深部真菌快速定量檢測-醫(yī)院

深部真菌(zhēnjūn)感染第一頁，共三十九頁。編輯課件深部真菌(zhēnjūn)感染簡介定義:

由致病性真菌所引起的人體深部感染，如侵及到皮膚深層和內(nèi)臟，如肺、粘膜、肌肉、腦、消化道等器官，危害性較大,稱為深部真菌感染。

類型:

目前，深部真菌感染已成為免疫功能低下患者發(fā)病(fābìng)和死亡最常見的原因。常見有念珠菌病、孢子絲菌病、隱珠菌病、曲霉病、毛霉菌病、馬爾尼菲青霉菌病、組織孢漿菌病以及球孢子、副球孢子菌等臨床病癥。黑曲霉第二頁，共三十九頁。編輯課件深部真菌感染(gǎnrǎn)誘因誘發(fā)因素：(1)慢性消耗性疾病，如惡性腫瘤、糖尿病和尿毒癥等，可使機(jī)體免疫功能和抵抗力降低(jiàngdī)；(2)長期使用廣譜抗生素，敏感的細(xì)菌被抑制，消除了正常菌群中與真菌相拮抗的細(xì)菌，使真菌得以大量繁殖。有些抗生素可促進(jìn)某些真菌的生長，(3)腎上腺皮質(zhì)激素可抑制炎癥反應(yīng)和纖維細(xì)胞增生，并可穩(wěn)定細(xì)胞內(nèi)溶酶體的膜，阻止其中酶的釋放，影響中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞溶解殺滅微生物的作用。(4)大劑量X線照射、抗腫瘤藥物和免疫抑制劑都能抑制骨髓，使中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞減少，機(jī)體的免疫功能和抵抗力降低。(5)治療用長時間靜脈(jìngmài)插管，留置導(dǎo)尿管和大手術(shù)，可引起局部損傷，成為真菌侵入的門戶，在機(jī)體抵抗力低落時在體內(nèi)繁殖致病。第三頁，共三十九頁。編輯課件深部真菌(zhēnjūn)感染的誘因免疫功能(gōngnéng)低下深部真菌(zhēnjūn)感染組織局部損傷菌群平衡長期使用廣譜抗生素大手術(shù)、內(nèi)臟插管抗腫瘤藥物使用慢性消耗、免疫缺陷疾病長期使用腎上腺皮質(zhì)激素X-R、抗腫瘤、免疫(-)某些內(nèi)分泌失調(diào)：甲低第四頁，共三十九頁。編輯課件深部真菌感染(gǎnrǎn)的特點1.不產(chǎn)生內(nèi)毒素和外毒素，致病機(jī)理不明。2.致病力一般較弱，機(jī)體免疫低下時發(fā)生。3.感染(gǎnrǎn)菌種變化，白念珠菌感染(gǎnrǎn)下降。熱帶念珠菌，近平滑念珠菌，克柔念珠菌，光滑念珠菌等感染(gǎnrǎn)增多。4.真菌感染早期癥狀無特異性，往往被原發(fā)病掩蓋，病程長，發(fā)現(xiàn)較晚，死亡率高，《真菌感染病學(xué)》中寫到，真菌院內(nèi)感染死亡率為90%。第五頁，共三十九頁。編輯課件深部真菌(zhēnjūn)感染診治中的問題1.深部真菌感染發(fā)病率增加。2.誤診率高:1984年～1997年，醫(yī)院深部真菌誤診率30%，美國Muglistom1985年耳真菌病誤診率為90%。3.真菌感染與院內(nèi)感染關(guān)系密切，美國80年代末真菌感染占院內(nèi)感染的10%。4.危險因素多:年齡，腫瘤，移植，抗生素，激素(jīsù)等。5.抗真菌藥物品種少，價格貴，因副作用而難以預(yù)防用藥，耐藥顯現(xiàn)多。6.沒有指導(dǎo)臨床用藥的可靠指標(biāo)。北京協(xié)和醫(yī)院真菌(zhēnjūn)感染病例分布圖第六頁，共三十九頁。編輯課件深部真菌感染(gǎnrǎn)的臨床檢測1.G實驗：檢測(1-3)-β-D-葡聚糖的含量，判斷是否有真菌感染，耗時短，靈敏度高，特異性強(qiáng)。