比濁法操作手冊(cè)

比濁法操作規(guī)程一、準(zhǔn)備工作：(一)培養(yǎng)基的制備 ：1、III號(hào)培養(yǎng)基的制備胨5g葡萄糖1g牛肉浸出粉1.5g磷酸氫二鉀3.68g磷酸二氫鉀1.32g氯化鈉3.5g酵母浸出粉3g水1000ml除葡萄糖外，混合上述成分，加熱溶化后濾過(guò)，加葡萄糖溶解后，搖勻，調(diào)節(jié)pH值使滅菌后為7.0?7.2，在115°C滅菌30分鐘。2、營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基的制備按照營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上標(biāo)注的比例系數(shù)，進(jìn)行營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基和純化水配制?；蛘甙凑账幍溥M(jìn)行配制。胨 10g 氯化鈉 5g瓊脂 15?20g 肉浸液 1000ml除瓊脂外，混合上述成分，調(diào)節(jié)pH值使比最終的pH值略高0.2?0.4,加入瓊脂，加熱溶化后濾過(guò)，調(diào)節(jié)pH值使滅菌后為7.2?7.4，分裝，在115C滅菌30分鐘，趁熱斜放使凝固成斜面。3、注意事項(xiàng)含有葡萄糖的培養(yǎng)基應(yīng)在各成分加熱溶解后再加入，其目的是防止葡萄糖加熱被破壞。配制的培養(yǎng)基必須調(diào)節(jié)pH值，保證培養(yǎng)基滅菌后其pH值在規(guī)定范圍之內(nèi)；測(cè)定硫酸慶大霉素的培養(yǎng)基pH值滅菌后最好在7.15?7.20。pH值的測(cè)定使用酸度計(jì)或其它準(zhǔn)確度較高的儀器，使用20%的氫氧化鈉溶液或濃鹽酸進(jìn)行調(diào)整；調(diào)節(jié)pH時(shí)應(yīng)避免反復(fù)調(diào)節(jié)。（3） 配制的培養(yǎng)基應(yīng)透明、無(wú)沉淀。應(yīng)先調(diào)節(jié)pH再分裝后滅菌。（4） 配制好的培養(yǎng)基應(yīng)儲(chǔ)存在冷處，出現(xiàn)渾濁后不能繼續(xù)使用。（二）緩沖液的制備：1、pH7.0磷酸鹽緩沖液(BP)磷酸二氫鉀13.6g氫氧化鈉2.37g滅菌水2000ml2、pH7.8磷酸鹽緩沖液磷酸氫二鉀5.59g磷酸二氫鉀0.41g水 1000ml3、注意事項(xiàng)（1） 所用化學(xué)藥品規(guī)格不低于二級(jí)試劑（AR）規(guī)格。（2） 配制后若出現(xiàn)沉淀或渾濁應(yīng)用耐酸濾過(guò)漏斗濾過(guò)，使溶液澄清。（3） 緩沖液配制后應(yīng)澄明無(wú)色、無(wú)菌、無(wú)渾濁沉淀，應(yīng)避免被毛點(diǎn)、纖維污染。（4） 配制后應(yīng)滅菌保存使用。（三）試驗(yàn)菌：菌懸液的制備：金黃色葡萄球菌懸液取金黃色葡萄球菌的營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物，接種于營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面上，在35?37°C培養(yǎng)20?22小時(shí)。臨用時(shí)，用滅菌水或0.9%滅菌氯化鈉溶液將菌苔洗下，備用。大腸桿菌懸液取大腸桿菌的營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物，接種于營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面上，在35?37C培養(yǎng)20~22小時(shí)。臨用時(shí)，用滅菌水將菌苔洗下，備用。白色念珠菌懸液取白色念珠菌的改良馬丁瓊脂斜面的新鮮培養(yǎng)物，接種于10mllX號(hào)培養(yǎng)基中，置35?37°C培養(yǎng)8小時(shí)，再用IX號(hào)培養(yǎng)基稀釋至適宜濃度，備用。