艾滋病基礎(chǔ)技術(shù)培訓(xùn)

什么是艾滋病病毒（HIV）HIV屬于逆轉(zhuǎn)錄病毒科，慢病毒亞科，單鏈雙拷貝RNA病毒。病毒顆粒：呈20面體立體對(duì)稱球形，表面有刺突狀結(jié)構(gòu)的糖蛋白，分為包膜和核心兩部分本文檔共53頁(yè)；當(dāng)前第1頁(yè)；編輯于星期三\17點(diǎn)24分艾滋病的傳播途徑經(jīng)血液傳播：輸血、靜脈吸毒等。經(jīng)性傳播：異性、同性、雙性。垂直傳播：母嬰經(jīng)胎盤(pán)傳播。本文檔共53頁(yè)；當(dāng)前第2頁(yè)；編輯于星期三\17點(diǎn)24分艾滋病的檢測(cè)方法快速檢測(cè)：膠體金/硒、明膠凝集、唾液檢測(cè)卡等。

敏感性約相當(dāng)于中度敏感的ELISA，適用于應(yīng)急檢測(cè)、門(mén)診急診個(gè)體檢測(cè)。

優(yōu)點(diǎn)：簡(jiǎn)單、快速。缺點(diǎn)：不穩(wěn)定、假陰/陽(yáng)性常用篩查實(shí)驗(yàn)：酶聯(lián)免疫（ELISA）、化學(xué)發(fā)光等。確證檢測(cè)：免疫印跡實(shí)驗(yàn)（WB）其他檢測(cè)方法：核酸檢測(cè)等

本文檔共53頁(yè)；當(dāng)前第3頁(yè)；編輯于星期三\17點(diǎn)24分什么是ELISA方法是以酶標(biāo)記的抗體或抗原為主要試劑，利用抗原抗體反應(yīng)進(jìn)行的檢測(cè)方法,是標(biāo)記免疫技術(shù)的一種。本文檔共53頁(yè)；當(dāng)前第4頁(yè)；編輯于星期三\17點(diǎn)24分目前使用的ELISA試劑多為第三代及第四代ELISA試劑。第四代試劑是最近發(fā)展起來(lái)的HIV抗原抗體聯(lián)合測(cè)定試劑，可同時(shí)檢測(cè)P24抗原和抗HIV-1/2抗體。與第三代抗HIV-1/2試劑相比，檢出時(shí)間提前了4-9.1天，其優(yōu)點(diǎn)在于能同時(shí)檢測(cè)抗原、抗體，降低血源篩查的殘余危險(xiǎn)度。什么是ELISA方法本文檔共53頁(yè)；當(dāng)前第5頁(yè)；編輯于星期三\17點(diǎn)24分什么是ELISA方法本文檔共53頁(yè)；當(dāng)前第6頁(yè)；編輯于星期三\17點(diǎn)24分什么是ELISA方法ELISA可用于測(cè)定抗原，也可用于測(cè)定抗體。在這種測(cè)定方法中有3種必要的試劑：①固相的抗原或抗體，②酶標(biāo)記的抗原或抗體，③酶作用的底物，根據(jù)試劑的來(lái)源和標(biāo)本的性狀以及檢測(cè)的條件，可設(shè)計(jì)出各種不同的檢測(cè)方法。本文檔共53頁(yè)；當(dāng)前第7頁(yè)；編輯于星期三\17點(diǎn)24分本文檔共53頁(yè)；當(dāng)前第8頁(yè)；編輯于星期三\17點(diǎn)24分ELISA的成品試劑盒中包含以下各組分：