2.GM實驗：曲霉屬半乳甘露聚糖抗原檢測。判斷是否曲霉屬真菌感染。對兒童及接受造血干細(xì)胞移植患者、ICU患者不適用。3.真菌的抗原、抗體及代謝產(chǎn)物的血清學(xué)檢查和真菌核酸檢測（PCR技術(shù)）用于實驗室檢測，已成為(chéngwéi)這一領(lǐng)域研究的熱點。1.直接方法：是組織或滲出物中可分離培養(yǎng)出致病真菌。特點：耗時長,并由于大量廣譜抗生素的廣泛使用，其培養(yǎng)陽性率也是很低。2.輔助方法：臨床表現(xiàn)，免疫學(xué)，病理學(xué)，影像學(xué)檢查等。特點：觀察期不確定，費時費力，特征性不明顯，并對醫(yī)師的專業(yè)水平(shuǐpíng)要求高。傳統(tǒng)檢查非傳統(tǒng)檢查第七頁，共三十九頁。編輯課件深部真菌感染的藥物(yàowù)治療第八頁，共三十九頁。編輯課件(1-3)-β-D-葡聚糖簡介(jiǎnjiè)第九頁，共三十九頁。編輯課件1-3-β-D-葡聚糖本質(zhì)(běnzhì)及特點葡聚糖廣泛存在于真菌細(xì)胞壁中，占其干燥重量的80%-90%。其中(1-3)-β-D-葡聚糖占真菌壁成分50%以上，是真菌細(xì)胞壁上的特有成分，其形式以1-3-β-糖苷鍵連接(liánjiē)的葡萄糖殘基骨架作為主鏈，分支狀1-6-β-D葡萄糖殘基作為側(cè)鏈。第十頁，共三十九頁。編輯課件(1-3)-β-D-葡聚糖特性(tèxìng)當(dāng)真菌進(jìn)入人體血液或深部組織后，經(jīng)吞噬細(xì)胞的吞噬、消化等處理后，(1-3)-β-D-葡聚糖可從胞壁中釋放出來，從而使血液及其它體液(tǐyè)中含量增高。當(dāng)真菌在體內(nèi)含量減少時，機(jī)體免疫系統(tǒng)可將其清除。在淺部真菌感染中，(1-3)-β-D-葡聚糖未被釋放出來，故其在體液中的量不增高。對熱極為穩(wěn)定，高壓121℃并不能使其滅活。在念珠菌和曲霉菌細(xì)胞壁中含量較多，對G實驗靈敏，而隱球菌(qiújūn)中含量較少，則需要較多的試劑才能檢出。第十一頁，共三十九頁。編輯課件(1-3)-β-D-葡聚糖

定量(dìngliàng)測定第十二頁，共三十九頁。編輯課件測定葡聚糖可以很快得到結(jié)果，指導(dǎo)臨床醫(yī)生采取積極的治療,及時準(zhǔn)確的選用抗真菌藥物。動態(tài)快速檢測，不受血中抗生素和酶等的影響。所有真菌的細(xì)胞膜上都含有(hányǒu)(1-3)-β-D葡聚糖，而其他微生物、動物及人的細(xì)胞成分和細(xì)胞外液都不含這種成分，因此在機(jī)體的體液中檢測到(1-3)-β-D葡聚糖是診斷深部真菌感染的有效依據(jù)。不能確定菌種，但能肯定是否有真菌感染。指導(dǎo)臨床科學(xué)合理的使用抗真菌藥物。當(dāng)檢測到標(biāo)本中葡聚糖含量較高時，即刻予以系統(tǒng)治療，不必等鑒定出種屬。定量(dìngliàng)測定(1-3)-β-D-葡聚糖的特點樣品(yàngpǐn)來源：血漿，血清，腹水，尿液，腦脊液第十三頁，共三十九頁。編輯課件定量測定(cèdìng)(1-3)-β-D-葡聚糖的意義早期診斷：深部真菌感染增多且復(fù)雜，早期癥狀無特異性，往往被原發(fā)病掩蓋，病程長，發(fā)現(xiàn)較晚，死亡率高。因此對深部真菌感染治療成敗的關(guān)鍵在于早期診斷?？焖僭\斷：真菌感染就醫(yī)的患者，往往病情嚴(yán)重，傳統(tǒng)的微生物分離(fēnlí)、培養(yǎng)與鑒定需要時間較長，患者在等待期間有可能病情加重，甚至死亡。