高中生物選修一微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用

高中生物選修一微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用第1頁，課件共24頁，創(chuàng)作于2023年2月一、微生物（一）特點（二）類型①種類多；②分布廣；③易培養(yǎng)；④個體微??；

⑤結(jié)構(gòu)簡單；⑥繁殖快；⑦代謝強；⑧易變異。微生物原核:真核非細胞類：細菌、放線菌、支原體、藍藻等酵母菌、霉菌等真菌：原生生物病毒、類病毒、朊病毒等顯微藻類：衣藻、小球藻等原生動物：草履蟲、變形蟲等第2頁，課件共24頁，創(chuàng)作于2023年2月1.球菌2.桿菌3.螺旋菌肺炎雙球菌金黃色葡萄球菌乳酸鏈球菌大腸桿菌蘇云金芽孢桿菌枯草芽孢桿菌霍亂弧菌幽門螺旋菌齒垢密螺旋體（三）細菌的形態(tài)第3頁，課件共24頁，創(chuàng)作于2023年2月細菌芽孢的結(jié)構(gòu)模式圖環(huán)境適宜時，芽孢可以萌發(fā)，形成一個細菌。（四）細菌的芽孢和孢子芽孢：有些細菌在一定的條件下，細胞里面形成一個橢圓形的休眠體（不是生殖細胞）。孢子：細菌的生殖細胞芽孢的壁很厚，含水量極低，抗逆性極強（對干旱、低溫、高溫等惡劣的環(huán)境有很強的抵抗力）。第4頁，課件共24頁，創(chuàng)作于2023年2月菌落具有大小、形狀、光澤度、顏色、透明度等基本特征。菌落是鑒定菌種的重要依據(jù)。（五）菌落菌落：由單個細菌（或其他微生物）細胞或少數(shù)同種細胞在適宜固體培養(yǎng)基表面或內(nèi)部生長繁殖到一定程度，形成肉眼可見的子細胞群體。第5頁，課件共24頁，創(chuàng)作于2023年2月吸附注入合成釋放組裝

噬菌斑即噬菌體侵染細菌細胞，導(dǎo)致寄主細胞溶解死亡，因而在瓊脂培養(yǎng)基表面形成的肉眼可見的透明小圓斑（“負菌落”）。

在適當條件下，一個噬菌體形成一個噬菌斑。

（六）病毒的繁殖第6頁，課件共24頁，創(chuàng)作于2023年2月二、無菌技術(shù)（一）定義在培養(yǎng)微生物的操作中，所有防止雜菌污染的方法。（二）措施1.對實驗操作的空間、操作者的衣著和手，進行清潔和消毒。2.將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等進行滅菌。3.為避免周圍環(huán)境中微生物的污染，實驗操作應(yīng)在酒精燈火焰附近進行。4.實驗操作時應(yīng)避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與周圍的物品相接觸?？諝庵杏写罅康奈⑸?，而酒精燈的火焰旁能形成一個無菌區(qū)域。第7頁，課件共24頁，創(chuàng)作于2023年2月二、無菌技術(shù)（三）消毒1.定義指使用較為溫和的物理或化學(xué)方法僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分對人體有害的微生物。（不包括芽孢和孢子）2.方法1）煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min2）巴氏消毒法：70-75℃下煮30min或80℃下煮15min3）化學(xué)藥劑消毒法:用酒精進行皮膚消毒;氯氣消毒水源4）紫外線消毒：只適用于表面滅菌和空氣滅菌5）化學(xué)藥物消毒:照射前噴灑式碳酸或煤酚皂溶液等消毒液，以增強消毒效果第8頁，課件共24頁，創(chuàng)作于2023年2月二、無菌技術(shù)（四）滅菌1.定義使用強烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子。2.方法在酒精燈火焰上灼燒。適用于接種環(huán)、接種針、接種鉤等金屬用具以及試管口、三角瓶口滅菌1)灼燒滅菌接種針、鉤、環(huán)第9頁，課件共24頁，創(chuàng)作于2023年2月二、無菌技術(shù)2)干熱滅菌干熱滅菌箱內(nèi)160～170℃1～2小時，適用于耐高溫、需保持干燥的物品（吸管、培養(yǎng)皿）和金屬用具等。3)高壓蒸汽滅菌高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)100KPa、121℃、15～30min；適用于培養(yǎng)基、水的滅菌。高壓蒸汽滅菌前，為什么要將滅菌鍋內(nèi)的冷空氣排盡？利于溫度升高。若冷空氣未排盡，當壓力升到100kpa時，鍋內(nèi)溫度不會上升到應(yīng)有高度，導(dǎo)致滅菌不徹底滅菌完畢后，若壓力未降到零就打開氣閥，會出現(xiàn)什么現(xiàn)象？為什么？滅菌容器內(nèi)的液體沖出容器。因為滅菌鍋內(nèi)外壓力不平衡的緣故利用干熱滅菌箱和高壓蒸汽滅菌鍋滅菌時，物品不能擺的太擠，為什么？以免妨礙熱空氣或蒸汽的流通超凈工作臺第10頁，課件共24頁，創(chuàng)作于2023年2月三、培養(yǎng)基（一）定義

