧工藝模擬實(shí)驗(yàn)，或在模擬過程中進(jìn)行培

養(yǎng)基的切換。培養(yǎng)基灌裝試驗(yàn)中的樣品是否需要在培養(yǎng)過程中進(jìn)行

|

不需要。培養(yǎng)基灌裝的樣品應(yīng)在開始培養(yǎng)前進(jìn)行操作，使

培養(yǎng)基充分接觸到內(nèi)部各個(gè)表面，開始培養(yǎng)后不應(yīng)再進(jìn)行

反轉(zhuǎn)等干擾。國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心56

|

常見問題如何對(duì)培養(yǎng)基灌裝試驗(yàn)中的干預(yù)進(jìn)行設(shè)計(jì)？

考慮到最差狀況

涵蓋整個(gè)生產(chǎn)周期，包括換班、連續(xù)生產(chǎn)等

所有干預(yù)應(yīng)經(jīng)預(yù)先批準(zhǔn)和文件化，干預(yù)描述、發(fā)生時(shí)間、頻

率、持續(xù)時(shí)間、受影響的瓶數(shù)等

常規(guī)干預(yù)每次培養(yǎng)基灌裝都要模擬，非常規(guī)干預(yù)可每年一次。培養(yǎng)基灌裝試驗(yàn)是否要模擬所有生產(chǎn)過程？是否可以分段進(jìn)行模擬試驗(yàn)？

|

菌過濾以后。

可以，比如凍干工藝，可以把無菌灌裝和凍干模擬分開；粉

針工藝中可把加注培養(yǎng)基與粉劑分裝分開。但都需要有明確

方案和判斷標(biāo)準(zhǔn)。國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心|57

|

常見問題什么情況下，可以認(rèn)為培養(yǎng)基灌裝試驗(yàn)無效？

陽性對(duì)照失敗

工藝過程中在無菌操作區(qū)發(fā)生重大偏差，如停電，高效過

濾器損壞等在培養(yǎng)基灌裝試驗(yàn)中，是否必須進(jìn)行錄像？錄像的保存期需要多長(zhǎng)？

不是必需的，錄像僅是一種可選的輔助調(diào)查和培訓(xùn)手段。

如果采用了錄像措施，也僅作為公司內(nèi)部的資料（如同內(nèi)

部審計(jì)報(bào)告），不必向檢查員出示。

公司應(yīng)有文件規(guī)定，什么情況下要進(jìn)行錄像，錄像的儲(chǔ)存

時(shí)間等國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心58

|

Warning

LetterYour

firm

failed

to

design

and

perform

an

adequateaseptic

process

simulation

(i.e.,

media

fill)

basedupon

the

same

controls

used

for

routineproduction.

We

note

that

t

the

(b)(4)

wasobserved

(b)(4)

during

ac

ctual

production.

However,this

intervention

was

per

rformed

only

once

duringthe

media

fill

in

2009.

–

公司的培養(yǎng)

|

基灌裝驗(yàn)證未根據(jù)日常生產(chǎn)的控制進(jìn)行設(shè)計(jì)

和完成，如在實(shí)際生產(chǎn)中觀察到的一些干預(yù)操作國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心th59

|

Warning

LetterThe

written

procedur

res

related

to

theproduction

simulations

–

“media

fills”

-conducted

to

validate

e

your

capability

toaseptically

produce

s

small

volume

parenteral(SVP)

were

found

to

be

inadequate.

The

mediafills

for

this

line

did

not

represent

actualoperations

used

in

he

aseptic

production

ofampoules

and

vials.培養(yǎng)基灌

|裝沒有模擬實(shí)際的生產(chǎn)過程。國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心60

|

Warning

Letter-

A

routine

production

of

a

(b)(4)

Injection

vials

lot

would

take

approximately

(b)(4)

hours

to

be

filled.

Your

written

pro

ocedures

for

routine

production

require

tha

at

an

intervention

take

place

every

(b)(4)

minu

utes

for

fill-weight

verification

measurements.

SOP規(guī)定每幾分鐘就要對(duì)裝量進(jìn)行測(cè)試，但是模擬

|國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心61

|

Warning

Letter–

The

process

simulatio

ons

(media

fill)

do

not

represent

actual

production

operations

for

your

sterile

API.

The

proces

ss

simulation

performed

by

your

firm

in

July

20

009

failed

to

include

simulation

of

the

routine

interventions

performed

in

a

typical

l

campaign

of

13

batches.

培養(yǎng)基灌裝驗(yàn)證沒有反應(yīng)實(shí)際無菌API的生產(chǎn)過程。

|

常干預(yù)的模擬。國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心|溶液。62

|

Warning

Letter–

Placebo

mediums

should

be

evaluated

for

their

ability

to

support

growth.

Their

placebo

used

in

the

process

simulation

is

sod

dium

phosphate

in

different

forms

(solution

and

anhy

ydrous)

and

sodium

chloride

solution.

