植物黃酮類物質(zhì)基因工程

植物黃酮類物質(zhì)基因工程應(yīng)用研究進(jìn)展摘要：黃酮類次生代謝產(chǎn)物基因工程是指通過基因工程的手段有目的地修飾個(gè)物種中某一代謝途徑，或引入一新的代謝途徑，以達(dá)到提高或降低黃酮類代謝產(chǎn)物的合成水平，或使被修飾物種產(chǎn)生某種新的次生代謝產(chǎn)物的操作。黃酮類次生代謝物的基因工程包括基因添加，基因剔除，基因的協(xié)同轉(zhuǎn)化，調(diào)控因子等在代謝途徑上的調(diào)控。關(guān)鍵字：黃酮類物質(zhì)基因工程進(jìn)展AbstractFlavonoidsecondarymetabolitesbygeneticengineering,geneticengineeringisameansofpurposefulmodificationofametabolicpathwayinaspecies,orintroduceanewmetabolicpathwaystoachievetheincreaseordecreasethesynthesisofflavonoidmetabolitelevels,ortosomenewspecieshavebeenmodifiedsecondarymetabolitesoperation.Secondarymetabolitesofflavonoids,includinggeneticengineering,geneadded,geneknockout,genecotransformation,andotherregulatoryfactorsontheregulationofthemetabolicpathways.Keywords:FlavonoidsAdvancesingeneticengineering.引言黃酮類物質(zhì)，是一類在植物界廣泛存在的低分子量的多酚類次生代謝產(chǎn)物，從苔蘚植物到被子植物都含有這類物質(zhì)。在自然界中，類黃酮與許多的功能都有關(guān)，類黃酮物質(zhì)是花，果實(shí)和種子顏色的主要顯色物質(zhì)，能夠保護(hù)植物抵御紫外線和防止病源微生物侵襲，能夠提高農(nóng)作物產(chǎn)量，調(diào)節(jié)植物生長(zhǎng)素的運(yùn)輸，在植物和細(xì)菌的相互作用中作為信號(hào)分子，促進(jìn)花粉萌發(fā)并且和花粉的育性直接相關(guān)。同時(shí)，黃酮類化合物是一類生物活性很強(qiáng)的化合物，是一種天然的抗氧化劑，具有降低心肌耗氧量、防治血管硬化等作用，具有抗衰老、增強(qiáng)機(jī)體免疫力、抗癌防癌的功效［1］。在醫(yī)藥、食品等領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)用前景。在植物次生代謝中，類黃酮的生物合成是目前研究最為深入的次生代謝途徑。植物類黃酮生物合成途徑主要由兩類基因控制：結(jié)構(gòu)基因和調(diào)節(jié)基因。其中，結(jié)構(gòu)基因直接編碼與類黃酮次生代謝生物合成有關(guān)的各種酶類，而調(diào)節(jié)基因則是控制結(jié)構(gòu)基因表達(dá)強(qiáng)度和表達(dá)方式的一類基因。目前與類黃酮生物合成的主要結(jié)構(gòu)基因和調(diào)節(jié)基因在多種植物中被克隆，主要結(jié)構(gòu)基因編碼的酶的生化作用機(jī)制也已被闡明［2］。盡管已有學(xué)者利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)，將控制類黃酮次生代謝的關(guān)鍵酶基因或其反義序列導(dǎo)入植物，通過促進(jìn)或抑制該基因的表達(dá)，改變了類黃酮次生代謝途徑，然而植物類黃酮生物合成途徑是非常復(fù)雜的，涉及到的酶種類繁多，有時(shí)并不是一兩個(gè)關(guān)鍵酶所能控制。