關(guān)愛(ài)生命呵護(hù)健康紅細(xì)胞血型理論與技術(shù)

紅細(xì)胞血型理論與實(shí)驗(yàn)技術(shù)長(zhǎng)春博德生物技術(shù)有限責(zé)任公司童軍

主要內(nèi)容紅細(xì)胞血型相容性檢測(cè)紅細(xì)胞血型血清學(xué)檢測(cè)方法紅細(xì)胞血型系統(tǒng)介紹紅細(xì)胞血型抗原為同種異型抗原，是人類遺傳多態(tài)性標(biāo)志之一。自二十世紀(jì)初Landsteiner發(fā)現(xiàn)ABO血型以來(lái)，已陸續(xù)發(fā)現(xiàn)了許多新的紅細(xì)胞血型抗原。國(guó)際輸血協(xié)會(huì)（ISBT）2008年報(bào)告中已確認(rèn)了308個(gè)紅細(xì)胞血型抗原。并將其分為血型系統(tǒng)、血型集合和血型系列。輸血關(guān)系最大的是ABO及Rh血型系統(tǒng)。人類紅細(xì)胞血型研究背景血型系統(tǒng)血型系統(tǒng)ABO血型發(fā)現(xiàn)歷史1901年，Landsteiner把幾份血液標(biāo)本中的紅細(xì)胞分別與他人的血清交叉混合后，發(fā)現(xiàn)有的血液之間發(fā)生凝集反應(yīng)，有的則不發(fā)生。將人的紅細(xì)胞血型分為A、B、C(后稱為O)三種類型。1902年他的學(xué)生Decastello及Sturli發(fā)現(xiàn)了第4種血型，即AB型。ABO血型的發(fā)現(xiàn)，開(kāi)啟了血液免疫學(xué)及免疫遺傳學(xué)的新紀(jì)元。

ABH抗原的生化結(jié)構(gòu)編碼巖藻糖轉(zhuǎn)移酶添加巖藻糖到血型多聚糖前體的終端半乳糖上特異性H抗原形成編碼A或B轉(zhuǎn)移酶構(gòu)建完成A或B抗原H基因ABO基因

ABO抗原的發(fā)育

在胚胎早期A和B抗原就開(kāi)始產(chǎn)生。但到出生時(shí)，還沒(méi)有完全發(fā)育，與抗A和抗B試劑血清反應(yīng)比成人弱，2～4歲時(shí)才能充分表現(xiàn)出抗原性。

