組織學(xué)基本技術(shù)

組織學(xué)基本技術(shù)本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第1頁(yè)；編輯于星期一\18點(diǎn)35分內(nèi)容提綱組織的概念及研究?jī)?nèi)容組織學(xué)技術(shù)簡(jiǎn)介組織標(biāo)本的制備組織化學(xué)與免疫組織化學(xué)術(shù)組織學(xué)的學(xué)習(xí)方法本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第2頁(yè)；編輯于星期一\18點(diǎn)35分1.組織學(xué)（Histology）概念研究機(jī)體的微細(xì)結(jié)構(gòu)及其相關(guān)功能的科學(xué)。2.研究?jī)?nèi)容是在細(xì)胞水平、亞細(xì)胞水平和分子水平上對(duì)機(jī)體進(jìn)行研究。一、組織學(xué)概念及研究?jī)?nèi)容本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第3頁(yè)；編輯于星期一\18點(diǎn)35分二、組織學(xué)技術(shù)簡(jiǎn)介顯微鏡技術(shù)組織化學(xué)術(shù)圖像分析術(shù)細(xì)胞培養(yǎng)術(shù)和組織工程本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第4頁(yè)；編輯于星期一\18點(diǎn)35分顯微鏡技術(shù)16世紀(jì)末，荷蘭的眼鏡商詹森（ZacchariasJanssen）和他的兒子把幾塊鏡片放進(jìn)了一個(gè)圓筒中，結(jié)果發(fā)現(xiàn)通過(guò)圓筒看到附近的物體出奇的大，這就是現(xiàn)在的顯微鏡和望遠(yuǎn)鏡的前身。詹森制造的第一臺(tái)復(fù)合式顯微鏡。其基本原理是使用兩個(gè)凸透鏡，一個(gè)凸透鏡把另外一個(gè)所成的像進(jìn)一步放大。本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第5頁(yè)；編輯于星期一\18點(diǎn)35分顯微鏡的發(fā)展史世界上的第一架顯微鏡是荷蘭眼睛匠詹森父子在1590年前后制成的，效果不理想。前后經(jīng)過(guò)伽利略和胡克改良，效果較好。1878年，制成現(xiàn)代的光學(xué)顯微鏡。20世紀(jì)30年代，制造了第一架電子顯微鏡。1981年，掃描隧道顯微鏡應(yīng)運(yùn)而生。本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第6頁(yè)；編輯于星期一\18點(diǎn)35分根據(jù)光源不同，顯微鏡分為光學(xué)顯微鏡和電子顯微鏡兩大類。前者以可見(jiàn)光為光源，后者則以電子束為光源?！?、光學(xué)顯微鏡（一）普通光學(xué)顯微鏡（二）熒光顯微鏡（三）激光共聚焦掃描顯微境（四）暗視野顯微鏡（五）相差顯微鏡（六）偏光顯微鏡（七）微分干涉差顯微鏡（八）倒置顯微鏡顯微鏡技術(shù)本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第7頁(yè)；編輯于星期一\18點(diǎn)35分尼康E-600光學(xué)顯微鏡普通光學(xué)顯微鏡由二部分構(gòu)成：①光學(xué)部分：包括聚光鏡、物鏡和目鏡；②機(jī)械部分：包括鏡臂、載物臺(tái)等。尼康E-600光學(xué)顯微鏡本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第8頁(yè)；編輯于星期一\18點(diǎn)35分尼康E800熒光顯微鏡熒光顯微鏡由光源、濾片系統(tǒng)和顯微鏡三部分構(gòu)成。光源為高壓汞燈，用以產(chǎn)生波長(zhǎng)短、能量高的紫外光。原理：紫外光激發(fā)標(biāo)本中的熒光物質(zhì)，使之產(chǎn)生各種不同顏色的熒光，通過(guò)觀察熒光的分布與強(qiáng)弱來(lái)測(cè)定被檢物質(zhì)。研究?jī)?nèi)容：觀察組織、細(xì)胞中有自發(fā)熒光或經(jīng)熒光染料染色或標(biāo)記的結(jié)構(gòu)。本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第9頁(yè)；編輯于星期一\18點(diǎn)35分萊卡倒置顯微鏡倒置顯微鏡：組成和普通顯微鏡一樣，不同處物鏡與照明系統(tǒng)顛倒，前者在載物臺(tái)之上，后者在載物臺(tái)之下。研究?jī)?nèi)容：觀察細(xì)胞培養(yǎng)中活細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)和生長(zhǎng)變化情況。倒置相差顯微鏡：具有相差物鏡，使活細(xì)胞的不同結(jié)構(gòu)出現(xiàn)顯著的明暗反差，并具有立體感。本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第10頁(yè)；編輯于星期一\18點(diǎn)35分二、電子顯微鏡透射電鏡掃描電鏡本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第11頁(yè)；編輯于星期一\18點(diǎn)35分透射電鏡觀察細(xì)胞的內(nèi)部結(jié)構(gòu)