指導(dǎo)用藥：快速確定真菌感染后，選擇好治療方案,有針對性使用抗真菌類藥物。為臨床選用副作用小，療效高，價格適宜的藥物提供準(zhǔn)確的依據(jù)。評價效果：應(yīng)用抗真菌藥物后，定期檢測血漿中葡聚糖濃度變化，評價選用藥物的有效性。監(jiān)護(hù)病程：監(jiān)護(hù)深部真菌感染易感人群的病發(fā)狀態(tài)。動態(tài)觀察：易感人群，臨床療效第十四頁，共三十九頁。編輯課件動態(tài)(dòngtài)濁度法原理凝固(nínggù)蛋白原凝固(nínggù)蛋白動態(tài)濁度法凝固酶凝固酶原活化因子C因子C細(xì)菌內(nèi)毒素因子G活化因子B活化因子G1-3-β-D-葡聚糖因子B全過程2小時內(nèi)完成，可及時提供結(jié)果，指導(dǎo)臨床第十五頁，共三十九頁。編輯課件定量(dìngliàng)測定(1-3)-β-D-葡聚糖的原理不同濃度反應(yīng)體系引起不同的濁度變化，當(dāng)透光率達(dá)到法線時，該時間的對數(shù)(duìshù)（LgTg），與葡聚糖的濃度（LgC），呈直線關(guān)系定量(dìngliàng)依據(jù)第十六頁，共三十九頁。編輯課件定量(dìngliàng)測定(1-3)-β-D-葡聚糖的設(shè)備(國內(nèi)外現(xiàn)狀(xiànzhuàng))國外現(xiàn)狀(xiànzhuàng)國內(nèi)現(xiàn)狀美國、日本等國均已出現(xiàn)專用的(1-3)-β-D葡聚糖檢測儀器及配套的檢測試劑盒，而且獲得美國FDA及厚生省批準(zhǔn)文號，作為一種日常檢測項目。美國:ELx808?IncubatingMicroplateReaders日本:WellreaderSK603ToxinometerMT-5500MB-80微生物動態(tài)快速測定系統(tǒng)（金山川公司）首家獲得SDA認(rèn)證普及面廣,影響大.國內(nèi)獨創(chuàng)專利產(chǎn)品計算機(jī)軟件著作權(quán)第十七頁，共三十九頁。編輯課件定量測定(cèdìng)(1-3)-β-D-葡聚糖的設(shè)備MB-80微生物快速動態(tài)測定系統(tǒng)：主機(jī)反應(yīng)器，數(shù)據(jù)處理分析軟件，計算機(jī)，打印機(jī)，電子恒溫(héngwēn)加熱儀等。生產(chǎn)商：北京(běijīnɡ)金山川公司第十八頁，共三十九頁。編輯課件國外檢測(jiǎncè)儀器及試劑日本(rìběn)生化學(xué)WellreaderSK603第十九頁，共三十九頁。編輯課件國外-日本(rìběn)日本(rìběn)和光トキシノメーターMT-5500

Β-GlucantestWako第二十頁，共三十九頁。編輯課件國外-美國(měiɡuó)ELx808?*IncubatingMicroplateReadersGlucatell?Kit(13)-β-D-glucanDetection第二十一頁，共三十九頁。編輯課件定量(dìngliàng)測定(1-3)-β-D-葡聚糖的試劑盒GKT-5MSet動態(tài)真菌檢測試劑盒：真菌反應(yīng)主劑（用于各種體液中真菌檢測）及樣品(yàngpǐn)處理液（樣品(yàngpǐn)處理液的目的排除體液中存在的各種測定干擾物質(zhì)）各5支。生產(chǎn)商：北京金山川(shānchuān)公司第二十二頁，共三十九頁。編輯課件定量(dìngliàng)測定(1-3)-β-D-葡聚糖的附件T01智能恒溫(héngwēn)儀真菌檢測專用真空采血管，采尿杯無熱原平底專用試管生產(chǎn)商：北京金山川(shānchuān)公司第二十三頁，共三十九頁。編輯課件MB-80的五大(wǔdà)特點生產(chǎn)商：北京金山川(shānchuān)公司快速(kuàisù)---2個小時完成檢測動態(tài)---動態(tài)檢測定量---定量檢測靈敏---內(nèi)毒素最低檢測量1pg/ml(1-3)-β-D-葡聚糖最低檢測量5pg/ml

