白芍、赤芍的研究綜述

白芍、赤芍的研究綜述【摘要】芍藥經(jīng)過歷代醫(yī)家的不斷實踐，已經(jīng)形成了較為穩(wěn)定的用法。但是，在白芍與赤芍區(qū)分方面仍有不甚明晰之處。通過查閱文獻從來源、化學(xué)成分、藥理作用及臨床應(yīng)用等方面對之加以區(qū)別。兩者都含有芍藥苷，本文將介紹一些關(guān)于芍藥苷的現(xiàn)代分析方法?！娟P(guān)鍵詞】白芍、赤芍、芍藥苷、化學(xué)成分、藥理作用、分析方法1、來源與加工的區(qū)別白芍為毛莨科植物芍藥Paeonialactiflora?Pall的去外皮干燥根,性微寒,味苦酸。歸肝脾經(jīng)。主產(chǎn)于浙江、安徽、四川、山東、湖南等地。夏、秋采挖已栽植3?4年的芍藥根，除去根莖及須根，洗凈，刮去粗皮，置于沸水中略煮,使芍根發(fā)軟,撈出曬干。以根粗、堅實、無白心或裂隙者為佳。赤芍為毛茛科植物芍藥Paeonialactiflora?Pall或川赤芍PaeoniaveitchiiLynch的干燥根,性味苦、微寒,歸肝經(jīng)。赤芍主產(chǎn)于內(nèi)蒙古、河北、東北等省區(qū)；陜西、甘肅、寧夏、山西亦產(chǎn)。川赤芍主產(chǎn)于四川；甘肅、陜西、青海亦有分布。夏、秋兩季采挖,除去根頭及須根,曬干。以條粗長、斷面粉白色、粉性大者為佳?！?】結(jié)合上述，白芍與赤芍的主要不同點在于白芍主產(chǎn)于南方，炮制過程要去粗皮，水煮后晾干。而赤芍主產(chǎn)于北方，炮制是采挖后可直接晾干，無需水煮。并且在來源上赤芍比白芍來源廣泛些，赤芍也可取自川赤芍的根?，F(xiàn)常將芍藥栽培品的根作為白芍入藥,而其野生及其它種芍藥皆作為赤芍入藥。2、化學(xué)成分的區(qū)別白芍主要含有芍藥苷(paeoniflorin)1.86%?5.76%、羥基芍藥苷(oxypaeoniflorin)、芍藥內(nèi)酯苷(albiflorin)、苯甲酰羥基芍藥苷(benzoyloxypaeoniflorin)、苯甲酸、鞣質(zhì)、沒食子酸。赤芍含有豐富的苷類化合物，主要含有芍藥苷3.5%?7.98%,羥基芍藥苷0.12%?0.21%、芍藥內(nèi)酯苷，苯甲酰羥基芍藥苷，苯甲酰芍藥苷(benzoylpaeoniflorin),此外還含有沒食子酸、苯甲酸、鞣質(zhì)。二者所含的化學(xué)成分大致相同，但是含量各異，差別較大，有文獻報道赤芍中芍藥苷的含量大6.4%。D-兒茶精的含量高于0.05%,沒食子酸的含量(除黃龍外)小于0.05%,苯甲酸含量低于0.21%。白芍中沒有檢測到D-兒茶精，芍藥苷的含量小于6.0%,沒食子酸的含量大于0.07%,苯甲酸含量低于0.15%。3、藥理作用和臨床應(yīng)用的區(qū)別白芍中醫(yī)記載具有養(yǎng)血柔肝,緩中止痛,行瘀、涼血、消腫及斂陰收汗之功效?，F(xiàn)代中藥藥理研究表明它具有解除腹部痙攣作用，對胃、腸管、子宮平滑肌均有抑制或解痙作用；并有解熱，鎮(zhèn)痛，鎮(zhèn)靜和抗驚厥的作用；還有抗炎，抗?jié)兒蛯Χ喾N致病菌及某些病毒有抑制作用等。臨床多用于陰虛發(fā)熱、自汗盜汗，主治頭暈、頭痛、胸脅疼痛、痢疾腹痛、闌尾炎腹痛、腓腸肌痙攣、痛經(jīng)和月經(jīng)不調(diào)等癥。白芍因其藥理作用廣泛，臨床上多與其它藥配伍使用。除上述治療作用外，用于治療糖尿病、哮喘、胃及十二指腸潰瘍、習(xí)慣性便秘、肌肉痙攣及各種痛癥，均取得良好療效。赤芍中醫(yī)中記載有清熱涼血、散瘀止痛之功能?