觀察細(xì)胞表面的立體結(jié)構(gòu)掃描電鏡本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第12頁(yè)；編輯于星期一\18點(diǎn)35分透射電鏡標(biāo)本制備步驟取材（約1mm3）雙重固定（雙醛固定液和四氧化鋨）樹(shù)脂包埋超薄切片重金屬染色電鏡觀察脫水本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第13頁(yè)；編輯于星期一\18點(diǎn)35分掃描電鏡標(biāo)本制備步驟取材（直徑約0.3cm）雙重固定（雙醛固定液和四氧化鋨）脫水干燥噴鍍電鏡掃描觀察本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第14頁(yè)；編輯于星期一\18點(diǎn)35分顯微組織標(biāo)本的制備有多種方法，例如：切片法（石蠟切片和冰凍切片）、涂片法、鋪片法、磨片法等。組織學(xué)中最常用的方法是石蠟切片法。三、顯微組織標(biāo)本的制備本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第15頁(yè)；編輯于星期一\18點(diǎn)35分三、顯微組織標(biāo)本的制備組織制片的意義和目的組織標(biāo)本制作的方法組織切片標(biāo)本制作的基本程序蘇木精-伊紅染色的程序本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第16頁(yè)；編輯于星期一\18點(diǎn)35分組織制片的意義和目的組織制片技術(shù)是隨著生命科學(xué)的發(fā)展而不斷進(jìn)步的。利用組織切片染色(staining)的方法所制出的標(biāo)本顯示了各種組織細(xì)胞的不同結(jié)構(gòu)和形態(tài)，它們之間的相互連接及它們之中的某些化學(xué)成分的種類和含量的變化，為細(xì)胞分子學(xué)的研究提供了最直觀的依據(jù)。因此，組織制片是研究醫(yī)學(xué)和生物學(xué)的一個(gè)最基本和最重要的手段。本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第17頁(yè)；編輯于星期一\18點(diǎn)35分組織標(biāo)本制作的方法