培養(yǎng)基灌裝所用的介質(zhì)，沒有評(píng)估其對(duì)微生物的抑菌

影響。培養(yǎng)基灌裝所用的材料是磷酸鈉和次氯酸鈉的國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心63

|

Warning

Letter–

Placebo

mediums

should

b

be

evaluated

for

their

inhibitory

effect

on

microor

rganisms.

Your

response

does

not

indicate

that

your

firm

uses

beta-lactamase

to

inhibit

the

effect

of

antib

biotic

residue

in

the

production

line

during

proc

cess

simulation.

沒有考慮可能存在的頭孢殘留對(duì)培養(yǎng)基中微生物的影響

|國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心|影響。64

|

Warning

Letter–

Gases

used

during

proc

cess

simulation

should

be

evaluated

for

their

inhib

bitory

effect

on

microorganisms.

Your

response

states

that

the

nitrogen

used

in

the

pro

ocess

simulation

is

removed

by

the

test

membrane

d

during

filtration.

沒有評(píng)估模擬過程中使用的氣體（氮?dú)猓?duì)微生物國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心65

|

Any

Ques

stions？

謝謝！

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Address：gejunyou@126.com國家大容量注射劑工程技術(shù)研究中心安全閥基本知識(shí)如果壓力容器(設(shè)備/管線等)壓力超過設(shè)計(jì)壓力…1.盡可能避免超壓現(xiàn)象堵塞(BLOCKED)火災(zāi)(FIRE)熱泄放(THERMALRELIEF)如何避免事故的發(fā)生?2.使用安全泄壓設(shè)施爆破片安全閥如何避免事故的發(fā)生?01安全閥的作用就是過壓保護(hù)!一切有過壓可能的設(shè)施都需要安全閥的保護(hù)!這里的壓力可以在200KG以上,也可以在1KG以下!設(shè)定壓力(setpressure)安全閥起跳壓力背壓(backpressure)安全閥出口壓力超壓(overpressure)表示安全閥開啟后至全開期間入口積聚的壓力.幾個(gè)壓力概念彈簧式先導(dǎo)式重力板式先導(dǎo)+重力板典型應(yīng)用電站鍋爐典型應(yīng)用長(zhǎng)輸管線典型應(yīng)用罐區(qū)安全閥的主要類型02不同類型安全閥的優(yōu)缺點(diǎn)結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單,可靠性高適用范圍廣價(jià)格經(jīng)濟(jì)對(duì)介質(zhì)不過分挑剔彈簧式安全閥的優(yōu)點(diǎn)預(yù)漏--由于閥座密封力隨介質(zhì)壓力的升高而降低,所以會(huì)有預(yù)漏現(xiàn)象--在未達(dá)到安全閥設(shè)定點(diǎn)前,就有少量介質(zhì)泄出.100%SEATINGFORCE75502505075100%SETPRESSURE彈簧式安全閥的缺點(diǎn)過大的入口壓力降會(huì)造成閥門的頻跳,縮短閥門使用壽命.ChatterDiscGuideDiscHolderNozzle彈簧式安全閥的缺點(diǎn)彈簧式安全閥的缺點(diǎn)=10090807060500102030405010%OVERPRESSURE%BUILT-UPBACKPRESSURE%RATEDCAPACITY普通產(chǎn)品平衡背壓能力差.在普通產(chǎn)品基礎(chǔ)上加裝波紋管,使其平衡背壓的能力有所增強(qiáng).能夠使閥芯內(nèi)件與高溫/腐蝕性介質(zhì)相隔離.平衡波紋管彈簧式安全閥的優(yōu)點(diǎn)優(yōu)異的閥座密封性能,閥座密封力隨介質(zhì)操作壓力的升高而升高,可使系統(tǒng)在較高運(yùn)行壓力下高效能地工作.ResilientSeatP1P1P2先導(dǎo)式安全閥的優(yōu)點(diǎn)平衡背壓能力優(yōu)秀有突開型/調(diào)節(jié)型兩種動(dòng)作特性可遠(yuǎn)傳取壓先導(dǎo)式安全閥的優(yōu)點(diǎn)對(duì)介質(zhì)比較挑剃,不適用于較臟/較粘稠的介質(zhì),此類介質(zhì)會(huì)堵塞引壓管及導(dǎo)閥內(nèi)腔.