農(nóng)藥殘留和霉菌素檢測(cè) Microsoft PowerPoint 演示文稿-課件

農(nóng)藥殘留量的測(cè)定

農(nóng)藥殘留是指由于存留在農(nóng)產(chǎn)品、或食品、飼料、藥材等產(chǎn)品中的農(nóng)藥及其降解代謝產(chǎn)物,還包括環(huán)境背景中存有的農(nóng)藥污染物或持久性農(nóng)藥的殘留物再次在產(chǎn)品中形成的殘留。一般來說,農(nóng)藥殘留量是指農(nóng)藥本體及其代謝物的殘留量的總和,表示單位為mg/kg。當(dāng)農(nóng)藥過量或長期施用,導(dǎo)致農(nóng)產(chǎn)品或食物中農(nóng)藥殘存數(shù)量超過最大殘留限量(MRL)時(shí),將對(duì)人和動(dòng)物產(chǎn)生不良影響,或通過食物鏈對(duì)生態(tài)系統(tǒng)中其他生物造成毒害。食品中的農(nóng)藥殘留途徑：①施用農(nóng)藥后對(duì)作物或食品的直接污染；②空氣、水、土壤的污染造成動(dòng)植物體內(nèi)含有農(nóng)藥殘留，而間接污染食品；③來自食物鏈和生物富集作用，如：水中農(nóng)藥→浮游生物→水產(chǎn)動(dòng)物→高濃度農(nóng)藥殘留食品；④運(yùn)輸及貯存中由于和農(nóng)藥混放而造成食品污染。色譜技術(shù)1薄層色譜法薄層色譜的原理：是將吸附劑涂布于諸如玻璃板、鋁薄板等固相支持物,經(jīng)枯燥后形成薄層板,當(dāng)點(diǎn)有樣品的薄層板被放入盛有流動(dòng)相的層析缸中時(shí),在流動(dòng)相沿固定相(即吸附劑)移動(dòng)的過程中,樣品中不同的組分受到來自固定相和流動(dòng)相的作用力不同,致使各組分的在固定相上遷移的速率不同,從而使得各組分被分開。被別離的各組分在薄層板上形成不同的斑點(diǎn),斑點(diǎn)的位置常用比移值(Rf)來表示：Rf=斑點(diǎn)中心到原點(diǎn)中心距離/展開劑前沿到原點(diǎn)中心距離在一定的色譜條件下,物質(zhì)的Rf值是一定的,因此可以用Rf值進(jìn)行定性分析。2紙色譜作為快速別離和鑒定的一種手段，紙色譜法可以進(jìn)行有機(jī)氯農(nóng)藥殘留的半定量檢測(cè)，與國家標(biāo)準(zhǔn)方法色譜法相比無顯著差異，具有方法簡單，操作方便快捷，靈敏和干擾少等特點(diǎn)。3氣象色譜法氣象色譜法具有高選擇性，高別離效能，高靈敏度，快速等優(yōu)點(diǎn)。易汽化，汽化后部發(fā)生分解等現(xiàn)象的農(nóng)藥均可用此方法檢測(cè)，使用的氣譜柱主要是填充柱和毛細(xì)管柱，檢測(cè)儀器有FID,ECD,TCD,FPD,PID等。食品中有機(jī)氯農(nóng)藥殘留量測(cè)定一、有機(jī)氯農(nóng)藥的結(jié)構(gòu)與性質(zhì)有機(jī)氯農(nóng)藥〔簡稱為OCP〕分為DDT類和氯化甲撐萘類兩類：DDT類，稱為氯化苯及其衍生物，包括DDT、666等；氯化甲撐萘類，如艾氏劑、狄氏劑、異狄氏劑、七氯、氯丹、毒殺芬等。一)666〔簡稱BHC〕白色或淡黃色固體，不溶于水，易溶于脂肪、丙酮、乙醚及環(huán)已烷等有機(jī)溶劑，對(duì)光、熱、空氣、強(qiáng)酸穩(wěn)定，遇堿分解二)DDT〔簡稱二二三〕白色或淡黃色固體；不溶于水，易溶于脂肪、丙酮、四氯化碳、苯、氯苯、乙醚等有機(jī)試劑，對(duì)光、酸穩(wěn)定，對(duì)熱較穩(wěn)定，遇堿分解〔1〕提取糧食：稱取樣品→石油醚提取→過濾到分液漏斗→定至約100ml蔬菜：稱取樣品→搗碎→取勻漿→丙酮提取→過濾到分液漏斗→石油醚提取→加硫酸鈉溶液→別離→石油醚層過濾至分液漏斗→定至約100ml肉類及動(dòng)物組織：稱取絞碎樣品→加硫酸鈉研磨→加石油醚提取→濃縮至約100ml〔2〕凈化〔3〕測(cè)定①色譜條件電子捕獲檢測(cè)器〔ECD〕氣化室溫度：190℃〔215℃〕色譜柱溫度：160℃〔195℃〕檢測(cè)器溫度：165℃〔225℃〕載氣流速：60ml/min〔90ml/min〕色譜柱：固定液1.5%OV-17和2%QF-1，擔(dān)體白色硅藻土〔80~100目〕，3~4mm×2m②標(biāo)準(zhǔn)曲線制備〔3〕測(cè)定③樣品測(cè)定〔二〕氣相色譜法〔GB/T146—2003〕〔食品中有機(jī)氯和擬除蟲菊酯類農(nóng)藥多種殘留的測(cè)定〕樣品中有機(jī)氯和擬除蟲菊酯農(nóng)藥用有機(jī)溶劑提取，經(jīng)液液分配及層析凈化除去干擾物質(zhì)，用電子捕獲檢測(cè)器檢測(cè)，根據(jù)色譜峰的保存時(shí)間定性，外標(biāo)法定量。取糧食樣品經(jīng)糧食粉碎機(jī)粉碎，過20目篩制成糧食試樣。取蔬菜樣品擦凈，去掉非可食局部后備用。糧食樣品：稱取10g糧食試樣，置于100mL具塞三角瓶中，參加20mL石油醚提取，于振蕩器上振搖0.5h。蔬菜樣品：稱取20g蔬菜試樣，置于組織搗碎杯中，參加30mL丙酮和30mL石油醚，于搗碎機(jī)上搗碎2min，搗碎液經(jīng)抽濾，濾液移入250mL分液漏斗中，參加100mL2%硫酸鈉水溶液，充分搖勻，靜置分層，將下層溶液轉(zhuǎn)移到另一250mL分液漏斗中，用20mL×2石油醚萃取，合并三次萃取的石油醚層，過無水硫酸鈉層，于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮至10mL。層析柱的制備：玻璃層析柱中先參加1cm高無水硫酸鈉，再參加5g5%脫活弗羅里硅土，最后參加1cm高無水硫酸鈉，輕輕敲實(shí)，用20mL石油醚淋洗凈化柱，棄去淋洗液，柱面要留有少量液體。凈化與濃縮：準(zhǔn)確吸取樣品提取液2mL，參加已淋洗過的凈化柱中，用100mL石油醚＋乙酸乙酯(95∶5)洗脫，收集洗脫液于蒸餾瓶中，于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮近干，用少量石油醚屢次溶解殘?jiān)诳潭入x心管中，最終定容至1.0mL，供氣相色譜分析。5.3測(cè)定

