流感病毒臨床標本的采集方法運輸保存課件

概述流感病毒分離成功與否很大程度上取決于臨床標本的質(zhì)量，及其保存運輸?shù)拳h(huán)節(jié)多數(shù)標本取自患者上呼吸道鼻咽腔，其次為氣管和支氣管分泌物及尸檢組織一、采樣對象和時間采樣對象：流感樣病例（沒有服用過抗病毒藥物）、人禽流感待查病例

流感樣病例:發(fā)熱（體溫≥38℃），伴咳嗽或咽痛之一者，而缺乏其它的實驗室確定診斷依據(jù)采集時間：病人發(fā)病后的頭三天二、采樣液要求常用的采樣液有：普通肉湯（只用于雞胚，對細胞有毒性），PH7.4-7.6的Hank’s液，Eagel`s培養(yǎng)液或水解乳蛋白溶液采樣液應包含有一定量的蛋白質(zhì)和抗菌素標本采集后應立即放入適當?shù)牟蓸右褐械蜏乇４鍱agel`s基礎(chǔ)培養(yǎng)基

抗生素名稱終濃度慶大霉素0.1mg/ml抗真菌素2Ug/ml采樣液抗生素含量三、臨床標本的采集常用的標本種類：咽拭子鼻拭子漱口液鼻咽吸取物鼻洗液1、咽拭子

用滅菌棉簽（最好用塑料柄、尼龍拭子，因為木頭柄棉拭子會抑制PCR實驗）擦拭雙側(cè)咽扁桃體及咽后壁，將棉簽頭部浸入3-4ml采集液中，尾部棄去凍存的標本送到實驗室后，24小時內(nèi)能進行病毒分離的，可以放置4℃保存。先將收集器頭部插入鼻腔，接通負壓，旋轉(zhuǎn)收集器頭部并緩慢退出。將棉簽頭部浸入3-4ml采集液中，尾部棄去凍存的標本送到實驗室后，24小時內(nèi)能進行病毒分離的，可以放置4℃保存。將棉簽頭部浸入3-4ml采集液中，尾部棄去收集抽取的粘液，并用采樣液5ml涮洗收集器3次應在4℃條件下，24小時內(nèi)運送至全國流感監(jiān)測網(wǎng)絡實驗室；六、臨床標本的處理原則采樣液應包含有一定量的蛋白質(zhì)和抗菌素如未能分離的標本應置-70℃或以下保存收集抽取的粘液，并用采樣液5ml涮洗收集器3次用滅菌棉簽（最好用塑料柄、尼龍拭子，因為木頭柄棉拭子會抑制PCR實驗）擦拭雙側(cè)咽扁桃體及咽后壁，將棉簽頭部浸入3-4ml采集液中，尾部棄去多數(shù)標本取自患者上呼吸道鼻咽腔，其次為氣管和支氣管分泌物及尸檢組織八、臨床標本的的處理原則凍存的標本送到實驗室后，24小時內(nèi)能進行病毒分離的，可以放置4℃保存。如未能分離的標本應置-70℃或以下保存上清液可直接接種或低溫保存寄送流感毒株標本的包裝要求4．人禽流感病毒分離、培養(yǎng)、純化，微量中和試驗等實驗必須在生物安全三級（BSL-3級）實驗室里操作。凍存的標本送到實驗室后，24小時內(nèi)能進行病毒分離的，可以放置4℃保存。采咽拭子的器材和容器2、鼻拭子

將滅過菌干凈的棉簽輕輕插入鼻道內(nèi)鼻腭處，停留片刻后緩慢轉(zhuǎn)動退出，以同一拭子擦拭兩側(cè)鼻孔。將棉簽頭部浸入3-4ml采集液中，尾部棄去采鼻拭子的器材和容器

