優(yōu)質(zhì)課微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)詳解演示文稿

優(yōu)質(zhì)課微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)詳解演示文稿本文檔共29頁；當(dāng)前第1頁；編輯于星期一\13點(diǎn)0分優(yōu)選優(yōu)質(zhì)課微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)本文檔共29頁；當(dāng)前第2頁；編輯于星期一\13點(diǎn)0分一.培養(yǎng)基微生物原核類:真核類非細(xì)胞類：細(xì)菌、藍(lán)藻等酵母菌、霉菌、食用菌等真菌：原生生物：草履蟲、變形蟲等病毒是一切肉眼看不見或看不清楚的微小生物的總稱．關(guān)于微生物的類群本文檔共29頁；當(dāng)前第3頁；編輯于星期一\13點(diǎn)0分牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基是一種應(yīng)用最廣泛和最普通的細(xì)菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基。一、培養(yǎng)基的概念人們按照微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出供其生長(zhǎng)繁殖的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)——培養(yǎng)基思考：微生物“吃”什么？本文檔共29頁；當(dāng)前第4頁；編輯于星期一\13點(diǎn)0分一、培養(yǎng)基的成分：微生物生存的環(huán)境和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)⑴碳源（提供碳元素的物質(zhì)）無機(jī)碳源：有機(jī)碳源CO2、碳酸鹽自養(yǎng)微生物異養(yǎng)微生物⑵氮源（提供氮元素的物質(zhì)）無機(jī)氮源：有機(jī)氮源：：（葡糖糖、蔗糖、淀粉、牛肉膏、蛋白胨等）牛肉膏、蛋白胨等NH4＋、NO3-N2本文檔共29頁；當(dāng)前第5頁；編輯于星期一\13點(diǎn)0分(3).不同的微生物往往需要采用不同的培養(yǎng)基配方(參考教材附錄內(nèi)容)(5)另外還需要滿足微生物生長(zhǎng)對(duì)pH、特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),例如:生長(zhǎng)因子(即細(xì)菌生長(zhǎng)必需，而自身不能合成的化合物,如維生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶)以及氧氣等的要求。

(4).不管哪種培養(yǎng)基，一般都含有水、碳源、氮源、無機(jī)鹽——基本成分本文檔共29頁；當(dāng)前第6頁；編輯于星期一\13點(diǎn)0分（1）按培養(yǎng)基的物理形態(tài)分：液體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基一、培養(yǎng)基的種類（2）按培養(yǎng)基的功能分：基礎(chǔ)（通用）培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基（3）按培養(yǎng)基的化學(xué)成分分：·天然培養(yǎng)基·合成培養(yǎng)基本文檔共29頁；當(dāng)前第7頁；編輯于星期一\13點(diǎn)0分二、無菌技術(shù)1.概念無菌技術(shù)又稱無菌操作，泛指在培養(yǎng)微生物的操作中，所有防止雜菌污染的方法。因此，獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止外來雜菌的入侵本文檔共29頁；當(dāng)前第8頁；編輯于星期一\13點(diǎn)0分消毒

使用較為溫和的物理或化學(xué)方法，殺死物體表面或內(nèi)部的部分微生物(不包括芽孢和孢子)。2.消毒與滅菌滅菌使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子。理化因素的作用強(qiáng)度消滅微生物的數(shù)量芽孢和孢子能否被消滅(1)定義本文檔共29頁；當(dāng)前第9頁；編輯于星期一\13點(diǎn)0分①煮沸消毒法：100℃煮沸5-6min。②巴氏消毒法：70-75℃下煮30min或80℃下煮15min。③化學(xué)藥劑消毒法：用75%酒精等進(jìn)行皮膚消毒；氯氣消毒水源。④紫外線消毒。⑴.消毒的方法：2.常用的消毒與滅菌的方法本文檔共29頁；當(dāng)前第10頁；編輯于星期一\13點(diǎn)0分①灼燒滅菌②干熱滅菌：160-170℃下加熱1-2h。③高壓蒸氣滅菌：100kPa、121℃下維持15-30min.⑵.滅菌的方法：本文檔共29頁；當(dāng)前第11頁；編輯于星期一\13點(diǎn)0分二、無菌技術(shù)（1）對(duì)實(shí)驗(yàn)操作的空間、操作者的衣著和手，進(jìn)行清潔和消毒。（2）將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等器具進(jìn)行滅菌。（3）為避免周圍環(huán)境中微生物的污染，實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在酒精燈火焰附近進(jìn)行。（4）實(shí)驗(yàn)操作時(shí)應(yīng)避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與周圍的物品相接觸。無菌技術(shù)圍繞著如何避免雜菌的污染展開，主要包括以下幾個(gè)方面本文檔共29頁；當(dāng)前第12頁；編輯于星期一\13點(diǎn)0分思考：1.無菌技術(shù)除了用來防止實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)物被其他外來微生物污染外，還有什么目的？思考：2.請(qǐng)你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅菌。如果需要，請(qǐng)選擇合適的方法。（1）培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿（2）玻棒、試管、燒瓶和吸管（3）實(shí)驗(yàn)操作者的雙手