(1)氣相色譜參考條件

色譜柱：石英彈性毛細(xì)管色譜柱，0.25mm(內(nèi)徑)×15m，內(nèi)涂有OV－101固定液。

氣體流速：氮?dú)?0mL/min，尾吹氣60mL/min，分流比1∶50。

溫度：柱溫自180℃→230℃〔5℃/min)保持30min；檢測(cè)器、進(jìn)樣口溫度250℃。(2)色譜分析吸取1μL試樣液注入氣相色譜儀，記錄色譜峰的保存時(shí)間和峰高。再吸取1μL混標(biāo)溶液進(jìn)樣，記錄色譜峰的保存時(shí)間和峰高。根據(jù)組分在色譜上的出峰時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)組分比較定性；用外標(biāo)法與標(biāo)準(zhǔn)組分比較定量。〔三〕薄層色譜法樣品中666、DDT經(jīng)有機(jī)溶劑〔石油醚〕提取，提取液經(jīng)濃硫酸磺化，凈化處理液濃縮后點(diǎn)于薄層板上，經(jīng)展開后，用硝酸銀顯色，經(jīng)紫外線照射后生成黑色斑點(diǎn)，與標(biāo)準(zhǔn)比較定性、定量分析。2.試劑、儀器提取→凈化→濃縮→薄層板制備→點(diǎn)樣→展開(丙酮:石=1+99)→顯色，硝酸銀顯色劑(硝酸銀+苯氧乙醇+過氧化氫)，紫外線〔254nm)食品中有機(jī)磷農(nóng)藥殘留量測(cè)定一、有機(jī)磷農(nóng)藥的結(jié)構(gòu)與性質(zhì)有機(jī)磷農(nóng)藥是指在組成上含有磷的有機(jī)殺蟲劑、殺菌劑等。主要類型有：磷酸酯型，如久效磷、磷胺等；二硫代磷酸酯型，如馬拉硫磷、樂果、甲拌磷、亞胺硫磷等；硫酮磷酸酯型，如對(duì)硫磷、甲基對(duì)硫磷、內(nèi)吸磷、殺螟松等；硫醇磷酸酯型，如氧化樂果、伏地松；磷酰胺型，如甲胺磷、乙酰甲胺磷；膦酸酯型，如敵百蟲、苯脯磷有機(jī)磷農(nóng)藥種類很多，按毒性分為高毒〔劇毒〕、中毒、低毒三類；溶解性：多數(shù)難溶于水，可溶于有機(jī)溶劑水解性：在堿性介質(zhì)中易水解氧化性：硫代磷酸酯類在溴、紫外線等作用下其中的S可被O取代。酶抑制活性：可抑制羧酸酯酶、膽堿酯酶的活性二、測(cè)定方法〔一〕氣相色譜法〔GB5009.20-2003〕1.水果、蔬菜、谷類中有機(jī)磷農(nóng)藥的多殘留測(cè)定方法本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了水果、蔬菜、谷類中敵敵畏、速滅磷、久效磷、甲拌磷、巴胺磷、二嗪農(nóng)、乙嘧硫磷、甲基嘧啶硫磷、甲基對(duì)硫磷、稻瘟凈、水胺硫磷、氧化喹硫磷、稻豐散、甲喹硫磷、克線磷、乙硫磷、樂果、喹硫磷、對(duì)硫磷、殺螟硫磷的殘留量分析方法。樣品經(jīng)提取、凈化后注入氣相色譜儀測(cè)定。含有機(jī)磷的樣品在富氫焰上燃燒，以HPO*碎片的形式，放射出波長526nm的特征光；這種光通過濾光片選擇后，由光電倍增管接收，轉(zhuǎn)換成電信號(hào)，經(jīng)微電流放大器放大后被記錄下來。樣品的峰面積或峰高與標(biāo)準(zhǔn)品的峰面積或峰高進(jìn)行比較定量。1.2試劑、儀器1.3試樣的制備