ABO抗體的發(fā)育出生時(shí)，正常的抗A和抗B還沒(méi)產(chǎn)生或較弱，到三個(gè)月時(shí)，反應(yīng)基本上與成年人的一樣。5～10歲時(shí)，抗體的產(chǎn)生達(dá)到高峰，具有較高效價(jià)。孟買型與類孟買型孟買型Bombayphenotype紅細(xì)胞上沒(méi)有A、B、H抗原，血清中存在抗-A、抗-B和抗-H抗體。表型標(biāo)記為：OhO、OhA、OhB、OhAB類孟買型Bombay-likephenotype表型標(biāo)記為:Ah、Bh、ABhABO血型的亞型ABO亞型（subgroups)，也稱變異型，紅細(xì)胞同屬于一種血型抗原，但在結(jié)構(gòu)上有一定的差異，性能也不完全相同。由于抗原弱，在用已知抗體檢測(cè)抗原和用已知抗原檢測(cè)被檢血清時(shí)不符合血清學(xué)反應(yīng)特征。A亞型：A1和A2是血型血清學(xué)方法確定的最重要的A型紅細(xì)胞亞型，一般認(rèn)為有兩種抗原A和A1，A1型人紅細(xì)胞上有這兩種抗原，A2型人紅細(xì)胞只有A抗原。亞洲人中A1型約占27%；A2型人稀少。其它A亞型：A3、Ax、Aend、Am、Ay和Ael。B亞型一般比A亞型更少：B3、Bx、Bm和Bel幾種A亞型紅細(xì)胞上的A抗原A1與A2的區(qū)分A1型紅細(xì)胞：A抗原和A1抗原A2型紅細(xì)胞：A抗原雙花扁豆（Dolichosbiflous)種子提取液Rh血型系統(tǒng)1939年Levine及Stetson在一個(gè)新生兒溶血疾病的母親的血清中，發(fā)現(xiàn)可凝集85%白種人的紅血球抗體。1940年Landsteiner及Wiener以恒河猴(Rhesusmonkey)的紅血球免疫兔子產(chǎn)生抗體，也可凝集85%白種人的紅血球。因此命名為Rh抗原。（恒河猴L(fēng)W抗原）Rh血型系統(tǒng)抗原RH血型系統(tǒng)抗原46個(gè)，其中D、C、E、c、e為主要的血型抗原。D抗原：只存在與人紅細(xì)胞膜，不存在與其它組織細(xì)胞中，體液分泌中也無(wú)D抗原。D抗原分類：根據(jù)D抗原的數(shù)量和質(zhì)量不同以及抗原性不同，將D抗原分類為5種：常見(jiàn)D抗原、弱D、不完全型D、不完全型弱D及增強(qiáng)D。Rh血型系統(tǒng)抗原頻率Dantigen–85%Cantigen–70%cantigen–80%Eantigen–30%eantigen–98%Rh血型系統(tǒng)抗體Rh抗體主要通過(guò)輸血和妊娠免疫產(chǎn)生。一般在初次免疫后2-6個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)。對(duì)Rh(D)初次免疫的人，經(jīng)再次免疫后，在三周內(nèi)抗體濃度可達(dá)最高峰。同種異型抗體：RhD陰性人輸用D陽(yáng)性血而產(chǎn)生的抗-D抗體。絕大部分人血清同種異體抗體都是IgG類抗體，多數(shù)在鹽水介質(zhì)中不發(fā)生直接凝集。單克隆抗-D：人鼠或人人淋巴細(xì)胞雜交瘤制備而成。紅細(xì)胞血型相容性檢測(cè)交叉配血血型檢測(cè)抗體篩檢及鑒定紅細(xì)胞血型血清學(xué)反應(yīng)已知紅細(xì)胞：反定型紅細(xì)胞不規(guī)則抗體檢測(cè)紅細(xì)胞譜紅細(xì)胞已知抗體：抗A抗B抗D抗M、抗N……AHG用已知的檢測(cè)未知的血型檢測(cè)血型檢測(cè)：確定待檢者的ABO、RhD血型。ABO血型定型：正定型：是用已知特異性抗體來(lái)測(cè)定紅細(xì)胞上有無(wú)相應(yīng)的抗原。反定型：是用已知抗原的紅細(xì)胞來(lái)測(cè)定血清中有無(wú)相應(yīng)的抗體。ABO血型定型抗A抗BA細(xì)胞B細(xì)胞結(jié)果(試劑)(待檢者)ABABO血型定型正定型反定型血型比例%（亞洲）抗-A抗-BA細(xì)胞B細(xì)胞--++O43++--AB5+--+A27-++-B25RhD抗原檢測(cè)抗D結(jié)果(試劑)(待檢者)D陽(yáng)性我國(guó)臨床常規(guī)RhD血型的檢測(cè)，應(yīng)用不識(shí)別DVI型D抗原的單克隆抗體。對(duì)不出現(xiàn)凝集的標(biāo)本判斷為RhD陰性；對(duì)出現(xiàn)弱反應(yīng)（凝集反應(yīng)強(qiáng)度≤2+）的病人（受血者），將其視為RhD陰性，只能輸用RhD陰性的紅細(xì)胞；對(duì)弱反應(yīng)的獻(xiàn)血者視為RhD陽(yáng)性。初篩RhD陰性和弱反應(yīng)的標(biāo)本，應(yīng)該進(jìn)一步研究確定其RhD表型，應(yīng)用能夠識(shí)別DVI型的單克隆抗體；同時(shí)進(jìn)行吸收放散實(shí)驗(yàn)，以排除Del型。亞型鑒定方法凝集抑制試驗(yàn)：可溶性抗原與相應(yīng)已知抗體結(jié)合能夠全部或部分抑制抗體活性，通過(guò)此試驗(yàn)可確定抗原的特異性。又稱唾液分泌試驗(yàn)。