(1)已包被抗原或抗體的固相載體(96孔板);(2)酶標(biāo)記的抗原或抗體(結(jié)合物);(3)酶的底物（緩沖液和底物液或稱A/B液）;(4)陰性對(duì)照品和陽(yáng)性對(duì)照品(定性測(cè)定中)(5)有些試劑盒中還有標(biāo)本的稀釋液;(6)洗滌液（基本為通用的濃縮磷酸鹽溶液）;(7)酶反應(yīng)終止液（一般為弱硫酸液）什么是ELISA方法本文檔共53頁(yè)；當(dāng)前第9頁(yè)；編輯于星期三\17點(diǎn)24分必須是經(jīng)國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局注冊(cè)批準(zhǔn)、批批檢驗(yàn)合格、在有效期內(nèi)的試劑。推薦使用經(jīng)臨床質(zhì)量評(píng)估敏感性和特異性高的試劑。什么是ELISA方法本文檔共53頁(yè)；當(dāng)前第10頁(yè)；編輯于星期三\17點(diǎn)24分1HIV抗體檢測(cè)可用于監(jiān)測(cè)、診斷、血液篩查。2以監(jiān)測(cè)為目的的檢測(cè)是為了解不同人群HIV感染率及其變化趨勢(shì)而進(jìn)行的檢測(cè)，檢測(cè)的人群包括各類高危人群和一般人群。3以診斷為目的的檢測(cè)是為了確定個(gè)體HIV感染狀況而進(jìn)行的檢測(cè)，包括臨床檢測(cè)和自愿咨詢檢測(cè)、術(shù)前檢測(cè)、根據(jù)特殊需要進(jìn)行的體檢等。4以血液篩查為目的的檢測(cè)是為了防止輸血傳播HIV而進(jìn)行的檢測(cè)，包括獻(xiàn)血員篩查和原料血漿篩查。HIV抗體檢測(cè)的目的本文檔共53頁(yè)；當(dāng)前第11頁(yè)；編輯于星期三\17點(diǎn)24分樣品初篩試驗(yàn)篩查試劑陽(yáng)性反應(yīng)陰性反應(yīng)復(fù)檢試驗(yàn)原有試劑+另一不同原理（或廠家）試劑或另外兩種不同原理（或廠家）試劑均陽(yáng)性反應(yīng)一陰一陽(yáng)均陰性反應(yīng)確證試驗(yàn)報(bào)告陰性

HIV抗體篩查檢測(cè)流程HIV檢測(cè)試驗(yàn)流程本文檔共53頁(yè)；當(dāng)前第12頁(yè)；編輯于星期三\17點(diǎn)24分最常用的樣品是血液，包括血清、血漿和全血。唾液或尿液有時(shí)也可作為測(cè)試樣品。什么是血清：抽取靜脈血，置于普通試管內(nèi)，室溫下自然放置12h，待血液凝固、血塊收縮后再用3000r/min離心15min，吸出血清備用。什么是血槳：抗凝靜脈血，抽取靜脈血后，置于加有EDTA或肝素等抗凝劑的試管，顛倒混勻數(shù)次，可用于CD4細(xì)胞檢測(cè)。離心分離出的上清液為血槳。血漿與血清的區(qū)別是上清液中存在纖維蛋白，容易產(chǎn)生假陽(yáng)性。因此盡量上送血清樣品。采樣注意：采血時(shí)自我防護(hù)，使用安全針具，戴雙層手套本文檔共53頁(yè)；當(dāng)前第13頁(yè)；編輯于星期三\17點(diǎn)24分用于抗體檢測(cè)的血清或血漿樣品，應(yīng)存放于-20℃以下，短期（1周）內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)的樣品可存放于2-8℃。用于CD4+/CD8+T淋巴細(xì)胞測(cè)定的樣品不能長(zhǎng)期保存，樣品采集時(shí)間超過(guò)48h則不可檢測(cè)。采樣本文檔共53頁(yè)；當(dāng)前第14頁(yè)；編輯于星期三\17點(diǎn)24分血液樣本應(yīng)及時(shí)檢測(cè)，一般10個(gè)工作日內(nèi)必須出具報(bào)告。各篩查實(shí)驗(yàn)室必須對(duì)樣品進(jìn)行ELISA或化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)。不能只進(jìn)行快速檢測(cè)。對(duì)于篩查陰性的樣品出具：