組織切片法非組織切片法本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第18頁(yè)；編輯于星期一\18點(diǎn)35分組織切片法：利用化學(xué)試劑將組織經(jīng)過(guò)一系列的固定(fixation)、脫水、透明后，再利用石蠟或火棉膠和明膠等支持物滲透進(jìn)組織內(nèi)部，使組織保持一定的硬度，并包埋(embedding)成塊，然后依靠切片機(jī)(microtome)將包埋好的組織塊切成以微米計(jì)的薄片，再根據(jù)需要進(jìn)行各種染色得到的供顯微鏡下觀察的標(biāo)本的方法。包括：石蠟切片、火棉膠切片、明膠切片，冰凍切片。本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第19頁(yè)；編輯于星期一\18點(diǎn)35分組織不經(jīng)過(guò)切片手續(xù)制成的觀察標(biāo)本的方法為非組織切片法。包括：涂片、壓片、鋪片、磨片、消化分離、活體標(biāo)本、整裝標(biāo)本、血管注射標(biāo)本。涂片：將所采的血液或骨髓樣品涂抹于載玻片上經(jīng)瑞氏或姬姆薩染色后的標(biāo)本。壓片：先將組織處理成小塊物質(zhì)，然后經(jīng)化學(xué)藥品軟化和染色，再用蓋玻片壓封于載玻片上的標(biāo)本。例如運(yùn)動(dòng)終板等。非組織切片法本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第20頁(yè)；編輯于星期一\18點(diǎn)35分鋪片：將需要觀察的薄片組織用手工的方法直接鋪于載玻片上，然后經(jīng)過(guò)固定、染色等程序制成的標(biāo)本。例如蛙的腸系膜鋪片，大白鼠的皮下組織鋪片等。磨片：骨，牙齒等組織，不經(jīng)脫鈣和切片，直接在磨石上用手工磨成大約50微米左右的薄片，然后再進(jìn)行染色封固在載玻片上的標(biāo)本。消化分離：將組織分離成小塊，然后利用相應(yīng)的化學(xué)藥品水溶液將其細(xì)胞間質(zhì)消化溶去，再用機(jī)械分離的方法，如利用水的震蕩沖擊力等，使小塊組織分離成單個(gè)而又完整的細(xì)胞，經(jīng)染色后涂于載玻片上封固的標(biāo)本。例如平滑肌分離標(biāo)本，脊髓的運(yùn)動(dòng)神經(jīng)細(xì)胞等。本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第21頁(yè)；編輯于星期一\18點(diǎn)35分活體標(biāo)本：將所采的觀察標(biāo)本加生理鹽水后直接滴于載玻片上在顯微鏡下觀察。整裝標(biāo)本：一種是將胚胎或小動(dòng)物經(jīng)前期固定后整體封藏于盛滿固定劑的透明容器中。另一種是將發(fā)育至某一階段的雞胚整體取出，經(jīng)固定、染色、脫水、透明后封固于載玻片上的標(biāo)本。血管注射標(biāo)本：一種是將有色物質(zhì)注射進(jìn)血管，用酸或鹼將血管周圍的組織腐蝕后做成的整體封藏的血管標(biāo)本。另一種是將有色物質(zhì)注射進(jìn)血管后，經(jīng)一系列制片技術(shù)處理后封固于載玻片上供顯微鏡下觀察的標(biāo)本。本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第22頁(yè)；編輯于星期一\18點(diǎn)35分切片：用于具有一定硬度的組織，例如肝、腎等本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第23頁(yè)；編輯于星期一\18點(diǎn)35分涂片:用于液態(tài)組織，如血液，精液和唾液。本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第24頁(yè)；編輯于星期一\18點(diǎn)35分鋪片:用于很薄的組織，如腸系膜。本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第25頁(yè)；編輯于星期一\18點(diǎn)35分磨片:用于很堅(jiān)硬的組織，如骨和牙。本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第26頁(yè)；編輯于星期一\18點(diǎn)35分石蠟切片制作步驟

取材固定包埋切片染色封片本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第27頁(yè)；編輯于星期一\18點(diǎn)35分石蠟切片的制備（一）取材注意事項(xiàng)：材料愈新鮮愈好，動(dòng)作要迅速、準(zhǔn)確，防止組織發(fā)生變形、自溶；取材所用的刀和剪要銳利，避免損傷組織；取材部位要恰當(dāng)、準(zhǔn)確，易于說(shuō)明問(wèn)題；所取組織塊大小要恰當(dāng)，便于固定液的滲透。組織的大小以1X1X0.3cm為宜，厚度一般不超過(guò)0.5cm。本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第28頁(yè)；編輯于星期一\18點(diǎn)35分（二）固定目的：使組織內(nèi)的蛋白質(zhì)迅速凝固或沉淀，防止細(xì)胞自溶或組織腐敗，盡量保持組織的原有結(jié)構(gòu)和化學(xué)組成。本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第29頁(yè)；編輯于星期一\18點(diǎn)35分

單純固定液4%中性甲醛：用PH7.2-7.4的PBS配制，配制后密封、4℃保存，保存時(shí)間不超過(guò)一個(gè)月。適用HE染色和免疫組化。4%多聚甲醛：用PH7.2-7.4的PBS配制。乙醇混合固定液復(fù)合固定液

AF（乙醇-甲醛）固定液

Bouin固定液

Carnoy固定液

Zenker固定液固定液的種類本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第30頁(yè)；編輯于星期一\18點(diǎn)35分固定方法

