脂質(zhì)體的應用與制備

脂質(zhì)體應用及其制備盧銘輝20110006015脂質(zhì)體—結(jié)構

英國科學家龐漢姆等在1965年進行生物膜研究時，發(fā)現(xiàn)磷脂分子在水中分散后能夠自發(fā)的形成一種囊泡體，這種囊泡體具有類似于細胞膜的雙分子層結(jié)構，他將這種囊泡體稱為脂質(zhì)體。20世紀70年代初用脂質(zhì)體作為藥物載體包埋淀粉葡萄糖苷酶治療糖原沉積病首次獲得成功后,脂質(zhì)體便引起了廣泛關注。磷脂分子具有一個親水的極性頭部和一個疏水的非極性尾部，因此在組成脂質(zhì)體時，磷脂的親水極性頭部位于脂質(zhì)體雙分子層的外部，疏水的非極性尾部朝向脂質(zhì)體雙分子層的中間。脂質(zhì)體(liposome)是單層或多層脂質(zhì)雙分子膜以同心圓的形式包封而成,類似細胞膜的微球體。脂質(zhì)體按照不同的直徑大小以及內(nèi)囊數(shù)目可分為以下幾種類型：√直徑小于100nm的小單層脂質(zhì)體(SUV)√直徑大于100nm的大單層脂質(zhì)體(LUV)√多層同心的多層脂質(zhì)體(MLV)√非同心多囊泡脂質(zhì)體(MVL)作用：脂質(zhì)體的囊泡結(jié)構能夠充當藥物分子或其他物質(zhì)等的載體。親脂性的藥物可以儲存在磷脂雙分子層中，親水性的藥物可以存儲在脂質(zhì)體的內(nèi)囊中。脂質(zhì)體—分類應用

√長循環(huán)脂質(zhì)體長循環(huán)脂質(zhì)體是指經(jīng)過修飾作用的具有一定空間穩(wěn)定性的脂質(zhì)體，常見的修飾物有聚乙二醇（PEG）、神經(jīng)節(jié)苷脂（GM1）等。因其具有空間穩(wěn)定性，所以長循環(huán)脂質(zhì)體可在體內(nèi)長時間駐留，進而使藥物的作用時間得到延長，發(fā)揮出長效作用。GM1能夠增強脂質(zhì)體膜的剛性，減少單核吞噬細胞系統(tǒng)（MPS）對長循環(huán)脂質(zhì)體的吞噬率。PEG可以在脂質(zhì)體的表面產(chǎn)生空間位阻層，以使長循環(huán)脂質(zhì)體不被內(nèi)皮網(wǎng)狀系統(tǒng)（RES）吞噬，進而延長藥物作用時間。√熱敏脂質(zhì)體

熱敏脂質(zhì)體又叫溫度敏感脂質(zhì)體，其所使用的磷脂具有比人體體溫稍高的相變溫度，在當環(huán)境溫度達到相變溫度時，脂質(zhì)體雙分子層會由“膠晶態(tài)”轉(zhuǎn)變?yōu)槟ち鲃有愿鼜姷摹耙壕B(tài)”，從而促使脂質(zhì)體所包封藥物的釋放率加大。

在研究中，有學者提出將腫瘤等病灶部位升溫，使局部溫度能夠高于熱敏脂質(zhì)體的相變溫度，可以使抗腫瘤藥物在腫瘤病灶部位快速釋放，來提高脂質(zhì)體的靶向治療作用。

熱敏脂質(zhì)體已被廣泛的應用于核酸、抗生素和抗腫瘤藥物等的載體研究，尤其在抗腫瘤藥物載體方向的研究已經(jīng)取得了較深入的成果?！蘰H敏感脂質(zhì)體

pH敏感脂質(zhì)體是基于腫瘤間質(zhì)處的pH值比正常組織低的特點而設計的一種具有細胞內(nèi)靶向和控制藥物釋放作用的脂質(zhì)體。目前常用的PH敏感脂質(zhì)體為二油酰磷脂酰乙醇胺(DOPE)。

當脂質(zhì)體處于中性pH環(huán)境時,DOPE的羧基離子可提供有效靜電進行排斥,使脂質(zhì)體保持穩(wěn)定,當pH改變時,雙層脂質(zhì)體可轉(zhuǎn)變成六角相,引發(fā)脂質(zhì)體膜不穩(wěn)定、聚集、融合、釋放內(nèi)容物。從而將包封物導入細胞質(zhì)并主動靶向到病變組織,提高藥物的靶向性?！堂庖咧|(zhì)體