通過轉(zhuǎn)錄因子作用，有可能激活類黃酮次生代謝途徑中多個(gè)結(jié)構(gòu)基因的表達(dá)，達(dá)到的效果將比導(dǎo)入某個(gè)結(jié)構(gòu)基因的作用更明顯。例如，黃酮醇的形成需要CHS,CHLF3H和FLS等基因的表達(dá)，要提高植物中該物質(zhì)的含量，通過導(dǎo)入某個(gè)酶基因是很難實(shí)現(xiàn)的，Bovyw］等(2002)在番茄果肉中表達(dá)玉米轉(zhuǎn)錄因子基因Lc和CJ，結(jié)果與黃酮醇相關(guān)酶基因的表達(dá)含量顯著提高，同時(shí)在轉(zhuǎn)基因番茄果肉中，黃酮醇含量大概是對(duì)照的20倍。黃酮類生物合成途徑生物合成基因黃酮類化合物是一種小分子酚類物質(zhì)，廣泛存在于植物界，具有多種生物功能，如：調(diào)節(jié)植物生長(zhǎng)，保護(hù)植物免受紫外線的損傷，抗病蟲等。花青素和黃酮類物質(zhì)還具有較高的抗氧化活性，富含這兩種物質(zhì)的植物食品有利于人類健康和疾病預(yù)防。由于對(duì)這兩條生物合成途徑研究的較清楚，而且其生物合成途徑的改變能很容易通過花色的改變來(lái)鑒定［4］。因此，自上世紀(jì)90年代早期，黃酮類和花青素的生物合成一直是植物次生代謝基因工程的一個(gè)主要目標(biāo)。Chenb］等發(fā)現(xiàn)查爾酮異構(gòu)酶是黃酮類代謝途徑中的早期酶，也是增加黃酮醇產(chǎn)物的關(guān)鍵酶。.Davies^］等將矮牽牛CHI在番茄中超表達(dá)，導(dǎo)致轉(zhuǎn)基因番茄果皮中黃酮類含量增加78倍、果肉中黃烷醇增加21倍。植株及果實(shí)的其它性狀在轉(zhuǎn)基因植株和對(duì)照之間沒有區(qū)別。將查爾酮合成酶和黃酮醇合成酶基因?qū)敕押?，使這兩個(gè)目標(biāo)合成酶基因協(xié)同表達(dá)的轉(zhuǎn)基因果肉中黃酮醇類物質(zhì)積累顯著增加［7］。這些結(jié)果表明了應(yīng)用基因工程技術(shù)使目標(biāo)酶基因在番茄果實(shí)中超表達(dá)，增加番茄果實(shí)中有益于人體健康的化合物的生物合成量是可行的。豆類植物的異黃酮是一類植物抗毒素，在植株受微生物侵染后，這些抵抗微生物的活性化合物可被誘導(dǎo)合成［8］。正常情況下，擬南芥、煙草和玉米等植物缺少合成這類化合物的能力。何水林［9］等將一種細(xì)胞色素P450單加氧酶——異黃酮合成酶的基因?qū)脒@些植物，使該基因超表達(dá)，這些轉(zhuǎn)基因植物均能合成異黃酮類物質(zhì)。因此，苯丙烷類代謝途徑的基因工程可進(jìn)一步應(yīng)用于提高異源植物中異黃酮的生物合成（楊致榮等［10］）。轉(zhuǎn)錄因子植物代謝途徑大多是由多種酶參與的多步反應(yīng)，受發(fā)育、環(huán)境等因素的影響，對(duì)單個(gè)基因進(jìn)行修飾有時(shí)難以奏效。研究發(fā)現(xiàn)一些轉(zhuǎn)錄因子可調(diào)控多個(gè)參與代謝途徑基因的表達(dá)，例如，MYB類轉(zhuǎn)錄因子就參與了黃酮類物質(zhì)的生物合成的調(diào)節(jié)（楊致榮等［ii］）。田文中等［12］通過轉(zhuǎn)錄因子的分子操作，調(diào)控植物代謝途徑中目標(biāo)代謝物合成的嘗試已取得了成功。在玉米籽粒中，兩種轉(zhuǎn)錄因子即R和C1通過共同作用調(diào)節(jié)著花青素生物合成。?梁輝等［13］將轉(zhuǎn)錄因子R和C1在離體培養(yǎng)的未分化玉米細(xì)胞超表達(dá)，成功地誘導(dǎo)了完整的黃酮類合成途徑。在水稻中，玉米轉(zhuǎn)錄因子R、C1和查爾酮合成酶基因的協(xié)同超表達(dá)也激活了花青素生物合成途徑，增強(qiáng)了對(duì)真菌的抗性［14］。