吸收放散試驗(yàn)：抗體與相應(yīng)抗原在適合條件下發(fā)生凝集或致敏，但這種結(jié)合是可逆的，如改變某些物理?xiàng)l件時(shí)，抗體又可以從結(jié)合的紅細(xì)胞上解脫下來(lái)，這種試驗(yàn)方法叫做吸收放散試驗(yàn)。放散技術(shù)放散試驗(yàn)種類酸放散熱放散ZZAP放散二磷酸氯喹放散ABO亞型的血清學(xué)特征AABBTECHNICALMANUAL16theditionP366各種A亞型的鑒別紅細(xì)胞弱凝集A3AxAend混合視野凝集(Mf），唾液中含有A物質(zhì)A3與抗A10％紅細(xì)胞呈十分弱的mf凝集Aend及/或抗只與抗AB呈弱凝集AxA1B反應(yīng)不凝集能吸附及放散抗AAmAyAel容易吸附放散抗AAm分泌型唾液中有一定量的A物質(zhì)不容易吸附放散抗AAy分泌型唾液含少量的A物質(zhì)吸附放散抗AAel分泌型唾液只含H物質(zhì)無(wú)A物質(zhì)抗D單克隆抗體抗體篩檢及鑒定用已知抗原的O型紅細(xì)胞（篩檢細(xì)胞及譜細(xì)胞），檢測(cè)病人血清中是否含有抗體及對(duì)所檢測(cè)到的抗體特異性進(jìn)行鑒定?？贵w定義不規(guī)則抗體的含義：通常把抗A、抗B以外的所有紅細(xì)胞血型抗體稱為不規(guī)則抗體。如抗D、抗N、抗M抗體。完全抗體或不完體抗體：與相應(yīng)抗原紅細(xì)胞在鹽水介質(zhì)中或在中性微柱凝膠中出現(xiàn)凝集反應(yīng)的抗體稱為完全抗體。完全抗體大部分是IgM類抗體，但非所有IgM類抗體都是完全抗體。大部分IgG抗體為不完全抗體，但一些IgG抗體也是完全抗體。臨床有意義和臨床無(wú)意義抗體：能引起新生兒溶血?。℉DN）和血型不相容輸血免疫溶血的抗體為臨床有意義抗體。如母體免疫IgG抗體抗-D能夠穿過(guò)胎盤進(jìn)入胎兒體內(nèi)，引起胎兒溶血。反之為臨床無(wú)意義抗體，如Lewis血型同種異型抗體常是IgM抗體，但極少見(jiàn)溶血性輸血反應(yīng)和引起HDN，故該血型抗體為臨床無(wú)意義抗體。檢測(cè)方法方法原理局限性酶檢測(cè)技術(shù)破壞紅細(xì)胞表面的唾液酸，降低其表面電荷，減少紅細(xì)胞間斥力，使得紅細(xì)胞靠攏，在不完全抗體的作用下，紅細(xì)胞便出現(xiàn)凝集。改變其他系統(tǒng)(尤其是M，N，F(xiàn)ya，F(xiàn)yb)抗原的構(gòu)型破壞其抗原性。酶還可能改變細(xì)胞懸液的物理性質(zhì)，可導(dǎo)致紅細(xì)胞的非免疫性聚集。凝聚胺法凝聚胺是一種多價(jià)陽(yáng)離子氨基聚合物，它可以引起正常紅細(xì)胞的可逆性凝集，如果被抗體致敏的紅細(xì)胞與凝聚胺連在一起，就會(huì)發(fā)生不可逆凝集。在使用凝聚胺檢測(cè)抗體活性時(shí)，抗原抗體在低離子介質(zhì)中孵育，可促進(jìn)紅細(xì)胞與相應(yīng)抗體的反應(yīng)，使得抗原抗體更有效的結(jié)合。經(jīng)再懸液中和后，抗體介導(dǎo)的特異性凝集仍然存在，而非特異凝集的細(xì)胞散開(kāi)。破壞Kell系統(tǒng)抗原抗人球蛋白法一些IgG類抗體(主要是免疫抗體，如Rh血型抗體)是一種7s球蛋白，分子量小，分子長(zhǎng)度只250°A，與紅細(xì)胞相應(yīng)抗原結(jié)合后，在鹽水介質(zhì)中不出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的凝集反應(yīng)，但在加入抗-IgG的抗體后，以其搭橋則可出現(xiàn)凝集反應(yīng)操作繁瑣，耗時(shí)長(zhǎng)–––––––––––––––––––––––––––––––––––酶作用縮短紅細(xì)胞間距離–––––––––––––酶對(duì)紅細(xì)胞抗原的作用抗原增強(qiáng)抗原性破壞KiddRhLewisIPFyaFybMNSs抗人球蛋白檢測(cè)技術(shù)分類：直接抗人球蛋白實(shí)驗(yàn)（DAT）間接抗人球蛋白試驗(yàn)(IAT)試劑：多特異性抗人球(抗-IgG+抗-C3)單特異性抗人球(抗-IgG或抗-C3)SensitizationAgglutinationbyAnti-humanGlobulinDATPt.RBCs+AHG觀察凝集并判讀結(jié)果IATRBCs+血清+AHG觀察凝集并判讀結(jié)果抗人球蛋白檢測(cè)技術(shù)抗人球蛋白試驗(yàn)應(yīng)用直接抗人球蛋白試驗(yàn)在臨床上主要應(yīng)用于：胎母血型不合新生兒溶血病（HDN）免疫溶血性輸血反應(yīng)（LHTR）自身免疫溶血性貧血（AIHA）藥物導(dǎo)致的免疫溶血性貧血間接抗人球蛋白試驗(yàn)應(yīng)用于：紅細(xì)胞血型定型；相容性配血實(shí)驗(yàn)；產(chǎn)前檢查；弱D抗原檢測(cè)洗滌加入AHG離心陽(yáng)性直接抗人球蛋白間接抗人球蛋白+離心孵育后洗滌陽(yáng)性陰性陽(yáng)性陰性加入AHG加入對(duì)照細(xì)胞后離心觀察結(jié)果Coombs’