取糧食樣品經(jīng)粉碎機(jī)粉碎，過20目篩制成糧食試樣；取水果、蔬菜樣品洗凈，晾干，去掉非可食局部后制成待分析試樣。1.4分析步驟

1.4.1提取

水果、蔬菜稱取50.00g試樣，置于300mL燒杯中，參加50mL水和100mL丙酮(提取液總體積為150mL)，用組織搗碎機(jī)提取1~2min。勻漿液經(jīng)鋪有二層濾紙和約10gCelite545的布氏漏斗減壓抽濾。從濾液中分取100mL移至500mL分液漏斗中。

谷物稱取25.00g試樣，置于300mL燒杯中，參加50mL水和100mL丙酮，以下步驟同上。1.4.2凈化

向?yàn)V液中參加10~15g氯化鈉使溶液處于飽和狀態(tài)。猛烈振搖2~3min，靜置10min，使丙酮從水相中鹽析出來，水相用50mL二氯甲烷振搖2min，再靜置分層。

將丙酮與二氯甲烷提取液合并，經(jīng)裝有20~30g無水硫酸鈉的玻璃漏斗脫水濾入250mL圓底燒瓶中，再以約40mL二氯甲烷分?jǐn)?shù)次洗滌容器和無水硫酸鈉。洗滌液也并入燒瓶中，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮至約2mL，濃縮液定量轉(zhuǎn)移至5~25mL容量瓶中，加二氯甲烷定容至刻度。1.4.3氣相色譜測(cè)定

色譜參考條件

色譜柱:a.玻璃柱2.6m×3mm(i.d)，填裝涂有4.5%(m/m)DC200＋2.5%(m/m)OV-17的ChromosorbW/AW/DMCS(80~100目)的擔(dān)體。

b.玻璃柱2.6m×3mm(i.d)，填裝涂有1.5%(m/m)DCOE-1的ChromosorbW/AWDMCS(60~80目)。

氣體速度氮?dú)?N2)50mL/min、氫氣(H2)100mL/min、空氣50mL/min。

溫度：柱箱240℃、汽化室260℃、檢測(cè)器270℃吸取2~5μL混合標(biāo)準(zhǔn)液及樣品凈化液注入色譜儀中，以保存時(shí)間定性。以試樣的峰高或峰面積與標(biāo)準(zhǔn)比較定量。2.糧、菜、油中有機(jī)磷農(nóng)藥殘留量測(cè)定方法本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了糧、菜、油等食品中敵敵畏、樂果、馬拉硫磷、對(duì)硫磷、甲拌磷、稻瘟凈、殺螟硫磷、倍硫磷、蟲螨磷的測(cè)定方法。原理、試劑、儀器同1.水果、蔬菜、谷類中有機(jī)磷農(nóng)藥的多殘留測(cè)定方法分析步驟

2.1提取與凈化

蔬菜：將蔬菜切碎混勻。稱取10.00g混勻的樣品，置于250mL具塞錐形瓶中，加30～100g無水硫酸鈉(根據(jù)蔬菜含水量)脫水，加0.2~0.8g活性炭(根據(jù)蔬菜色素含量)脫色。加70mL二氯甲烷，在振蕩器上振搖0.5h，經(jīng)濾紙過濾。量取35mL濾液，在通風(fēng)柜中室溫下自然揮至近干，用二氯甲烷少量屢次研洗殘?jiān)?，移?0mL(或5mL)具塞刻度試管中，并定容至2.0mL，備用。2.1提取與凈化進(jìn)稻谷：脫殼、磨粉、過20目篩、混勻。稱取10.00g，置于具塞錐形瓶中，參加0.5g中性氧化鋁及20mL二氯甲烷，振搖0.5h，過濾，濾液直接進(jìn)樣。如農(nóng)藥殘留量過低，那么加30mL二氯甲烷，振搖過濾，量取15mL濾液濃縮并定容至2.0mL進(jìn)樣。小麥、玉米：將樣品磨碎過20目篩、混勻。稱取10.00g置于具塞錐形瓶中，參加0.5g中性氧化鋁、0.2g活性炭及20mL二氯甲烷，振搖0.5h，過濾，濾液直接進(jìn)樣。如農(nóng)藥殘留量過低，那么加30mL二氯甲烷，振搖過濾，量取15mL濾液濃縮，并定容至2mL樣。

