液相色譜實驗報告

華南師范大學(xué)實驗陳述之答祿夫天創(chuàng)作液相色譜分析混合樣品中的苯和甲苯一、實驗?zāi)康?、掌握高效液相色譜定性和定量分析的原理及方法；2、了解高效液相色譜的構(gòu)造、原理及操縱技術(shù)。二、實驗原理高效液相色譜由儲液器，泵、進樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成，儲液器中的流動相被高壓泵打入系統(tǒng)，樣品溶液經(jīng)進樣器進入流動相，被流動相載入色譜柱內(nèi)，由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有分歧的分配系數(shù)，在兩相中作相對運動，經(jīng)過反復(fù)多次的吸附—解吸的分配過程，各組分在移動速度上發(fā)生較大的不同，被分離成單個組分依次從柱內(nèi)流出，通過檢測器時，樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號傳送到記錄儀。三、主要儀器和試劑主要儀器：島津液相色譜儀(LC-10AT)［配有紫外檢測器，PhenomenexODS柱］；10uL微量注射器試劑：苯尺度溶液：10.0?L/mL；甲苯尺度溶液：10.0uL/mL；苯、甲苯混合尺度溶液：1；甲醇：80%；苯和甲苯混合待測溶液；四、實驗步調(diào)1、尺度溶液的配制系列用100?L的微量注射器分別量取10?L、20?L、50?L、100UL的苯和甲苯的混合尺度溶液(10.0?L/mL)，再分別加入90?L、80?L、50uL、0uL甲醇將其稀釋，作為待測液，其濃度分別為1uL/mL、2uL/mL、5uL/mL、10uL/mL2、色譜條件優(yōu)化按操縱規(guī)程開機，并調(diào)好色譜條件，使儀器處于工作狀態(tài)?？刂屏鲃酉嗔魉贋榧状迹?.8mL/min、水：0.2mL/min；柱溫30°C；檢測波長254nm；觀察記錄保存時間，通過軟件分析兩峰分離效果。改變色譜條件，控制流動相流速為甲醇：0.95mL/min、水：0.05mL/min；柱溫30C；檢測波長254nm；觀察記錄保存時間，通過軟件分析兩峰分離效果。通過觀察兩種色譜條件下的峰分離效果，選擇最佳的色譜條件。若還不克不及達(dá)到最佳的分離效果，可以再設(shè)定分歧的色譜條件，然后根據(jù)峰分離效果，選擇最佳的色譜條件。3、 苯、甲苯定性分析在最佳條件下，待基線走穩(wěn)后，用10?L微量注射器分別進樣5?L苯和甲苯混合待測溶液，5uL苯尺度溶液(10.0?L/mL)和5uL甲苯尺度溶液(10.0uL/mL)(微量注射器用甲醇潤洗3?5遍)，觀察并記錄色譜圖上顯示的保存時間，確定苯和甲苯的峰。4、 苯、甲苯定量分析最佳條件下，待基線走穩(wěn)后，用10uL微量注射器分別進樣1.0uL/mL、5uL。觀察并記錄各色譜圖上的保存時間和峰面積。繪制苯和甲苯混合尺度溶液峰面積與相應(yīng)濃度的尺度曲線。5、 苯和甲苯混合待測溶液分析最佳條件下，待基線走穩(wěn)后，用10uL微量注射器進樣苯和甲苯混合待測液5uL，觀察并記錄各色譜圖上的保存時間和峰面積。根據(jù)峰面積在工作曲線上查出苯和甲苯待測液的濃度，并計算試樣中苯和甲苯的含量。

五、實驗數(shù)據(jù)及分析高效液相色譜數(shù)據(jù)陳述一、色譜條件優(yōu)化定性分析定性分析三、定樣品三、定樣品甲苯分分保存時間苯、甲苯混合尺度溶液濃度分別為：1苯、甲苯混合尺度溶液濃度分別為：1ul/ml2ul/ml,5甲苯2ul/ml 4292915甲苯2ul/ml 4292915ul/ml 954537濃度 峰面積1ul/ml 3877102ul/ml 7479835ul/ml 1533892Y=aX+bYY=aX+b四、未知樣品濃度未知樣品苯甲苯濃度2濃度12.9ul/ml六、實驗討論由于實驗中待測溶液的組分只有苯和甲苯兩種物質(zhì)，組分比較簡單，只要在實驗過程中，嚴(yán)格控制且定量進樣，就能采取操縱、計算簡便的尺度曲線法得出準(zhǔn)確的實驗結(jié)果，因而采取尺度曲線法。若采取歸一化法或內(nèi)標(biāo)法，雖然能得到準(zhǔn)確更高的實驗結(jié)果，但由于實驗操縱及計算均較為復(fù)雜，實驗及數(shù)據(jù)處理的時間長，效率相對不高，故實驗中采取尺度曲線法作為定量的方法。最佳色譜條件的選擇是本實驗準(zhǔn)確度的關(guān)鍵。若苯與甲苯的峰分離效果過小，苯與甲苯的峰未能完全分離，肯定影響其保存時間和峰面積的計算，是實驗準(zhǔn)確度減小，數(shù)據(jù)誤差加大；若苯與甲苯的峰分離效果過好，雖然能將苯與甲苯的峰完全分離，實驗準(zhǔn)確度好，但是耗費的實驗時間較長，效率欠好。因而，應(yīng)選擇合適的色譜條件。為了提高尺度曲線的擬