人們按照微生物對__________的不同需求，配制出供其

的營養(yǎng)基質(zhì)叫培養(yǎng)基營養(yǎng)物質(zhì)生長繁殖種類是否含凝固劑用途固體培養(yǎng)基1.5%-2.5%分離、計數(shù)、鑒定半固體培養(yǎng)基0.2%-0.7%觀察運動、鑒定菌種液體培養(yǎng)基否工業(yè)生產(chǎn)（二）類型（按物理性質(zhì)劃分）固體培養(yǎng)基：菌落固體斜面培養(yǎng)基固體平板培養(yǎng)基瓊脂液體培養(yǎng)基第11頁，課件共24頁，創(chuàng)作于2023年2月三、培養(yǎng)基（三）基本成分成分舉例作用或特點碳源無機物有機物氮源無機物有機物無機鹽水CO2、HCO3-等適于自養(yǎng)生物，不提供能量葡萄糖、牛肉膏、蛋白胨等適于異養(yǎng)生物，可提供能量N2、NH4＋、NH3、NO3-等牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等KH2PO4、K2HPO4、（NH4）2SO4、MgSO4、CaCl2、Ca(NO3)2、NaCl、FeSO4等。參與酶的組成；調(diào)節(jié)并維持細胞的滲透壓；調(diào)節(jié)PH的平衡。良好溶劑，參與物質(zhì)運輸；參與細胞內(nèi)一系列化學(xué)反應(yīng)；酶催化的介質(zhì)生長因子微生物生長所必需的、微量的、自身不能合成或合成很少的有機物。包括維生素、某些氨基酸、堿基三類物質(zhì)第12頁，課件共24頁，創(chuàng)作于2023年2月