3、鼻咽吸取物

用與負壓泵相連的收集器從鼻咽部抽取粘液。先將收集器頭部插入鼻腔，接通負壓，旋轉(zhuǎn)收集器頭部并緩慢退出。收集抽取的粘液，并用采樣液5ml涮洗收集器3次

內(nèi)有HEPA膜進風道鼻咽吸取裝置出風道吸取過程正確錯誤錯誤不要觸摸病人的臉!4、漱口液用10ml生理鹽水漱喉。漱時讓患者頭部微后仰，發(fā)“噢”聲，讓生理鹽水在咽部轉(zhuǎn)動。然后，用平皿或燒杯收集洗液5、鼻洗液

患者取坐姿，頭微后仰，用移液管將5ml生理鹽水注入一側(cè)鼻孔，囑患者同時發(fā)K音以關(guān)閉咽腔。然后讓患者低頭使生理鹽水流出，用平皿或燒杯收集洗液。重復此過程洗兩側(cè)鼻孔四、標本收集注意事項操作要細心，嚴防標本間交叉污染，要做好自我保護采集標本要有一定力度標本采集后應迅速至于冰上或者4℃以下保存，因為流感病毒對熱很敏感標本管上寫明：醫(yī)院名稱，標本號，患者姓名，性別，采樣日期標本采集后盡量在24小時內(nèi)送到實驗室進行病毒分離。24小時內(nèi)未能進行病毒分離的標本應放-70℃或以下新鮮的臨床采集標本應在4℃條件下，24小時內(nèi)運送至全國流感監(jiān)測網(wǎng)絡實驗室；未能24小時內(nèi)送至實驗室的，應置-70℃或以下保存凍存的臨床采集標本應在凍存的條件下，低溫送至實驗室五、臨床標本的運送要求凍存的標本送到實驗室后，24小時內(nèi)能進行病毒分離的，可以放置4℃保存。上清液可直接接種或低溫保存4．人禽流感病毒分離、培養(yǎng)、純化，微量中和試驗等實驗必須在生物安全三級（BSL-3級）實驗室里操作。凍存的標本送到實驗室后，24小時內(nèi)能進行病毒分離的，可以放置4℃保存。凍存的標本送到實驗室后，24小時內(nèi)能進行病毒分離的，可以放置4℃保存。六、臨床標本的處理原則收集抽取的粘液，并用采樣液5ml涮洗收集器3次用滅菌棉簽（最好用塑料柄、尼龍拭子，因為木頭柄棉拭子會抑制PCR實驗）擦拭雙側(cè)咽扁桃體及咽后壁，將棉簽頭部浸入3-4ml采集液中，尾部棄去肺組織材料：肺組織材料在無菌條件下，用高壓滅菌的乳缽研磨后，用生理鹽水配成20%懸液，2000rpm離心10min，取上清加入抗生素。上清液可直接接種或低溫保存直接在塑料管上用油性記號筆寫明病毒的名稱，同時也將病毒標本有關(guān)信息填在“流感/人禽流感毒株送檢單”內(nèi)，送檢單應單獨放在防水的袋子里用與負壓泵相連的收集器從鼻咽部抽取粘液。直接在塑料管上用油性記號筆寫明病毒的名稱，同時也將病毒標本有關(guān)信息填在“流感/人禽流感毒株送檢單”內(nèi)，送檢單應單獨放在防水的袋子里用滅菌棉簽（最好用塑料柄、尼龍拭子，因為木頭柄棉拭子會抑制PCR實驗）擦拭雙側(cè)咽扁桃體及咽后壁，將棉簽頭部浸入3-4ml采集液中，尾部棄去標本管上寫明：醫(yī)院名稱，標本號，患者姓名，性別，采樣日期應在4℃條件下，24小時內(nèi)運送至全國流感監(jiān)測網(wǎng)絡實驗室；5．臨床標本病毒核酸提取在生物安全二級（BSL-2級）實驗室的二級生物安全柜里進行，采用生物安全三級防護。用滅菌棉簽（最好用塑料柄、尼龍拭子，因為木頭柄棉拭子會抑制PCR實驗）擦拭雙側(cè)咽扁桃體及咽后壁，將棉簽頭部浸入3-4ml采集液中，尾部棄去凍存的標本送到實驗室后，24小時內(nèi)能進行病毒分離的，可以放置4℃保存。寄送流感毒株標本的包裝要求如未能分離的標本應置-70℃或以下保存六、臨床標本的處理原則新鮮的標本送至實驗室后，病毒分離標本應盡快進行接種分離，24小時內(nèi)能進行接種的可置于4℃保存，如未能接種應置-70℃或以下保存凍存的標本送到實驗室后，24小時內(nèi)能進行病毒分離的，可以放置4℃保存。如未能分離的標本應置-70℃或以下保存七、臨床標本的處理方法含聚丙烯纖維的拭子的采集標本:先將含聚丙烯纖維的拭子在管壁反復擠壓后取出鼻洗液標本:充分振蕩標本管，將粘液打碎。置4℃待其自然沉淀5～10分鐘，取上清5ml。上清液可直接接種或低溫保存

