熒光分光光度計使用

熒光分光光度計使用工作原理熒光產(chǎn)生的原理熒光的定義：某些物質(zhì)受紫外光或可見光照耀激發(fā)后能放射出比激發(fā)光波長較長的光。熒光產(chǎn)生的原理：化學物質(zhì)能從外界吸取并儲存能量如光能、化學能等而進入激發(fā)態(tài)，當磁輻射的形式放射即發(fā)光。熒光化合物的兩種特征光譜熒光激發(fā)光譜，就是通過測量熒光體的發(fā)波長激發(fā)光引起熒光的相對效率。熒光放射光譜，如使激發(fā)光的波長和強度保持不變，而讓熒光物質(zhì)所產(chǎn)生的熒光通過放射的譜圖稱為熒光光譜。物質(zhì)的激發(fā)光譜和熒光放射光譜，可以用作該物質(zhì)的定性分析。當激發(fā)光強度、波長、所用關系，可以用作定量分析。熒光分析法的靈敏度一般較紫外分光光度法或比色法為高，濃度太大的溶液會有“自熄滅”作用，以及由于在液面四周溶液會吸取激發(fā)光，正比，故熒光分析法應在低濃度溶液中進展。熒光放射的特點：可產(chǎn)生熒光的分子或原子在承受能量后即刻引起發(fā)光而一旦停頓供能，發(fā)光熒光現(xiàn)象也隨之在瞬間內(nèi)消逝。溶液熒光光譜通常具有的特征：斯托克斯位移：在溶液熒光光譜中，所觀看到的熒光的波長總是大于激發(fā)光的波長。熒光放射光譜的外形與激發(fā)波長無關。熒光放射光譜的形成與吸取光譜的外形有鏡像關系熒光的猝滅：熒光分子的輻射力量在受到激發(fā)光較長時間的照耀后會減弱甚至猝滅，這是用的熒光。因此熒光物質(zhì)的保存應留意避開光特別是紫外光的直接照耀和與其他化合物的接觸。熒光效率：熒光分子不會將全部吸取的光能都轉(zhuǎn)變成熒光，總或多或少地以其他形式釋放。熒光效率是指熒光分子將吸取的光能轉(zhuǎn)變成熒光的百分率，與放射熒光光量子的數(shù)值成正比。熒光效率=放射熒光的光量分子數(shù)熒光強度吸取光的光量子數(shù)激發(fā)光強度)放射熒光的光量子數(shù)亦即熒光強度，除受激熒光分子有其特定的吸取光譜和放射光譜熒光光譜光波峰時，得到的熒光強度也最大。測量原理稀溶液IF=2.303φFI0εcb,其中，I0為激發(fā)光強度為熒光強度;φf為熒光效率b為液池厚度;ε和c分別為發(fā)光物質(zhì)的摩爾吸光系數(shù)和摩爾濃度。技術指標：波長掃描范圍：220-900nm波長精度：1.5nm;狹縫范圍：0.15-20nm信噪比：S/N150以上水拉曼峰測定，狹5nm)最高掃描速度：5，500nm/min操作規(guī)程開機確認所測試樣液體或固體，選擇相應的附件。先開啟儀器主機電源，預熱半小時后啟動RF-530XPC，儀器自檢通過后，即可正常使用。測樣spectrum模式在“AcquireMode”中選擇“Spectrum”模式。對于做熒光光譜的樣品，“Configure”中“Parameters”的參數(shù)設置如下：Type”Emission;給定EX波長EM的掃描范圍最大范圍設定掃描速度掃描間隔狹縫寬度，點擊“OK”完成參數(shù)的設定。對于做激發(fā)光譜的樣品，“Configure”中“Parameters”的參數(shù)設置如下：EM波長EX的掃描范圍最大范圍設定掃描速度掃描間隔狹縫寬度，點擊“OK”，完成參數(shù)的設定。在樣品池中放入待測的溶液，點擊“Start”，即可開頭掃描。掃描完畢后，系統(tǒng)提示保存文件。可在“Presentation”中選擇“Graf”“Radar”“BothAxesCtrl+R”來調(diào)整顯示結(jié)果范圍在“Manipulate”中選擇“PeakPick”來標出峰位，最終在“Channel”中進展通道設定。述操作步驟對固體樣品同樣適用。Quantitativ模式在“AcquireMode”中選擇“Quantitative”模式。中“Parameters”的參數(shù)設置如下：Method選擇“MultiPointWorkingCurve;“OrderofCurve”中選擇“1st和“No”;EX、EM波長設定狹縫寬度，點擊“OK”，完成參數(shù)的設定。在樣品池中放入裝有空白溶液的比色皿后執(zhí)行“AutoZero”命令校零點。點擊“Standard”模式，制作工作曲線。將樣品池中的空白溶液換成一系列的濃度的樣品標準溶液進展測量，執(zhí)行“Read”命生成一條“熒光強度濃度”曲線。在“Presentation”中選擇“Display“Save”為擴展名為“.std”的文件。工作曲線制備完畢，即可進入未知樣的測量，選擇進入“Unknown”模式，將樣品池中的濃度標準溶液換成待測樣品溶液，執(zhí)行“Read”命令，即可得到相應的熒光強度和相應“Save”為擴展名為“.qnt”的文件。TimeCourse模式在“AcquireMode”中選擇“TimeCourse”模式。中“Parameters”的參數(shù)設置如下：EXEM波長設定狹縫寬度設定反響時間讀取速度讀取點數(shù);點擊“OK”，完成參數(shù)的設定。在樣品池中放入裝有空白溶液的比色皿后執(zhí)行“AutoZero”命令校零點。將樣品池中的空白溶液換成待測溶液，點擊“Start”，即可開頭掃描。掃描完畢后，即可得到熒光強度對時間的工作曲線。將此工作曲線“Save”為擴展名為“.TMC”的文件。關機留意事項請留意疼惜液體比色皿，特別是測試有機污染，影響透光度。固體樣品池僅剩一個，測試完畢請物歸原處。測試完畢請留意登記，關閉儀器。分子吸取、熒光、磷光輻射躍遷無輻射躍遷——去活化過程處于激發(fā)態(tài)分子不穩(wěn)定，通過輻射或非輻射振動弛豫在液相或壓力足夠高的氣相中，處于激發(fā)態(tài)的分子因碰撞將能量以熱的形式傳遞給四周的程，稱為振動弛豫。內(nèi)轉(zhuǎn)換對于具有一樣多重度的分子，假設較高電子能級的低振動能層與較低電子能級的高振動能層S2-S1;T2-T1。定性分析任何熒光都具有兩種特征光譜：激發(fā)光譜與放射光譜。它們是熒光定性分析的根底。激發(fā)光譜轉(zhuǎn)變激發(fā)波長，測量在最強熒光放射波特長激發(fā)光譜。激發(fā)光譜外形與吸取光譜外形完全相像，經(jīng)校正后二者完全一樣這是由于分子吸取光能的過程就是分子的激發(fā)過程。激發(fā)光譜可用于鑒別熒光物質(zhì)在定量時，