浸透固定：將組織切成小塊，直接投入固定液中固定。灌注固定：一般采用心臟灌注固定。固定更加迅速、均勻。尤其適用神經(jīng)組織。本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第31頁(yè)；編輯于星期一\18點(diǎn)35分固定注意事項(xiàng)及時(shí)固定：最好動(dòng)物死后半小時(shí)內(nèi)固定，一般不超過(guò)2小時(shí)。固定液選擇：根據(jù)組織的特點(diǎn)、染色方法選擇合適的固定液。固定液的量：一般為組織體積的6-10倍。固定時(shí)間：在保存組織形態(tài)結(jié)構(gòu)的同時(shí)，盡可能較好保存組織細(xì)胞的抗原。固定溫度：低溫可以保持好的結(jié)構(gòu)。本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第32頁(yè)；編輯于星期一\18點(diǎn)35分高效、方便、快捷的全自動(dòng)形態(tài)檢測(cè)平臺(tái)！本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第33頁(yè)；編輯于星期一\18點(diǎn)35分（三）染色HE染色（hematoxylin-eosinstaining）

：組織學(xué)最常用的染色方法。特殊染色：硝酸銀染色、醛復(fù)紅染色、甲苯胺藍(lán)染色等。本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第34頁(yè)；編輯于星期一\18點(diǎn)35分鍍銀染色神經(jīng)元H.E染色本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第35頁(yè)；編輯于星期一\18點(diǎn)35分蘇木精堿性染料將嗜堿性物質(zhì)染成藍(lán)色酸性染料將嗜酸性物質(zhì)染成紅色細(xì)胞核中的染色質(zhì)細(xì)胞質(zhì)中的核糖體

多數(shù)細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)（線粒體、溶酶體、滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)）HE染色嗜堿性嗜酸性伊紅本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第36頁(yè)；編輯于星期一\18點(diǎn)35分細(xì)胞爬片制作將處理好的蓋玻片放入接種了細(xì)胞的培養(yǎng)瓶或六孔板內(nèi)。待細(xì)胞生長(zhǎng)達(dá)到60％以上后取出玻片。用4%的多聚甲醛固定2h以上?？杉痈视头獯嬷糜诹阆?0℃保存。本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第37頁(yè)；編輯于星期一\18點(diǎn)35分細(xì)胞涂片制作離心將細(xì)胞收集出來(lái)，用預(yù)冷的PBS洗2－3遍，最后用PBS將細(xì)胞重懸。吸取30－50ul（可根據(jù)細(xì)胞量調(diào)整）滴至處理過(guò)的載玻片上，然后涂抹均勻。待稍微風(fēng)干以后加4％多聚甲醛溶液覆蓋細(xì)胞，固定2－4小時(shí)。在細(xì)胞上加一層甘油放-20℃保存。本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第38頁(yè)；編輯于星期一\18點(diǎn)35分組織化學(xué)技術(shù)概念：應(yīng)用化學(xué)反應(yīng)或免疫學(xué)反應(yīng)等原理檢測(cè)組織和細(xì)胞的化學(xué)成分并進(jìn)行定位、定量的技術(shù)。包括一般組織化學(xué)、免疫組織化學(xué)、原位雜交組織化學(xué)等。四、組織化學(xué)與免疫組織化學(xué)術(shù)本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第39頁(yè)；編輯于星期一\18點(diǎn)35分