脂質(zhì)體的表面連接上抗體或受體，則可通過特異性結(jié)合作用，使脂質(zhì)體的移動具有靶向性，這樣的脂質(zhì)體叫做免疫脂質(zhì)體。由于其具有運載量大、靶向性強和毒副作用小等優(yōu)點，也被學者研究來用于腫瘤靶向治療?！檀判灾|(zhì)體

磁性脂質(zhì)體是在脂質(zhì)體中摻入鐵磁性物質(zhì)制成,在體外磁場的作用下,把抗腫瘤藥物選擇性地輸送和定位于靶細胞,從而降低藥量,減少毒性，提高療效。

在交變磁場作用下,到達靶區(qū)的磁場粒子能迅速升溫至有效治療溫度,導致腫瘤組織壞死,而無磁性脂質(zhì)體的正常組織則不受損傷。脂質(zhì)偏體—制備√實蔥驗原帳理常見需的磷柿脂分君子結(jié)牲構中梢有兩丟條較慌長的新疏水它烴鏈茶和一扒個親輸水基雙團。眠將適診量的塵磷脂龍加至避水或戒緩沖綢溶液巷中，磷脂墓分子忍定向承排列，其除親水毫基團愈面向綱兩側(cè)距的水潛相，爹疏水襯的烴面鏈彼旦此相皂對締捐和為乓雙分絡子層屋，構德成脂倡質(zhì)體出。用于毫制備妥脂質(zhì)剪體的宋磷脂斤有天然死磷脂，如跳大豆暈卵磷隔脂、積蛋黃棍卵磷雖脂等唱；合成樂磷脂，如控二棕起櫚酰濁磷脂命酰膽郵堿、連二硬寒脂酰秒磷脂忽酰膽塵堿等挺。常用宵的附內(nèi)加劑灶為膽雹固醇。膽艘固醇魔也是讓兩親增性物釘質(zhì)，創(chuàng)與磷蛾脂混收合使飽用，各可制揭得穩(wěn)誼定的滔脂質(zhì)并體，喬其作旱用是調(diào)節(jié)外雙分械子層巾的流堂動性，降低棍脂質(zhì)宮體膜蠢的通驗透性。其他頓附加殊劑有丙十八咐胺、臺磷脂潔酸等勞，這撐些附修加劑幻玉能改變主脂質(zhì)勢體表涂面的宇電荷四性質(zhì)，從宇而改錫變脂買質(zhì)體刮的包封桐率、顯體內(nèi)紹外穩(wěn)獅定性炎、體礙內(nèi)分已布等其團他相詞關參掘數(shù)。2.墓實驗券方法在制廉備含蔽藥脂啞質(zhì)體掌時，狗根據(jù)都藥物帶裝載脅的機貴理不真同，腔可分框為“主品動載藥”嫌與“碼被動成載藥覺”兩大深類。所謂留“主各動載怒藥”演，即暫通過槐脂質(zhì)嗓體內(nèi)外幼水相療的不曲同離上子或鹿化合準物梯度進行漫載藥真，主笑要有K+-N城a+梯度漿和H+梯度虹(即孟pH茅梯度偵)等。傳統(tǒng)零上，蛙人們寄采用來最多訴的方震法是示“被鑒動載肉藥”囑法。敲“被運動載配藥”圈即首先昏將藥床物溶神于水強相或隙有機純相(警脂溶韻性藥參物)猾中，然布后按隸所選償擇的麥脂質(zhì)鐘體制備竿方法院制備禍含藥斯脂質(zhì)母體。對于脂溶糾性的呀、與耗磷脂巴膜親朵和力戴高的藥花物，惹“被繪動載充藥”界法較脂為適用。而對詳于兩腔親性其藥物垂，其兩相分配眉系數(shù)受介蜘質(zhì)的谷pH錘值和瓣離子熊強度悔的影響較拜大，賞包封病條件寇的較削小變榆化，暖就有影可能拉使包損封率炒有較監(jiān)大的垂變化，首蓋選“主斧動載串藥”指方歇法。下圖充是“蟻主動引載藥價”中費pH誰梯度窄法載雜藥原駱理示這意圖暗。H+H+DDDH+DH+in撓si凡deac曾id裝p捆Hou想ds掌id列ene缺ut講ra赤l(xiāng)儀pH被動栗載藥(1釣)薄潤膜分役散法坦將磷言脂溶峰解于涉適量岸的氯陷仿或品乙醚旨等有帳機溶質(zhì)劑中屯，在旋轉(zhuǎn)碰蒸發(fā)徐儀上涂旋轉(zhuǎn)犯蒸發(fā)第使磷善脂干另燥，襯使磷斧脂在砌瓶壁羅上形由成一醫(yī)層脂不質(zhì)薄膜證。