曾明等［15］應(yīng)用TDNA激活標(biāo)簽技術(shù)在擬南芥中鑒定出一種MYB類轉(zhuǎn)錄因子，它的超表達(dá)能激活許多參與花青素生物合成途徑的基因表達(dá)，使植物體中紫色素的含量明顯增加。有些轉(zhuǎn)錄因子則是植物體內(nèi)自然產(chǎn)物合成的抑制子。采用基因沉默技術(shù)關(guān)閉這類轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)，就能促使相關(guān)化合物的合成。例如，擬南芥轉(zhuǎn)錄因子AtMYB4,是參與芥子酸酯合成的關(guān)鍵酶——桂酸4-單加氧酶（C4H）的抑制子。汪海峰等［16］將AtMYB4基因剔除，結(jié)果導(dǎo)致了C4H的大量表達(dá)，葉子中芥子酸酯增加，提高了抗紫外輻射的能力。刑建民等［17］克隆和鑒定了一個(gè)參與草莓果實(shí)黃酮類代謝途徑的轉(zhuǎn)錄因子FaMYB1，該轉(zhuǎn)錄因子抑制黃酮類合成下游一些步驟。FaMYB1基因在煙草中的超表達(dá)引起了花青素和黃酮類化合物減少。相反，抑制或降低FaMYB1就會(huì)增加花青素和黃酮類化合物的積累。上述這些例子表明，通過一種或幾種轉(zhuǎn)錄因子的超表達(dá),可以改變植物生長(zhǎng)發(fā)育過程中自然產(chǎn)物的合成和積累，甚至在異源植物種中也是可行的。植物次生代謝圖譜植物次生代謝圖譜（圖1）的研究是一項(xiàng)非常復(fù)雜和巨大的工程，它包括次生代謝途徑的中間產(chǎn)物和終產(chǎn)物的來(lái)龍去脈，參與各步反應(yīng)的酶和基

因的表達(dá)與調(diào)控，以及次生代謝產(chǎn)物產(chǎn)生的細(xì)胞學(xué)定位等等。迄今，在龐大的植物次生代謝途徑網(wǎng)絡(luò)中，已明確功能的酶和已克隆的基因是極其有限的。黃酮類次生代謝產(chǎn)物的生物合成途徑（圖2）”1，是目前研究得較為透徹的次生代謝途徑之一用2黃酮類化合物生成合成簡(jiǎn)圖箭頭顏色與轉(zhuǎn)錄因子顏色相對(duì)應(yīng)，顫色相同表示催化該步反應(yīng)的酶受該轉(zhuǎn)

錄因子的調(diào)控。為研究植物次生代謝中物質(zhì)的流向，c13標(biāo)記的底物飼喂法。一直是常用的方法。植物懸浮培養(yǎng)細(xì)胞，能夠有效利用環(huán)境中的底物合成產(chǎn)物，而成為底物飼喂法中的一個(gè)重要工具。根和芽培養(yǎng)物的應(yīng)用，解決了在培養(yǎng)細(xì)胞中不能表達(dá)的某些次生代謝途徑的問題，也成為目前研究植物次生代謝途徑的有效手段之一。另一比較便捷而有效的方法是將酶從植物中提取出來(lái)，與底物共同培育，檢測(cè)生成的產(chǎn)物，由此推導(dǎo)出物質(zhì)的流向［18］。植物次生代謝途徑中，酶控制著物質(zhì)流向，其作用是必不可少的，而酶的作用又離不開基因的調(diào)控?？萍嫉陌l(fā)展，已經(jīng)使基因水平的操作成為現(xiàn)實(shí)。酶及其基因的表達(dá)調(diào)控研究是復(fù)雜而細(xì)致的工作?；虻姆蛛x與克隆是研究其表達(dá)調(diào)控的基礎(chǔ)，應(yīng)用在植物次生代謝途徑研究中的方法主要有差別篩選法、轉(zhuǎn)座子標(biāo)簽法和微生物突變互補(bǔ)法。得到與目標(biāo)代謝途徑相關(guān)的突變體是這些基因克隆方法的關(guān)鍵。突變體的產(chǎn)生往往是由于基因水平的變化引起，利用突變體與野生株之間的基因差異，可以篩選到與代謝途徑有關(guān)的新基因，為代謝途徑的研究開辟新的天地。利用已知的關(guān)鍵酶的氨基酸序列的保守區(qū)域，設(shè)計(jì)兼并引物，克隆在其它物種中已知的某個(gè)基因，是在新的物種中展開次生代謝研究工作的常用方法［19］。