肽聚糖(PGN)最低檢測量20ng/ml檢測不受病人用藥影響第二十四頁，共三十九頁。編輯課件MB-80的技術(shù)指標(biāo)靈敏度：最小檢出值5pg/ml精密度：批間CV<10%準(zhǔn)確性：回收率平均75-125%標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍：5-9000pg/ml相關(guān)系數(shù)︱r︱≥0.980檢測(jiǎncè)速度快：2小時內(nèi)完成第二十五頁，共三十九頁。編輯課件測定(cèdìng)(1-3)-β-D-葡聚糖的參考值真菌定量檢測試劑盒GKT-5MSet(定量)(1-3)-β-D-葡聚糖臨床判斷(pànduàn)閥值為10pg/ml。檢測值判讀：10pg/ml以下：健康人值10-20pg/ml間：真菌定植病變觀察期20pg/ml以上：深部真菌感染，需采用治療。敏感性與特異性為100%第二十六頁，共三十九頁。編輯課件使用MB-80的臨床(línchuánɡ)評價取一份真菌性肺炎病人標(biāo)本，重復(fù)測定10次，真菌葡聚糖的CV值為6.7%。用公司(ɡōnɡsī)提供的真菌葡聚糖標(biāo)準(zhǔn)品，測定5次，取均值然后計算相對誤差為21.8%。取真菌葡聚糖的標(biāo)準(zhǔn)品，按照公司提供的檢測范圍，從5000pg/ml開始做10倍稀釋，共稀釋5次，進(jìn)行檢測，做直線回歸分析，相關(guān)系數(shù)（r）為0.901。北京安貞醫(yī)院感染科用金山川科技發(fā)展有限公司生產(chǎn)的MB-80微生物快速動態(tài)檢測儀進(jìn)行了初步的性能(xìngnéng)評價：第二十七頁，共三十九頁。編輯課件使用(shǐyòng)MB-80的臨床評價北京安貞醫(yī)院感染科使用金山川公司(ɡōnɡsī)生產(chǎn)的真菌葡聚糖試劑和日本和光公司(ɡōnɡsī)生產(chǎn)的試劑，在MB-80微生物動態(tài)檢測儀上做試劑的比對試驗，結(jié)果見下表：第二十八頁，共三十九頁。編輯課件使用MB-80的臨床(línchuánɡ)評價關(guān)于真菌葡聚糖試劑的比對試驗--------------------------------------------------------病人細(xì)菌培養(yǎng)結(jié)果金山川試劑和光試劑--------------------------------------------------------65/M白色念珠菌86.284.676/M熱帶念珠菌36.233.522/F毛霉菌(méjūn)480.9476.675/M煙曲霉菌265.1235.481/M熱帶念珠菌31.536.278/F光滑念珠菌54.255.761/M白色念珠菌22.420.268/F近平滑念珠菌8.65.6--------------------------------------------------------第二十九頁，共三十九頁。編輯課件使用(shǐyòng)MB-80的臨床評價正常對照組血漿1-3-β-D葡聚糖含量(hánliàng)為2.83±2.57pg/ml；深部真菌感染組為54.06±36.13pg/ml。