鼻咽吸取液：用干凈滅菌過的毛細吸管，在無菌條件下反復吹打收集的溶液，以便打碎粘液，同樣置4℃待其自然沉淀5～10分鐘，取上清5ml。上清液可直接接種或低溫保存肺組織材料：肺組織材料在無菌條件下，用高壓滅菌的乳缽研磨后，用生理鹽水配成20%懸液，2000rpm離心10min，取上清加入抗生素。接種細胞或雞胚八、臨床標本的的處理原則

臨床標本處理后，將原始標本分為三份:一份（40％）用于雞胚接種，一份（30％）用于MDCK細胞接種，一份（30％）保存待復核用。對于病毒分離陽性的標本－70℃保存6個月流感病毒株的運輸寄送流感毒株標本的包裝要求病毒標本必須放在大小適合的帶螺旋蓋內(nèi)有橡膠圈的塑料管里，擰緊。蓋上蓋子后不應有泄漏，推薦使用螺口細胞保存管保存和運輸流感病毒標本直接在塑料管上用油性記號筆寫明病毒的名稱，同時也將病毒標本有關(guān)信息填在“流感/人禽流感毒株送檢單”內(nèi)，送檢單應單獨放在防水的袋子里將裝標本的密封袋放入專用運輸箱內(nèi)（或疫苗冷藏包），放入冰排，然后以柔軟物質(zhì)填充，內(nèi)襯具吸水和緩沖能力的材料標本運輸：異地運輸可以采用郵寄或快遞的方法九、禽流感標本采集的生物安全防護1．采集人禽流感臨床樣本時，采集人員需要做好個人防護，戴防護口罩、帽子、護目鏡、手套、防護衣、鞋套。2.

人禽流感標本的運送、接收和保藏應當符合我國《病原微生物實驗室生物安全管理條例》（國務院424號令）的有關(guān)要求。3．人禽流感臨床標本的處理、分裝在生物安全二級的實驗室里進行，采用生物安全三級防護。4．人禽流感病毒分離、培養(yǎng)、純化，微量中和試驗等實驗必須在生物安全三級（BSL-3級）實驗室里操作。5．臨床標本病毒核酸提取在生物安全二級（BSL-2級）實驗室的二級生物安全柜里進行，采用生物安全三級防護。6．用滅活的抗原進行紅細胞凝集抑制（HI）實驗、RT-PCR病毒核酸檢測可以在生物安全二級（BSL-2級）實驗室里操作。謝謝!三、臨床標本的采集常用的標本種類：咽拭子鼻拭子漱口液鼻咽吸取物鼻洗液2、鼻拭子