黃酮類化合物生成基因工程的策略黃酮類化合物生成基因工程中，大多是通過轉(zhuǎn)入某些關(guān)鍵酶的基因或其反義基因，促進(jìn)或抑制該基因的表達(dá)，而引起植物次生代謝產(chǎn)物發(fā)生改變。此類報(bào)道有很多，如趙淑娟等［20］在開白花和深粉紅色花的矮牽牛變種中轉(zhuǎn)入苜蓿的查爾酮還原酶，分別得到了開黃色花和淺粉紅色花的轉(zhuǎn)基因植株。這是因?yàn)檗D(zhuǎn)入的查爾酮還原酶與受體細(xì)胞自身的查爾酮合成酶協(xié)同作用生成了異甘草根亭基質(zhì)，而該化合物不能為矮牽牛的查爾酮異構(gòu)酶催化，造成脫氧查爾酮衍生物的積累。然而，植物次生代謝途徑是非常復(fù)雜的，有時(shí)遠(yuǎn)非一兩個(gè)關(guān)鍵酶所能控制。調(diào)控因子的應(yīng)用和基因的協(xié)同轉(zhuǎn)化是近幾年來(lái)植物次生代謝基因工程中的一個(gè)新方向，顯示出廣泛的應(yīng)用前景?；蛱砑油ㄟ^基因工程提高控制某一特定次生代謝物合成的限速酶活性或在植物中引入新的次生代謝物合成途徑，可提高轉(zhuǎn)基因植物目標(biāo)次生代謝物含量或合成外源次生代謝物"前一種策略可通過強(qiáng)啟動(dòng)子與關(guān)鍵酶基因的嵌合轉(zhuǎn)化，后一種策略往往采用次生代謝物合成途徑中下游一個(gè)或若干個(gè)有關(guān)酶基因的協(xié)同轉(zhuǎn)化。何水林等［21］,將IOMT(異黃酮-4-0-甲基轉(zhuǎn)移酶)基因與CaMV35S連接，轉(zhuǎn)入苜蓿，在對(duì)照植株中，I0MT和其它有關(guān)異黃酮合成酶的基因僅在病原菌誘導(dǎo)后表達(dá)，而轉(zhuǎn)基因植物在病原菌侵染后IOMT基因的快速組成型表達(dá)使其較對(duì)照合成苜蓿素的速度快且產(chǎn)量高，相應(yīng)地，抗病水平也有顯著的提高。將次生代謝物合成途徑的下游關(guān)鍵酶基因轉(zhuǎn)入目標(biāo)植物，在植物細(xì)胞內(nèi)存在反應(yīng)底物的時(shí)，外源基因的表達(dá)可使轉(zhuǎn)基因植物啟動(dòng)新的次生代謝物合成支路。將擬南芥的IFS基因轉(zhuǎn)入煙草和玉米等非豆科植物，可將柚皮素轉(zhuǎn)化為染料木黃酮、大豆黃素等僅存在于豆科植物的異黃酮類植保素［22］?；虻奶蕹龑?duì)于部分不利于營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)或加工品質(zhì)提高的植物次生代謝物，可通過反義基因的遺傳轉(zhuǎn)化抑制其合成途徑中有關(guān)基因的表達(dá)，減少植物合成特定次生代謝物，從而提高植物產(chǎn)品的品質(zhì)。例如，通過反義基因技術(shù)，可降低飼料和樹木中木質(zhì)素含量，從而提高飼料的飼用價(jià)值和木材的造紙質(zhì)量和效益。通過CCoAOMT反義基因的遺傳轉(zhuǎn)化，有效地降低了轉(zhuǎn)基因煙草中木質(zhì)素含量。對(duì)黃酮類物質(zhì)代謝的基因剔除目前還有待研究。調(diào)控因子的作用植物次生代謝產(chǎn)物的生物合成，大多是由多種酶參與的多步反應(yīng)，在此過程中調(diào)控因子往往具有牽一發(fā)而動(dòng)全身的功能。研究表明，轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)控在黃酮類化合物的生物合成中具有重要作用。Walker等測(cè)］在大麥培養(yǎng)細(xì)胞中表達(dá)異源轉(zhuǎn)錄因子cl和R基因，使得正常狀態(tài)下無(wú)色的細(xì)胞中出現(xiàn)了藍(lán)色素)的積累。這是因?yàn)樵谒{(lán)色素的生物合成起作用的大部分酶類，在cl和R基因表達(dá)的MYB蛋白和bHLH蛋白的協(xié)同調(diào)控下，催化代謝向藍(lán)色素生成的方向進(jìn)行。