（四） 實(shí)驗(yàn)器具：1、 比色皿及大口吸管的清洗、滅菌：用自來(lái)水沖洗比色皿5次以上，再用去離子水將每個(gè)比色皿清洗三次，放入恒溫干燥箱，150?160C干熱滅菌1?2小時(shí)。加培養(yǎng)基和菌液用大口吸管依次用自來(lái)水、洗滌液、自來(lái)水沖洗干凈，用純化水沖洗三次，用牛皮紙逐支包好，150?160C干熱滅菌1?2小時(shí)，備用。2、 容量瓶、移液管、刻度吸管等精密計(jì)量器具的清洗、滅菌：依次用自來(lái)水、洗滌液、自來(lái)水洗滌，用純化水沖洗三次，必要時(shí)于150?160C干熱滅菌1?2小時(shí)。3、 注意事項(xiàng)比濁法所用器具應(yīng)避免抗生素及微生物污染，必要時(shí)精密計(jì)量器具應(yīng)進(jìn)行滅菌。（五） 抗生素溶液的配制：精密稱取標(biāo)準(zhǔn)品或供試品適量（制劑產(chǎn)品可根據(jù)劑型選擇適當(dāng)?shù)姆椒ǎ┯谌萘科恐?，配制成濃度?000u/ml的溶液，選擇適當(dāng)?shù)姆椒ㄏ♂屩烈?guī)定濃度。

二、比濁法操作過(guò)程：1、標(biāo)準(zhǔn)品溶液及供試品溶液的制備可按各品種的具體規(guī)定，稀釋制備，也可以進(jìn)行預(yù)試驗(yàn)，選擇合適的濃度比，如果試驗(yàn)菌的靈敏度高可以選擇低的劑間比，如1.25:1；如果試驗(yàn)菌的靈敏度低則可選擇較高的劑間比，如2:1或4:1等。2、標(biāo)準(zhǔn)品溶液及供試品溶液的分裝取備好的大試管16支，分配dS14支，dS24支，dT14支及dT24支，分別作好標(biāo)記，按照拉丁方順序排列。將標(biāo)準(zhǔn)品溶液dSl、dS2及供試品溶液dT1、dT2各1.0毫升按編號(hào)加入相應(yīng)的大試管中。注意：加入溶液時(shí)，均在有標(biāo)記處沿管壁移入，以便在分裝培養(yǎng)基時(shí)，可沿此處管壁流入，將沾在試管壁上的抗生素充分洗入培養(yǎng)基內(nèi)（如有自動(dòng)加樣裝置，則可免去此手工法操作）。比濁法大試管拉丁方排列示意圖3、比濁法試驗(yàn)用培養(yǎng)基的接種接種試驗(yàn)菌的量，需作預(yù)測(cè)試驗(yàn)，使S］、S2管，經(jīng)培養(yǎng)后（37°C，般4小時(shí)），吸收度A（D光密度）以0.3?0.7為適當(dāng)。4、 培養(yǎng)基的分裝比濁法試驗(yàn)用的培養(yǎng)基，接種試驗(yàn)菌后用大口吸管或其他自動(dòng)加樣器，分裝至大試管中，每管分裝9.0ml，每管分裝量應(yīng)盡量一致，其差異越小試驗(yàn)的精密度越高。移入培養(yǎng)基時(shí)，按加入樣品溶液的標(biāo)記處稍上方，沿管壁流入，立即振搖，使抗生素溶液與培養(yǎng)基混合均勻。5、 培養(yǎng)按照各品種規(guī)定的條件進(jìn)行培養(yǎng)。6、 測(cè)量取同條件下接種的比濁試驗(yàn)用培養(yǎng)基9.0ml，加稀釋劑lml，12%甲醛液0.5ml搖勻，作為空白，使用分光光度計(jì)進(jìn)行測(cè)量。使用WBS-100微生物比濁儀可進(jìn)行恒溫振蕩培養(yǎng)并在線快速測(cè)量，在波長(zhǎng)530nm處，測(cè)量各大試管內(nèi)培養(yǎng)物的吸收度。短時(shí)間內(nèi)完成的在線測(cè)量，既能保證更高的精度，又避免了與甲醛的過(guò)多接觸。7、 計(jì)算結(jié)果及誤差統(tǒng)計(jì)分析比濁法效價(jià)測(cè)定二劑量法結(jié)果的計(jì)算，可照管碟法效價(jià)測(cè)定二劑量法結(jié)果的計(jì)算方法計(jì)算，并用誤差統(tǒng)計(jì)分析方法進(jìn)行可靠性檢驗(yàn)，求出效價(jià)、偏離平行及可信限率等，以檢驗(yàn)試驗(yàn)結(jié)果的可靠性。