牛肉膏、稱量紙、少量水加入燒杯→加熱溶解→取紙→蛋白胨、NaCl→攪拌溶解→冷卻調(diào)pH→瓊脂→攪拌熔化→補水至100mL（四）制備（牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基）1.計算：依配方計算100mL培養(yǎng)基所需各成分的用量。2.稱量：玻璃棒挑取牛肉膏于稱量紙上稱取。牛肉膏和蛋白胨易吸潮，稱取時動作要迅速。3.溶化：牛肉膏黏稠，保證粘附在稱量紙上的牛肉膏也溶于水中，減少誤差作為凝固劑防止瓊脂糊底而導(dǎo)致燒杯破裂4.滅菌：培養(yǎng)基裝入錐形瓶，加棉塞，包牛皮紙扎緊，高壓蒸汽滅菌；培養(yǎng)皿5～8套作一包，放于干熱滅菌箱內(nèi)滅菌。三、培養(yǎng)基防止污染和揮發(fā)滅菌時避免水蒸氣浸濕棉塞，取出培養(yǎng)基時，也起到隔絕空氣中雜菌的作用第13頁，課件共24頁，創(chuàng)作于2023年2月三、培養(yǎng)基5.倒平板培養(yǎng)基冷卻至約50℃左右時②灼燒滅菌①左手拔出棉塞③通過縫隙倒入培養(yǎng)基，蓋蓋④冷卻倒置第14頁，課件共24頁，創(chuàng)作于2023年2月答：用手觸摸錐形瓶，感覺剛剛不燙手時。2.為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？答：灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。問題討論1.培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50℃左右時，才能用來倒平板。你用什么辦法來估計培養(yǎng)基的溫度？3.平板冷凝后，為什么要將平板倒置？答：既可以防止培養(yǎng)基表面的水分過快揮發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，影響微生物生長。4.在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？答：最好不要用。因為空氣中的微生物可能在此滋生。第15頁，課件共24頁，創(chuàng)作于2023年2月三、培養(yǎng)基5.倒平板培養(yǎng)基冷卻至約50℃左右時②灼燒滅菌①左手拔出棉塞③通過縫隙倒入培養(yǎng)基，蓋蓋④冷卻倒置6.無菌檢查：

37℃倒置培養(yǎng)24～48h，觀察是否有微生物生長。第16頁，課件共24頁，創(chuàng)作于2023年2月四、純化大腸桿菌（微生物的接種）（一）平板劃線法①接種環(huán)灼燒滅菌②冷卻接種環(huán)，打開菌種的棉塞③試管口滅菌④沾取菌種⑤試管口滅菌，塞棉塞⑥通過縫隙，劃3-5平行線，蓋蓋，不要劃破培養(yǎng)基12345⑦灼燒接種環(huán)，冷卻后，從1區(qū)末端往2區(qū)劃線，重復(fù)操作⑧倒置培養(yǎng)1.操作：第17頁，課件共24頁，創(chuàng)作于2023年2月四、純化大腸桿菌（微生物的接種）（一）平板劃線法02.培養(yǎng)方法：3.其他劃線方法：3.培養(yǎng)結(jié)果：123劃線組：分離到由一個細胞繁殖而來的菌落對照組：無微生物生長三個重復(fù)平板1倒置培養(yǎng)2倒置培養(yǎng)3倒置培養(yǎng)空白對照0倒置培養(yǎng)第18頁，課件共24頁，創(chuàng)作于2023年2月四、純化大腸桿菌（微生物的接種）（一）平板劃線法問題討論1.為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？防止污染：操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上

可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；

劃線結(jié)束時灼燒接種環(huán)，及時殺死接種環(huán)上殘留

的菌種，避免細菌污染環(huán)境和感染操作者。純化微生物：每次劃線前的灼燒，為殺死上次殘留的菌種，

保證使下一次劃線時，菌種直接來源于上次劃

線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次

劃線時菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到單個菌落。第19頁，課件共24頁，創(chuàng)作于2023年2月四、純化大腸桿菌（微生物的接種）（一）平板劃線法問題討論2.在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進行劃線？以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。3.在作第二次以及其后的劃線操作時，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？劃線后，線條末端細菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個細菌繁殖而來的菌落。第20頁，課件共24頁，創(chuàng)作于2023年2月四、純化大腸桿菌（微生物的接種）（二）稀釋涂布平板法第21頁，課件共24頁，創(chuàng)作于2023年2月四、純化大腸桿菌（微生物的接種）（二）稀釋涂布平板法1.操作將菌液進行一系列的梯度稀釋①移液管、試管及水等要滅菌；②菌液與水要混勻；③移液管、試管口要離火焰1～2cm處。涂布平板（接種）第22頁，課件共24頁，創(chuàng)作于2023年2月四、純化大腸桿菌（微生物的接種）（二）稀釋涂布平板法2.培養(yǎng)方法：3.培養(yǎng)結(jié)果：各梯度分別涂布3個平