3-脫氧黃酮的合成需要另一MYB型的轉(zhuǎn)錄因子——P因子的調(diào)控，它是獨(dú)立于c1和R因子的轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子。異源P基因在大麥培養(yǎng)細(xì)胞中表達(dá)，導(dǎo)致了不同于cl，R因子調(diào)控的黃酮類化合物的積累。因此，合理利用調(diào)控因子，將可能成為今后植物次生代謝基因工程的有效手段。參與類黃酮次生代謝的轉(zhuǎn)錄因子黃酮類次生代謝生物合成途徑涉及的反應(yīng)步驟多，而且類黃酮在植物組織中含量一般較低，檢測(cè)難度大，因而對(duì)與黃酮類次生代謝有關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子的分離、鑒定困難較大。但是，隨著分子生物學(xué)和基因工程技術(shù)的迅猛發(fā)展，目前已在一些植物中發(fā)現(xiàn)了調(diào)控類。黃酮生物合成途徑的調(diào)節(jié)基因，并且用轉(zhuǎn)座子標(biāo)簽法等技術(shù)克隆了部分編碼轉(zhuǎn)錄因子的基因如今，人們已在玉米、擬南芥、矮牽牛、水稻等作物中，分離、鑒定了調(diào)控黃酮類次生代謝的轉(zhuǎn)錄因子基因，分別屬于編碼M'1q3、MYC、bZIP蛋白、WD40蛋白、鋅指蛋白等各種類型基因家族。它們大多是控制花色、種皮顏色等表型易于檢測(cè)的性狀，因?yàn)榭刂七@些性狀的轉(zhuǎn)錄因子基因便于應(yīng)用轉(zhuǎn)座子標(biāo)簽、T．DNA激活標(biāo)簽或圖位克隆等方法進(jìn)行分離。這些轉(zhuǎn)錄因子能夠通過與結(jié)構(gòu)基因啟動(dòng)子中含有的能被其識(shí)別的順式作用元件結(jié)合，從而激活類黃酮生物合成途徑中多個(gè)基因的表達(dá)，有效地啟動(dòng)類黃酮生物合成途徑。在目前已被分離、鑒定與調(diào)控黃酮類次生代謝有關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子中，人們對(duì)MYB和MYC(bHLH)兩大類轉(zhuǎn)錄因子家族的研究較為深入［24］。3.4基因的協(xié)同轉(zhuǎn)化矮牽牛AN2、玉米C1、擬南芥的PAPI/PAP2等R2R3—MYB轉(zhuǎn)錄因子不能單獨(dú)調(diào)控花色素合成的結(jié)構(gòu)基因，而必須在有另外一類轉(zhuǎn)錄因子(bHLH)存在的情況下才能發(fā)揮功能。此外，在擬南芥中轉(zhuǎn)錄因子基因TTG2、與TTGl、m、m一起調(diào)控原花色素的合成，m編碼的MYB蛋白激活類黃酮合成途徑中后期相關(guān)酶基因的表達(dá)，但是需要依賴bHLH型轉(zhuǎn)錄因子TT8的作用，共同控制DFR和BAN基因的表達(dá)。在玉米中，MYB型轉(zhuǎn)錄因子C1/PI和bHLH型轉(zhuǎn)錄因子RfB協(xié)同控制玉米類黃酮生物合成途徑結(jié)構(gòu)基因的表達(dá)。利用次生代謝途徑中幾種酶的協(xié)同作用，可以達(dá)到改造植物的理想目的，這為植物次生代謝產(chǎn)物的基因工程開辟了新的思路。植物轉(zhuǎn)基因方法植物黃酮類轉(zhuǎn)基因的方法很多，最為成功的主要有農(nóng)桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)基因技術(shù)和基因槍直接轉(zhuǎn)基因技術(shù)。農(nóng)桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)基因技術(shù)農(nóng)桿菌包括根癌農(nóng)桿菌和發(fā)根農(nóng)桿菌。