使用WBS-100微生物比濁儀可進(jìn)行自動(dòng)計(jì)算比濁法操作注意事項(xiàng)1、 防止抗生素污染：比濁法測(cè)定抗生素效價(jià)抗生素溶液的濃度非常低，抗生素在培養(yǎng)基中的最終濃度約為0.01?0.1u/m1,因此測(cè)定時(shí)所用的實(shí)驗(yàn)器具應(yīng)嚴(yán)防抗生素殘留和污染。比如，培養(yǎng)用比色皿至少用自來(lái)水沖洗6次、用純化水沖洗三次，洗滌比色皿和大口吸管的水池與洗滌抗生素溶液的水池分開(kāi)。2、 防止微生物污染：微生物污染對(duì)比濁法測(cè)定效價(jià)有很大影響，若實(shí)驗(yàn)用器具、材料被微生物污染，將導(dǎo)致生物反應(yīng)紊亂，各管形成的吸收度精密度變差，可信限率顯著增高，測(cè)定結(jié)果的精密度和準(zhǔn)確度變差，所以實(shí)驗(yàn)過(guò)程中應(yīng)嚴(yán)防微生物污染。因此，實(shí)驗(yàn)用比色皿、大口吸管、培養(yǎng)基、緩沖液等應(yīng)滅菌后使用，稀釋用精密計(jì)量器具必要時(shí)進(jìn)行滅菌。3、 菌種：實(shí)驗(yàn)用菌種應(yīng)保持新鮮、純凈，對(duì)抗生素反應(yīng)應(yīng)靈敏。菌種對(duì)測(cè)定影響很大，若菌種不適合，將得不出正確結(jié)果甚至得不出結(jié)果。若菌種不新鮮，其生長(zhǎng)速度慢，在規(guī)定時(shí)間內(nèi)濁度（吸收度）達(dá)不到要求；若菌種不純，各管形成的吸收度精密度差，可信限率高；若菌種對(duì)抗生素反應(yīng)不靈敏，高低劑量抗生素形成的吸收度距離減小，測(cè)定結(jié)果可信限率顯著增高。4、 培養(yǎng)基：實(shí)驗(yàn)用培養(yǎng)基的靈敏度應(yīng)高，應(yīng)嚴(yán)格控制培養(yǎng)基的pH值。若培養(yǎng)基的靈敏度不高或培養(yǎng)基的pH值不適合，細(xì)菌生長(zhǎng)速度慢，在規(guī)定時(shí)間內(nèi)濁度（吸收度）達(dá)不到要求。硫酸慶大霉素培養(yǎng)基消毒后pH值最好控制在7.15?7.20。5、 抗生素溶液的配制、稀釋與加入：配制、稀釋抗生素溶液時(shí)應(yīng)準(zhǔn)確、精密；加入1.00ml抗生素溶液時(shí)應(yīng)精密，從某一記號(hào)處加入，目的是用培養(yǎng)基將粘在管壁的抗生素溶液沖下；加入9.0ml帶菌培養(yǎng)基應(yīng)精密。6、 培養(yǎng)：培養(yǎng)溫度應(yīng)均勻，應(yīng)按照隨機(jī)排列的方式進(jìn)行培養(yǎng)（二劑量法和三劑量法按照拉丁方排列），以消除局部培養(yǎng)溫度不均勻?qū)Y(jié)果的影響。7、 培養(yǎng)時(shí)間：培養(yǎng)時(shí)間不可過(guò)長(zhǎng)，吸收度不可過(guò)高，高低劑量吸收度達(dá)到0.3以上即可。若發(fā)現(xiàn)某種劑量下細(xì)菌生長(zhǎng)緩慢或停止生長(zhǎng)應(yīng)停止實(shí)驗(yàn)，否則測(cè)定結(jié)果變化較大。

比濁法常見(jiàn)的異?，F(xiàn)象及其解決方法異常現(xiàn)象原因解決辦法1細(xì)菌生長(zhǎng)的濁度大，陽(yáng)性對(duì)照、高低劑量距離小，可信限率高菌種不純；抗生素的濃度不適宜（低）更換菌種；提高抗生素溶液的濃度2陽(yáng)性對(duì)照、高低劑量細(xì)菌生長(zhǎng)的濁度值均小。菌種不新鮮，活力差；培養(yǎng)基不靈敏更換或純化菌種；更換培養(yǎng)基3陽(yáng)性對(duì)照濁度大，高低劑量濁度小抗生素的濃度不適宜（高）降低抗生素溶液的濃度4陽(yáng)性對(duì)照濁度大，陽(yáng)性對(duì)照、高低劑量濁度均符合要求，陽(yáng)性對(duì)照、高低劑量間的距離符合要求，各管間的濁度值精密度差，可信限率高比色皿被抗生素污染；菌種不純或器具被雜菌污染；加樣不精密清洗比色皿；更換菌種或?qū)ζ骶哌M(jìn)行清晰滅菌；提高加樣的精密度5陽(yáng)性對(duì)照、低劑量濁度值符合要求，高劑量濁度值低，高低劑量距離過(guò)大抗生素的濃度不適