“HIV抗體陰性（—）”報(bào)告此為唯一正確格式檢測(cè)及報(bào)告本文檔共53頁(yè)；當(dāng)前第15頁(yè)；編輯于星期三\17點(diǎn)24分實(shí)驗(yàn)室間傳遞的樣品應(yīng)為血清或血漿，除特殊情況外一般不運(yùn)送全血。應(yīng)采用三級(jí)包裝系統(tǒng)（WHO提出）NO.1帶螺帽的凍存管，要求防滲漏。標(biāo)注：姓名、種類以及采集時(shí)間。

疑似陽(yáng)性樣品的處理試管的周圍應(yīng)墊有緩沖吸水材料（泡沫塑料等）。本文檔共53頁(yè)；當(dāng)前第16頁(yè)；編輯于星期三\17點(diǎn)24分NO.2

：要求耐受性好、防滲漏、容納并保護(hù)第一層容器，帶蓋子。（金屬盒，硬塑料盒）NO.3：生物運(yùn)輸箱。外貼警示標(biāo)簽。

疑似陽(yáng)性樣品的處理隨樣品應(yīng)附有送檢單，送檢單應(yīng)與樣品分開(kāi)放置，并由1名檢驗(yàn)人員和1名具有中級(jí)以上技術(shù)職稱的人員的手寫(xiě)簽字。本文檔共53頁(yè)；當(dāng)前第17頁(yè)；編輯于星期三\17點(diǎn)24分血清和血漿樣品應(yīng)在28℃條件下由專人運(yùn)送。用于CD4+/CD8+T淋巴細(xì)胞測(cè)定的樣品應(yīng)在室溫下1825℃運(yùn)送。疑似陽(yáng)性樣品的處理運(yùn)送必須有陽(yáng)性標(biāo)本轉(zhuǎn)運(yùn)登記表：送樣人以及接收人都要有簽字。本文檔共53頁(yè)；當(dāng)前第18頁(yè)；編輯于星期三\17點(diǎn)24分實(shí)驗(yàn)室需要重視的問(wèn)題：cutoff值的計(jì)算臨界值（cutoff值）是界定樣品陰陽(yáng)性的標(biāo)準(zhǔn)，不同的試劑有不同的設(shè)定方法。以珠海麗珠為例：cutoff值=NC1+0.15。（陰性對(duì)照<0.08，按0.08計(jì)算）因此在NC1<0.08時(shí)，cutoff值=0.230.本文檔共53頁(yè)；當(dāng)前第19頁(yè)；編輯于星期三\17點(diǎn)24分S/CO值的計(jì)算：S/CO值=樣品OD值/cutoff值S/CO值≥1為陽(yáng)性，反之為陰性。