將滅過菌干凈的棉簽輕輕插入鼻道內(nèi)鼻腭處，停留片刻后緩慢轉(zhuǎn)動退出，以同一拭子擦拭兩側(cè)鼻孔。將棉簽頭部浸入3-4ml采集液中，尾部棄去凍存的標本送到實驗室后，24小時內(nèi)能進行病毒分離的，可以放置4℃保存。4．人禽流感病毒分離、培養(yǎng)、純化，微量中和試驗等實驗必須在生物安全三級（BSL-3級）實驗室里操作。6．用滅活的抗原進行紅細胞凝集抑制（HI）實驗、RT-PCR病毒核酸檢測可以在生物安全二級（BSL-2級）實驗室里操作。流感病毒分離成功與否很大程度上取決于臨床標本的質(zhì)量，及其保存運輸?shù)拳h(huán)節(jié)凍存的標本送到實驗室后，24小時內(nèi)能進行病毒分離的，可以放置4℃保存。未能24小時內(nèi)送至實驗室的，應置-70℃或以下保存寄送流感毒株標本的包裝要求先將收集器頭部插入鼻腔，接通負壓，旋轉(zhuǎn)收集器頭部并緩慢退出。1．采集人禽流感臨床樣本時，采集人員需要做好個人防護，戴防護口罩、帽子、護目鏡、手套、防護衣、鞋套。對于病毒分離陽性的標本－70℃保存6個月六、臨床標本的處理原則如未能分離的標本應置-70℃或以下保存將棉簽頭部浸入3-4ml采集液中，尾部棄去4．人禽流感病毒分離、培養(yǎng)、純化，微量中和試驗等實驗必須在生物安全三級（BSL-3級）實驗室里操作。如未能分離的標本應置-70℃或以下保存如未能分離的標本應置-70℃或以下保存24小時內(nèi)未能進行病毒分離的標本應放-70℃或以下肺組織材料：肺組織材料在無菌條件下，用高壓滅菌的乳缽研磨后，用生理鹽水配成20%懸液，2000rpm離心10min，取上清加入抗生素。含聚丙烯纖維的拭子的采集標本:先將含聚丙烯纖維的拭子在管壁反復擠壓后取出將棉簽頭部浸入3-4ml采集液中，尾部棄去上清液可直接接種或低溫保存操作要細心，嚴防標本間交叉污染，要做好自我保護五、臨床標本的運送要求1．采集人禽流感臨床樣本時，采集人員需要做好個人防護，戴防護口罩、帽子、護目鏡、手套、防護衣、鞋套。直接在塑料管上用油性記號筆寫明病毒的名稱，同時也將病毒標本有關(guān)信息填在“流感/人禽流感毒株送檢單”內(nèi)，送檢單應單獨放在防水的袋子里未能24小時內(nèi)送至實驗室的，應置-70℃或以下保存寄送流感毒株標本的包裝要求操作要細心，嚴防標本間交叉污染，要做好自我保護將棉簽頭部浸入3-4ml采集液中，尾部棄去將棉簽頭部浸入3-4ml采集液中，尾部棄去上清液可直接接種或低溫保存流感病毒分離成功與否很大程度上取決于臨床標本的質(zhì)量，及其保存運輸?shù)拳h(huán)節(jié)蓋上蓋子后不應有泄漏，推薦使用螺口細胞保存管保存和運輸流感病毒標本蓋上蓋子后不應有泄漏，推薦使用螺口細胞保存管保存和運輸流感病毒標本標本采集后應立即放入適當?shù)牟蓸右褐械蜏乇４嫒缥茨芊蛛x的標本應置-70℃或以下保存將棉簽頭部浸入3-4ml采集液中，尾部棄去將棉簽頭部浸入3-4ml采集液中，尾部棄去流感病毒分離成功與否很大程度上取決于臨床標本的質(zhì)量，及其保存運輸?shù)拳h(huán)節(jié)4．人禽流感病毒分離、培養(yǎng)、純化，微量中和試驗等實驗必須在生物安全三級（BSL-3級）實驗室里操作。用滅菌棉簽（最好用塑料柄、尼龍拭子，因為木頭柄棉拭子會抑制PCR實驗）擦拭雙側(cè)咽扁桃體及咽后壁，將棉簽頭部浸入3-4ml采集液中，尾部棄去采樣對象：流感樣病例（沒有服用過抗病毒藥物）、人禽流感待查病例