，F(xiàn)代藥理作用研究證明其具有抑制血小板和紅細胞聚集、抗凝和抗血栓、抗動脈粥樣硬化、保護心臟和肝臟、抗腫瘤等作用，具有廣泛的藥理活性。臨床用于溫毒發(fā)斑,吐血衄血，目赤腫痛，肝郁脅痛，經(jīng)閉痛經(jīng)，癥瘕腹痛，跌撲損傷，癰腫瘡瘍等癥?！?】總之，在中醫(yī)理論中白偏于補，赤偏于破，乃是赤白芍二藥分用的基本特點。白芍常配伍白術(shù)補脾，同川芍瀉肝，同人參補氣，同當歸補血，同甘草止腹痛，同黃連止瀉痢。赤者常配伍犀角今以水牛角代涼血止血，同檳榔治五淋，同桅子瀉肝火，同防風(fēng)發(fā)痘疹，同天花粉祛癖生新。要在配伍之神，乃著奇績耳。4、現(xiàn)代分析方法高效液相色譜法高效液相色譜法主要是利用芍藥苷與其他組分在流動相與固定相中的分配系數(shù)不同而把芍藥苷分離出來并進行含量的測定。芍藥苷為親水性化合物分離主要是用反相高效液相色譜法(RP-HPLC)。該法測定芍藥苷的色譜條件中流動相以“甲醇-水”系統(tǒng)、“乙腈-水”系統(tǒng)以及“甲醇-異丙醇-醋酸-水”系統(tǒng)為主,且以“甲醇-水”系統(tǒng)最為常用，有的流動相加入一定的有機酸(如:乙酸、磷酸)是為了調(diào)節(jié)pH值,因為芍藥苷呈弱酸性，加入一定的酸或緩沖溶液可減少拖尾提高靈敏度，多少根據(jù)具體實驗而定；檢測波長多在230nm；流動相流速多在0.5?1.5ml/min之間,供試液的制備以甲醇溶液提取為主，乙醇也較常用,且常通過濾膜(0.45um)。文獻中記錄用高效液相色譜法測定芍藥苷含量的過程比我們在實驗室的操作要嚴謹一些，文獻中除了對照品溶液、供試品溶液、標準曲線的制備還會做精密度實驗，精密量取對照品溶液10R匕注入高效液相色譜儀,按已知色譜條件試驗，重復(fù)測定6次,計算芍藥苷峰面積積分值的RSD,考察儀器精密度。穩(wěn)定性實驗，取供試樣品溶液分別在0h、2h、4h、8h、20h進樣20pL,計算芍藥苷峰面積積分值的RSD,分析溶液的穩(wěn)定性【6】。重復(fù)性實驗，取同供試藥材樣品6份,按供試品測定法測定,測得芍藥苷的平均含量，計算RSD(n=6)，避免偶然誤差?！?】最后還有加樣回收率實驗，取已知含量的供試品溶液5份，各1mL，分別加入每毫升含芍藥苷50pg的芍藥苷對照品溶液1mL，混勻，測定回收率。在有些處方中測定芍藥苷的含量時還會做陰性對照實驗，將處方中的芍藥除去，提取其它藥材，進樣，陰性對照液則在相對應(yīng)的保留時間內(nèi)無吸收峰出。高效液相色譜法具有適用范圍廣、分離效率高、速度快、流動相可選擇范圍寬、靈敏度高、色譜柱可反復(fù)使用、流出組分易收集以及安全等特點,應(yīng)用范圍非常廣泛。薄層掃描法薄層掃描法是先用薄層色譜法(TLC)將待測組分分離出來，然后利用薄層掃描儀在選定的波長范圍進行掃描,得到面積積分值,再根據(jù)由標準液建立的回歸方程算出含量,該方法準確、靈敏度高,應(yīng)用較為廣泛,但操作也較麻煩,尤其是測定復(fù)方中某一味組分的含量時,為避免其他組分干擾,往往需要作各種前處理,所受影響較大,重現(xiàn)性較差。掃描儀目前國內(nèi)多用日本島津雙波長單光束薄層掃描儀；展開劑多用氯仿-甲醇系統(tǒng)；測定波長是芍藥苷的吸收波長其數(shù)值各異,是因為不同的溶劑和其他成分對芍藥苷的測定產(chǎn)生一定影響,而有一定的波動,有時為了避免其他組分的干擾,而不采取最大吸收峰,另取一峰值或其附近值；狹縫寬度直接影響分光質(zhì)量,一般以減少狹縫寬度時吸光度不再改變時的寬度為宜?！?】