實(shí)驗(yàn)室需要重視的問(wèn)題：cutoff值的計(jì)算HIV檢測(cè)一般不設(shè)灰度值，遇到臨界的情況需重新檢測(cè)并咨詢上級(jí)檢測(cè)單位。本文檔共53頁(yè)；當(dāng)前第20頁(yè)；編輯于星期三\17點(diǎn)24分外部質(zhì)控目的：為了監(jiān)控檢測(cè)的重復(fù)性和穩(wěn)定性，試劑盒批間或孔間差異。包括強(qiáng)陽(yáng)性、弱陽(yáng)性和陰性對(duì)照血清。也可以只設(shè)置一個(gè)弱陽(yáng)性對(duì)照，以該試劑盒臨界值（cutoff值）的23倍為宜。實(shí)驗(yàn)室需要重視的問(wèn)題：外部質(zhì)控的設(shè)定本文檔共53頁(yè)；當(dāng)前第21頁(yè)；編輯于星期三\17點(diǎn)24分外質(zhì)控品可通過(guò)購(gòu)買(mǎi)獲得，不能使用試劑盒中的陰/陽(yáng)性對(duì)照配制。按一周實(shí)驗(yàn)用量分裝、分類、標(biāo)記、封口、-20℃凍存于非自動(dòng)除霜冰箱中。不可反復(fù)凍融，一旦融化后應(yīng)該存放28℃，一周內(nèi)用完。實(shí)驗(yàn)室需要重視的問(wèn)題：外部質(zhì)控的設(shè)定本文檔共53頁(yè)；當(dāng)前第22頁(yè)；編輯于星期三\17點(diǎn)24分60/110μl陽(yáng)性血清60/110μl陰性血清60/110μl陰性血清60/110μl陰性血清60/110μl陰性血清60/110μl陰性血清60/110μl陰性血清質(zhì)控品梯度稀釋方法將梯度稀釋后的樣品同普通樣品一樣進(jìn)行OD值測(cè)定60/110μl混合液本文檔共53頁(yè)；當(dāng)前第23頁(yè)；編輯于星期三\17點(diǎn)24分對(duì)于檢測(cè)量小的單位，可以使用“即刻法”進(jìn)行質(zhì)量控制。對(duì)于檢測(cè)量大的單位，可以使用常規(guī)方法（L-J法）進(jìn)行質(zhì)量控制。實(shí)驗(yàn)室需要重視的問(wèn)題：質(zhì)控方法的種類本文檔共53頁(yè)；當(dāng)前第24頁(yè)；編輯于星期三\17點(diǎn)24分“即刻法”質(zhì)控是在對(duì)同一批外部質(zhì)控血清（Q）進(jìn)行連續(xù)測(cè)定3次后，即可對(duì)第3次檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行質(zhì)控。一直到20次后更換為“L-J法質(zhì)控”為止。具體計(jì)算方法如下：即刻法質(zhì)控本文檔共53頁(yè)；當(dāng)前第25頁(yè)；編輯于星期三\17點(diǎn)24分

⑴將質(zhì)控血清的測(cè)定值從小到大排列：

x1，x2，x3……xn(x1為最小值，xn為最大值)。⑵計(jì)算平均值和標(biāo)準(zhǔn)差s。即刻法質(zhì)控本文檔共53頁(yè)；當(dāng)前第26頁(yè)；編輯于星期三\17點(diǎn)24分⑶計(jì)算SI上限值和SI下限值。⑷將SI上限、SI下限與“SI值表”中的數(shù)字比較。

即刻法質(zhì)控本文檔共53頁(yè)；當(dāng)前第27頁(yè)；編輯于星期三\17點(diǎn)24分即刻法質(zhì)控本文檔共53頁(yè)；當(dāng)前第28頁(yè)；編輯于星期三\17點(diǎn)24分（4）當(dāng)SI上限值和SI下限值<n2s時(shí)表示處于控制范圍內(nèi)，可以繼續(xù)測(cè)定。（5）當(dāng)SI上限值和SI下限值有一值處于n2s-n3s值之間時(shí)說(shuō)明該值在2s3s范圍，處于“告警”狀態(tài)。（6）當(dāng)SI上限值和SI下限值有一值>n3s時(shí)說(shuō)明該值已在3s范圍之外，屬“失控”。每增加一個(gè)測(cè)定值都要重新計(jì)算平均值和標(biāo)準(zhǔn)差，重復(fù)以上各項(xiàng)計(jì)算。即刻法質(zhì)控本文檔共53頁(yè)；當(dāng)前第29頁(yè)；編輯于星期三\17點(diǎn)24分（7）數(shù)值處于“告警”和“失控”狀態(tài)應(yīng)舍去，需重新測(cè)定該質(zhì)控血清和病人樣品。（8）舍去的只是失控的這次數(shù)值，其它測(cè)定值仍可繼續(xù)使用。即刻法質(zhì)控本文檔共53頁(yè)；當(dāng)前第30頁(yè)；編輯于星期三\17點(diǎn)24分最常用的質(zhì)控圖是Levey-Jennings質(zhì)控圖，通過(guò)圖形分析可提供一段時(shí)間內(nèi)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制的總體情況。Levey-Jennings質(zhì)控本文檔共53頁(yè)；當(dāng)前第31頁(yè)；編輯于星期三\17點(diǎn)24分質(zhì)控圖參數(shù)包括：算數(shù)平均值：標(biāo)準(zhǔn)差:是描述樣品與均數(shù)之間離散程度的一個(gè)指標(biāo)。S