宜（劑間比過(guò)大）降低劑間比6陽(yáng)性對(duì)照、高低劑量濁度值均符合要求，陽(yáng)性對(duì)照與低劑量距離符合要求，高低劑量距離過(guò)小抗生素的濃度不適宜（劑間比過(guò)小）提高劑間比7某一管或幾管異常過(guò)高或過(guò)低漏加或錯(cuò)加溶液；比色皿方向放置錯(cuò)誤；抗生素污染加強(qiáng)操作，減少錯(cuò)誤；加強(qiáng)操作，減少錯(cuò)誤；器具清洗消毒8結(jié)果明顯不正確，偏離平行異常高四組劑量按照拉丁方排列放置時(shí)位置錯(cuò)誤加強(qiáng)操作，減少錯(cuò)誤

操作實(shí)例分析1、以下是一組有問(wèn)題的實(shí)驗(yàn)報(bào)告：由其中的一些實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)我們可以得出一些問(wèn)題。具體分析如下：品名：硫酸慶大霉素原料編號(hào)：00005實(shí)驗(yàn)日期：2005.11.16碟號(hào)ds1ds2dt1dt2ymNo.10.4920.4790.4970.4881.956No.20.4840.4690.4820.4631.898No.30.4950.4740.4920.4701.932No.40.4890.4760.4910.4701.927No.50.5070.4910.5120.4861.996No.60.5030.4770.4990.4711.950No.70.4810.4870.5000.4851.954No.80.4960.4840.5040.4801.964yk3.9463.8383.9783.81415.576陽(yáng)性對(duì)照：0.521培養(yǎng)時(shí)間：3.5小時(shí) 試管型號(hào)：2cm試品間 F1= 0.0695 回 歸F2=78.3748 偏離平行 F3=3.1699劑間 F6= 27.2044 組 間F7=7.0663組數(shù)m=8 估計(jì)效價(jià)At=100劑間比 r=1.5 濃度比D=1 對(duì)數(shù)值 I= 0.1761t表 t=2.08 樣品方差SA2=0 自由度 f= 21R的對(duì)數(shù)M=-0.0052回歸系數(shù)g=0.0552標(biāo)準(zhǔn)誤差Sm=0.0205對(duì)數(shù)比值R=0.9880 R上限Rh=1.089 R下限Rl=0.8951測(cè)定效價(jià)Pt=98.8002 Pt上限Ph=108.9019Pt下限Pl=89.5091平均可信限率Pt的FL%=9.81實(shí)驗(yàn)說(shuō)明：菌液：III號(hào)培養(yǎng)基培養(yǎng)18個(gè)小時(shí)。溶液配制：由1000單位-100單位一5單位一0.4單位和0.6單位。培養(yǎng)過(guò)程：在WBS-100微生物比濁儀中37°C恒溫振蕩培養(yǎng)3小時(shí)30分。問(wèn)題與討論：符合第一條異?，F(xiàn)象。該結(jié)果可信限沒(méi)有通過(guò)，回歸數(shù)值太小，主要原因是高低劑量沒(méi)有拉開(kāi)，另外陽(yáng)性對(duì)照數(shù)值基本上和低劑量之間的差異不是很大，其原因主要是：①細(xì)菌年齡老化，細(xì)菌老齡化造成了對(duì)抗生素不敏感，高低劑量之間的距離過(guò)小。出現(xiàn)這種情況只能更換菌種，下次做實(shí)驗(yàn)時(shí)最好用新鮮的菌種。②選擇的抗生素溶液濃度過(guò)低，應(yīng)提高溶液的濃度，必要時(shí)提高劑間比。