成本較高.先導(dǎo)式安全閥的缺點(diǎn)重力板式產(chǎn)品的優(yōu)點(diǎn)目前低壓儲(chǔ)罐呼吸閥/緊急泄放閥的主力產(chǎn)品.結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單.價(jià)格經(jīng)濟(jì).重力板式產(chǎn)品的缺點(diǎn)不可現(xiàn)場(chǎng)調(diào)節(jié)設(shè)定值.閥座密封性差,并有較嚴(yán)重的預(yù)漏.受背壓影響大.需要很高的超壓以達(dá)到全開.不適用于深冷/粘稠工況.幾個(gè)常用規(guī)范ASMEsectionI-動(dòng)力鍋爐(FiredVessel)ASMEsectionVIII-非受火容器(UnfiredVessel)API2000-低壓安全閥設(shè)計(jì)(LowpressurePRV)API520-火災(zāi)工況計(jì)算與選型(FireSizing)API526-閥門尺寸(ValveDimension)API527-閥座密封(SeatTightness)介質(zhì)狀態(tài)(氣/液/氣液雙相).氣態(tài)介質(zhì)的分子量&Cp/Cv值.液態(tài)介質(zhì)的比重/黏度.安全閥泄放量要求.設(shè)定壓力.背壓.泄放溫度安全閥不以連接尺寸作為選型報(bào)價(jià)依據(jù)!如何提供高質(zhì)量的詢價(jià)?彈簧安全閥的結(jié)構(gòu)彈簧安全閥起跳曲線彈簧安全閥結(jié)構(gòu)彈簧安全閥結(jié)構(gòu)導(dǎo)壓管活塞密封活塞導(dǎo)向不平衡移動(dòng)副(活塞)導(dǎo)管導(dǎo)閥彈性閥座P1P1P2先導(dǎo)式安全閥結(jié)構(gòu)先導(dǎo)式安全閥的工作原理頻跳安全閥的頻跳是一種閥門高頻反復(fù)開啟關(guān)閉的現(xiàn)象。安全閥頻跳時(shí)，一般來說密封面只打開其全啟高度的幾分只一或十幾分之一，然后迅速回座并再次起跳。頻跳時(shí)，閥瓣和噴嘴的密封面不斷高頻撞擊會(huì)造成密封面的嚴(yán)重?fù)p傷。如果頻跳現(xiàn)象進(jìn)一步加劇還有可能造成閥體內(nèi)部其他部分甚至系統(tǒng)的損傷。安全閥工作不正常的因素頻跳后果1、導(dǎo)向平面由于反復(fù)高頻磨擦造成表面劃傷或局部材料疲勞實(shí)效。2、密封面由于高頻碰撞造成損傷。3、由于高頻振顫造成彈簧實(shí)效。4、由頻跳所帶來的閥門及管道振顫可能會(huì)破壞焊接材料和系統(tǒng)上其他設(shè)備。5、由于安全閥在頻跳時(shí)無法達(dá)到需要的排放量，系統(tǒng)壓力有可能繼續(xù)升壓并超過最大允許工作壓力。安全閥工作不正常的因素A、系統(tǒng)壓力在通過閥門與系統(tǒng)之間的連接管時(shí)壓力下降超過3%。當(dāng)閥門處于關(guān)閉狀態(tài)時(shí)，閥門入口處的壓力是相對(duì)穩(wěn)定的。閥門入口壓力與系統(tǒng)壓力相同。當(dāng)系統(tǒng)壓力達(dá)到安全閥的起跳壓力時(shí)，閥門迅速打開并開始泄壓。但是由于閥門與系統(tǒng)之間的連接管設(shè)計(jì)不當(dāng)，造成連接管內(nèi)局部壓力下降過快超過3%，是閥門入口處壓力迅速下降到回座壓力而導(dǎo)致閥門關(guān)閉。因此安全閥開啟后沒有達(dá)到完全排放，系統(tǒng)壓力仍然很高，所以閥門會(huì)再次起跳并重復(fù)上述過程，既發(fā)生頻跳。導(dǎo)致頻跳的原因?qū)е陆庸軌航蹈哂?%的原因1、閥門與系統(tǒng)間的連接管內(nèi)徑小于閥門入口管內(nèi)徑。2、存在嚴(yán)重的渦流現(xiàn)象。3、連接管過長(zhǎng)而且沒有作相應(yīng)的補(bǔ)償（使用內(nèi)徑較大的管道）。4、連接管過于復(fù)雜（拐彎過多甚至在該管上開口用作它途。在一般情況下安全閥入口處不允許安裝其他閥門。）導(dǎo)致頻跳的原因B、閥門的調(diào)節(jié)環(huán)位置設(shè)置不當(dāng)。安全閥擁有噴嘴環(huán)和導(dǎo)向環(huán)。這兩個(gè)環(huán)的位置直接影響安全閥的起跳和回座過程。如果噴嘴環(huán)的位置過低或?qū)颦h(huán)的位置過高，則閥門起跳后介質(zhì)的作用力無法在閥瓣座和調(diào)節(jié)環(huán)所構(gòu)成的空間內(nèi)產(chǎn)生足夠的托舉力使閥門保持排放狀態(tài)，從而導(dǎo)致閥門迅速回座。但是系統(tǒng)壓力仍然保持較高水平，因此回座后閥門會(huì)很快再次起跳。導(dǎo)致頻跳的原因C、安全閥的額定排量遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于所需排量。

