實(shí)驗(yàn)二細(xì)菌的分離接種及理化因素影響

實(shí)驗(yàn)二細(xì)菌的分離接種及理化因素影響第一頁，共十五頁，編輯于2023年，星期二實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆张囵B(yǎng)基制備的基本過程熟悉常用培養(yǎng)基的原理、種類及其用途掌握細(xì)菌的分離接種方法皮膚表面的細(xì)菌發(fā)布及消毒前后對比紫外線對細(xì)菌的影響藥物對細(xì)菌的影響第二頁，共十五頁，編輯于2023年，星期二實(shí)驗(yàn)內(nèi)容1、制備普通瓊脂平板2、細(xì)菌在平板上的接種方法及生長表現(xiàn)3、細(xì)菌在液體中的接種方法（肉湯）及生長表現(xiàn)4、細(xì)菌在半固體中的接種方法及生長表現(xiàn)5、皮膚表面的細(xì)菌分布及消毒前后對比6、紫外線對細(xì)菌的影響7、藥物對細(xì)菌的影響（藥敏實(shí)驗(yàn)）第三頁，共十五頁，編輯于2023年，星期二制備普通瓊脂平板將已滅菌的普通瓊脂加熱融化，冷卻至60度左右，倒入滅菌平板中，厚度約為4-5毫米，冷卻后備用。第四頁，共十五頁，編輯于2023年，星期二細(xì)菌在平板上的接種方法及生長表現(xiàn)四區(qū)劃線法：分別接種大腸埃希菌和枯草桿菌，37度培養(yǎng)24小時(shí)，觀察光滑型菌落和粗燥型菌落的不同點(diǎn)。第五頁，共十五頁，編輯于2023年，星期二細(xì)菌在液體中的接種方法（肉湯）及生長表現(xiàn)

分別將大腸埃希菌，枯草桿菌，炭疽桿菌接種至肉湯管中，37度培養(yǎng)24小時(shí)，觀察三種不同的生長表現(xiàn)：混濁生長、表面生長、沉淀生長。第六頁，共十五頁，編輯于2023年，星期二細(xì)菌在半固體中的接種方法及生長表現(xiàn)在半固體中分別接種大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌，37度培養(yǎng)24小時(shí)，觀察有動(dòng)力的菌和無動(dòng)力的菌的不同表現(xiàn)。第七頁，共十五頁，編輯于2023年，星期二皮膚表面的細(xì)菌分布及消毒前后對比將普通平板分區(qū)，手指消毒前后分別按一下，37度培養(yǎng)24小時(shí)后，比較消毒前后的菌落數(shù)。第八頁，共十五頁，編輯于2023年，星期二紫外線對細(xì)菌的影響將大腸埃希菌密集接種于普通平板上，將平板蓋一半打開，置于紫外燈下30分鐘，合上蓋，放入37度培養(yǎng)24小時(shí)，觀察紫外燈直接照射和隔著平板蓋照射的區(qū)別。第九頁，共十五頁，編輯于2023年，星期二藥物對細(xì)菌的影響（藥敏實(shí)驗(yàn)）紙片擴(kuò)散法（K-B法）第十頁，共十五頁，編輯于2023年，星期二原理：含有定量抗菌藥物的紙片貼在已接種測試菌的瓊脂平板上，紙片中所含的藥物吸取瓊脂中的水分溶解，不斷向紙片周圍區(qū)域擴(kuò)散，形成遞減的梯度濃度。在紙片周圍抑菌濃度范圍內(nèi)的細(xì)菌生長被抑制，形成透明的抑菌圈。抑菌圈大小反映測試菌對測定藥物的敏感程度。第十一頁，共十五頁，編輯于2023年，星期二方法:（4人一組，選4個(gè)不同的藥物紙片）

1、制備MH瓊脂平板：將加熱融化的瓊脂冷卻至60℃左右時(shí)傾注于直徑為6cm的無菌平板中，使瓊脂厚度為4mm，待瓊脂凝固后使用，如有冷凝水產(chǎn)生，可放置37℃溫箱中15-30分鐘后使用。

2、無菌棉簽蘸取菌液，在試管內(nèi)壁旋轉(zhuǎn)擠去多余菌液后在平板表面均勻涂布接種3次，每次旋轉(zhuǎn)平板60°，最后沿平板內(nèi)緣涂布1周。

3、平板在室溫下干燥5分鐘，用無菌鑷子將抗菌藥物紙片貼于瓊脂表面，各紙片中心相距大于24mm，距平板內(nèi)緣大于15mm，37℃溫箱中孵育16-18小時(shí)，量取抑菌圈直徑。第十二頁，共十五頁，編輯于2023年，星期二結(jié)果觀察中的注意事項(xiàng)：

1、準(zhǔn)確量取抑菌圈直徑，若抑菌圈為橢圓形，量其最長徑和最短徑，取其平均值。

2、若出現(xiàn)雙層抑菌圈，一般藥物測量內(nèi)圈，而磺胺類藥物則量其外圈。

3、若抑菌圈內(nèi)有散在菌落出現(xiàn)，排除污染菌的存在和其他影響因素，若無污染菌等，需重做。第十三頁，共十五頁，編輯于2023年，星期二結(jié)果觀察：

結(jié)果解釋：用毫米尺量取抑菌圈直徑，參照書上的標(biāo)準(zhǔn)判讀結(jié)果。按敏感（S）、中介（I）、耐藥（R）報(bào)告。例如：抗菌藥物丁胺卡那霉素（AMK），每張紙片含藥量30微克