植物油2.2氣相色譜測(cè)定

色譜柱：玻璃柱，內(nèi)徑3mm，長1.5～2.0m。

別離測(cè)定敵敵畏、樂果、馬拉硫磷和對(duì)硫磷的色譜柱。a.內(nèi)裝涂以2.5%(m/m)SE-30和3%(m/m)QF-混合固定液的60~80目ChromosorbWAWDMCS。b.內(nèi)裝涂以1.5%(m/m)OV-7和2%(m/m)QF-1混合固定液的60~80目ChromosorbWAWDMCS。c.或內(nèi)裝涂以2%(m/m)OV-101和2%(m/m)QF-混合固定液的60～80目ChromosorbWAWDMCS。

別離測(cè)定甲拌磷、蟲螨磷、稻瘟凈、倍硫磷和殺螟硫磷的色譜柱。a.內(nèi)裝涂以3%(m/m)PE-GA和5%(m/m)QF-1混合固定液的60~80目ChromosorbWAWDMCS。b.內(nèi)裝涂以2%(m/m)NPGA和3%(m/m)QF-1混合固定液的60~80目ChromosorbWAWDMCS。氣流速度：載氣為氮?dú)?0mL/min；空氣50mL/min；氫氣180mL/min(氮?dú)?、空氣和氫氣之比按各儀器型號(hào)不同選擇各自的最正確比例條件)。

溫度：進(jìn)樣口為220℃；檢測(cè)器為240℃；柱溫為180℃，(測(cè)定敵敵畏為130℃)將混合農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)使用液2~5μL分別注入氣相色譜儀中，可測(cè)得不同濃度有機(jī)磷標(biāo)準(zhǔn)溶液的峰高。分別繪制有機(jī)磷標(biāo)準(zhǔn)曲線。同時(shí)取樣品溶液2~5μL注入氣相色譜儀中，測(cè)得的峰高從標(biāo)準(zhǔn)曲線圖中查出相應(yīng)的含量。3.肉類、魚類中有機(jī)磷農(nóng)藥殘留量的測(cè)定方法

本標(biāo)準(zhǔn)適用于肉類、魚類中敵敵畏、樂果、馬拉硫磷、對(duì)硫磷農(nóng)藥的殘留分析。敵敵畏、樂果、馬拉硫磷、對(duì)硫磷最低檢出量為0.6，0.3，0.3，0.15ng，當(dāng)進(jìn)樣量相當(dāng)于0.002g時(shí)，最低檢出濃度分別為0.03，0.015，0.015，0.008mg/kg。原理、試劑、儀器同前。分析步驟

提取凈化：將有代表性的肉、魚樣品切碎混勻，稱取20.00g于250mL具塞錐瓶中，加60mL丙酮，于振蕩器上振搖0.5h，經(jīng)濾紙過濾，取濾液30mL于125mL分液漏斗中，加60mL硫酸鈉溶液(20g/L)和30mL二氯甲烷，振搖提取2min后，靜置分層，將下層提取液放入另一個(gè)125mL分液漏斗中，再用20mL二氯甲烷于丙酮水溶液中同樣提取后，合并二次提取液，在二氯甲烷提取液中加1g中性氧化鋁(如為魚肉加5.5g)，輕搖數(shù)次，加20g無水硫酸鈉。振搖脫水，過濾于蒸發(fā)皿中，用20mL二氯甲烷分二次洗滌分液漏斗，倒入蒸發(fā)皿中，在55℃水浴上蒸發(fā)濃縮至1mL左右，用丙酮少量屢次將殘液洗入具塞刻度小試管中，定容至2~5mL，如溶液含少量水，可在蒸發(fā)皿中加少量無水硫酸鈉后，再用丙酮洗入具塞刻度小試管中，定容。色譜柱：內(nèi)徑3.2mm，長1.6m玻璃柱，內(nèi)裝涂以O(shè)V-17(1.5%m/m)和QF-1(2%m/m)的混合固定液的80~100目ChromosorbWAWDMCS。