由于所選的安全閥的喉徑面積遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于所需，安全閥排放時(shí)過大的排量導(dǎo)致壓力容器內(nèi)局部壓力下降過快，而系統(tǒng)本身的超壓狀態(tài)沒有得到緩解，使安全閥不得不再次起跳頻跳的原因閥門拒跳：當(dāng)系統(tǒng)壓力達(dá)到安全閥的起跳壓力時(shí)，閥門不起跳的現(xiàn)象。安全閥工作不正常的因素1、閥門整定壓力過高。2、閥門內(nèi)落入大量雜質(zhì)從而使閥辦座和導(dǎo)套間卡死或摩擦力過大。3、彈簧之間夾入雜物使彈簧無法被正常壓縮。4、閥門安裝不當(dāng)，使閥門垂直度超過極限范圍（正負(fù)兩度）從而使閥桿組件在起跳過程中受阻。5、排氣管道沒有被可靠支撐或由于管道受熱膨脹移位從而對(duì)閥體產(chǎn)生扭轉(zhuǎn)力，導(dǎo)致閥體內(nèi)機(jī)構(gòu)發(fā)生偏心而卡死。安全閥拒跳的原因閥門不回座或回座比過大：安全閥正常起跳后長(zhǎng)時(shí)間無法回座，閥門保持排放狀態(tài)的現(xiàn)象。安全閥工作不正常的因素1、閥門上下調(diào)整環(huán)的位置設(shè)置不當(dāng)。2、排氣管道設(shè)計(jì)不當(dāng)造成排氣不暢，由于排氣管道過小、拐彎過多或被堵塞，使排放的蒸汽無法迅速排出而在排氣管和閥體內(nèi)積累，這時(shí)背壓會(huì)作用在閥門內(nèi)部機(jī)構(gòu)上并產(chǎn)生抑制閥門關(guān)閉的趨勢(shì)。3、閥門內(nèi)落入大量雜質(zhì)從而使閥瓣座和導(dǎo)套之間卡死后摩擦力過大。安全閥不回座或回座比過大的因素：4、彈簧之間夾入雜物從而使彈簧被正常壓縮后無法恢復(fù)。5、由于對(duì)閥門排放時(shí)的排放反力計(jì)算不足，從而在排放時(shí)閥體受力扭曲損壞內(nèi)部零件導(dǎo)致卡死。6、閥桿螺母（位于閥桿頂端）的定位銷脫落。在閥門排放時(shí)由于振動(dòng)使該螺母下滑使閥桿組件回落受阻。安全閥不回座或回座比過大的因素：7、由于彈簧壓緊螺栓的鎖緊螺母松脫，在閥門排放時(shí)由于振動(dòng)時(shí)彈簧壓緊螺栓松動(dòng)上滑導(dǎo)致閥門的設(shè)定起跳值不斷減小。

8、閥門安裝不當(dāng)，使閥門垂直度超過極限范圍（正負(fù)兩度）從而使閥桿組件在回落過程中受阻。

9、閥門的密封面中有雜質(zhì)，造成閥門無法正常關(guān)閉。

10、鎖緊螺母沒有鎖緊，由于管道震動(dòng)下環(huán)向上運(yùn)動(dòng)，上平面高于密封面，閥門回座時(shí)無法密封安全閥不回座或回座比過大的因素：謝謝觀看癌基因與抑癌基因oncogene&tumorsuppressorgene24135基因突變概述.癌基因和抗癌基因的概念.癌基因的分類.癌基因產(chǎn)物的作用.癌基因激活的機(jī)理主要內(nèi)容疾病：

——是人體某一層面或各層面形態(tài)和功能（包括其物質(zhì)基礎(chǔ)——代謝）的異常，歸根結(jié)底是某些特定蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)或功能的變異，而這些蛋白質(zhì)又是細(xì)胞核中相應(yīng)基因借助細(xì)胞受體和細(xì)胞中信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子接收信號(hào)后作出應(yīng)答（表達(dá)）的產(chǎn)物。TranscriptionTranslationReplicationDNARNAProtein中心法規(guī)Whatisgene?基因：

—是遺傳信息的載體

—是一段特定的DNA序列（片段）

—是編碼RNA或蛋白質(zhì)的一段DNA片段

—是由編碼序列和調(diào)控序列組成的一段DNA片段基因主宰生物體的命運(yùn)：微效基因的變異——生物體對(duì)生存環(huán)境的敏感度變化關(guān)鍵關(guān)鍵基因的變異——生物體疾病——死亡所以才有：“人類所有疾病均可視為基因病”之說注：如果外傷如燒傷、骨折等也算疾病的話，外傷應(yīng)該無法歸入基因病的行列。Genopathy問：兩個(gè)不相干的人，如果他們患得同一疾病，致病基因是否相同？再問：同卵雙生的孿生兄弟，他們患病的機(jī)會(huì)是否一樣，命運(yùn)是否相同？┯┯┯┯

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┷┷┷┷增添缺失替換DNA分子(復(fù)制)中發(fā)生堿基對(duì)的______、______

和

，而引起的

的改變。替換增添缺失基因結(jié)構(gòu)基因變異的概念：英語句子中的一個(gè)字母的改變，可能導(dǎo)致句子的意思發(fā)生怎樣的變化？可能導(dǎo)致句子的意思不變、變化不大或完全改變THECATSATONTHEMATTHECATSITONTHEMATTHEHATSATONTHEMATTHECATONTHEMAT同理：替換、增添、缺失堿基對(duì)，可能會(huì)使性狀不變、變化不大或完全改變?；虻慕Y(jié)構(gòu)改變,一定會(huì)引起性狀的改變??原句：1.基因多態(tài)性與致病突變基因變異與疾病的關(guān)系2.單基因病、多基因病3.疾病易感基因