2、以下是某藥品檢驗(yàn)所用WBS-100微生物比濁儀做出的一份實(shí)驗(yàn)結(jié)果：實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)如下：品名：硫酸慶大霉素原料編號(hào)：00006實(shí)驗(yàn)日期：2005.11.2碟號(hào)ds1ds2dt1dt2ymNo.10.2520.0990.2420.0950.688No.20.2280.0890.2370.0910.645No.30.2260.0870.2370.0850.635No.40.2340.0910.2320.0890.646No.50.2560.0950.2460.0950.692No.60.2550.0900.2490.0920.686No.70.2530.0920.2420.0880.675No.80.2530.0940.2530.0940.694yk1.9570.7371.9380.7295.361陽(yáng)性對(duì)照：0.436試品間F1=0.7115回歸F2=5758.2777偏離平行F3=0.1181劑間F6=1919.7024組間F7=4.5630組數(shù)m=8 估計(jì)效價(jià)At=100劑間比r=1.5濃度比D=1對(duì)數(shù)值I=0.1761t表 t=2.08樣品方差SA2=0.0032自由度f(wàn)=21R的對(duì)數(shù)M=—0.0052回歸系數(shù)g=0.0552標(biāo)準(zhǔn)誤差Sm=0.0205對(duì)數(shù)比值R=1.0045R上限Rh=1.0158R下限Rl=0.9934測(cè)定效價(jià)Pt=100.4517Pt上限Ph=101.5752Pt下限Pl=99.3413平均可信限率Pt的FL%=1.11實(shí)驗(yàn)說(shuō)明：菌液：III號(hào)培養(yǎng)基培養(yǎng)18個(gè)小時(shí)。加樣操作：由1000單位-100單位一5單位-0.4單位和0.6單位。培養(yǎng)過(guò)程：在WBS-100微生物比濁儀中37°C恒溫振蕩培養(yǎng)3小時(shí)30分。問(wèn)題與討論：符合第三條異?，F(xiàn)象1、 測(cè)定效價(jià)準(zhǔn)確，可信限也非常低；但是高低劑量濁度值低而且差距太大，主要是因?yàn)榭股貙?duì)細(xì)菌的抑制太明顯，細(xì)菌生長(zhǎng)緩慢。2、 造成這種情況的原因是抗生素濃度過(guò)高。3、 左右效價(jià)差距大約在一個(gè)效價(jià)單位左右，精度很好。3、以下是本公司實(shí)驗(yàn)室工作人員做出的一些報(bào)告:品名：硫酸慶大霉素原料（自身對(duì)照）編號(hào)：00006實(shí)驗(yàn)日期：2005.11.2碟號(hào)ds1ds2dt1dt2ymNo.10.5580.3750.5540.3791.866No.20.5510.3720.5510.3651.839No.30.5390.3670.5320.3581.796No.40.5500.3570.5560.3681.831No.50.5650.4040.5590.3911.919No.60.5360.3740.5320.3811.823No.70.5490.3820.5580.3801.869No.80.5690.3790.5810.3831.912yk4.4173.0104.4233.00514.855陽(yáng)性對(duì)照：0.692培養(yǎng)時(shí)間：4小時(shí)試管型號(hào)：1cm試品間F1=0.0004 回歸F2=3369.3252劑間F6=1123.1250組間F7=7.0663組數(shù)m=8 估計(jì)效價(jià)At=100偏離平行F3=0.0511劑間比r=1.5濃度比D=1對(duì)數(shù)值I=0.1761t表t=2.08樣品方差SA2=0.0001自由度f(wàn)=21R的對(duì)數(shù)M=-0.0001回歸系數(shù)g=0.0013標(biāo)準(zhǔn)誤差Sm=0.0205對(duì)數(shù)比值R=0.9999R上限Rh=1.0145R下限Rl=0.9854測(cè)定效價(jià)Pt=99.9856平均可信限率Pt的FL%Pt上限Ph=101.4499=1.45Pt下限Pl=98.5425實(shí)驗(yàn)說(shuō)明：菌 液：斜面培養(yǎng)基培養(yǎng)20小時(shí)，加2毫升菌液。加樣操作：由1000單位-100單位一5單位-0.4單位和0.6單位。