流量：氮?dú)?0mL/min；氫氣0.7kg/cm2；空氣0.5kg/cm2。

溫度：檢測(cè)器250℃，進(jìn)樣口250℃，柱溫220℃(測(cè)定敵敵畏時(shí)為190℃)。如同時(shí)測(cè)定四種農(nóng)藥可用程序升溫。測(cè)定：將標(biāo)準(zhǔn)使用液或樣品液進(jìn)樣1~3μＬ，以保存時(shí)間定性；測(cè)量峰高，與標(biāo)準(zhǔn)比較進(jìn)行定量。獸藥殘留獸藥殘留的種類與危害典型的獸藥是指用于預(yù)防和治療畜禽疾病的藥物。但是,隨著集約化養(yǎng)殖生產(chǎn)的開展,一些化學(xué)的、生物的藥用成分被開發(fā)成具有某些成效的動(dòng)物保健品或飼料添加劑,也屬于獸藥的范疇。獸藥的主要用途有防病治病、促進(jìn)生長、提高生產(chǎn)性能、改善動(dòng)物性食品的品質(zhì)等。獸藥殘留是指動(dòng)物性產(chǎn)品的任何可食局部含有獸藥母化合物或其代謝物。獸藥最高殘留限量〔MRLVD〕是指某種獸藥而在食物中或食物外表產(chǎn)生的的最高允許獸藥殘留量〔單位μg/kg,以鮮重計(jì)〕。獸藥殘留主要是由于各種正常用藥和藥物濫用造成的,另外,休藥期(是指自停止給藥到動(dòng)物獲準(zhǔn)屠宰或其動(dòng)物性產(chǎn)品獲準(zhǔn)上市的間隔時(shí)間)過短,是造成動(dòng)物性食品獸藥殘留過量的另一個(gè)重要原因。常見獸藥殘留的種類如下:1．抗生素類藥物這類藥物多為天然發(fā)酵產(chǎn)物，是臨床應(yīng)用最多的一類抗菌藥物，如青霉素類、氨基糖苷類、大環(huán)內(nèi)酯類、四環(huán)素類、螺旋霉素、鏈霉素、土霉素、金霉素等。青霉素類最容易引發(fā)超敏反響，四環(huán)素類、鏈霉素有時(shí)也能引起超敏反響。輕至中度的超敏反響一般表現(xiàn)為短時(shí)間內(nèi)出現(xiàn)血壓下降、皮疹、身體發(fā)熱、血管神經(jīng)性水腫、血清病樣反響等，極度超敏反響可能導(dǎo)致過敏性休克甚至死亡。長期攝入含氨基糖苷類殘留超標(biāo)的動(dòng)物性食品，可損害聽力及腎臟功能。2．磺胺類藥物:主要用于抗菌消炎，如磺胺嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺瞇、菌得清、新諾明等。近年來，磺胺類藥物在動(dòng)物性食品中的殘留超標(biāo)現(xiàn)象，在所有獸藥當(dāng)中是最嚴(yán)重的。長期攝入含磺胺類藥物殘留的動(dòng)物性食品后，藥物可不斷在體內(nèi)蓄積?；前奉愃幹饕?jīng)腎臟排出，在尿中濃度較高，其溶解度又較低，尤其當(dāng)尿液偏酸性時(shí)，可在腎盂、輸尿管或膀胱內(nèi)析出結(jié)晶，產(chǎn)生刺激和阻塞，造成泌尿系統(tǒng)損傷，引起結(jié)晶尿、血尿、管型尿、3．硝基呋喃類藥物主要用于抗菌消炎，如呋喃唑酮、呋喃西林、呋喃妥因等。通過食品攝入超量硝基呋喃類殘留后，對(duì)人體造成的危害主要是胃腸反響和超敏反響。劑量過大或腎功能不全者，可引起嚴(yán)重毒性反響，主要表現(xiàn)為周圍神經(jīng)炎、嗜酸性白細(xì)胞增多、溶血性貧血等。長期攝人可引起不可逆性末端神經(jīng)損害，如感覺異常、疼痛及肌肉萎縮等，我國尚未制定硝基呋喃類藥物殘留檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)。4．抗寄生蟲類藥物這類藥物主要用于驅(qū)蟲或殺蟲，如苯并咪唑、左旋咪唑、克球酚、吡喹酮等。而常用的苯并咪唑類抗寄生蟲藥物有丙硫苯咪唑、丙氧咪唑、噻苯咪唑、甲苯咪唑、丁苯咪唑等。食用殘留有苯并咪唑類藥物的動(dòng)物性食品，對(duì)人主要的潛在危害是致畸作用和致突變作用。對(duì)于妊娠期的孕婦有可能發(fā)生胎兒畸形，如短肢、兔唇等；對(duì)所有消費(fèi)者來說，可能由于其致突變作用使消費(fèi)者發(fā)生癌變和性染色體畸變，從而其后代有發(fā)生畸形的危險(xiǎn)。