基因多態(tài)性polymorphism是指DNA序列在群體中的變異性（差異性）在人群中的發(fā)生概率>1%（SNP&CNP)<1%的變異概率叫做突變基因多態(tài)性特定的基因多態(tài)性與疾病相關(guān)時(shí)，可用致病突變加以描述SNP:散在單個(gè)堿基的不同，單個(gè)堿基的缺失、插入和置換。

CNP:DNA片段拷貝數(shù)變異，包括缺失、插入和重復(fù)等。同義突變、錯(cuò)義突變、無義突變、移碼突變

致病突變生殖細(xì)胞基因突變將突變的遺傳信息傳給下一代(代代相傳),即遺傳性疾病。體細(xì)胞基因突變局部形成突變細(xì)胞群（腫瘤）。受精卵分裂基因突變的原因物理因素化學(xué)因素生物因素基因突變的原因（誘發(fā)因素）紫外線、輻射等堿基類似物5BU/疊氮胸苷等病毒和某些細(xì)菌等自發(fā)突變DNA復(fù)制過程中堿基配對(duì)出現(xiàn)誤差。UV使相鄰的胸腺嘧啶產(chǎn)生胸腺嘧啶二聚體,DNA復(fù)制時(shí)二聚體對(duì)應(yīng)鏈空缺，堿基隨機(jī)添補(bǔ)發(fā)生突變。胸腺嘧啶二聚體胸腺嘧啶胸腺嘧啶紫外線誘變物理誘變(physicalinduction)

5溴尿嘧啶(5BU)與T類似，多為酮式構(gòu)型。間期細(xì)胞用酮式5BU處理，5BU能插入DNA取代T與A配對(duì)；插入DNA后異構(gòu)成烯醇式5BU與G配對(duì)。兩次DNA復(fù)制后,使A/T轉(zhuǎn)換成G/C，發(fā)生堿基轉(zhuǎn)換,產(chǎn)生基因突變?；瘜W(xué)誘變(chemicalinduction)堿基類似物(baseanalogues)誘變AT5-BUA5-BUAAT5-BU5-BU(烯醇式)

(酮式)GGC1.生物變異的根本來源，為生物進(jìn)化提供了最初的原始材料,能使生物的性狀出現(xiàn)差別，以適應(yīng)不同的外界環(huán)境，是生物進(jìn)化的重要因素之一。2.致病突變是導(dǎo)致人類遺傳病的病變基礎(chǔ)?；蛲蛔兊囊饬x概述：腫瘤細(xì)胞惡性增殖特性（一）腫瘤細(xì)胞失去了生長(zhǎng)調(diào)節(jié)的反饋抑制正常細(xì)胞受損,一旦恢復(fù)原狀，細(xì)胞就會(huì)停止增殖，但是腫瘤細(xì)胞不受這一反饋機(jī)制抑制。（二）腫瘤細(xì)胞失去了細(xì)胞分裂的接觸抑制。正常細(xì)胞體外培養(yǎng)，相鄰細(xì)胞相接觸，長(zhǎng)在一起，細(xì)胞就會(huì)停止增殖，而腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)滿培養(yǎng)皿后，細(xì)胞可以重疊起生長(zhǎng)。（三）腫瘤細(xì)胞表現(xiàn)出比正常細(xì)胞更低的營養(yǎng)要求。（四）腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)有一種自分泌作用，自己分泌生長(zhǎng)需要的生長(zhǎng)因子和調(diào)控信號(hào),促進(jìn)自身的惡性增殖。Whatisoncogene?癌基因——是基因組內(nèi)正常存在的基因，其編碼產(chǎn)物通常作為正調(diào)控信號(hào)，促進(jìn)細(xì)胞的增殖和生長(zhǎng)。癌基因的突變或表達(dá)異常是細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化（癌變）的重要原因?！彩悄芫幋a生長(zhǎng)因子、生長(zhǎng)因子受體、細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子以及與生長(zhǎng)有關(guān)的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子等的基因。如何發(fā)現(xiàn)癌基因的呢?11910年，洛克菲勒研究院一個(gè)年輕的研究員Rous發(fā)現(xiàn)，雞肉瘤細(xì)胞裂解物在通過除菌濾器以后，注射到正常雞體內(nèi)，可以引起肉瘤，首次提出雞肉瘤可能是由病毒引起的。0.2m孔徑細(xì)菌過不去但病毒可以通過從病毒癌基因到細(xì)胞原癌基因的研究歷程：Roussarcomavirus,RSVthefirstcancer-causingretrovirus1958年，Stewart和Eddy分離出一種病毒，注射到小鼠體內(nèi)可以引起肝臟、腎臟、乳腺、胸腺、腎上腺等多種組織器官的腫瘤，因而把這種病毒稱為多瘤病毒。50年代末、60年代初，癌病毒研究成了一個(gè)極具想像力的研究領(lǐng)域，主流科學(xué)家開始進(jìn)入癌病毒研究領(lǐng)域polyomavirus這期間，Temin發(fā)現(xiàn)RSV有不同亞型，且引起細(xì)胞惡變程度不同，推測(cè)RNA病毒將其遺傳信息傳遞給了正常細(xì)胞的DNA。這與Crick提出的中心法則是相違背的讓事實(shí)屈從于理論還是堅(jiān)持基于實(shí)驗(yàn)的結(jié)果？VSTemin發(fā)現(xiàn)逆轉(zhuǎn)錄酶，1975年獲諾貝爾獎(jiǎng)TeminCrickTemin的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)：實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)簡(jiǎn)單而巧妙：將合成DNA所需的“原料”，即A、T、C、G四種脫氧核苷酸，與破壞了外殼的RSV一起在體外40℃的條件下溫育一段時(shí)間結(jié)果在試管里獲得了一種新合成的大分子，它不能被RNA酶破壞，但卻可以被DNA酶所分解，證明這種新合成的大分子是DNA用RNA酶預(yù)先破壞RSV的RNA，再重復(fù)上述的試驗(yàn)，則不能獲得這種大分子，說明這個(gè)DNA大分子是以RSV的RNA為模板合成的1969年，一個(gè)日本學(xué)者里子水谷來到Temin的實(shí)驗(yàn)室，這是一個(gè)非常擅長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)的年輕科學(xué)家。按Temin的設(shè)想，他們開始尋找RSV中存在“逆轉(zhuǎn)錄酶”的證據(jù)DNA