分光光度法分光光度法是定量分析中常用的方法,是利用分光光度計來測定芍藥苷的吸光度，建立濃度C與吸光度A之間的正比關(guān)系A(chǔ)=KXC,來計算其含量?？傮w來說,分光光度法是經(jīng)典的定量分析方法之一,但由于其操作繁瑣,影響因素較多,靈敏度受到一定限制,應(yīng)用不多。高效毛細管電泳法(HPCE)HPCE是繼HPLC之后又一種重要的分離、分析及微量制備的新技術(shù)。其原理是利用離子在電場作用下,在毛細管中按其淌度和分配系數(shù)不同進行分離、分析。具有分離效率高、進樣量少、最低檢測量小、重現(xiàn)性好、柱子不污染、成本低廉等特點,近幾年應(yīng)用越來越廣泛。如王磊磊文獻中報道利用高效毛細管電泳分析方法,建立赤芍和白芍的高效毛細管電泳法(HPCE指紋圖譜。方法HPCE工作條件:采用未涂層熔融石英毛細管(內(nèi)徑75pm,有效長度50cm),分離電壓為25卜乂柱溫25℃,二極管陣列檢測器(DAD)檢測波長為220nm，緩沖液為30mmol/L硼砂(pH=9.0)溶液。按此條件對來自不同產(chǎn)地的7種赤芍樣品和8種白芍樣品進行了分析。結(jié)果建立了赤芍和白芍HPCE指紋圖譜,采用中藥指紋圖譜相似度計算軟件,以系統(tǒng)生成的對照指紋圖譜為對照模板對不同樣品的圖譜進行相似度計算。目前,芍藥苷在復(fù)方中的定量分析方法主要有反相高效液相色譜法、薄層掃描法、分光光度法和毛細管電泳法等。薄層掃描法和分光光度法因操作繁瑣、靈敏度不高、影響因素較多而應(yīng)用較少；毛細管電泳法為一新興分離、分析技術(shù),應(yīng)用前景廣闊；反相高效液相色譜法以其高效、高速、儀器化等特點而應(yīng)用最廣。在查閱文獻過程中還看到一篇采用競爭性酶聯(lián)免疫檢測法(ELISA)對芍藥中芍藥苷(PF)和白花素(Alb)進行定量分析。介紹了一種對芍藥進行質(zhì)量控制的免疫化學(xué)方法，這種方法較新穎。競爭性酶聯(lián)免疫檢測法的原理:以測定抗原為例，(1)將特異抗體與固相載體連接，形成固相抗體，洗滌。(2)待測管中加受檢標本和一定量酶標抗原的混合溶液，使之與固相抗體反應(yīng)。如受檢標本中無抗原，則酶標抗原能順利地與固相抗體結(jié)合。如受檢標本中含有抗原，則與酶標抗原以同樣的機會與固相抗體結(jié)合，競爭性地占去了酶標抗原與固相載體結(jié)合的機會，使酶標抗原與固相載體的結(jié)合量減少。參考管中只加酶標抗原，保溫后，酶標抗原與固相抗體的結(jié)合可達最充分的量。洗滌。(3)加底物顯色：參考管中由于結(jié)合的酶標抗原最多，故顏色最深。參考管顏色深度與待測管顏色深度之差，代表受檢標本抗原的量。待測管顏色越淡，表示標本中抗原含量越多。文獻作者利用這一方法測定白芍苷的含量，測定結(jié)果與HPLC檢測結(jié)果的一致性良好，共檢測了15個方劑，競爭性ELISA的靈敏度比HPLC法高100倍。但是我覺得競爭性ELISA操作過于繁瑣，與HPLC相比可行性差。而且個人覺得HPLC的靈敏度已經(jīng)可以達到要求。5、討論白芍與赤芍在化學(xué)成分、藥理作用等方面都有差異，所以在臨床應(yīng)用上定要加以區(qū)別，不可以同作為一味中藥使用。在芍藥苷含量測定方面多采用HPLC法，該法測定操作簡單、適用范圍廣、分離效率高、速度快、流動相可選擇范圍寬、靈敏度高、色譜柱可反復(fù)使用、流出組分易收集以及安全等特點,應(yīng)用范圍非常廣泛。［參考文獻］【1】陳建杉.白芍、赤芍源流考.四川中醫(yī),2006年第24卷第12【2】項亞西，張京紅.赤白芍