變異系數(shù)：用來(lái)衡量檢測(cè)的重復(fù)性。CV經(jīng)由“即刻法”質(zhì)控后得到了20個(gè)Q的數(shù)據(jù)作為基礎(chǔ)數(shù)據(jù)計(jì)算得出各項(xiàng)參數(shù)值。L-J法質(zhì)控本文檔共53頁(yè)；當(dāng)前第32頁(yè)；編輯于星期三\17點(diǎn)24分繪制質(zhì)控圖:包含一條中心橫線（均值線）和其上、下各兩條平行的控制線（均值±1SD和均值±

2SD），并按時(shí)間順序點(diǎn)入本實(shí)驗(yàn)室每次試驗(yàn)Q的測(cè)定值。L-J法質(zhì)控本文檔共53頁(yè)；當(dāng)前第33頁(yè)；編輯于星期三\17點(diǎn)24分將平均值和標(biāo)準(zhǔn)差分別在質(zhì)控框架圖中標(biāo)示出來(lái)。以S/CO值作縱座標(biāo)(Y軸)，每一次試驗(yàn)時(shí)間點(diǎn)作為橫座標(biāo)(x軸)，繪制質(zhì)控圖。L-J法質(zhì)控本文檔共53頁(yè)；當(dāng)前第34頁(yè)；編輯于星期三\17點(diǎn)24分從第21次的Q值起，將每次質(zhì)控血清的檢測(cè)結(jié)果依次點(diǎn)入該質(zhì)控框架圖中，檢驗(yàn)進(jìn)入質(zhì)控狀態(tài)。L-J法質(zhì)控前20次數(shù)據(jù)屬于即刻法，在L-J法中成為基礎(chǔ)數(shù)據(jù)不標(biāo)入圖中本文檔共53頁(yè)；當(dāng)前第35頁(yè)；編輯于星期三\17點(diǎn)24分本文檔共53頁(yè)；當(dāng)前第36頁(yè)；編輯于星期三\17點(diǎn)24分告警（2S）：當(dāng)外部對(duì)照的S/CO值超出±2s范圍時(shí)，系統(tǒng)處于告警狀態(tài)，應(yīng)予注意，是否可以繼續(xù)檢測(cè)需要進(jìn)一步觀察。失控（3S）：當(dāng)外部對(duì)照的S/CO值超出±3s范圍時(shí)，系統(tǒng)處于失控狀態(tài)，本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果不能被接受。可能是系統(tǒng)誤差、隨機(jī)誤差或外部對(duì)照滴度下降造成。超出2s或3s的數(shù)據(jù)不應(yīng)刪除L-J法質(zhì)控本文檔共53頁(yè)；當(dāng)前第37頁(yè)；編輯于星期三\17點(diǎn)24分位移：連續(xù)幾次（35次）外部對(duì)照S/CO值都落在均值的一側(cè)則稱為位移，提示實(shí)驗(yàn)條件發(fā)生了較大的變化。趨勢(shì)：連續(xù)幾次（57次）外部對(duì)照S/CO值幾乎按一個(gè)方向分布時(shí)稱為趨勢(shì)，通常由參數(shù)的緩慢改變引起。L-J法質(zhì)控更換了新的試劑盒\(zhòng)孵育時(shí)間和溫度不準(zhǔn)確\更換新的檢驗(yàn)人員更換了新的儀器設(shè)備（加樣器、洗板機(jī)、酶標(biāo)儀等）本文檔共53頁(yè)；當(dāng)前第38頁(yè)；編輯于星期三\17點(diǎn)24分出現(xiàn)下列情況時(shí)，應(yīng)暫停檢測(cè)查找原因⑴出現(xiàn)一次3s范圍的變化⑵連續(xù)兩次出現(xiàn)同一方向2s范圍的變化⑶連續(xù)四次出現(xiàn)同一方向的1s范圍的變化⑷連續(xù)10次結(jié)果都在1s范圍內(nèi)，但落在均值線的同一側(cè)。L-J法質(zhì)控本文檔共53頁(yè)；當(dāng)前第39頁(yè)；編輯于星期三\17點(diǎn)24分實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立質(zhì)控圖分析及失控情況處理程序。當(dāng)出現(xiàn)失控時(shí)必須找出問(wèn)題原因，并找出解除故障的方法，消除原因，防止將來(lái)出現(xiàn)同樣的問(wèn)題。L-J法質(zhì)控本文檔共53頁(yè)；當(dāng)前第40頁(yè)；編輯于星期三\17點(diǎn)24分建議長(zhǎng)期和穩(wěn)定地使用一種質(zhì)量好的試劑盒，更換不同廠家的試劑盒后，必須重新配制質(zhì)控品并重新進(jìn)行新的質(zhì)控，繪制新的質(zhì)控圖。并在質(zhì)控圖上注明使用日期。L-J法質(zhì)控本文檔共53頁(yè)；當(dāng)前第41頁(yè)；編輯于星期三\17點(diǎn)24分發(fā)現(xiàn)質(zhì)控結(jié)果失控，應(yīng)填寫(xiě)報(bào)告單，上交質(zhì)量負(fù)責(zé)人，分析原因并決定是否發(fā)出檢測(cè)報(bào)告。質(zhì)控圖上必須有操作者以及審核者的手寫(xiě)簽名。L-J法質(zhì)控本文檔共53頁(yè)；當(dāng)前第42頁(yè)；編輯于星期三\17點(diǎn)24分使用新批次的外部對(duì)照質(zhì)控物時(shí)，必須重新繪制質(zhì)控圖。變異系數(shù)(cv)小于20％，表示外部對(duì)照處于穩(wěn)定狀態(tài)。L-J法質(zhì)控本文檔共53頁(yè)；當(dāng)前第43頁(yè)；編輯于星期三\17點(diǎn)24分實(shí)驗(yàn)室操作人員在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)必須穿戴規(guī)范的防護(hù)用品，隔離衣、口罩、帽子等。HIV病毒對(duì)酒精等化學(xué)消毒劑敏感，實(shí)驗(yàn)室內(nèi)應(yīng)備有酒精噴壺等設(shè)備。實(shí)驗(yàn)室廢棄物必須用高壓蒸汽滅菌后，裝入黃色垃圾袋中，并貼上警示標(biāo)簽后。由專人負(fù)責(zé)轉(zhuǎn)運(yùn)。并填寫(xiě)廢棄物轉(zhuǎn)運(yùn)登記。實(shí)驗(yàn)室需要重視的問(wèn)題：