RNA

ProteinTranscriptionTranslationReplicationReplicationRe-Transcription修正中心法規(guī)據(jù)說，1975年Temin因發(fā)現(xiàn)逆轉(zhuǎn)錄酶而獲諾貝爾獎(jiǎng)時(shí)，Bishop懊惱不已，因?yàn)樵缭?969年他就認(rèn)為Temin的RNADNA的“前病毒理論”有可能是正確的，并且也進(jìn)行了一些實(shí)驗(yàn)，但不久由于資深同事的規(guī)勸而放棄了這方面的努力。但Bishop馬上意識(shí)到：逆轉(zhuǎn)錄酶的發(fā)現(xiàn)為逆轉(zhuǎn)錄病毒致癌的研究提供了一條新途徑。一個(gè)RSV，三個(gè)諾貝爾獎(jiǎng)！??！1989年，UCSF的Bishop和Varmus根據(jù)逆轉(zhuǎn)錄病毒的復(fù)制機(jī)制發(fā)現(xiàn)了細(xì)胞癌基因，并獲諾貝爾獎(jiǎng)。Cellularoncogene啟示：Perutz說:“科學(xué)創(chuàng)造如同藝術(shù)創(chuàng)造一樣，都不可能通過精心組織而產(chǎn)生”Bishop說:“許多人引以為豪的是一天工作16小時(shí)，工作安排要以分秒計(jì)……可是工作狂是思考的大敵，而思考則是科學(xué)發(fā)現(xiàn)的關(guān)鍵”Perutzsharedthe1962NobelPrizeforChemistrywithJohnKendrew,fortheirstudiesofthestructuresofhemoglobinandglobularproteins科學(xué)的本質(zhì)和藝術(shù)一樣，都需要直覺和想像力請(qǐng)給自己一些思考的時(shí)間吧！癌基因的分類目前對(duì)癌基因尚無統(tǒng)一分類的方法，一般有下面3種分類方法：一、按結(jié)構(gòu)特點(diǎn)分（6）類（一）src癌基因家族（二）ras癌基因家族（三）sis癌基因家族（四）myc癌基因家族（五）myb癌基因家族（六）其它：如fos，erb－A等。三、按細(xì)胞增殖調(diào)控蛋白特性分成（4）類（一）生長(zhǎng)因子（二）受體類（三）細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)換器（四）細(xì)胞核因子二、按產(chǎn)物功能分（8）類（一）生長(zhǎng)因子類（二）酪氨酸蛋白激酶（三）膜相關(guān)G蛋白（四）受體，無蛋白激酶活性（五）胞質(zhì)絲氨酸-蘇氨酸蛋白激酶（六）胞質(zhì)調(diào)控因子（七）核反式調(diào)控因子（八）其它:db1、bcl－2癌基因產(chǎn)物參與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)