根癌農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒和發(fā)根農(nóng)桿菌Ri質(zhì)粒上Vir區(qū)表達(dá)的蛋白質(zhì)，可以將質(zhì)粒上的T.DNA轉(zhuǎn)入植物細(xì)胞，并經(jīng)同源重組，整合到植物的基因組，在植物細(xì)胞中表達(dá)。利用T-DNA的轉(zhuǎn)移機(jī)理，科研工作者成功地構(gòu)建了將外源基因轉(zhuǎn)入植物細(xì)胞所用的雙元載體，使它成為植物轉(zhuǎn)基因的有效工具。植物次生代謝基因工程中，這一技術(shù)已得到廣泛應(yīng)用，尤其是轉(zhuǎn)基因毛狀根培養(yǎng)技術(shù)。利用發(fā)根農(nóng)桿菌感染藥用植物形成的發(fā)根，生長(zhǎng)速度快，遺傳穩(wěn)定性強(qiáng)，是頗有潛力的培養(yǎng)系統(tǒng)，至今已在31科100多種植物上取得了成功。在研究LeDI.2功能的過程中，Winkel等［25］利用發(fā)根農(nóng)桿菌(A.rhizogenes)將LeDI.2的反義DNA轉(zhuǎn)入紫草細(xì)胞，得到了紫草寧含量減少的毛狀根。趙淑娟等，獲得的轉(zhuǎn)GBSSI基因的黃芪毛狀根，其多糖含量和黃酮類化合物含量有所改變?；驑屩苯愚D(zhuǎn)基因技術(shù)?；驑尲夹g(shù)的特點(diǎn)是：①由于根癌農(nóng)桿菌僅對(duì)某些雙子葉植物敏感，而對(duì)多數(shù)單子葉植物不敏感，從而限制了根癌農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒介導(dǎo)法等的應(yīng)用范圍，而基因槍法不受宿主限制、宿主可以是雙子葉植物，也可以是單子葉植物。②受體類型廣泛。該法不僅可以原生質(zhì)體作為受體材料，而且同以完整細(xì)胞、組織等如葉片、莖或根的切段、幼胚、愈傷組織、花粉細(xì)胞等作為受體材料進(jìn)行轟擊轉(zhuǎn)化。③可控度高?；驑屴Z擊過程中，可根據(jù)需要將射彈射入特定層次位置的細(xì)胞，有利于提高轉(zhuǎn)化效率。④操作簡(jiǎn)單、迅速，但費(fèi)用較高。操作需要基因槍和組織培養(yǎng)條件即可。目前普遍用于黃酮類化合物基因工程中。結(jié)語(yǔ)與展望類黃酮次生代謝途徑中，特定產(chǎn)物的生成與否、量的多少主要由參與其合成的多個(gè)酶蛋白的活性所決定，而這些相關(guān)酶的表達(dá)受到相應(yīng)的轉(zhuǎn)錄因子調(diào)節(jié)。轉(zhuǎn)錄因子通過激活類黃酮次生代謝途徑中多個(gè)酶基因的表達(dá)，可有效地啟動(dòng)或關(guān)閉次生代謝合成途徑，從而調(diào)節(jié)特定次生代謝物的形成。轉(zhuǎn)錄因子的基因工程是類黃酮次生代謝遺傳改良的有效途徑，隨著植物次生代謝調(diào)控機(jī)制的闡明，特別是隨著調(diào)節(jié)特定次生代謝物合成的轉(zhuǎn)錄因子的分離和功能鑒定，轉(zhuǎn)錄因子基因工程將為人類開發(fā)利用類黃酮次生代謝物這一巨大的寶庫(kù)提供更為有效的手段。同時(shí)類黃酮生物合成過程的調(diào)控是很復(fù)雜的，類黃酮生物合成還與環(huán)境刺激因子如光、溫度和營(yíng)養(yǎng)供給有關(guān)；此外也受內(nèi)部因子的作用，如生長(zhǎng)調(diào)節(jié)因子、代謝物以及組織特殊發(fā)育階段的影響。不同的調(diào)控因子控制了生物合成途徑的不同部分，不同的調(diào)控因子之間也存在著相互作用，而這些調(diào)控機(jī)制仍需要進(jìn)一步研究［26］。總之，研究類黃酮的生物合成及其基因調(diào)控模式，將有利于我們更好地采用基因工程手段改良植物類黃酮次生代謝途徑。