對(duì)照細(xì)胞(CCC,CC)假陰性結(jié)果陰性結(jié)果陽(yáng)性陰性洗滌加入抗人球蛋白試劑后離心陽(yáng)性未洗滌假陰性FalseNegativeTests抗體篩檢篩檢紅細(xì)胞IS37℃30’AHGCCOI1+--2+OII3+--2+1、表明抗體為IgM抗體

2、存在劑量效應(yīng)劑量效應(yīng)Kidd、Duffy、Rh及MN（MNSs）系統(tǒng)中抗原存在劑量效應(yīng)。抗體篩檢篩檢紅細(xì)胞IS37℃30’AHGCCOI--3+NTOII---2+表明篩檢的抗體為IgG類抗體抗體鑒定DCcEeKkAHG1++--+++3+2+-++--+-3+-+-++-3+4-++-+-+-5--+++-+-6--+-+++3+Anti-K抗體鑒定DCcEeJkaJkbAHG1++--+++W+2+-++--+-3+-+-++-2+4-++-+++W+5--+++-+-6--+-++-2+Anti-Jka交叉配血試驗(yàn)相容性配血試驗(yàn)，檢測(cè)受血者血清中抗體和獻(xiàn)血者紅細(xì)胞抗原是否相合試驗(yàn)為主側(cè)交叉配血試驗(yàn)，檢測(cè)受血者紅細(xì)胞和獻(xiàn)血者血清中抗體是否相合試驗(yàn)為次側(cè)交叉配血試驗(yàn)，對(duì)其中是不完全抗體的，應(yīng)用間接抗人球蛋白試驗(yàn)確定其相容性。目的防止發(fā)生輸血反應(yīng)增加體內(nèi)紅細(xì)胞的存活率進(jìn)一步確定ABO血型定型正確檢測(cè)抗體的另一方法血型檢測(cè)常規(guī)方法玻片法試管法微板法固相凝集法微柱凝膠法孵育洗滌YYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYLISS+Sample+固相凝集實(shí)驗(yàn)技術(shù)陽(yáng)性離心弱陽(yáng)性陰性指示細(xì)胞+微柱凝膠檢測(cè)加入血清及紅細(xì)胞凝膠離心力反應(yīng)腔分類中性膠：微柱腔內(nèi)及凝膠中不含特異性抗體,也不含抗人球蛋白?？谷饲蚰z：微柱腔內(nèi)及凝膠中含抗人球蛋白。特異性膠：微柱腔內(nèi)及凝膠中含特異性抗體。