胞外信號(hào)作用于膜表面受體→胞內(nèi)信使物質(zhì)的生成便意味著胞外信號(hào)跨膜傳遞的完成。胞內(nèi)信使至少有：cAMP（環(huán)磷酸腺苷）IP3（三磷酸肌醇）PG（前列腺素）cGMP（環(huán)磷酸鳥苷）DG（二?；视停〤a2＋（鈣離子）CAM（鈣調(diào)素）主要機(jī)制是通過蛋白激酶活化引起底物蛋白一連串磷酸化的生物信號(hào)反應(yīng)過程,跨膜機(jī)制涉及到：（一）質(zhì)膜上cAMP信使系統(tǒng)（二）質(zhì)膜上肌醇脂質(zhì)系統(tǒng)這兩個(gè)系統(tǒng)都是由受體鳥苷酸調(diào)節(jié)蛋白（GTP-regulatoryprotein，G蛋白）和效應(yīng)酶（腺苷酸環(huán)化酶磷脂酶等）組成，有相似的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過程：即受體活化后引起GTP與不同G蛋白結(jié)合活化和抑制效應(yīng)酶從而影響胞內(nèi)信使產(chǎn)生而發(fā)生不同的調(diào)控效應(yīng)。（三）受體操縱的離子通道系統(tǒng)（四）受體酪氨酸蛋白激酶的轉(zhuǎn)導(dǎo)

（一）獲得性基因病

(acquiredgeneticdisease)例如：病毒感染激活原癌基因癌基因活化的機(jī)制

（二）染色體易位和重排使無活性的原癌基因轉(zhuǎn)位至強(qiáng)啟動(dòng)子或增強(qiáng)子附近而被活化。與基因脆性位點(diǎn)相關(guān)。（三）基因擴(kuò)增（四）點(diǎn)突變?nèi)?、癌基因的產(chǎn)物與功能（一）癌基因產(chǎn)物作用的一般特點(diǎn)1.目前發(fā)現(xiàn)c-onc均為結(jié)構(gòu)基因.2.癌基因產(chǎn)物可分布在膜質(zhì)核也可分泌至胞外.（二）癌基因產(chǎn)物分類1.細(xì)胞外生長(zhǎng)因子：TGF-b2.跨膜生長(zhǎng)因子受體:MAPK3.細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子:Gprotein/Ras4.核內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子

（三）癌基因產(chǎn)物的協(xié)同作用實(shí)驗(yàn)證明，用ras或myc分別轉(zhuǎn)染細(xì)胞，可使細(xì)胞長(zhǎng)期增殖，但不能轉(zhuǎn)化成癌細(xì)胞，在裸鼠體內(nèi)也不能形成腫瘤。但用ras+myc同時(shí)轉(zhuǎn)染細(xì)胞，則使細(xì)胞轉(zhuǎn)化成癌細(xì)胞。說明：致癌至少需要2種或以上的onc協(xié)同作用，2種onc在2條通路上發(fā)揮作用，由于細(xì)胞增殖調(diào)控是多因子，多階段影響的結(jié)果。而影響增殖分化的onc達(dá)幾十種之多，所以大多數(shù)人認(rèn)為：癌發(fā)生是多階段多步驟的。Whatistumorsuppressorgene?腫瘤抑制基因（抗癌基因、抑癌基因）——是調(diào)節(jié)細(xì)胞正常生長(zhǎng)和增殖的基因。當(dāng)這些基因不能表達(dá)，或其產(chǎn)物失去活性時(shí)，細(xì)胞就會(huì)異常生長(zhǎng)和增殖，最終導(dǎo)致細(xì)胞癌變。反之，若導(dǎo)入或激活它則可抑制細(xì)胞的惡性表型?！┗蚺c抑癌基因相互制約，維持細(xì)胞增殖正負(fù)調(diào)節(jié)信號(hào)的相對(duì)穩(wěn)定。影響1歲的兒童“二次打擊”學(xué)說兩個(gè)等位基因同時(shí)突變視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤（Retinoblastoma）RB基因變異(13號(hào)染色體)

(1)脫磷酸化Rb蛋白（活性）與轉(zhuǎn)錄因子E2F結(jié)合，抑制基因的轉(zhuǎn)錄活性(2)磷酸化Rb蛋白（失活）與E2F解離，釋放E2F(3)E2F啟動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄(4)細(xì)胞進(jìn)入增生階段(G1S)因此，Rb蛋白在控制細(xì)胞生長(zhǎng)方面發(fā)揮重要作用一旦Rb基因突變可使細(xì)胞進(jìn)入過度增生狀態(tài)RB基因的功能等位基因(allele)例如：花顏色基因位于一對(duì)同源染色體的同一位置上、控制相對(duì)性狀的兩個(gè)的基因叫等位基因(allele)一對(duì)相同的等位基因稱純合等位基因