5．激素類藥物這類藥物主要用于提高動(dòng)物的繁殖和加快生長發(fā)育速度，使用于動(dòng)物的激素有性激素和皮質(zhì)激素，而以性激素最常用，如孕酮、睪酮、雌二醇等。正常情況下，動(dòng)物性食品中天然存在的性激素含量是很低的，因而不會(huì)干擾消費(fèi)者的激素代謝和生理機(jī)能。但攝人性激素殘留超標(biāo)的動(dòng)物性食品，可能會(huì)影響消費(fèi)者的正常生理機(jī)能，并具有一定的致癌性，可能導(dǎo)致兒童早熟、兒童發(fā)育異常、兒童異性趨向等。鹽酸克倫特羅的檢驗(yàn)GB/T5009.192-2003?動(dòng)物性食品中克倫特羅殘留量的測(cè)定?第三法——GC/MS法。根本原理：微孔板包被有針對(duì)克倫特羅IgG的抗抗體；參加克倫特羅抗體，經(jīng)過溫育和洗滌后；參加酶標(biāo)記物、標(biāo)準(zhǔn)或樣品溶液，克倫特羅與酶標(biāo)記物競爭與抗體結(jié)合；沒有連接的克倫特羅酶標(biāo)記物在被洗滌除去；參加酶底物和發(fā)色劑并且溫育，結(jié)合的酶標(biāo)記物將無色的發(fā)色劑為藍(lán)色的產(chǎn)物，參加反響終止液使顏色有藍(lán)轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色。在450nm處比色測(cè)定。1〕試劑盒的選擇和準(zhǔn)備固相載體：吸附性能，孔底透明度，板、孔性能差異；包被物：純度；儲(chǔ)存條件：2-8℃；室溫平衡：試驗(yàn)用試劑應(yīng)提前1-2h從冰箱中取出，待溫度與室溫平衡后使用；及時(shí)保存：試劑完畢后不需用的局部應(yīng)及時(shí)放回冰箱保存。2〕試樣的處理盡可能使用新鮮樣本；進(jìn)行必要的前處理。3〕加樣加樣前樣本必須混合均勻；加在板孔底部，防止加在孔壁上部；不可濺出，不可產(chǎn)生氣泡；每次加標(biāo)本應(yīng)更換吸嘴，以免發(fā)生交叉污染；加酶結(jié)合物和底物時(shí)可用定量多道加液器。4〕溫育溫育前必須震動(dòng)混勻，但不可濺出；溫育的溫度和時(shí)間應(yīng)按規(guī)定力求準(zhǔn)確；溫育必須避光。5〕洗滌清洗必須徹底；防止出現(xiàn)板孔枯燥；反轉(zhuǎn)傾空微孔板要迅速，防止清洗液混合。6〕顯色和比色顯色的溫度和時(shí)間應(yīng)按規(guī)定力求準(zhǔn)確；顯色必須避光；使用多道加液器加終止液；顯色完畢后盡快比色測(cè)定常見問題1〕樣本曲線偏離正常。2〕樣本吸光值高于標(biāo)準(zhǔn)曲線的最大吸光值零標(biāo)準(zhǔn)。3〕樣本吸光值低于標(biāo)準(zhǔn)曲線的最小吸光值。食品中霉菌毒素及其檢測(cè)一、霉菌毒素的種類霉菌是一些絲狀真菌的通稱，在自然界分布很廣，幾乎無處不有，主要生長在不通風(fēng)、陰暗、潮濕和溫度較高的環(huán)境中。霉菌可非常容易地生長在各種食品上并產(chǎn)生危害性很強(qiáng)的霉菌毒素。目前的霉菌毒素約有200余種，與食品關(guān)系較為密切的有黃曲霉毒素、赭曲霉毒素、雜色曲霉素等。有5種毒素可引起動(dòng)物致癌，它們是黃曲霉毒素(B-、G。、M，)、黃天精、環(huán)氯素、雜色曲霉素和展青霉素。霉菌污染食品可使食品的食用價(jià)值降低，甚至使之完全不能食用，造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。據(jù)統(tǒng)計(jì)全世界每年平均有2％的谷物由于霉變不能食用。霉菌毒素引起的中毒大多通過被霉菌污染的糧食、油料作物以及發(fā)酵食品等引起。霉菌毒素多數(shù)有較強(qiáng)的耐熱性，一般的烹調(diào)加熱方法不能使其破壞。當(dāng)人體攝入的霉菌毒素量到達(dá)一定程度后，可引起中毒。霉菌中毒往往表現(xiàn)為明顯的地方性和季節(jié)性，臨床表現(xiàn)較為復(fù)雜，有急性中毒、慢性中毒以及致癌、致畸和致突變等。食品中常見的幾類霉菌毒素如下。