培養(yǎng)過(guò)程：在WBS-100微生物比濁儀中37°C恒溫振蕩培養(yǎng)4小時(shí)。問(wèn)題與討論：1、 總體結(jié)果良好，高低劑量之間的差距拉開(kāi)明顯，并且符合藥典規(guī)定吸光度的范圍。估計(jì)效價(jià)及可信限率均不錯(cuò)。2、 只要每個(gè)比色皿中加入的抗生素準(zhǔn)確、精密，菌液及培養(yǎng)基加入也準(zhǔn)確，這種做法培養(yǎng)出來(lái)的結(jié)果可以達(dá)到不錯(cuò)的效果。4、以下實(shí)驗(yàn)是在某省所做出的回收率實(shí)驗(yàn)報(bào)告：該報(bào)告左半部分拉丁方陣是測(cè)定90%的含量，右半部分是測(cè)定110%的含量。品名：硫酸慶大霉素原料（自身對(duì)照）編號(hào):00006實(shí)驗(yàn)日期:2005.11.29左側(cè)：90%含量測(cè)定碟號(hào)ds1ds2dt1dt2ymNo.10.4280.2790.4500.3141.480No.20.4320.2700.4380.3101.450No.30.4110.2650.4700.3151.461No.40.4030.3010.4450.3181.467陽(yáng)性對(duì)照：0.562培養(yǎng)時(shí)間：3小時(shí)50分試管型號(hào)：2cm試品間劑間F1=23.7193F6=133.0591回歸F2=375.4530組間F7=0.1892偏離平行F3=0.0048組數(shù)m=8估計(jì)效價(jià)At=100劑間比r=1.5濃度比D=1對(duì)數(shù)值I=0.1761t表t=2.2620樣品方差SA2=0.0002自由度f(wàn)=21R的對(duì)數(shù)M=-0.0425回歸系數(shù)g=0.0136準(zhǔn)誤差Sm=0.0094對(duì)數(shù)比值R=0.9067R上限Rh=0.9511R下限Rl=0.8621測(cè)定效價(jià)Pt=90.6721Pt上限Ph=95.1124Pt下限Pl=86.2056平均可信限率Pt的FL%=4.91問(wèn)題與討論：左側(cè)測(cè)得的效價(jià)與90%非常接近,高低劑量之間基本上也已經(jīng)拉開(kāi)一定的距離，可信限也能控制在5%以內(nèi)，偏率平行也通過(guò)，表明該結(jié)果符合要求。

右側(cè)：110%含量測(cè)定碟號(hào)ds1ds2dt1dt2ymNo.10.4120.2580.3850.2191.274No.20.4280.2750.3680.2321.303No.30.3980.2410.3520.2281.219No.40.4000.2610.3900.2311.282陽(yáng)性對(duì)照：0.562 培養(yǎng)時(shí)間：3小時(shí)50分 試管型號(hào)：2cm試品間 F1= 33.8013回 歸F2=664.1970 偏離平行 F3=0.1525劑間 F6= 232.7171組 間F7=2.4152組數(shù) m=8組數(shù) m=8劑間比 r=1.5t表 t=2.2620R的對(duì)數(shù) M=-0.0415對(duì)數(shù)比值R=1.1002測(cè)定效價(jià)Pt=110.0165估計(jì)效價(jià)At=100濃度比D=1樣品方差SA2=0.0001回歸系數(shù)g=0.0077R上限Rh=1.1421Pt上限Ph=114.2058對(duì)數(shù)值 I=0.1761自由度 f=21標(biāo)準(zhǔn)誤差Sm=0.0070R下限Rl=1.0614Pt下限Pl=106.1382平均可信限率Pt的FL%=3.67問(wèn)題與討論：高劑量抗生素吸收度稍微偏低右側(cè)測(cè)得的效價(jià)與110%非常接近，高低劑量之間也拉開(kāi)了距離，可信限也控制在5%以內(nèi)，偏率平行也通過(guò)，表明該結(jié)果也符合要求。綜合討論：由以上的左右兩組拉丁方陣測(cè)得的結(jié)果可以看出：在比濁儀上同時(shí)測(cè)得兩組含量不同的樣品，結(jié)果也能達(dá)到非常好的效果。