應(yīng)用ABO、RhD血型定型抗人球蛋白檢測(cè)抗體篩檢及鑒定交叉配血新生兒溶血病檢測(cè)Thankyou

聯(lián)系方式：辦公機(jī)-mail:tongjun666@呼吸機(jī)治療常見(jiàn)病癥及通氣參數(shù)初設(shè)患者的分類呼吸力學(xué)及氣體交換正常嚴(yán)重氣流阻塞慢性呼吸功能衰竭急性加重急性缺氧性呼吸功能衰竭肺或胸廓限制性疾病呼吸力學(xué)及氣體交換正常的患者中驅(qū)驅(qū)動(dòng)力的缺乏-藥物過(guò)量、腦干結(jié)構(gòu)損傷神經(jīng)肌肉疾病-高位頸髓損傷、急性轉(zhuǎn)發(fā)性脊髓炎、重癥肌無(wú)力休克治療中的輔助療法過(guò)度通氣-顱腦損傷后ICP升高的治療嚴(yán)重氣流梗阻臨床反映：內(nèi)源性PEEP過(guò)高-肺泡過(guò)度膨脹-胸腔內(nèi)壓過(guò)高回心血量減少休克降低內(nèi)源性的方法-延長(zhǎng)呼氣時(shí)間增加吸氣流量降低呼吸頻率外源性PEEP？

例：增加流量不能顯著延長(zhǎng)呼氣時(shí)間TEVTRRFlowTE0.515603.500.5151203.750.514603.80降低分鐘通氣量對(duì)減少病人內(nèi)源性PEEP的重要作用！嚴(yán)重氣流梗阻通過(guò)應(yīng)用外源性PEEP來(lái)對(duì)抗內(nèi)源性PEEP-存在患者觸發(fā)時(shí)-外源性PEEP應(yīng)不超過(guò)內(nèi)源性的85%嚴(yán)重氣流梗阻嘆息=？并不需要-氣道壓力上限≥15%減速氣流=？不推薦使用-呼吸機(jī)工作“更佳”峰值壓力-患者病情可能“更差”內(nèi)源性PEEP積極的胸部物理治療（CPT）-清除黏液栓-保持氣道通暢慢性呼吸功能衰竭急性加重患者插管時(shí)-低灌注（心動(dòng)過(guò)速、低血壓）？常見(jiàn)-暫時(shí)中斷機(jī)械通氣并進(jìn)行擴(kuò)容慢性呼吸功能衰竭急性加重患者通氣的目的-使患者和呼吸肌肉得到36~72小時(shí)的長(zhǎng)時(shí)間休息-適當(dāng)?shù)牡屯饴院粑δ芩ソ呒毙约又鼗颊逷EEP的調(diào)節(jié)-FiO2≤60%時(shí)保持SaO2＞90%的最小PEEP-靜態(tài)P-V曲線的低位轉(zhuǎn)折點(diǎn)以上2cmh2o急性缺氧性呼吸功能衰竭的患者參數(shù)設(shè)置：-定容通氣時(shí)的潮氣量：9ml/kg-壓力支持通氣的壓力：19cmH2o-呼吸末正壓：≤5cmH2o肺或胸?cái)U(kuò)限制性疾病的患者肺部疾患-晚期肺纖維化-晚期ARDS腹部疾患-大量腹水其他胸廓異常-脊柱后凸畸形肺或胸?cái)U(kuò)限制性疾病的患者減少死腔通氣的方法-降低分鐘通氣量-糾正低血容量患者的處理呼吸機(jī)的參數(shù)初設(shè)模式FiO2PEEPVTRRFLOW