油浸食品中防腐劑反相高效液相色譜法測定

油浸食品中防腐劑反相高效液相色譜法測定

【關(guān)鍵詞】防腐劑檢測

對于油浸食品中的防腐劑檢測，國標(biāo)GB/T500929-2003中沒有明確規(guī)定處理與檢驗(yàn)方法，實(shí)驗(yàn)室一般采用酸性乙醚萃取、濃縮，氣相色譜法檢測。該方法由于填充柱的吸附及柱效能差別較大，使標(biāo)準(zhǔn)系列線性差，最低檢出限較高，對于含量低或稀釋倍數(shù)大的樣品無法檢測。本方法采用乙醇?xì)溲趸c混合液萃取，反相液相色譜紫外檢測器檢測，有效消除萃取中乳化現(xiàn)象，提高分析靈敏性和準(zhǔn)確性。

1儀器與試劑

11主要儀器L7000型高效液相色譜系統(tǒng)(日本日立HITACHI公司)，配L7420型UVVis檢測器，D7000色譜數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)；802型離心機(jī)(上海手術(shù)器械廠)；XK96B型快速混合器(姜堰新康醫(yī)療器械有限公司)。

12試劑苯甲酸和山梨酸標(biāo)準(zhǔn)儲備液：100mg/ml(國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研究中心)；001mol/L氫氧化鈉乙醇溶液;008mol/L氯化氫溶液；002mol/L乙酸銨溶液；石油醚乙醚混合液：石油醚(AR)+乙醚(AR)=3+1；甲醇：色譜純。

13儀器條件色譜柱：KromasilC18(250×46mm，ID5μm)；流動相：甲醇+002mol/L乙酸銨溶液=5+95；流速：10ml/mim；進(jìn)樣量：5μl;柱溫：室溫；檢測波長：230nm。

14方法(1)樣品處理:準(zhǔn)確稱取混勻后的樣品100g于10ml的具塞離心管中，加入50ml的石油醚乙醚混合液,用快速混合器使油脂溶解。加入001mol/L氫氧化鈉乙醇溶液40ml，上下振蕩20次，靜置15min后，在離心機(jī)中3500r/min離心5min，取下層溶液于10ml容量瓶中，按上述方法再萃取1次，合并2次萃取液，用008mol/L氯化氫溶液調(diào)節(jié)pH≈7，用雙蒸水定容至10ml，混勻，取適量定容液，用045μm濾膜過濾，注入具塞小試管中，待測。同法做試劑空白。(2)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制及樣品測定：分別取苯甲酸和山梨酸標(biāo)準(zhǔn)儲備液配制出00，100，200，500，1000，1500，2000μg/ml標(biāo)準(zhǔn)工作曲線濃度系列,在上述儀器條件下，用5μl定量環(huán)取標(biāo)準(zhǔn)及樣品溶液進(jìn)行液相色譜分析。以標(biāo)準(zhǔn)系列質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，樣品測定結(jié)果由其峰面積經(jīng)工作曲線計(jì)算得出。

2結(jié)果

21萃取劑的選擇利用苯甲酸和山梨酸的酸性，分別采用Na2CO3、NaHCO3、NaOH等堿性化合物配成一定濃度的萃取液，通過對樣品萃取效率、時間及樣品的乳化情況進(jìn)行綜合比較，NaOH溶液效果較好，但由于其堿性強(qiáng)，為減少樣品萃取時的乳化及皂化，應(yīng)嚴(yán)格控制使用的濃度。通過食品中防腐劑最大使用限量與萃取效率計(jì)算，并用不同濃度的NaOH溶液實(shí)際操作對比，濃度在001～005mol/L時效果較好。

22樣品的乳化與破乳樣品中含有大量的油脂，因此，在萃取過程中會產(chǎn)生嚴(yán)重的乳化現(xiàn)象，為有效破乳，分別采用濃硫酸除脂、氯化鈉氫氧化鈉混合液萃取、乙醇?xì)溲趸c混合液萃取、離心破乳等不同方法對同一樣品進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明，乙醇?xì)溲趸c混合液萃取后再離心法破乳效果最好，使用中應(yīng)注意乙醇濃度不易太高，否則將有較多的有機(jī)雜質(zhì)、色素等進(jìn)入萃取劑中，使色譜柱分離困難。通過對不同濃度的乙醇?xì)溲趸c體系萃取分離效果的對比，乙醇含量在25％～35％為最佳，離心時轉(zhuǎn)速越大，時間越長，破乳率越高，一般在2000r/min以上，作用2min后，破乳率即可達(dá)100％。

23萃取的效率液液萃取是利用樣品中不同組分在不混溶2種溶劑中溶解度的不同來達(dá)到分離提取的目的，要獲得較高的萃取效率，可采用高分配系數(shù)的萃取劑、增大萃取劑用量、多次萃取等方法。試驗(yàn)用10ml萃取劑分為1次、2次、3次對同一樣品萃取效率進(jìn)行比較，分別為945％，983％，986%，因此，采用2次萃取即可取得滿意的結(jié)果。

24方法的線性范圍及檢出限量本實(shí)驗(yàn)的線性范圍苯甲酸0～200μg/ml，r=099996，回歸方程Y=17000X+7514；山梨酸0～200μg/ml，r=099997，回歸方程Y=29442X+9204。取置信因子P=095，儀器噪聲電平的2倍為檢出限，則苯甲酸、山梨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的最低檢出濃度為012和008μg/ml。若取樣品100g，萃取后定容至10ml，則樣品的最低檢出濃度為苯甲酸12mg/kg，山梨酸08mg/kg。

25方法的精密度和準(zhǔn)確度用本方法平行測定含苯甲酸、山梨酸的樣品各6次。結(jié)果，苯甲酸平均含量110mg/kg，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)28％；山梨酸平均含量126mg/kg，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)32％。在樣品中加入高、低2種不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，用本法測得苯甲酸的回收率在954％～1026％之間，山梨酸的回收率在961%～1035％之間，說明本方法精密度與準(zhǔn)確度均較高，結(jié)果可靠，見表1。

表1樣品加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

26樣品的分析及方法比對采用本方法與氣相色譜法同時測定不同樣品中的苯甲酸(樣品本底)、山梨酸(樣品加標(biāo))含量，經(jīng)測定結(jié)果配對t檢驗(yàn)，表明2法對同一樣品檢測結(jié)果差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表2。

表22種方法測定結(jié)果比較

注：t苯甲酸=1004,t山梨酸=1001,(t02(3)=1638),P02

3小結(jié)

試驗(yàn)結(jié)果表明，本方法的精密度和準(zhǔn)確度較高，線性范圍寬，比氣相色譜檢測法樣品處理更簡單、快速，試劑消耗少，從而減少雜質(zhì)的引入，降低了空白值，提高結(jié)果的準(zhǔn)確性，為油浸食品中的防腐劑檢測提供更完善、可靠的手段。

參考文獻(xiàn)

〔1〕StephenPcapacityandtheoptimalorderofextraction［J］.JournalofEnvironmentalEconomicsandManagement,2003，(45):569-588.

〔2〕王立，汪正范，牟世