參考文獻(xiàn)：AtchleyW.R.WollenbergK.R.FitchW.M.TerhalleW,DressA.WCorrelationsamongaminoacidsitesinbHLHproteindomains:aninformationtheoreticanalysis2000BorevitzJ.O.XiaY.BlountJ.DixonR.A,LambCActivationtaggingidentifiesaconservedMYBregulatorofphenylpropanoidbiosynthesis2000BovyA.deVosR.KemperM.SchijlenE,AlmenarPertejoM,MuirS,CollinsG,RobinsonS,VerhoeyenM,HughesS,Santos-BuelgaC,vanTunenAHigh-flavonoltomatoesresultingfromtheheterologousexpressionofthemaizetranscriptionfactorgenesLCandC12002YangZR(楊致榮),WangXC(王興春),LiXM(李西明),YangCD(楊長(zhǎng)登)(2004).Advanceonthestudyoftranscriptionfactorsinhigherplants.Hereditas(遺傳),26(3):403-408(inChinese)ChenDH,YeHC,LiGF(2000).ExpressionofachimericfarnesyldiphosphatesynthasegeneinArtemisiaannuaL.transgenicplantsviaAgrobacteriumtumefaciensmediatedtransformation.PlantSci,155:179-185DaviesKM(2000).Plantcolourandfragrance.In:VerpoorteR,AlfermannAW(eds).MetabolicEngineeringofPlantSecondaryMetabolism.Dordrecht:KluwerAcademicPublishers,127-164何水林，鄭金貴，黎紅志#種植制度中作物他感作用及其應(yīng)用.見：黃國(guó)勤，高旺盛，陳阜等，中國(guó)集約型農(nóng)作制度可持續(xù)發(fā)展.南昌：江西科學(xué)技術(shù)出版社，2000.219~2248.何水林,植保素代謝與植物防御反應(yīng).廣州：廣東科技出版社，2002.1~259.石碧，狄瑩,植物多酚，北京：科學(xué)出版社，1999.171~180,285~29010.楊致榮.毛雪.楊致芬.李潤(rùn)植CytochromeP450genesandtheirapplicationinplantimprovement[J]-HEREDITAS2003(02)楊致榮.王興春.李西明.楊長(zhǎng)登Advanceonthestudyoftranscriptionfactorsinhigherplants[J]-HEREDITAS2004(03)田文中.丁力.曹守云.戴順洪.葉松青.李良材Ricetransformationwithaphytoalexingeneandbioassayofthetransgenicplants[J]-植物學(xué)報(bào)1998(09)梁輝?鄭近?段霞瑜用基因槍法獲得抗白粉病轉(zhuǎn)芪合酶基因小麥[J]-科學(xué)通報(bào)1999(24)李衛(wèi)東?梁慧珍?盧為國(guó)大豆籽粒異黃酮含量與生態(tài)因子相關(guān)關(guān)系的研究[J]-中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)2004(10)曾明?張漢明?鄭水慶野葛中活性成分的動(dòng)態(tài)研究[J]-第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)1997(02)汪海峰?鞠興榮?何廣斌不同海拔高度和生長(zhǎng)季節(jié)對(duì)銀杏葉