1．黃曲霉毒素黃曲霉毒素(Aflatoxins。簡寫AFT)是黃曲霉、寄生曲霉及溫特曲霉等產(chǎn)毒菌株的代謝產(chǎn)物，是一群結(jié)構(gòu)類似的化合物。目前已發(fā)現(xiàn)17種黃曲霉毒素。根據(jù)其在波長為365nm紫外光下呈現(xiàn)不同顏色的熒光而分為B、G二大類：B大類在氧化鋁薄層板上于紫外光照射下呈現(xiàn)藍(lán)色熒光；G大類那么呈綠色熒光。

AFT主要污染糧油及其制品，如花生、花生油、玉米、大米、棉籽等被污染嚴(yán)重，此外各種植物性與動(dòng)物性食品也能被廣泛污染，如在胡桃、杏仁、高梁、小麥、豆類、王豆、皮蛋、奶與奶制品、干咸魚及辣椒中均有AFT污染。其污染程度與各種作物生物學(xué)特性和化學(xué)組成以及成熟期所處的氣候條件有很大關(guān)系。一般來說，富含脂肪的糧食易產(chǎn)生AFT。此外，收獲季節(jié)高溫、高濕，也易造成AFT的污染。(一)黃曲霉毒素的結(jié)構(gòu)1.溶解性：AFT的分子量為312—346，難溶于水、乙醚、石油醚及己烷中，易溶于油和甲醇、丙酮、氯仿、苯、等有機(jī)溶劑中。2．穩(wěn)定性：AFT是一組性質(zhì)比較穩(wěn)定的化合物；其對(duì)光、熱、酸較穩(wěn)定，而對(duì)堿和氧化劑那么不穩(wěn)定。樣品預(yù)處理樣品預(yù)處理包括APT的提取、凈化及濃縮等過程。2．赭曲霉毒素赭曲霉毒素是分子結(jié)構(gòu)類似的一組化合物，包括赭曲霉毒素A、B、C、D和α，是曲霉屬和青霉屬的某些菌種的次生代謝產(chǎn)物，是谷物、大豆、咖啡豆和可可豆的常見污染物，其中赭曲霉毒素A是該類毒素的代表化合物。赭曲霉毒素A微溶于水，易溶于極性溶劑和稀的碳酸氫鈉水溶液，耐熱，穩(wěn)定性強(qiáng)，在紫外光下呈綠色熒光。赭曲霉毒素A的毒性較強(qiáng)，接近黃曲霉毒素B1，主要損傷腎臟。在巴爾干地方性腎病流行地區(qū)，6％～18％人群的血液中能檢出赭曲霉毒素A。1993年國家癌癥研究機(jī)構(gòu)認(rèn)為赭曲霉毒素A同時(shí)也是一種具有免疫抑制功能、神經(jīng)毒性以及致癌、致畸形的物質(zhì)。3．展青霉毒素展青霉毒素是多種真菌的有毒代謝產(chǎn)物，該物質(zhì)一方面是一種廣譜的抗生素，另一方面對(duì)小鼠、兔子等試驗(yàn)動(dòng)物具有較強(qiáng)的毒性。其污染食品和飼料后產(chǎn)生的毒性遠(yuǎn)大于其抗菌作用。容易污染食品和飼料并產(chǎn)生展青霉素的真菌主要有柯麻青霉、擴(kuò)展青霉、棒曲霉、巨大曲霉、雪白絲衣霉等。展青霉素還能夠?qū)μO果及其制品造成嚴(yán)重污染。展青霉素對(duì)大鼠的腎及胃腸系統(tǒng)有毒性作用，也有致癌、致畸形的作用。目前，已有十幾個(gè)國家制定了水果及其制品中展青霉素的限量標(biāo)準(zhǔn)。4．單端孢霉烯族化合物該組化合物的主要毒性表現(xiàn)在細(xì)胞毒性、免疫抑制和致畸、致癌作用。關(guān)于單端孢霉烯族化合物造成的食物中毒在國內(nèi)外已有多起報(bào)道，主要病癥是惡心、嘔吐、頭痛、腹痛、腹瀉等。5．玉米赤霉烯酮玉米赤霉烯酮也稱F一2毒素。鐮刀菌屬的多個(gè)菌種如禾谷鐮刀菌、三線鐮刀菌、粉紅鐮刀菌、半裸鐮刀菌、木賊鐮刀菌、黃色鐮刀茵、茄病鐮刀菌、串珠鐮刀菌等都可以產(chǎn)生該毒素。這些菌廣泛存在于土壤、空氣及污染的谷物中，主要污染玉米，也污染大麥、小麥、燕麥等。玉米的陽性檢出率可達(dá)45％，最高含毒量可達(dá)2909mg／蠅，小麥的陽性檢出率可達(dá)20％，含毒量為0．36～11．05mg／k。玉米赤霉烯酮對(duì)動(dòng)物的急性毒性很小。該化合物具有雌激素樣的作用，主要作用于生殖系統(tǒng)，可引起陰道和乳腺腫脹、流產(chǎn)、畸胎、死胎等。對(duì)玉米赤霉烯酮的最高限量很多國家已制定了標(biāo)準(zhǔn)，如巴西規(guī)定玉米中不超過200ug／kg，羅馬尼亞規(guī)定所有食品中不超過30ug/kg，我國尚未制定限量。6．雜色曲霉素