使胡用合甜適的丟溶液甜來水少化已怪干燥御的脂周質(zhì)薄穴膜，閑并根澤據(jù)磷津脂的借濃度，役通過肅振搖輸、超鞠聲或晃渦旋輝震蕩蔑等方叼式進乘行處顯理，袋得到紅的主要抬是大多室落脂質(zhì)舍體的茶混懸腐液。(2等)復乳撐法先將效脂質(zhì)侄體的害膜材刑和脂憐溶性吉藥物蛛溶于紗適量糕有機蝕溶劑澡中，按比版例加入犯少量癢水相嘆溶液逃，通阿過超聲史或震妙蕩等哄方法衣進行政處理箱以得者到狀態(tài)概穩(wěn)定膛的乎W/餓O擴乳化秤液，再欺加入誦大量蠶水相級溶液旬進行第二迎次乳曠化處鉆理，得到瞧W縣/O搞/W萍乳燥化液，再持通過標減壓到蒸發(fā)珍除去治有機恭溶劑醒，即后得到份脂質(zhì)等體懸液語。（3之）逆相所蒸發(fā)寸法暢將滴磷脂區(qū)等脂引溶性耐成分耽溶于鳳有機宣溶劑亞，再宰按一曬定比例與嗚含藥丹的緩罷沖液酷混合回、乳糞化，直然后相減壓蹄蒸去巾有機漢溶劑膝即可狹形成證脂質(zhì)體撐。該最法適行合于昌水溶毒性藥羨物、侵大分基子活攜性物采質(zhì)，傷如胰漿島素乘等的無脂質(zhì)體愚制備鳳，可物提高轟包封柱率。脂質(zhì)稀體包歐封率煩的測事定評價她脂質(zhì)潛體質(zhì)符量的輪指標戴有粒徑花、粒崖徑分上布和永包封票率等。其中辣脂質(zhì)蜘體的巨包封芝率是讓衡量忌脂質(zhì)蠶體內(nèi)裂在質(zhì)理量的深一個張重要賊指標沸。脂質(zhì)什體包莊封率券是指密被包礎裹物球質(zhì)（畝如某訂藥物譽）在我脂質(zhì)余體懸買液中酸占藥衣物總量盲的百昨分量。決定仰其包才封率收的因紡素為藥物緩與磷丹脂膜瀉的作僅用力殃、膜材的歐組成文、脂助質(zhì)體的痰內(nèi)水狂相體敵積、律脂質(zhì)搏體數(shù)畜目及示藥脂城比(燒藥物戴與磷裕脂膜材仇比)曬等。常見態(tài)的包嫁封率彎測定擴方法刊有分梨子篩狡法、羞超速鄰離心醉法、彎超濾足法、陽離子丘交換嘉樹脂坐法?！瓣枮╇x子哪交換晶樹脂撓法”磨是利猶用離植子交廢換作洪用，允將荷臘正電海的未棟包入脂弊質(zhì)體牢中的眨藥物沈(即滲游離樓藥物值)，羞通過陽離申子交托換樹午脂吸戶附除贊去，包封扔于脂愛質(zhì)體防中的筐藥物附，由熟于脂櫻質(zhì)體夠荷負燙電荷赴，不棍能被貸陽離缺子交光換樹脂騰吸附村，從泛而達溝到分句離目弓的，進而詞測定蛛包封載率。原理示意保圖見值下圖少。Na+SO-3Na+SO-3Na+SO-3Na+SO-3Be曬r+Be洪r+Be怎r+Be完r+Be鳳r－－－－－－－－－－－－以龍膽胖苦苷為例素制備斜龍膽雙苦苷噸脂質(zhì)據(jù)體。龍膽美具有淺利膽鏈、抗愧炎、霸健胃奮、降破壓等漢作用李。龍傲膽中初主含埋環(huán)烯熔醚萜便苷類成稠分，幻玉龍膽濫苦苷冊為其毫中主閥要有壓效成牲分。實驗散步驟份：1.幸提純浪龍膽艱苦苷2.線制龍羊膽苦輪苷標廁準溶校液，民作標暴準曲帖線（為忙包封猜率的詢測定摸做準雨備）3.剝檢測討龍膽辮苦苷頸的穩(wěn)濫定性茂以及曾儀器舟的精風密度4.陵選擇冊了復乳奸法、潮薄膜庭水化差法、勉逆相輝蒸發(fā)侍法等三名種脂幫質(zhì)體搶常見掘制備方法馬進行鞠制備厲龍膽藏苦苷芝脂質(zhì)塊體。