生物安全及廢棄物處理本文檔共53頁(yè)；當(dāng)前第44頁(yè)；編輯于星期三\17點(diǎn)24分儀器鑒定是確保整個(gè)實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行的重要條件之一，是必須具備的。儀器鑒定要提前進(jìn)行，以防止儀器使用中出現(xiàn)鑒定過(guò)期現(xiàn)象。儀器的鑒定管理最好有專人負(fù)責(zé)管理。實(shí)驗(yàn)室需要重視的問(wèn)題：儀器檢定本文檔共53頁(yè)；當(dāng)前第45頁(yè)；編輯于星期三\17點(diǎn)24分濟(jì)南市規(guī)定每月5日之前報(bào)上個(gè)月的報(bào)表。每個(gè)月的報(bào)表的紙質(zhì)版記錄都需要保存。陽(yáng)性結(jié)果上報(bào)必須以收到確認(rèn)陽(yáng)性報(bào)告的時(shí)間為準(zhǔn)，不可擅自上報(bào)。工作量為“0”也要上報(bào)。實(shí)驗(yàn)室需要重視的問(wèn)題：實(shí)驗(yàn)室月報(bào)本文檔共53頁(yè)；當(dāng)前第46頁(yè)；編輯于星期三\17點(diǎn)24分濟(jì)南市HIV確證實(shí)驗(yàn)室介紹：外觀