無菌技術(shù)還能有效避免操作者自身被微生物感染。（1）、（2）需要滅菌；（3）需要消毒。本文檔共29頁；當(dāng)前第13頁；編輯于星期一\13點(diǎn)0分練習(xí)細(xì)菌培養(yǎng)過程中分別采用了高壓蒸汽、酒精、火焰灼燒等幾種不同的處理方法，這些方法依次用于殺滅哪些部位的雜菌（）A.接種針、手、培養(yǎng)基B.高壓鍋、手、接種針C.培養(yǎng)基、手、接種針D.培養(yǎng)基、手、高壓鍋C本文檔共29頁；當(dāng)前第14頁；編輯于星期一\13點(diǎn)0分變形題培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿、接種環(huán)、實(shí)驗(yàn)操作者的雙手、空氣、牛奶所采用的滅菌、消毒方法依次是（）①化學(xué)消毒②灼燒滅菌③干熱滅菌④紫外線消毒⑤高壓蒸汽滅菌⑥巴氏消毒法A.⑤③②①④⑥B.①②③④⑤⑥C.⑥②③④①⑤D.③④②①⑥⑤A本文檔共29頁；當(dāng)前第15頁；編輯于星期一\13點(diǎn)0分（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基1.計(jì)算：（根據(jù)牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基配方的比例，計(jì)算配制100ML的培養(yǎng)基時(shí)，各種的成分的用量）物質(zhì)牛肉膏蛋白胨NaCl瓊脂水重量5g10g5g20g定溶至1000mL2.稱量

三、實(shí)驗(yàn)操作思考：該培養(yǎng)基從物理性質(zhì)分屬于哪種？原因？含有幾種基本營(yíng)養(yǎng)成分？牛肉膏提供上述哪幾種成分？準(zhǔn)確稱取各種成分，注意事項(xiàng)：牛肉膏要放在稱量紙上稱量，牛肉膏、蛋白胨都易吸潮，稱取時(shí)動(dòng)作要迅速，稱后及時(shí)蓋上瓶蓋。本文檔共29頁；當(dāng)前第16頁；編輯于星期一\13點(diǎn)0分

3.溶化：

4.滅菌：

5.倒平板：待培養(yǎng)基冷卻到50OC左右時(shí)，在酒精火焰附近倒平板。注意：溶化后應(yīng)該調(diào)節(jié)PH（在滅菌前）本文檔共29頁；當(dāng)前第17頁；編輯于星期一\13點(diǎn)0分?思考3①溶化時(shí)為什么要將牛肉膏連同稱量紙一起加熱?

②加瓊脂的目的是什么?可保證粘附在稱量紙上的牛肉膏也能溶于水中,減少誤差作為凝固劑本文檔共29頁；當(dāng)前第18頁；編輯于星期一\13點(diǎn)0分思考4

①在滅菌前,用牛皮紙、舊報(bào)紙包緊盛有培養(yǎng)基的錐形瓶的目的是什么？?在滅菌時(shí)能避免水蒸汽凝結(jié)時(shí)浸濕棉塞；在取出培養(yǎng)基錐形瓶時(shí)也能起到隔絕空氣中雜菌污染的作用本文檔共29頁；當(dāng)前第19頁；編輯于星期一\13點(diǎn)0分倒平板:本文檔共29頁；當(dāng)前第20頁；編輯于星期一\13點(diǎn)0分1).培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50℃左右時(shí)，才能用來倒平板。你用什么辦法來估計(jì)培養(yǎng)基的溫度？問題討論答：可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時(shí)，就可以進(jìn)行倒平板了。2).為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？答：通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。本文檔共29頁；當(dāng)前第21頁；編輯于星期一\13點(diǎn)0分3).平板冷凝后，為什么要將平板倒置？4).在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個(gè)平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？答：平板冷凝后，皿蓋上會(huì)凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。答：空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個(gè)平板培養(yǎng)微生物。本文檔共29頁；當(dāng)前第22頁；編輯于星期一\13點(diǎn)0分四、純化大腸桿菌

微生物接種方法常見的有平板劃線法和稀釋涂布平板法。（1）.平板劃線法通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。在數(shù)次劃線后可以分離到由一個(gè)細(xì)胞繁殖而來的肉眼可見的子細(xì)胞群體稱菌落。本文檔共29頁；當(dāng)前第23頁；編輯于星期一\13點(diǎn)0分學(xué)科網(wǎng)本文檔共29頁；當(dāng)前第24頁；編輯于星期一\13點(diǎn)0分將接種環(huán)放在火焰上灼燒，直到接種環(huán)_______在_______旁冷卻接種環(huán)，并打開棉塞將試管口通過火焰.將已______的接種環(huán)伸入菌液中蘸取一環(huán)菌液左手將皿蓋打開一條縫隙，右手將沾有菌種的接種環(huán)迅速伸入平板內(nèi)，劃__________條平行線，蓋上皿蓋。注意不要?jiǎng)澠婆囵B(yǎng)基。.將試管通過火焰，并塞上棉塞火焰冷卻三至五灼燒接種環(huán)，待其冷卻后，從第一區(qū)域劃線的_______開始往第二區(qū)域內(nèi)劃線。重復(fù)以上操作，在三、四、五區(qū)域內(nèi)劃線。注意不要將最后一區(qū)的劃線與第一區(qū)相連。末端燒紅將平板_____放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

倒置本文檔共29頁；當(dāng)前第25頁；編輯于星期一\13點(diǎn)0分

思考：1、為什么在操作的第一步要灼燒接種環(huán)？

操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；思考：2、每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？

每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時(shí)，接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時(shí)菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落。思考：3、在劃線操作結(jié)束時(shí)，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？

劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能及時(shí)殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。本文檔共29頁；當(dāng)前第26頁；編輯于星期一\13點(diǎn)0分思考：3、在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進(jìn)行劃線？避免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種思考：4、在作第二次以及其后的劃線操作時(shí)，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？劃線后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來的菌落。本文檔共29頁；當(dāng)前第27頁；編輯于星期一\13點(diǎn)0分平板劃線法的要點(diǎn)接種前，每次劃線前及接種后都要灼燒接種環(huán)接種環(huán)灼