一對(duì)不同的等位基因稱雜合等位基因

顯性基因隱性基因完全顯性不完全顯性共顯性問：女性的兩條X染色體基因應(yīng)如何表達(dá)？拓展知識(shí)：X染色體基因中，有65%完全處于“休眠”狀態(tài)，20%僅在部分女性身上“休眠”，15%則完全逃離“休眠”狀態(tài)一旦其中一條X染色體被損壞，還可以由另一條X染色體來糾正男性卻只有一條X染色體，一旦它遭到破壞，男性就會(huì)患上血友病、色盲以及肌肉萎縮癥等各種遺傳病以前人們一直認(rèn)為，在女性的兩條X染色體中，有一條染色體是完全不起作用或是處于“休眠”狀態(tài)的在Y染色體中，目前仍在“工作”的基因只剩下不到100個(gè)X染色體中“工作”的基因>1000個(gè)有一個(gè)這樣的故事：20年前一次意外事故，三個(gè)工人遭受鈷60（Co60)放射性核素的照射結(jié)果：一名工人不久死亡一名工人幾年后死于白血病最后一名工人20年后患糖尿病就診你知道醫(yī)生在為病人檢查時(shí)發(fā)現(xiàn)了什么嗎？鎖骨骨折肋骨串珠樣X光片發(fā)現(xiàn)廣泛性骨質(zhì)缺損骨髓檢查——漿細(xì)胞比例為30%左右（正常為0.6-1.3%）(多發(fā)性骨髓瘤）因此，多基因病涉及遺傳因素和環(huán)境因素物理因素化學(xué)因素生物因素自發(fā)因素2.多基因病(polygenicdisease)：性狀或疾病的遺傳方式取決于兩個(gè)以上微效基因的累加作用，同時(shí)還受環(huán)境因素的影響，因此這類性狀也稱為復(fù)雜性狀或復(fù)雜疾?。╟omplexdisease）也叫：“復(fù)雜性狀疾病”近視(myopia)高血壓(hypertension)糖尿病(diabetes)精神分裂癥(schizophrenia)哮喘(asthma)腫瘤或癌

(tumororcancer)多基因病的遺傳要點(diǎn)數(shù)量性狀的遺傳基礎(chǔ)是兩對(duì)以上基因。這些基因之間沒有顯,隱性的區(qū)別,而是共顯性。每個(gè)基因?qū)Ρ硇偷挠绊懞苄?稱為微效基因。微效基因具有累加效應(yīng),即一個(gè)基因?qū)Ρ硇妥饔煤苄?但若干個(gè)基因共同作用,可對(duì)表型產(chǎn)生明顯影響。不僅遺傳因素起作用,環(huán)境因素具有明顯作用。例如：結(jié)腸癌（Coloncancer)相關(guān)基因：NGX6，SOX7，ITGB1，HSPA9B，MAPK8，PAG，

RANGAP1，SRC和CDC2等。相關(guān)信號(hào)通路：ras/MEK/ERK，JNK，Rb/E2F，PI3K/AKT及受體相互作用相關(guān)通路，免疫反應(yīng)相關(guān)通路以及細(xì)胞黏附相關(guān)通路等。①早期原發(fā)癌生長(zhǎng)②腫瘤血管形成③腫瘤細(xì)胞脫落并侵入基質(zhì)④進(jìn)入脈管系統(tǒng)⑤癌栓形成⑥繼發(fā)組織器官定位生長(zhǎng)⑦轉(zhuǎn)移癌繼續(xù)擴(kuò)散例如：糖尿病(diabetes)依賴胰島素型糖尿病在位于第6號(hào)染色體上可能包含至少一個(gè)對(duì)I型糖尿病敏感的基因在人類基因組中，大約10個(gè)位點(diǎn)現(xiàn)在被發(fā)現(xiàn)似乎對(duì)I型糖尿病敏感其中：1)11號(hào)染色體位點(diǎn)IDDM2上的基因

2)葡萄糖激酶基因高血壓(hypertension)目前最受關(guān)注的是ATP2B1基因編碼一種膜蛋白，具有鈣泵特性能將高濃度細(xì)胞內(nèi)鈣泵出細(xì)胞外。精神神經(jīng)性疾病精神分裂癥基因表達(dá)改變/誘導(dǎo)增強(qiáng)家族史家暴基因本質(zhì)：基因組變異驚嚇—？—基因突變——精神病多基因病的遺傳：易患性(liability)易感性(susceptibility)發(fā)病閾值(threshold)易患性(liability)——在多基因病發(fā)生中，遺傳因素和環(huán)境因素共同作用決定一個(gè)個(gè)體患某種遺傳病的可能性。possibility遺傳因素(hereditaryfactors)環(huán)境因素(environmentalfactor)易感性(susceptibility)——特指由遺傳因素決定的患病風(fēng)險(xiǎn)，僅代表個(gè)體所含有的遺傳因素，易感性完全由基因決定?！谝欢ǖ沫h(huán)境條件下，易感性高低可代表易患性高低。riskwithdisease發(fā)病閾值(threshold)——當(dāng)一個(gè)個(gè)體易患性高到一定限度就可能發(fā)病——這種由易患性所導(dǎo)致的多基因病發(fā)病最低限度稱為發(fā)病閾值minimum例如：三核苷酸拷貝數(shù)變異CGG(精氨酸)重復(fù)：——重復(fù)5-54次，正常——重復(fù)6-230次，攜帶者（敏感體質(zhì)）——重復(fù)230-4000次，發(fā)病

如：脆性X染色體綜合征智力低下患者細(xì)胞在缺乏胸腺嘧啶或葉酸的環(huán)境中培養(yǎng)時(shí)往往出現(xiàn)