原理：組織細(xì)胞中的物質(zhì)（核酸、糖類、脂類、蛋白質(zhì)等）與相應(yīng)試劑反應(yīng)，最后形成有色終產(chǎn)物，通過(guò)有色終產(chǎn)物在細(xì)胞中的定位及顏色的深淺來(lái)判斷某種物質(zhì)在細(xì)胞中的分布和含量。特點(diǎn)：能在組織學(xué)標(biāo)本上，定位、定性和定量地顯示分布于組織或細(xì)胞內(nèi)某些物質(zhì)。本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第40頁(yè)；編輯于星期一\18點(diǎn)35分①糖類——過(guò)碘酸-Schiff反應(yīng)（PAS反應(yīng)）②DNA——福爾根反應(yīng)（Feulgenreaction）③DNA和RNA——甲基綠-派若寧反應(yīng)④脂類——脂溶性染料（蘇丹紅、油紅O等）⑤酶類——生化反應(yīng)（一）一般組織化學(xué)術(shù)（Histochemistry）本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第41頁(yè)；編輯于星期一\18點(diǎn)35分PAS反應(yīng)：確定組織或細(xì)胞中有無(wú)多糖存在的一種方法。反應(yīng)產(chǎn)物呈紫紅色。本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第42頁(yè)；編輯于星期一\18點(diǎn)35分Feulgen反應(yīng)：顯示DNA，呈紅色。甲基綠-派若寧反應(yīng)：同時(shí)顯示DNA核RNA，DNA呈藍(lán)綠色，RNA呈紅色。洋蔥鱗莖內(nèi)表皮細(xì)胞本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第43頁(yè)；編輯于星期一\18點(diǎn)35分蘇丹紅染色：脂類物質(zhì)呈紅色。冰凍切片對(duì)脂類物質(zhì)保持較好。本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第44頁(yè)；編輯于星期一\18點(diǎn)35分酶類：在適當(dāng)溫度和PH條件下，酶催化特異性底物形成初級(jí)反應(yīng)產(chǎn)物，再用捕捉劑捕獲該產(chǎn)物，形成鏡下可見(jiàn)的有色沉淀物。該技術(shù)檢測(cè)的不是酶本身，而是酶的活性。本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第45頁(yè)；編輯于星期一\18點(diǎn)35分（二）免疫組織化學(xué)術(shù)（immunohistochemistry）1.概念及原理：根據(jù)抗原和抗體特異性結(jié)合原理，檢測(cè)組織、細(xì)胞中多肽和蛋白質(zhì)等大分子物質(zhì)的一種技術(shù)。用標(biāo)記的抗體與組織中的抗原結(jié)合，然后通過(guò)化學(xué)反應(yīng)，將抗原抗體結(jié)合部位顯示出來(lái)，借助顯微鏡觀察，確定檢測(cè)物質(zhì)的分布、含量。本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第46頁(yè)；編輯于星期一\18點(diǎn)35分2.標(biāo)記物種類

熒光染料：例如異硫氰酸熒光素（FITC），四甲基異硫氰酸羅達(dá)明（TMRITC），用熒光顯微鏡觀察

酶類：例如辣根過(guò)氧化物酶，用光鏡或電鏡觀察。

膠體金：多用于電鏡觀察。本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第47頁(yè)；編輯于星期一\18點(diǎn)35分免疫組織化學(xué)原理模式圖

抗原抗體抗原抗體復(fù)合物

熒光素辣根過(guò)氧化物酶膠體金本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第48頁(yè)；編輯于星期一\18點(diǎn)35分3.免疫組化技術(shù)的種類根據(jù)染色步驟分：

直接法：直接標(biāo)記第一抗體。該法簡(jiǎn)單，特異性強(qiáng)，但敏感性較差。

間接法：不標(biāo)記第一抗體，標(biāo)記第二抗體。該法敏感性較高。

特殊的間接法：第一抗體和第二抗體均不標(biāo)記，而是用酶標(biāo)記與第二抗體結(jié)合的物質(zhì)。該法敏感性高。包括PAP法、ABC法、SABC法等。本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第49頁(yè)；編輯于星期一\18點(diǎn)35分根據(jù)標(biāo)記不同分：免疫熒光技術(shù)：免疫膠體金技術(shù)：免疫酶標(biāo)技術(shù)：目前最常用的方法。包括PAP法、ABC法、SABC法等。與免疫熒光技術(shù)比較，其優(yōu)點(diǎn)定位準(zhǔn)確、對(duì)比度好，染色標(biāo)本可長(zhǎng)期保存，適合光鏡、電鏡研究。本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第50頁(yè)；編輯于星期一\18點(diǎn)35分熒光標(biāo)記免疫組織化學(xué)

直接法間接法本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第51頁(yè)；編輯于星期一\18點(diǎn)35分免疫組織化學(xué)（熒光素標(biāo)記）毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞呈vWF陽(yáng)性——血管性假血友病因子本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第52頁(yè)；編輯于星期一\18點(diǎn)35分NucleusandActinEndoplasmicReticulumNucleusandMicrotubulesActinandMicrotubulesCellularStructuresTheGolgiApparatusStagesofMitosis本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第53頁(yè)；編輯于星期一\18點(diǎn)35分酶聯(lián)免疫組織化學(xué)ABC法：一抗＋生物素化二抗＋abc復(fù)合物

S-P法：一抗＋生物素化二抗＋HRP標(biāo)記的鏈霉卵白素本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第54頁(yè)；編輯于星期一\18點(diǎn)35分免疫組織化學(xué)（辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記）大腸肌動(dòng)蛋白——actin陽(yáng)性本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第55頁(yè)；編輯于星期一\18點(diǎn)35分4.免疫組化技術(shù)的注意事項(xiàng)：