3、鼻咽吸取物

用與負壓泵相連的收集器從鼻咽部抽取粘液。先將收集器頭部插入鼻腔，接通負壓，旋轉(zhuǎn)收集器頭部并緩慢退出。收集抽取的粘液，并用采樣液5ml涮洗收集器3次

4、漱口液用10ml生理鹽水漱喉。漱時讓患者頭部微后仰，發(fā)“噢”聲，讓生理鹽水在咽部轉(zhuǎn)動。然后，用平皿或燒杯收集洗液六、臨床標本的處理原則新鮮的標本送至實驗室后，病毒分離標本應盡快進行接種分離，24小時內(nèi)能進行接種的可置于4℃保存，如未能接種應置-70℃或以下保存凍存的標本送到實驗室后，24小時內(nèi)能進行病毒分離的，可以放置4℃保存。如未能分離的標本應置-70℃或以下保存將棉簽頭部浸入3-4ml采集液中，尾部棄去用滅菌棉簽（最好用塑料柄、尼龍拭子，因為木頭柄棉拭子會抑制PCR實驗）擦拭雙側(cè)咽扁桃體及咽后壁，將棉簽頭部浸入3-4ml采集液中，尾部棄去對于病毒分離陽性的標本－70℃保存6個月流感病毒分離成功與否很大程度上取決于臨床標本的質(zhì)量，及其保存運輸?shù)拳h(huán)節(jié)八、臨床標本的的處理原則采樣對象：流感樣病例（沒有服用過抗病毒藥物）、人禽流感待查病例多數(shù)標本取自患者上呼吸道鼻咽腔，其次為氣管和支氣管分泌物及尸檢組織直接在塑料管上用油性記號筆寫明病毒的名稱，同時也將病毒標本有關(guān)信息填在“流感/人禽流感毒株送檢單”內(nèi)，送檢單應單獨放在防水的袋子里六、臨床標本的處理原則6的Hank’s液，Eagel`s培養(yǎng)液或水解乳蛋白溶液凍存的標本送到實驗室后，24小時內(nèi)能進行病毒分離的，可以放置4℃保存。采樣液應包含有一定量的蛋白質(zhì)和抗菌素6．用滅活的抗原進行紅細胞凝集抑制（HI）實驗、RT-PCR病毒核酸檢測可以在生物安全二級（BSL-2級）實驗室里操作。4．人禽流感病毒分離、培養(yǎng)、純化，微量中和試驗等實驗必須在生物安全三級（BSL-3級）實驗室里操作。六、臨床標本的處理原則患者取坐姿，頭微后仰，用移液管將5ml生理鹽水注入一側(cè)鼻孔，囑患者同時發(fā)K音以關(guān)閉咽腔。常用的采樣液有：普通肉湯（只用于雞胚，對細胞有毒性），PH7.常用的采樣液有：普通肉湯（只用于雞胚，對細胞有毒性），PH7.將棉簽頭部浸入3-4ml采集液中，尾部棄去置4℃待其自然沉淀5～10分鐘，取上清5ml。將裝標本的密封袋放入專用運輸箱內(nèi)（或疫苗冷藏包），放入冰排，然后以柔軟物質(zhì)填充，內(nèi)襯具吸水和緩沖能力的材料用與負壓泵相連的收集器從鼻咽部抽取粘液。用滅菌棉簽（最好用塑料柄、尼龍拭子，因為木頭柄棉拭子會抑制PCR實驗）擦拭雙側(cè)咽扁桃體及咽后壁，將棉簽頭部浸入3-4ml采集液中，尾部棄去如未能分離的標本應置-70℃或以下保存收集抽取的粘液，并用采樣液5ml涮洗收集器3次采樣對象：流感樣病例（沒有服用過抗病毒藥物）、人禽流感待查病例未能24小時內(nèi)送至實驗室的，應置-70℃或以下保存用滅菌棉簽（最好用塑料柄、尼龍拭子，因為木頭柄棉拭子會抑制