5、以下是某藥品檢驗(yàn)所做出的實(shí)驗(yàn)結(jié)果：

該硫酸慶大霉素注射液含量不符合規(guī)定品名：硫酸慶大霉素注射液 編號(hào)：00003實(shí)驗(yàn)日期：2005.11.04初試結(jié)果:碟號(hào)ds1ds2dt1dt2ymNo.10.4530.3120.4690.3351.569No.20.4480.3250.4580.3541.585No.30.4550.3190.4780.3421.594No.40.4590.3230.4820.3491.613No.50.4400.3180.4780.3411.577No.60.4450.3200.4720.3621.599No.70.4470.3280.4660.3411.582No.80.4330.3050.4700.3481.556yk3.5802.5503.7732.77212.675試品間劑間F1=90.5336F6=753.1149回歸F2=2168.3692碟間F7=1.3384偏離平行F3=0.4421組數(shù)m= 8估計(jì)效價(jià)At=100劑間比r= 2濃度比D=1.0016對(duì)數(shù)值I=0.3010t表t=2.08樣品方差SA2=0.0059自由度f(wàn)=21R的對(duì)數(shù)M=—0.0608；回歸系數(shù)g=0.0020標(biāo)準(zhǔn)誤差Sm=0.0066對(duì)數(shù)比值R=0.8693R上限Rh=0.8970R下限Rl=0.8420測(cè)定效價(jià)Pt=86.9329Pt上限Ph=89.7018Pt下限Pl=84.2023平均可信限率Pt的FL%=3.16

復(fù)試結(jié)果:碟號(hào)ds1ds2dt1dt2ymNo.10.5680.3540.5990.3611.882No.20.5790.3480.6050.4051.937No.30.5820.3620.6110.4181.973No.40.5590.3470.5940.3851.885No.50.5750.3650.6120.4151.967No.60.5620.3590.6020.4091.932No.70.5670.3640.6140.3961.941No.80.5730.3550.6220.4111.961yk4.5652.8544.8593.20015.478試品間F1=51.1917劑間F6=1448.0846回歸F2=4192.0639偏離平行F3=0.9981碟間F7=3.5864組數(shù) m= 8估計(jì)效價(jià)At=100劑間比r= 2濃度比D=1.0016對(duì)數(shù)值I=0.3010t表 t=2.08樣品方差SA2=0.0085自由度f(wàn)= 21R的對(duì)數(shù)M=—0.0565回歸系數(shù)g=0.0010標(biāo)準(zhǔn)誤差Sm=0.0047對(duì)數(shù)比值R=0.8781R上限Rh=0.8981R下限Rl=0.8583測(cè)定效價(jià)Pt=87.8062平均可信限率Pt的FL%Pt上限=2.27Ph=89.8082Pt下限Pl=85.8259實(shí)驗(yàn)說(shuō)明：菌 液：營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)基培養(yǎng)16小時(shí)。加樣操作：1000u/ml硫酸慶大注射液f100u/m—5u/mlf0.35u/ml和0.7u/ml的硫酸慶大注射液。培養(yǎng)過(guò)程：在37°C下，20X20mm的石英比色皿中培養(yǎng)3小時(shí)20分。管碟法結(jié)果：初試：83.56%,復(fù)試：90.48%,合并計(jì)算結(jié)果：86.59%問(wèn)題與討論：比濁法測(cè)定結(jié)果精密度好，管碟法測(cè)定結(jié)果精密度較差，兩種方法測(cè)定結(jié)果合并計(jì)算值接近。WBS-100微生物比濁法測(cè)定儀操作規(guī)程1、接通儀器電源，長(zhǎng)按