組織固定愈新鮮愈好。固定液多用4%多聚甲醛，固定時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)。組織脫水必需徹底。切片必需完整，平展，無(wú)氣泡、皺褶。切片貼附必需牢固：載玻片需做特殊處理。切片脫蠟徹底。本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第56頁(yè)；編輯于星期一\18點(diǎn)35分4.免疫組化技術(shù)的注意事項(xiàng)：

徹底抑制內(nèi)源性過(guò)氧化物酶活性，降低背景染色常用抑制劑是3%的過(guò)氧化氫。合理使用封閉劑，目的減少非特異性染色。封閉血清一般是和二抗同一來(lái)源，也可以用羊血清、小牛血清等，但不能與一抗來(lái)源一致。抗原修復(fù)：本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第57頁(yè)；編輯于星期一\18點(diǎn)35分4.免疫組化技術(shù)的注意事項(xiàng)：

選擇合適抗體。抗體使用注意事項(xiàng)。

PBS的沖洗：

PBS的要求：PH7.2-7.6；濃度：0.02M。單獨(dú)沖洗溫柔沖洗沖洗徹底本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第58頁(yè)；編輯于星期一\18點(diǎn)35分4.免疫組化技術(shù)的注意事項(xiàng)：DAB顯色注意事項(xiàng)：DAB是一種致癌物，嚴(yán)禁倒入水池，同時(shí)注意自我保護(hù)。新鮮配制：顯色前10-15分鐘配制。室溫顯色，需要在鏡下控制顯色時(shí)間，一般在5-30分鐘。本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第59頁(yè)；編輯于星期一\18點(diǎn)35分洗滌劑清洗泡酸臨用前防脫處理（明膠、多聚賴氨酸、APES）流水沖洗烤箱烤干流水沖洗蒸餾水沖洗烤箱烤干37℃干燥備用免疫組織載玻片特殊處理步驟本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第60頁(yè)；編輯于星期一\18點(diǎn)35分組織制作過(guò)程中，由于化學(xué)試劑的作用封閉了部分抗原，又由于熱的作用致使部分抗原的肽鏈發(fā)生扭曲，導(dǎo)致免疫組化染色過(guò)程中不能將其徹底顯示，為了解決上述的問(wèn)題，利用化學(xué)試劑和熱的作用將這些抗原重新暴露或修正的過(guò)程稱為抗原修復(fù)。常用的抗原修復(fù)方法有微波修復(fù)法、高壓加熱法、水煮加熱法、酶消化法等，常用的修復(fù)液是PH6.0的mol/L的檸檬樹(shù)緩沖液?？乖迯?fù)本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第61頁(yè)；編輯于星期一\18點(diǎn)35分一抗選擇：選擇單克隆抗體還是多克隆抗體。單克隆抗體特異性強(qiáng)，靈敏度較低；多克隆抗體特異性稍弱，靈敏度高，易出現(xiàn)非特異性染色。通過(guò)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選擇種屬來(lái)源。能否做免疫組化。檢測(cè)標(biāo)本類型：石蠟切片、冰凍切片生產(chǎn)廠家：國(guó)內(nèi)、國(guó)外。二抗選擇：根據(jù)一抗種屬選擇二抗種屬來(lái)源?？贵w選擇本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第62頁(yè)；編輯于星期一\18點(diǎn)35分抗體保存：濃縮液于-80℃可保存三年左右。購(gòu)買后，應(yīng)在無(wú)菌條件下，將抗體分裝成小包裝，蠟?zāi)っ芊?。禁忌反?fù)凍融。選擇最佳抗體稀釋度：抗體稀釋液用山羊血清、BSA或脫脂奶粉等?？贵w的加入：切片濕潤(rùn)，滴入抗體量以一滴50ul為好。選擇合適的孵育時(shí)間：4℃孵育過(guò)夜，室溫2小時(shí)，37℃30-60分鐘。抗體使用注意事項(xiàng)本文檔共69頁(yè)；當(dāng)前第63頁(yè)；編輯于星期一\18點(diǎn)35分必須設(shè)染色對(duì)照：每批染色都要以特異性的陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照為基礎(chǔ)，才能對(duì)染色結(jié)果做出正確的判斷。