√復淡乳法餡：準確等稱取遺卵磷攜脂以勵及膽公固醇批于圓孕底旋太蒸瓶航中，補加入乙醚毒將其氏溶解，量取封的龍然膽苦債苷溶跑液狀與之誼混合州，用超誼聲波鎮(zhèn)細胞做粉碎獄儀進行超聲處理，形成規(guī)W洲/O洞型熄乳化惑液，字加入田超純鞋水作叉為外購水相價，繼續(xù)寫超聲勉處理，形穴成W/密O/滅W冒型乳略化劑，將忙其置鏡于旋趙轉(zhuǎn)蒸巷發(fā)儀逃上，碗在水炒浴、戀真空悄的條殼件下旋轉(zhuǎn)榮蒸發(fā)礦除去我有機搶溶劑孕，定量容。即得騾到脂頓質(zhì)體蜘懸液電?！瘫∶に被蚀_郊稱取悄卵磷良脂以中及膽搞固醇平于圓睬底旋希蒸瓶鐵中，意加入乙醚惑將其琴溶解醒置于旋冰轉(zhuǎn)蒸繩發(fā)儀援上，在水逼浴、答真空惠的條警件下道旋轉(zhuǎn)續(xù)蒸發(fā)滑除去貞有機術溶劑納直至圓送底旋柔蒸瓶煉的瓶邀壁上示形成否均勻誘的脂刺質(zhì)薄丈膜，量宜取龍師膽苦稠苷溶蜓液與之混航合，塊在漩傻渦混慌合器港上振說搖后病，并尋用超拋聲波裕細胞歸粉碎妙儀進行粒超聲處理，定鹿容。即得妹到脂勞質(zhì)體陳懸液拳?！棠嫦嗯舭l(fā)尤法準確請稱取泥卵磷矮脂以虜及膽梅固醇餓于圓暮底旋逆蒸瓶甜中，撤加入猛乙醚苦將其圣溶解，取龍挎膽苦污苷溶吊液與之混綿合，速并用腦超聲暖波細想胞粉麗碎儀進行罩超聲緣瑞處理，形成質(zhì)W衛(wèi)/O妙型灑乳化約液，嗚將其火置于圍旋轉(zhuǎn)細蒸發(fā)屯儀上抽，在水饑浴、躬真空否條件飽下旋轉(zhuǎn)盲蒸發(fā)音至生姿成反泳膠束因凝膠觸，繼執(zhí)續(xù)維溫持真康空度縮慧旋蒸念至反負膠束僅凝膠吃塌陷生京成水橡混懸豬液，矛定容。即得進到脂倡質(zhì)體葵懸液乏。5.虧包封腥率的旦測定分別量取斬相同催體積禾脂質(zhì)趁體懸液躁置于裹兩支山離心域管中障。向泡其中享一支離心賠管加紛入的曲拉謹通溶拜液并置筑于水虹浴中汗進行劈燕破乳姻，按仆標準網(wǎng)曲線皮測定方法紗進行些測定姥，并哈根據(jù)驚標準俱曲線籌計算職溶液掙中龍桐膽苦勞苷的總濃淋度C總。向另誤一支協(xié)離心天管中裝加入辭的魚精智蛋白拖溶液崖，混勻寒后靜礙置，昌用臺肌式冷支凍離心昆機進牛行離心寫，取占上清血液定專容，按昌標準凳曲線慕測定陽方法鋸進行旦測定夫，根據(jù)優(yōu)標準礎曲線斃計算錢溶液遠中游該離的喂龍膽豆苦苷萌的濃糕度鏡C游離終。然后等使用哲公式岸：E呼E（嚇%）遺=（漲C總-C游離）/縮慧C總×1物00纖%6.坊儲存害—水衰相的犯選擇振。脂質(zhì)與體通剛常以靜脈籃注射作為棒給藥慕途徑顏，合弱適的漁水相剪選擇哪是必提要的獄。影響漢脂質(zhì)酬體制尺備的正因素：藥液反濃度勒，膽憤固醇摘與卵士磷脂速質(zhì)量采比，峰有機澡相與張內(nèi)水允相體宇積比憶，超筑聲功工率，妖水浴舍溫度濱，標減壓坑蒸發(fā)示時間等。結(jié)語新型綿脂質(zhì)號體的悅研究魔已從撐單一眼脂質(zhì)論體向升多功霜能脂濃質(zhì)體打如p載H敏杜感免乓疫脂質(zhì)體聯(lián)、熱眾敏感帳長循匆環(huán)脂屢質(zhì)體藏等方概向發(fā)忽展.強這些魂脂質(zhì)要體在釣穩(wěn)定曬性、按靶向性和揮療效吊方面畫都比愉傳統(tǒng)既脂質(zhì)院體有扣明顯養(yǎng)改善勾,但成喪本，醬簡化指完善并制備哲工藝仍銜是脂安質(zhì)體密在藥佩物載蜜體應稈用上敢的關燥鍵問思題。參考豆文獻綢：[1牌