經(jīng)t-檢驗分析，對照組與深部真菌感染組1-3-β-D葡聚糖平均值差異非常顯著（t=7.741,P＜0.001）。血漿葡聚糖檢測可在擬診早期為臨床醫(yī)生提供是否感染真菌的可靠信息，是一種實用的真菌感染早期診斷方法。第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院檢驗科MB-80微生物快速動態(tài)(dòngtài)檢測儀研究深部真菌感染患者血漿1-3-β-D葡聚糖檢測與臨床意義時發(fā)現(xiàn)：---------中華醫(yī)院感染學(xué)雜志,2005,15(3):354-355第三十頁，共三十九頁。編輯課件深部真菌感染的病例(bìnglì)分析患者，男,41歲,因雙下肢關(guān)節(jié)疼痛1月余,發(fā)熱、咳嗽、痰血10余天于2006年9月12日入院.入院前曾予以青霉素抗感染治療,無好轉(zhuǎn),隨后出現(xiàn),體溫在39度左右波動,并有咳痰,痰中血絲癥狀.胸部CT檢查,發(fā)現(xiàn)左肺陰影。入院后9月18日進(jìn)行支氣管鏡檢查及作病理活檢,顯示肺左上方葉管口真菌感染.診斷為侵襲性肺曲菌病.實驗室檢查:入院當(dāng)天化驗血常規(guī)顯示白細(xì)胞10.1*109/L(中性粒細(xì)胞71%,淋巴細(xì)胞18.2%,單核細(xì)胞9.3%).血沉加快,C反應(yīng)蛋白(dànbái)(CRP)和降鈣素原均升高.9月14日痰培養(yǎng)結(jié)果為陰性.9月22日再一次進(jìn)行痰培養(yǎng)和血漿(1,3)-β-葡聚糖檢測,培養(yǎng)結(jié)果依然為陰性但血漿(1,3)-β-葡聚糖檢測為陽性(1806pg/ml).治療：入院后給予哌拉西林/他唑巴坦和西米替丁作抗菌治療,高熱未有好轉(zhuǎn),隨后9月21日給予氟康唑靜點,高熱好轉(zhuǎn),體溫在37度左右波動,以后繼續(xù)予以抗真菌治療,情況逐漸好轉(zhuǎn),9月30日出院.第三十一頁，共三十九頁。編輯課件金山川(shānchuān)為您提供

的服務(wù)第三十二頁，共三十九頁。編輯課件測定(cèdìng)操作步驟我們每一批試劑盒出廠前經(jīng)過嚴(yán)格的質(zhì)量控制，并進(jìn)行了方法學(xué)研究，節(jié)省了客戶對測定方法學(xué)的研究，客戶只需要按照我們的操作步驟進(jìn)行，將結(jié)果導(dǎo)入我們提供的軟件處理數(shù)據(jù)即可。若客戶需要進(jìn)行方法學(xué)驗證，我們提供合格(hégé)的標(biāo)準(zhǔn)品。我們可為您提供專業(yè)的培訓(xùn)。第三十三頁，共三十九頁。編輯課件試劑(shìjì)的注意事項試劑盒出廠前已經(jīng)過嚴(yán)格的質(zhì)量檢測,禁止在有效期外使用。試劑盒為體外診斷試劑,應(yīng)在2-8℃避光保存,禁止使用于人體。試劑盒在使用前應(yīng)作仔細(xì)檢查,出現(xiàn)(chūxiàn)損壞禁止使用,以免影響測定結(jié)果。每次實驗應(yīng)做質(zhì)控品對照，具體過程參照質(zhì)控品的使用說明書。實驗操作全過程都要避免使用金屬用具。第三十四頁，共三十九頁。編輯課件適合服務(wù)(fúwù)對象醫(yī)院：檢驗科，微生物室，免疫室，呼吸科，血液科，腫瘤科，燒傷科，器官移植部門，腎內(nèi)科，ICU病房(bìngfáng)個地區(qū)中心血站，血液