雜色曲霉素主要是由雜色曲霉、構(gòu)巢曲霉、皺褶曲霉、黃褐曲霉、四脊曲霉等產(chǎn)生，主要污染玉米、花生、大米、小麥等。雜色曲霉素與黃曲霉素B1相似。雜色曲霉素可以轉(zhuǎn)換為黃曲霉素B1。雜色曲霉素是一種毒性很強(qiáng)的肝及腎臟毒素。肝癌高發(fā)區(qū)居民所食用的食物中雜色曲霉素的污染也較為嚴(yán)重。食品中雜色曲霉素的測(cè)定參見GB／T5009．25—1996，該標(biāo)準(zhǔn)采用的是薄層色譜法，噴三氯化鋁顯色，加熱后，紫外光下觀察。7．棒曲霉素

8．島青霉毒素

9．其他霉菌毒素串珠鐮刀菌毒素、伏馬菌素(主要是FBl)這兩種毒素都可由串珠鐮刀菌產(chǎn)生，兩者皆為水溶性化合物，都有強(qiáng)烈的毒性酶聯(lián)免疫法測(cè)定原理：固相酶聯(lián)免疫吸附。B1特異性抗體包被于聚苯乙烯微量反響板的孔穴中，再參加樣品提取液〔未知抗原〕及B1抗原〔抗原〕，使兩者與抗體進(jìn)行免疫競爭反響，然后加酶底物顯色，顏色的深淺取決于抗體和酶標(biāo)B1抗原結(jié)合的量，即樣品中B1多，那么被抗體結(jié)合的B1抗原少，顏色淺，反之那么深。用目測(cè)法或酶標(biāo)儀B1標(biāo)準(zhǔn)樣比較判斷樣品中B1的含量。儀器：黃曲霉毒素B1測(cè)定儀由于AFT是一劇毒且強(qiáng)致癌性物質(zhì)，使用時(shí)應(yīng)特別小心應(yīng)按以下規(guī)定進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作和實(shí)驗(yàn)后的清洗消毒工作。①實(shí)驗(yàn)時(shí)應(yīng)戴口罩；配標(biāo)準(zhǔn)溶液時(shí)戴手術(shù)手套。②假設(shè)衣服被污染，須用5％次氯酸鈉溶液浸泡15—30分鐘再用清水洗凈。③對(duì)于剩余的AFT標(biāo)液或陽性樣液，應(yīng)先用5％次氮酸鈉處理前方可倒到指定的地方。④實(shí)驗(yàn)中所用的或被污染的玻璃器皿須經(jīng)5％次氯酸鈉溶液浸泡5分鐘再清洗之。⑤實(shí)驗(yàn)完畢應(yīng)用5％次氯酸鈉清洗消毒實(shí)驗(yàn)臺(tái)等。⑥萬一手皮膜被污染，可用次氯酸納溶液搓洗，再用肥皂水洗凈。赭曲霉毒素A的檢測(cè)原理

用三氯甲烷-0.1mol/L磷酸或石油醚-甲醇/水提取樣品中的赭曲霉毒素A，樣品提取

液經(jīng)液-液分配后，根據(jù)其在365nm紫外光燈下產(chǎn)生黃綠色熒光，在薄層色譜板上與標(biāo)準(zhǔn)

比較測(cè)定含量。

試劑

以下試劑除特殊規(guī)定外均為分析純?cè)噭?，水為蒸餾水或同等純度的水。

石油醚(60～90℃或30～60℃)。

甲醇。三氯甲烷。甲苯。乙酸乙酯。甲酸。冰乙酸乙醚。苯-乙腈(98：2)。0.1mol/L磷酸[c(H3PO4)=0.1mol/L]：稱取11.5g磷酸(85%)加水稀釋至1000mL。

2mol/L鹽酸溶液[c(HCL)=2mol/L]：量取20mL鹽酸，加水稀釋至120mL。

4%氯化鈉溶液。

0.1mol/L碳酸氫鈉溶液[c(NaHCO3)=0.1mol/L]：稱取8.4g碳酸氫鈉,加適量水溶解，

并用水稀釋至1000mL。

硅膠G：薄層層析用。赭曲霉毒素A(以下簡稱OA)標(biāo)準(zhǔn)溶液所有玻璃儀器均需用稀鹽酸浸泡，用自來水，蒸餾水沖洗。

1小型粉碎機(jī)。2電動(dòng)振蕩器。

3玻璃板：5cm×20cm。4薄層涂布器。

5展開槽：內(nèi)長25cm、寬6cm、高4cm6紫外光燈：365nm。

7微量注射器：10μL、50μL。

8具0.2mL尾管的10mL，小濃縮瓶提取苯-乙腈(98：2)溶解殘?jiān)?搖勻,供薄層色譜點(diǎn)樣用。

測(cè)定

薄層板的制備

稱取4g硅膠G,加約10mL水于乳缽中研磨至糊狀。立即倒入涂布器內(nèi)制成5cm×20cm,

厚度0.3mm的薄層板三塊,在空氣中枯燥后,在105～110℃活化1h，取出放枯燥器中保存。

點(diǎn)樣

取兩塊